CS261324B1 - Způsob separace amylolytických enzymů - Google Patents

Způsob separace amylolytických enzymů Download PDF

Info

Publication number
CS261324B1
CS261324B1 CS876175A CS617587A CS261324B1 CS 261324 B1 CS261324 B1 CS 261324B1 CS 876175 A CS876175 A CS 876175A CS 617587 A CS617587 A CS 617587A CS 261324 B1 CS261324 B1 CS 261324B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
solution
amylolytic enzymes
enzyme
cyclodextrin
amylase
Prior art date
Application number
CS876175A
Other languages
English (en)
Other versions
CS617587A1 (en
Inventor
Maria Gottvaldova
Jiri Kucera
Alexandra Proskova
Original Assignee
Maria Gottvaldova
Jiri Kucera
Alexandra Proskova
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Maria Gottvaldova, Jiri Kucera, Alexandra Proskova filed Critical Maria Gottvaldova
Priority to CS876175A priority Critical patent/CS261324B1/cs
Publication of CS617587A1 publication Critical patent/CS617587A1/cs
Publication of CS261324B1 publication Critical patent/CS261324B1/cs

Links

Landscapes

  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

Roztok enzymů se vsádkově nebo ve sloupci sorbuje na cyklodextriny vázané na nerozpustném nosiči a po promytí se sorbované amylolytické enzymy eluují rbztokem cyklodextrinu o koncentraci 5 až 25 mM. Výhodou uvedeného řešení je vysoká čistota získaného enzymu,.

Description

Vynález se týká způsobu separace amylolytických enzymů z kultivační kapaliny po kultivaci plísní nebo bakterií, z extraktu rostlinných nebo živočišných materiálů nebo z jiných roztoků amylolytické enzymy obsahujících.
K separaci amylolytických enzymů se používá metody, při níž se roztok enzymu sráží síranem amonným, taninem, etanolem, acetonem nebo jejich směsi a sraženina se pak suší.
Jinou možností je zahuštění roztoku enzymu odpařením za snížené teploty nebo ultrafiltrací. Suchý práškový enzym může být rovněž připraven z jeho roztoku sušením na rozprašovací sušárně.
Nevýhody uvedených postupů spočívají v tom, že při srážení vzniká velké množství silně znečistěných odpadních vod nebo je nutno srážedlo regenerovat odpařením či destilací, což je energeticky náročné. Zahuštění enzymu ultrafiltrací je omezeno kapacitou zařízení, která je zpravidla nízká, a investiční nákladností tohoto zařízení. Všechny uvedené metody, separace pak dávají pouze technicky enzymový koncentrát, jehož kvalita je silně závislá na druhu použité suroviny, a na vedlejších látkách, které nejsou žádnou z uvedených metod odstraňovány.
Uvedené nevýhody odstraňuje způsob podle vynálezu, spočívající v tom, že je enzym sorbován, vsádkově nebo kontinuálně, na nerozpustný derivát cyklodextrinu připravený, sítěním cyklodextrinu nebo jejich vazbou na nerozpustný nosič, s výhodou perlovou cejujlosu.
Po promytí sorbentu s enzymem vodou, je pak enzym eluován ze sorbentu roztokem cyklodextrinu o koncentraci 5 až 25 milimolu na litr. Touto dvojí afinitní separací je získán enzym o vysoké čistotě s téměř kvantitativním výtěžkem, jehož kvalita není ovlivněna kvalitou použité suroviny.
Příklad 1
Kolona rozměru 1x12 cm je naplněna acylodextrinem kovalentně'vázaným na perlovou celulosu a promyta O,1M acetátovým pufrem pH 5,5. Potom je kolonou propuštěn extrakt žita obsahující žitné alfa - a beta-amylázy. Po průtoku 30 ml extraktu obsahujícího 40 mg bílkovin je sloupec promyt O,1M acetátem pH 5,5 a poté jsou amýlázy eluovány 10 mM roztokem beta cyklodextrinu v témže pufru. Jsou získány amylolytické anzymy v koncentrovaném stavu s výtěžkem pro alfa-amylázu 92,6 %, pro beta-amylázy 79,2 %.
Příklad 2
Kultivační kapalina po kultivaci plísně Aspergillus oryzae obsahující plísňovou alfa-amylázu je propouštěna kolonou jako v příkladu 1 za stejných podmínek. Stejným postupem jako v příkladu 1 je získán koncentrát plísňové alfa-amylázy s výtěžkem 94,8 %.
Příklad 3
Obchodní technický preparát bakteriální alfa-amylázy je naředěn na aktivitu 95 EU/ml a zpracován postupem podle příkladu 1 s tim rozdílem, že je použito pufru pH 6,0 pro všechny operace. Je získán čistý preparát bakteriální alfa-amylázy s výtěžkem 93,0 %.
Příklad 4
Extrakt žita jako v příkladu 1 je propouštěn kolonou rozměru 1x12 cm naplněnou beta-cyklodextrinem kovalentně vázaným na obchodní agarózový gel Ultrogel 34. Všechny ostatní podmínky jsou shodné s příkladem 1. Je získán koncentrát amylolytických enzymů s výtěžkem pro alfa-amylázu 93,8 % a pro beta-amylázu 77,6 %.
Příklad 5
Roztok bakteriální amylázy jako v příkladu 3 je propouštěn kolonou rozměru 1x12 cm obsahující beta-cyklodextrin kovalentně vázaný na hydroxyalkylmetakrylátový gel Spheron 1 000. Všechny ostatní podmínky jsou shodné s příkladem 3. Byl získán koncentrát čisté bakteriální alfa-amylázy s výtěžkem 91,8 %.

