CS262120B1 - CHrnmogenní substráty pro priitealytické enzymy štěpící v kyselé oblasti pH - Google Patents
CHrnmogenní substráty pro priitealytické enzymy štěpící v kyselé oblasti pH Download PDFInfo
- Publication number
- CS262120B1 CS262120B1 CS871672A CS167287A CS262120B1 CS 262120 B1 CS262120 B1 CS 262120B1 CS 871672 A CS871672 A CS 871672A CS 167287 A CS167287 A CS 167287A CS 262120 B1 CS262120 B1 CS 262120B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- nitroanilide
- phenylalanyl
- phenylalanine
- solution
- acidic
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Řešení se týká chromogenníčh substrátů pro proteolytické enzymy, které štěpí v kyselé oblasti pH. Jde o skupinu nových látek typu acylovaných tetrapeptidických derivátů p-nitroanilidu, použitelných při stanovení enzymové aktivity aspartátových proteináz.
Description
Vynález se týká chromogenních substrátů pro proteolytické enzymy štěpící v kyselé oblasti pH, obecného vzorce N°2 ve kterém značí:
X atom vodíku, 3-karboxyalkankarbonylovou skupinu s 3 až 5 atomy uhlíku nebo alkankarbonylovou skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku,
A zbytek kyseliny pyroglutámové, kyseliny asparágové, kyseliny glutámové, glycinu, leucinu nebo 2-oxoimidazolidin-l-karbonyl,
B zbytek histidinu, glycinu, šeřinu nebo prolinu,
C zbytek fenylalaninu, leucinu, norleucinu, methioninu nebo S-alkylcysteinu, kde alkyl má 1 až 3 atomy uhlíku.
Látky uvedeného vzorce, povahy tri- a tetrapeptidů, představují chromogenní substráty pro stanovení proteolytických enzymů štěpících v kyselé oblasti pH.
Ve srovnání s obdobnými, dosud známými a používanými chromogenními substráty [Bioorg. Chimija 9, 470 (1983); 10, 390 (1984)], vykazují substráty uvedeného vzorce vysokou rozpustnost ve vodě a vysokou citlivost stanovení.
Chromogenní substráty uvedeného vzorce lze připravovat metodami běžně užívanými v syntéze peptidů, například metodou azidovou, anhydridovou, karbodiimidovou nebo aktivních esterů.
Poznámky k experimentální části: Chromatografie byla provedena na tenké vrstvě silíkagelu (Kiesel-gel, Merck) v následujících systémech:
Soustava St:
1-butanol — kyselina octová — voda (4 :
:1:1);
Soustava S2:
1-butanol — kyselina octová — pyridin — — voda (15:3:10:6).
Standardní způsob je zpracování látky rozpuštěním v octanu etylnatém a postupným vytřepáváním 1M kyselinou chlorovodíkovou, vodou, 5% kyselým uhličitanem sodným, vodou, vysušením bezvodým síranem sodným a odpařením ve vakuu.
