CS254850B1 - Druhově specifické analogy gonadoliberinů /GnRH/ a způsob jejich pripravy - Google Patents
Druhově specifické analogy gonadoliberinů /GnRH/ a způsob jejich pripravy Download PDFInfo
- Publication number
- CS254850B1 CS254850B1 CS864664A CS466486A CS254850B1 CS 254850 B1 CS254850 B1 CS 254850B1 CS 864664 A CS864664 A CS 864664A CS 466486 A CS466486 A CS 466486A CS 254850 B1 CS254850 B1 CS 254850B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- trp
- tyr
- tle
- peptide
- leu
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Předmětem řešení jsou druhově specifické analogy gonadoliberinů /GmRH/ obecného vzoroe I Glp-His-Trp-Ser-X-Pro-Gly-NHg , kde x znaěí His-D-Tle-Trp-Tyr nebo Tyr-D-Tle-Leu-^Gln nebo Tyr-D-Tle-Trp-Leu. Dále je předmětem řešení způsob přípravy těchto látek, spočívající v tom, že na polymerní nosič ijolystyrenového typu s benzhydrylaminovými skupinami se zakotví karboxyterminální aminokyselina připravovaného peptidů a postupnou kondenzací se vystaví peptidioký řetězec, načež se chráněný peptid odštěpí z polymemího nosiče a přečistí se. Tyto analogy se podle biologických pokusů vyznačuji selektivním a vyšším účinkem na reprodukční funkce než mají přirozené faktory.
Description
Vynález se týká synthetických analogů gonadoliberinů /dále jen GnRH/ a způsobu jejich připravy. Je známo, že sekvence přirodnich GnRH je závislá na druhu živočicha. Byty např. isolovány GnRH z hypothalamů kuřete a lososa /King. J.A., Millar R.P:
S.afr.J.Sci. 73, 1982, str. 124-125j Gherwood N. a kol.:Proc.
Nati.Acad Sci USA, 80,1983, 2794-2798/. Některé analogy těchto hormonů nalezly uplatněni v humánní i veterinární medicíně, zejména při ovlivnění reprodukčních funkci /např. regulaci porodnosti/.
Předmětem vynálezu jsou druhově specifické analogy GnRH obecného vzorce I
Glp~Hi s-Trp-3er-X-Pro-Gly-ΝΗ-, f kde X značí His-D-Tle-Trp-Tyr nebo Tyr-D-Tle-Leu-Gln nebo Tyr-O-Tle-Trp-Leu
Dále je předmětem vynálezu způsob připravy těchto analogů, jehož podstatou je, že na p<ymerní nosič polystyrénového typu s benzhydrylaminovými skupinami se zakotví karboxyterminální aminokyselina připravovaného peptidů a postupnou kondensaci se vystaví peptidický řetězec, načež chráněný peptid se odštěpí z polynmerního nosiče a přečisti se.
Timto způsobem byly připraveny analogy druhově specifických GnRH /kuřete a lososa/, přičemž do polohy ó byla zavedena neproteinogenní hydrofobní aminokyselina konfigurace I>, t-leucin. Tyto analogy se dle předběžných biologických pokusů vyznačuji selektivním a vyšším účinkem na reprodukční funkce naž máji přirozené faktory.
- 2 254 ISO
Peptidy obecného vzorce I byly připraveny MerrifieIdovou metodou syntézy peptidu v pevné fázi. Jako polymerni nosič byl použit polystyren silovaný divinylbenzenem/ s výhodou jednim procentem/ s funkčními skupinami chlormetylovými nebo benzhydrylaminovými. N^-aminoskupiny byly chráněny acidolabilni chrániči skupinou, s výhodou tere buty loxykarbonylovou /dále jen 3oc/ skupinou, jejiž odštěpování v jednotlivých fázích syntézy bylo provedeno acidolyticky, s výhodou směsi triflu©roctovou kyselinou /dále jen TFA/ a dichlormethanu /dále jen DCM/, Postranní funkční skupiny vi cefunkčních aminokyselin byly chráněny skupinami ben2ylového typu. Kondenzace chráněných aminokyselin byly provedeny vhodně aktivovanými deriváty, s výhodou symetrickými anhydridy nebo hydroxybenztriazolové /H03t/ estery. Po ukončené syntéze byly peptidy z pryskyřice odštěpeny a současně byly odstraněny chránící skupiny vi cefunkčnich aminokyselin acidolyticky, s výhodou působením kapalného HF nebo trifluormethansulfonovou kyselinou /TcMSA/ ve směsi s trifluoroctovou kyselinou /TFA/ a thioanisólem. Surové produkty byly čištěny pomoci sloupcové chromatografie na nosičích používaných v chemii peptidu, s výhodou silikagelu, potaženém hydrofobními uhlíkatými řetězci nebo nosičů fungujících jako molekulární síta. Peptidy byly charakterizovány aminokyselinovou analýzou a elektroforetickými metodami.
Dále jsou uvedeny příklady způsobu podle vynálezu.
