CS261324B1 - Způsob separace amylolytických enzymů - Google Patents
Způsob separace amylolytických enzymů Download PDFInfo
- Publication number
- CS261324B1 CS261324B1 CS876175A CS617587A CS261324B1 CS 261324 B1 CS261324 B1 CS 261324B1 CS 876175 A CS876175 A CS 876175A CS 617587 A CS617587 A CS 617587A CS 261324 B1 CS261324 B1 CS 261324B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- solution
- amylolytic enzymes
- enzyme
- cyclodextrin
- amylase
- Prior art date
Links
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims abstract description 22
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims abstract description 22
- 230000003625 amylolytic effect Effects 0.000 title claims abstract description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 9
- 238000000926 separation method Methods 0.000 title description 3
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 claims abstract description 9
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims abstract description 3
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 claims abstract 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 claims 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims 1
- 239000005373 porous glass Substances 0.000 claims 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 claims 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 14
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 8
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 7
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 239000001116 FEMA 4028 Substances 0.000 description 3
- 108010019077 beta-Amylase Proteins 0.000 description 3
- WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N beta-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N 0.000 description 3
- 235000011175 beta-cyclodextrine Nutrition 0.000 description 3
- 229960004853 betadex Drugs 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 2
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940025131 amylases Drugs 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- -1 hydroxyalkyl methacrylate Chemical compound 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 239000001648 tannin Substances 0.000 description 1
- 235000018553 tannin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001864 tannin Polymers 0.000 description 1
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Roztok enzymů se vsádkově nebo ve
sloupci sorbuje na cyklodextriny vázané
na nerozpustném nosiči a po promytí
se sorbované amylolytické enzymy eluují
rbztokem cyklodextrinu o koncentraci
5 až 25 mM. Výhodou uvedeného řešení
je vysoká čistota získaného enzymu,.
Description
Vynález se týká způsobu separace amylolytických enzymů z kultivační kapaliny po kultivaci plísní nebo bakterií, z extraktu rostlinných nebo živočišných materiálů nebo z jiných roztoků amylolytické enzymy obsahujících.
K separaci amylolytických enzymů se používá metody, při níž se roztok enzymu sráží síranem amonným, taninem, etanolem, acetonem nebo jejich směsi a sraženina se pak suší.
Jinou možností je zahuštění roztoku enzymu odpařením za snížené teploty nebo ultrafiltrací. Suchý práškový enzym může být rovněž připraven z jeho roztoku sušením na rozprašovací sušárně.
Nevýhody uvedených postupů spočívají v tom, že při srážení vzniká velké množství silně znečistěných odpadních vod nebo je nutno srážedlo regenerovat odpařením či destilací, což je energeticky náročné. Zahuštění enzymu ultrafiltrací je omezeno kapacitou zařízení, která je zpravidla nízká, a investiční nákladností tohoto zařízení. Všechny uvedené metody, separace pak dávají pouze technicky enzymový koncentrát, jehož kvalita je silně závislá na druhu použité suroviny, a na vedlejších látkách, které nejsou žádnou z uvedených metod odstraňovány.
Uvedené nevýhody odstraňuje způsob podle vynálezu, spočívající v tom, že je enzym sorbován, vsádkově nebo kontinuálně, na nerozpustný derivát cyklodextrinu připravený, sítěním cyklodextrinu nebo jejich vazbou na nerozpustný nosič, s výhodou perlovou cejujlosu.
Po promytí sorbentu s enzymem vodou, je pak enzym eluován ze sorbentu roztokem cyklodextrinu o koncentraci 5 až 25 milimolu na litr. Touto dvojí afinitní separací je získán enzym o vysoké čistotě s téměř kvantitativním výtěžkem, jehož kvalita není ovlivněna kvalitou použité suroviny.
Příklad 1
Kolona rozměru 1x12 cm je naplněna acylodextrinem kovalentně'vázaným na perlovou celulosu a promyta O,1M acetátovým pufrem pH 5,5. Potom je kolonou propuštěn extrakt žita obsahující žitné alfa - a beta-amylázy. Po průtoku 30 ml extraktu obsahujícího 40 mg bílkovin je sloupec promyt O,1M acetátem pH 5,5 a poté jsou amýlázy eluovány 10 mM roztokem beta cyklodextrinu v témže pufru. Jsou získány amylolytické anzymy v koncentrovaném stavu s výtěžkem pro alfa-amylázu 92,6 %, pro beta-amylázy 79,2 %.
Příklad 2
Kultivační kapalina po kultivaci plísně Aspergillus oryzae obsahující plísňovou alfa-amylázu je propouštěna kolonou jako v příkladu 1 za stejných podmínek. Stejným postupem jako v příkladu 1 je získán koncentrát plísňové alfa-amylázy s výtěžkem 94,8 %.