Příklad 1 p-Nítroanllid terc.butyloxykarbonylfenyl alanyl -fenylalaninu
K roztoku terc.butyloxykarbonylfenylalaninu (15,9 g; 60 mmolů) a N-hydroxybenztriazolu (6,9 g; 60 mmolů) v dimethylformamidu (100 ml) vychlazenému na —5 °C byl přidán N,N‘-dicyklohexylkarbodiimid (13,2 g). Po 1 h míchání a chlazení při 0 stupních Celsia byl přidán roztok p-nitroanilidu fenylalaninu (17,1 g; 60 mmolů) v dimethylformamidu (30 ml). Po 1 h míchání při 0 °C a 12 h stání při teplotě místnosti byla vyloučená N,N‘-dicyklohexylmočovina odfiltrována, promyta tetrahydrofuranem a filtrát byl odpařen. Krystalický odparek byl zpracován standardním způsobem. Krystalizací z octanu ethylnatébo (200 ml) a petroletheru (800 ml) bylo získáno 26,5 g (83%) produktu o t. t. 179 až 180 °C, [a1 jo20 + 15,8° (c — 0,2; methanol). p-Nitroanilid fenylalanyl-fenylalaninu
K roztoku p-nitroanilidu terc.butyloxykarbonylfenylalanyl-fenylalaninu (21,3 g; 40 mmolů) v led. kyselině octové byl přidán roztok 2M kyseliny chlorovodíkové v led. kyselině octové (60 ml). Po 3 h stání při teplotě místnosti byl vysrážen krystalický hydrochlorid přídavkem etheru (1 550 ml), od filtrován a sušen v exsikátoru nad oxidem fosforečným. Potom byl hydrochlorid rozpuštěn v 50% ethanolu (vodným) (150 mililitrů) a přídavkem koncentrovaného amouiaku bylo pH roztoku upraveno na 7 až
8. Vyloučená krystalická báze byla ihned odfiltrována, promyta vychlazenou vodou, sušena volně na vzduchu a dosušena nad oxidem fosforečným. Bylo získáno 12,4 g (72 %) produktu o t. t. 168 až 169 °C; [oí]d20 +42,2° (c ~ 0,2; methanol).
p-Nitroanilid pyr oglutamyl-histidyl-f enylalanylfenylalaninu (acetát)
K roztoku hydrazidu pyroglutamyl-histidinu (2,8 g; 10 mmolů) v dimethylformamidu (100 ml) a koncentrované kyseliny chlorovodíkové (4 ml) ochlazenému na —20 stupňů Celsia byl za míchání přidán roztok dusitanu sodného (0,7 g) ve vodě (2,8 ml). Po 10 min. míchání a chlazení (—10 °C) bylo pH reakčního roztoku upraveno N-ethylpiperidinem na 6,9 až 7,1 a přidán roztok p-nitroanilidu fenylalanyl-fenylalaninu (4,32 gramu; 10 mmolů) v dimethylformamidu (100 ml) předchlazený na —10 °C. Po 12 h stání při +3 °C byl reakční roztok odpařen, odparek byl rozmíchán s vodou a po 2 h byl produkt zfiltrován a krystalován z e8
282120
S thanolu (50 ml) a etheru (250 ml). Rckrystalizací z kyseliny octové (30 ml) a octanu ethylnatého (100 ml) bylo získána 3,1 gramu (42 %] produktu o t. t. 238 až 240 stupňů Celsia; [«Id20 -1-10,9 (c — 0,2; dimethylf ormamid).
Příklad 2 p-Nitroanilid terc.butyloxykarbonylglycyl-glycylfenylalanyl-fenylalaninu
K roztoku terc.butyloxykarbonylglycyl-glycinu (1,67 g; 5 mmolů) a p-nitroanilidu fenylalanyl-fenylalaninu (2,16 g; 5 mmolů) v dimethylformamidu (70 ml) vychlazenému na 0 °C byl přidán N,N‘-dicyklohexylkarboidiimid (1,1 g). Po 2 h míchání a 12 h stání při teplotě místnosti byla vyloučená N,N‘-dicyklohexylmočovina odfiltrována, promyta dimethylformamidem; filtrát byl odpařen a odparek byl zpracován standardním způsobem. Krystalický odparek byl rekrystalován z 2-propanolu (50 ml) a petroletheru (300 ml). Bylo získáno· 2,1 (65 %) produktu o t. t. 197 až 199 °C; [ar],,20 +16,7° (c — 0,2; dimethylformamid).