Claims (1)

  1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU
    Způsob separace amylolytických enzymů z roztoku získaných kultivací plísní nebo bakterií, nebo z roztoku získaných z extrakcí rostlinných či živočišných tkání, případně jiných roztoků tyto enzymy obsahujících, vyznačený tím, že se roztok enzymu sorbuje,.vsádkově nebo ve sloupci, na cyklodextriny vázané na nerozpustném nosiči, jako je perlová nebo vláknitá celulóza, polysacharidy, poresní sklo, keramika, syntetické polymery atd. a po promytí se sorbované amylolytické enzymy eluují roztokem cyklodextrinu o koncentraci 5 až 25 mM.
CS876175A 1987-08-21 1987-08-21 Způsob separace amylolytických enzymů CS261324B1 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS876175A CS261324B1 (cs) 1987-08-21 1987-08-21 Způsob separace amylolytických enzymů

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS876175A CS261324B1 (cs) 1987-08-21 1987-08-21 Způsob separace amylolytických enzymů

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS617587A1 CS617587A1 (en) 1988-06-15
CS261324B1 true CS261324B1 (cs) 1989-01-12

Family

ID=5408184

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS876175A CS261324B1 (cs) 1987-08-21 1987-08-21 Způsob separace amylolytických enzymů

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS261324B1 (cs)

Also Published As

Publication number Publication date
CS617587A1 (en) 1988-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4264738A (en) Process for purification of proteolytic enzymes
FI61718C (fi) Foerfarande foer framstaellning av xylos genom enzymatisk hydrolys av xylaner
DE2703615C2 (cs)
Whistler et al. Enzymatic hydrolysis of Xylan1
Ishii et al. Purification and properties of endo-polygalacturonase from Aspergillus japonicus
Tanaka et al. α-Amylase isozymes in gibberellic acid-treated barley half-seeds
Berger et al. Cocoonase: III. Purification, preliminary characterization, and activation of the zymogen of an insect protease
Synge et al. Bound amino acids in protein-free extracts of Italian ryegrass
MacGregor Isolation, purification and electrophoretic properties of an α‐amylase from malted barley
CS261324B1 (cs) Způsob separace amylolytických enzymů
Chaga et al. Isolation and characterization of catalase from Penicillium chrysogenum
US4027012A (en) Process for the extraction of components having anticoagulant activity "in vivo" from snake venoms and products obtained
Burger et al. Stabilization, partial purification and characterization of peptidyl peptide hydrolases from germinated barley
US4100028A (en) Method for purification of proteolytic enzymes
Nummi et al. Immunoelectrophoretic detection of cellulases
US3623955A (en) Purification and recovery of alkaline protease using cationic-exchange resin
Shioi et al. A simple purification method for the preparation of solubilized chlorophyllase from Chlorella protothecoides
US4581332A (en) Novel alkaline protease
Tatsuoka et al. Purification of lipase produced by Rhizopus
Deleyn et al. Immobilised β‐amylase in the production of maltose syrups
US5543313A (en) Process for the separation and recovery of Aspergillus niger acid protease and glucoamylase
EP0059182B1 (en) A process for isolating aminoacylase enzyme from a mammal kidney extract
US3661716A (en) Process for simultaneous fractionation and purification of protease and ribonuclease of rhizopus mold
EP0294851A2 (de) Verfahren zur Herstellung von Humaninsulin und seinen Derivaten
Prentice et al. Peptide hydrolase in wheat embryo