Příklad 3
Obchodní technický preparát bakteriální alfa-amylázy je naředěn na aktivitu 95 EU/ml a zpracován postupem podle příkladu 1 s tim rozdílem, že je použito pufru pH 6,0 pro všechny operace. Je získán čistý preparát bakteriální alfa-amylázy s výtěžkem 93,0 %.
Příklad 4
Extrakt žita jako v příkladu 1 je propouštěn kolonou rozměru 1x12 cm naplněnou beta-cyklodextrinem kovalentně vázaným na obchodní agarózový gel Ultrogel 34. Všechny ostatní podmínky jsou shodné s příkladem 1. Je získán koncentrát amylolytických enzymů s výtěžkem pro alfa-amylázu 93,8 % a pro beta-amylázu 77,6 %.
Příklad 5
Roztok bakteriální amylázy jako v příkladu 3 je propouštěn kolonou rozměru 1x12 cm obsahující beta-cyklodextrin kovalentně vázaný na hydroxyalkylmetakrylátový gel Spheron 1 000. Všechny ostatní podmínky jsou shodné s příkladem 3. Byl získán koncentrát čisté bakteriální alfa-amylázy s výtěžkem 91,8 %.
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZUZpůsob separace amylolytických enzymů z roztoku získaných kultivací plísní nebo bakterií, nebo z roztoku získaných z extrakcí rostlinných či živočišných tkání, případně jiných roztoků tyto enzymy obsahujících, vyznačený tím, že se roztok enzymu sorbuje,.vsádkově nebo ve sloupci, na cyklodextriny vázané na nerozpustném nosiči, jako je perlová nebo vláknitá celulóza, polysacharidy, poresní sklo, keramika, syntetické polymery atd. a po promytí se sorbované amylolytické enzymy eluují roztokem cyklodextrinu o koncentraci 5 až 25 mM.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CS876175A CS261324B1 (cs) | 1987-08-21 | 1987-08-21 | Způsob separace amylolytických enzymů |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CS876175A CS261324B1 (cs) | 1987-08-21 | 1987-08-21 | Způsob separace amylolytických enzymů |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CS617587A1 CS617587A1 (en) | 1988-06-15 |
CS261324B1 true CS261324B1 (cs) | 1989-01-12 |
Family
ID=5408184
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CS876175A CS261324B1 (cs) | 1987-08-21 | 1987-08-21 | Způsob separace amylolytických enzymů |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CS (1) | CS261324B1 (cs) |
-
1987
- 1987-08-21 CS CS876175A patent/CS261324B1/cs unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CS617587A1 (en) | 1988-06-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4264738A (en) | Process for purification of proteolytic enzymes | |
FI61718C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av xylos genom enzymatisk hydrolys av xylaner | |
DE2703615C2 (cs) | ||
Whistler et al. | Enzymatic hydrolysis of Xylan1 | |
Ishii et al. | Purification and properties of endo-polygalacturonase from Aspergillus japonicus | |
Tanaka et al. | α-Amylase isozymes in gibberellic acid-treated barley half-seeds | |
Berger et al. | Cocoonase: III. Purification, preliminary characterization, and activation of the zymogen of an insect protease | |
Synge et al. | Bound amino acids in protein-free extracts of Italian ryegrass | |
MacGregor | Isolation, purification and electrophoretic properties of an α‐amylase from malted barley | |
CS261324B1 (cs) | Způsob separace amylolytických enzymů | |
Chaga et al. | Isolation and characterization of catalase from Penicillium chrysogenum | |
US4027012A (en) | Process for the extraction of components having anticoagulant activity "in vivo" from snake venoms and products obtained | |
Burger et al. | Stabilization, partial purification and characterization of peptidyl peptide hydrolases from germinated barley | |
US4100028A (en) | Method for purification of proteolytic enzymes | |
Nummi et al. | Immunoelectrophoretic detection of cellulases | |
US3623955A (en) | Purification and recovery of alkaline protease using cationic-exchange resin | |
Shioi et al. | A simple purification method for the preparation of solubilized chlorophyllase from Chlorella protothecoides | |
US4581332A (en) | Novel alkaline protease | |
Tatsuoka et al. | Purification of lipase produced by Rhizopus | |
Deleyn et al. | Immobilised β‐amylase in the production of maltose syrups | |
US5543313A (en) | Process for the separation and recovery of Aspergillus niger acid protease and glucoamylase | |
EP0059182B1 (en) | A process for isolating aminoacylase enzyme from a mammal kidney extract | |
US3661716A (en) | Process for simultaneous fractionation and purification of protease and ribonuclease of rhizopus mold | |
EP0294851A2 (de) | Verfahren zur Herstellung von Humaninsulin und seinen Derivaten | |
Prentice et al. | Peptide hydrolase in wheat embryo |