Hydrochlorid p-nitroanilidu glycyl-glycyl-fenylalanyl-fenylalaninu
K roztoku p-nitroanilidu terc.butyloxykarbonylglycyl-glycyl-fenylalanyl-alaninu (1,94 gramu; 3 mmoly) v led. kyselině octové (9 mililitrů) byl přidán roztok 2M kyseliny chlorovodíkové v led. kyselině octové (6 mililitrů). Po 3 h stání při teplotě místnosti byl krystalický hydrochlorid odfiltrován, proonyt etherem a vysušen nad hydroxidem sodným a oxidem fosforečným. Bylo získáno 1,8 g (kvant.) produktu o t. t. 232 až 236 °C. Vzorek k analýze byl krystalován z kyseliny octové a etheru; t. t. 254 až 257 °C, [oei]r,20 +2,7° (c — 0,2; dimethylformamid).
p-Nitroanilid glycyl-glycyl-fenylalanyl-fenylalaninu
Roztok hydrochloridu p-nitroanilidu glycyl-glycyl-fenylalanyl-fenylalaninu (1,9 g) v methanolu (50 ml) a vody (25 ml) byl upraven 10% amoniakem na pH 7 až 8, zředěn přídavkem vody (75 ml) a vyloučená sraženina byla odfiltrována, promyta vodou, sušena volně na vzduchu a dosušena nad oxidem fosforečným; bylo získáno 1,3 g (72 %) produktu o t. t. 185 až 188 “C.
p-Nitroanilid glutaryl-glycyl-glycyl-fenylalanyl-fenylalaninu
K roztoku p nitroanilidu glycyl-glycyl-fenylalanylfenylalaninu (550 mg; 1 mmol) v dimethylformamidu (10 ml) byl přidán anhydrid kyseliny glutarové (230 mg) a vzniklý roztok byl vyhříván 1 h při 80 ®C, potom byl odpařen a odparek byl rozmíchán s vodou (20 ml) a vzniklá sraženina byla odfiltrována a promyta vychlazenou vodou; surový produkt byl překrystalován ze zředěné kyseliny octové. Bylo získáno 530 mg (79 %) produktu o t. t. 221 až 224 C, [cet]D 20 +13,4° (c = 0,2; dímethylfoirmamid).
Příklad 3 p-Nítroanilid terc.butyloxykarbonylfenylalanyl-methioninu
Byl připraven obdobným způsobem jako odpovídající dipeptid p-nítroanilid terc.hutyloxykarbonylfenylalanyl-fenylalaninu uvedený v příkladě 1. ve výtěžku 68 % a t. t. 199 až 200 °C.
Hydrochlorid p-nitroanilidu fenylalanylmethioninu
Byl připraven obdobným způsobem jako odpovídající dipeptid p-nitroanilid fenylalanyl-fenylalaninu uvedený v příkladě 1, ve výtěžku 92 %; vzorek k analýze byl krystalován z methanolu a etheru, t. t. 246 až 248 °C. [ατ]ο2(’ +87,7° (c = 0,2; methanol).
p-Nitroanilid pyroglutamyl-histidyl-fenylalanylmethtoninu
Byl připraven obdobným způsobem jako odpovídající tetrapeptid uvedený v příkladě 1, z hydrazidu pyroglutamylhistídinu a p-nitroanilidu fenylalanyl-methioninu ve výtěžku 46 % a t. t. 228 až 231 °C.
Příklad 4 p-Nitroanilid' 2-oxoimidazoIidin-l-karbonylhistidylfenylalanyl-fenylalaninu
Byl připraven obdobným způsobem jako ojdpovídající pyroglutamylový derivát uvedený v příkladě 1, z hydrazidu 2-oxoimidazolidin-l-karbonyl-histidinu a p-nitroanilidu fenylalanyl-fenylalaninu ve výtěžku 46 proč. a t. t. 169 až 172 °C; [ w]d20 —8,9° (c = — 0,2; methanol).
Příklad 5 p-Nitroanilid acetylhistídyí-fenylalanyl. -fenylalaninu
Byl připraven obdobným způsobem jako tetrapeptid uvedený v příkladě 1, tj. azidovou metodou z hydrazidu acetylhistidinu (Collection Czechoslov. Chera. Commun. 45, 442 (1980)] p-nitroanilidu fenylalanyl-fenylalaninu ve výtěžku 52 % a t. t. 138 až 142 stupňů Celsia.
Příklad 6 p-Nitroanilid terc.butyloxykarbonylfenylalanyl-S-methylcysteinu
Byl připraven obdobným způsobem jako odpovídající dipeptid uvedený v příkladě 1, z terc.butyloxykarbonylfenylalaninu a p-nitroanilidu S-methylcysteinu ve výtěžku 77 % a t. t. 132 až 135 °C.
Hydrochlorid p-nitroanilidu fenylalanyl-S-methylcysteinu
Byl připraven obdobným způsobem jako hydrochlorid p-nitroanilidu fenylalanyl-methioninu uvedený v příkladě 3, ve výtěžku 90 % a t. t. 178 až 181 °C.
p-Nitroanilid pyroglutamyl-histidyl-fenylalanyl-S-methyícysteinu
Byl připraven obdobným způsobem jako odpovídající tetrapeptid uvedený v příkladě 1, ve výtěžku 56 % a t. t. 142 až 145 °C.
Příklad 7
Hydrazid benzyloxykarbonylleucyl-serinu
K roztoku methylesteru benzyloxykarbonylleucyl-serinu (7,35 g) v methanolu (50 mililitrů] byl přidán 100% hydrazinhydrát (5 ml). Po ldenním stání při teplotě místnosti byl vyloučený hydrazid odfiltrován a krystalován z ethanolu; bylo získáno 5,8 g (79 %) produktu o t. t. 175 až 177 °C.
p-Nitroanilid benzyloxykarbonylleucyl-seryl-fenylalanyl-fenylalaninu
Byl připraven obdobným způsobem jako odpovídající tetrapeptid uvedený v příkladě 1, z příslušného hydrazidu benzyloxykarbonylleucyl-serinu a p-nitroanilidu fenylalanyl-fenylalaninu ve výtěžku 59 % a t. t. 212 až 214 °C.
p-Nitroanilid leucyl-seryl-f enylalanyl-f enyl alaninu
K roztoku p-nitroanilidu benzyloxykarbonylleucyl-seryl-fenylalanyl-fenylalaninu (1,6 gj v ledové kyselině octové (5 ml) byl přidán 37% bromovodík v ledové kyselině octové. Po 1 h stání při teplotě místnosti byl vzniklý hydrobromid vysrážen etherem, odfiltrován, promyt etherem a vysušen v exsikátoru nad kysličníkem fosforečným a hydroxidem sodným. Po .12 h byl hydrobromid rozpuštěn v ethanolu (10 ml) a báze uvolněn přídavkem 5% hydrogen-uhličitanu sodného (5 ml); po 2 h byla báze odfiltrována, promyta vodou a ostře odsáta. Krystalizaci ze směsi octan ethylnatý (100 mililitrů), dimethylformamidu (5 ml) a petrolotheru (150 ml) bylo získáno 520 mg (41 %) o t. t. 201 až 203 °C (slíná při 126 stupních Celsia).
p-Nitroanilid glut.aryl-leucyl-seryl-fenylalanyl-f enylalaninu
K roztoku p-nitroanilidu leucyl-seryl-fenylalanyl-fenylalaninu (255 mg) v dimethylformamidu (3 ml) byl přidán anhydrid kyseliny glutarové (100 mg) a reakční roztok byl vyhříván 1 h při 80 °C. Potom byl roztok odpařen, produkt vysrážen vodou, odfiltrován, promyt vodou a krystalován z 2-propanolu (30 ml) a vody (0,1 ml); bylo získáno 190 mg (67 %) produktu o t. t. 256 až 259 °C. Vzorek k analýze byl krystalován obdobně; t. t. 258 až 260 °C. Příklad 8 p-Nltroanilid terc.butyloxykarbonylfenylalanyl-leucinu
Byl připraven obdobně jako odpovídající dipeptid uvedený v příkladě 1, v kvantitativním výtěžku a t. t. 151 až 153 °C.
Hydrochlorid p-nitroanilidu fenylalanyl-leucinu
Byl připraven obdobným způsobem jako odpovídající dipeptid p-nitroanilid fenylalanyl-methioninu uvedený v příkladě 3, ve výtěžku 88 %; Rf = 0,77/Sx; 0,81/S3.
p-Nitroanilid terc.butyloxykarbonylleucyl-seryl-fenylalanyl-leucinu
Byl připraven obdobně jako odpovídající tetrapeptid uvedený v příkladě 7, ve výtěžku 55 % a t. t. 203 až 205 °C.
p-Nitroanilid leucyl-seryí-fenylalanyl-leucinu
Byl připraven obdobně jako odpovídající volný tetrapeptid uvedený v příkladě 7, ve výtěžku 54 % a t. t. 197 až 200 °C. R, = 0,69/Si; 0,82/S2.
p-Nitroanilid glutaryl-leucyl-seryl fenylalanyl-leucinu
Byl přípraven obdobně jako odpovídající glutaryltetrapeptid uvedený v příkladě 7, ve výtěžku 89 % a t. t. 273 až 275 °C. Příklad 9 p-Nitroanilid terc.butyloxykarbonylfenylalanyl-norleucinu
Byl připraven v kvantitativním výtěžku jako obdobný dipeptid uvedený v příkladě 1; t. t. 166 až 167 °C.
6 2 1 7, 0
Hydrochlorid p-nitroanilidu fenylalanyl-norleucinu
Byl připraven obdobným způsobem jako odpovídající dipeptid uvedený v příkladě 8 ve výtěžku 84 %; R, = 0,73/Sj; 0,74/S2.
p-Nitroanilid benzyloxykarbonylglycyl•-proJyl-íenyíalanyl-nor leucinu
K roztoku benzytoxykarbonylglycyl-prolinu (460 mg) v dimethylformamidu (15 ml) a N-hydroxysukcinimidu (175 mg), ochlazenému na —20 °C, byl přidán N,N‘-dicykIohexylkarbodiimid (330 mg). Po 1 h míchání a chlazení (—5 °C) byl k reakčnímu roztoku přidán roztok p-nitroanilidu fenylalanyl-norleucinu v dimethylformamidu (10 ml), uvolněného z příslušného hydrochloridu (652 mg), přídavkem N-ethylpiperidimi (0,21 mililitru). Po 2 h míchání a 12 h stání při teplotě místnosti, byla vyloučená N,N‘-dicyklohexylmočovina odfiltrována, filtrát byl odpařen a odparek byl vysrážen vodou. Krystalizací z ethanolu (5 ml) a vody (20 mililitrů) bylo získáno 1,02 g (99 %) produktu o t. t. 101 až 104 °C.
p-Nitroanilid glycyl-prolyl-fenylalanyl-norleucinu
Byl připraven obdobným způsobem jako odpovídající tetrapeptid uvedený v příkladě 7, ve výtěžku 64 % a t. t. 12'2 až 124 °C. Rf = 0,69/Sn 0,83/S2l.
p-Nitroanilid glutaryl-glycyl-prolyl-fenylalanyl-norleucinu
Byl připraven obdobným způsobem jako odpovídající glutaryl-tetrapeptid uvedený v příkladě 7, ve výtěžku 84 % a t. t. 128 až 130 °C.
Claims (1)
- Chromogenní substráty pro proteolytické enzymy štěpící v kyselé oblasti pH, obecného vzorce λ -A-3 - Ph&~C~NH ve kterém značí:X atom vodíku, 3-karboxyalkankarbonylovou skupinu s 3 až 5 atomy uhlíku nebo alkankarbonylovou skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku,A zbytek kyseliny pyroglutámové, kyseliny asparágové, kyseliny glutámové, glycinu, leucinu nebo 2-oxoimidazolidin-l-karbonyl,B zbytek histidinu, glycinu, šeřinu nebo prolinu,C zbytek fenylalaninu, leucinu, norleucinu, methioninu neboi S-alkylcysteinu, kde alkyl má 1 až 3 atomy uhlíku.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS871672A CS262120B1 (cs) | 1987-03-12 | 1987-03-12 | CHrnmogenní substráty pro priitealytické enzymy štěpící v kyselé oblasti pH |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS871672A CS262120B1 (cs) | 1987-03-12 | 1987-03-12 | CHrnmogenní substráty pro priitealytické enzymy štěpící v kyselé oblasti pH |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS167287A1 CS167287A1 (en) | 1988-07-15 |
| CS262120B1 true CS262120B1 (cs) | 1989-02-10 |
Family
ID=5351677
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS871672A CS262120B1 (cs) | 1987-03-12 | 1987-03-12 | CHrnmogenní substráty pro priitealytické enzymy štěpící v kyselé oblasti pH |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS262120B1 (cs) |
-
1987
- 1987-03-12 CS CS871672A patent/CS262120B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS167287A1 (en) | 1988-07-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6093730A (en) | Substituted isoquinoline-3-carboxamides, their preparation and their use as pharmaceuticals | |
| Zimmerman et al. | A new fluorogenic substrate for chymotrypsin | |
| Veale et al. | Non-peptidic inhibitors of human leukocyte elastase. 4. design, synthesis, and in vitro and in vivo activity of a series of. beta.-carbolinone-containing trifluoromethyl ketones | |
| US4215047A (en) | 7-(Arginylamino)-4-methylcoumarins | |
| CZ289356B6 (cs) | Substituované amidy heterocyklických karboxylových kyselin, způsob jejich přípravy a jejich pouľití jako léčiva | |
| EP0004256A1 (en) | Easily split substrates for the quantification of proteases, a process for their production and a method for the quantification of proteases | |
| US4839465A (en) | Di-(D-tryptophyl and/or tetrahydropyridoindolylcarbonyl)-containing peptide amides and process for preparation thereof | |
| CS262120B1 (cs) | CHrnmogenní substráty pro priitealytické enzymy štěpící v kyselé oblasti pH | |
| US4584398A (en) | Arginyl-3-carboxy-4-hydroxyanilide | |
| JP2001515906A (ja) | ピロロピロリジン誘導体およびセリンプロテアーゼインヒビターとしてそれらの使用 | |
| Liu et al. | Synthesis of all the stereoisomers of statine (4-amino-3-hydroxy-6-methylheptanoic acid). Inhibition of pepsin activity by N-carbobenzoxy-L-valyl-L-valyl-statine derived from the four stereoisomers | |
| NO130583B (cs) | ||
| US4728725A (en) | Retro-inverted peptides analogues of Bradykinin Potentiator BPP5a | |
| Likó et al. | Synthesis of peptides containing bis-imidazole ligands | |
| EP0547031B1 (en) | N-protected-(S)-isoserine compounds | |
| Baker et al. | Irreversible enzyme inhibitors. CLXVII. Thymidine phosphorylase. 10. On the nature and dimensions of the hydrophobic bonding region. A | |
| Goldstein et al. | Synthesis of chromogenic substrates for the assay of aminopeptidase activity | |
| HRP20010767A2 (en) | PROCESS FOR PREPARING [S-(R*, S*)]-<F128M>b<F255D>-[[[1-[1-OXO-3-(4-PIPERIDINYL)PROPYL]-3-PIPERIDINYL]CARBONYL]AMINO]-3-PYRIDINEPROPANOIC ACID AND DERIVATIVES | |
| US5362743A (en) | Aminoquinoline derivatives | |
| HK1000153B (en) | N-protected-(s)-isoserine compounds | |
| US4474691A (en) | Chromophoric peptides, a process for their preparation, agents containing them and their use for determining DD-carboxypeptidases | |
| Waki et al. | Ribonuclease T1 peptides. II. Synthesis of a protected pentapeptide corresponding to sequence 12–16 | |
| US4260681A (en) | Reagent system and method for assaying peptidase enzymes | |
| CA2222960A1 (en) | Imidazo 1,5a pyridine derived serine protease inhibitors | |
| US3542862A (en) | 3-(o-aroylaminophenyl)-levulinic acids |