P ř i kla d í
Do reakční nádoby syntetizátoru pepti dú <{)ylo umístěno 1,4 g benzhydrylaminové polystyrénové pryskyřice silované 1>í divinylbenzenu /obsah HH^, 3.7 mmol/g pryskyřice/· Syntéza zahrnovala 10 cyklu, sestávajících z následujících kroků: /1/ štěpeni chránících skupin. TFAjDCM /1:1/, 1x5 min. 1x30 mini /2/ promývání,
DCM, óxl min; /3/ promýváni, 2-propanol, 2x1 min; /4/ promývání,
DCM, 2x1 min; /5/ neutralizace triethylamínv/Ttá/:DCM /1:1/,
1x1 min. 1x3 min; /3/ promýváni, DCM, 6x1 min; /7/ kondenzace pomocí předem připravených H03t esteru /3 násobný přebytek/, do negativní reakce na aminoskupiny; /3/ promýváni, DCM, 3x1 min.
254 850
První cyklus začínal krokem č. /5/. V jednotlivých cyklech byty kondenzovány následující chráněné aminokyseliny: 3oc-Gly, Boc-Pro, Boc-Leu, 3oc-Trp/For/, Boc-D-Tle, Boc-Tyr/Z/, Ser/Bzl/, Boc-Trp/For/, Boc-His/Boc/ a Glp. Po ukončení syntézy bylo získáno 3,1 g peptidylpryskyřice. Chránící skupiny byly odstraněny a peptid byl odštěpen z pryskyřice v 30 ml kapalného HF obsahující 2 g p-tiokresolu, 1 h při 0°C. Po oddestilováni HF byla reakčni směs extrahována suchým eterem a peptid extrahován do 50%ni kyseliny octové a lyofilizován. Výtěžek í',94 g surového peptidu. 200 mg surového peptidu bylo čištěno na koloně /25x2 cm/ naplněné si likagelovým sorbentem s návázanými hydrofobnimi uhlíkatými zbytky, mobilní fáze 45 - 55 íí methanolu, 55 - 45 % vody obsahující 0,1 <í TFA. Frakce odpovídající homogennímu produktu byly spojeny, zahuštěny a lyofilizovány. Produkt měl vyhovující aminokyselinovou analýzu a byl jednotný při chromatografii na tenké vrstvě, elektroforéze na papi ře při pH 2,5.
Výtěžek ó5 mg Glp-His-Trp-3er-Tyi—Ile-Trp-Leu-Pro-Gly-NH^.
Přiklad 2
Postupem podle příkladu 1 byly na benzhydrylaminovou polystyrénovou pryskyřici kondenzovány následující aminokyseliny: Boc-Gly, Boc-Pro, Boc-Gln, Boc-Leu, Boc-D-Tle, Boc-Tyr/Z/, áer/BZL/, Boc-Trp/For/, Boc-His/Boc/ a Glp. Po ukončené syntéze bylo získáno 2,9 g peptidyl-pryskyřice. Chránící skupiny byly odstraněny a peptid byl odštěpen z pryskyřice v 30 ml kapalného HF obsahující 2 g p-tiokresolu, 1 h při u°C. Po oddestilování HF byla reakční směs extrahována suchým eterem a peptid extrahován do 50/íni kyseliny /
octové a lyofilizován. Výtěžek 0,94 g surového peptidu. 50J mg surového peptidu bylo čištěno na koloně /25x2 cm/ naplněné ši Li — kagelovým sorbentem s návázanými hydrofobnimi uhlíkatými zbytky, mobilní fáze 45 - 55 íí metanolu, 55 - 45 % vody obsahující 0,1 /í TFA. Frakce odpovídající homogennímu produktu byly spojeny, zahuštěny a lyofilizovány. Produkt měl vyhovující aminokyselinovou analýzu a byl jednotný při chromatografií na tenké vrstvě a elektroforéze na papiře při pH 2,5.
Výtěžek 180 mg Gls-His-Trp-Ser-Tyr-Tle~Leu-Gln-Pro-Gly-NHo.
I
- 4 Příklad 3 254 ISO
Postupem podle přikladu i byly na toenzhydrylaminovou polystyrénovou pryskyřici kondenzován) následující aminokyseliny: Boc-Pro, Boc-Tyr/Z/, Boc-Trp/For/, Soc-í>-Tle, Boc-His/Boc/, 3er/Blz/, 3oc-Trp/Foř/, 3oc-His/3oc/ a Slp. Po ukončené syntéze bylo získáno 2,9 peptidyl-pryskyřice. Chrániči skupiny byly odstraněny a peptid byl odštěpen z pryskyřice v 30 ml kapalného HF obsahujici 2 g p-tiokresolu, 1 h při C°C. Po oddestilování HF byla reakční směs extrahována suchým eterem a peptid extrahován do 5UZní kyseliny octové a lyof i lizován. Výtěžek 0,94 g surového peptidú. .00 mg surového peptidú bylo čištěno na koloně /25x2 cm/ · naplněné silikagelovým sorbentem s návazanýemi hydrofóbnimi uhlíkatými zbytky, mobilní fáze 45 - 55 » metanolu, 55 - 45 /· vody obsahující 0,1 íi TFA. Frakce odpovídající homogennímu produktu byly spojeny, zahuštěny a lyofilizovány. Produkt měl vyhovujici aminokyselinovou analýzu a byt jednotný při pH 2,5.
Výtěžek 31 mg Slp-Hi s-Trp-3ei—Hi s-T le-Trp-Tyr-Pro-Glv-NH.,.
Claims (2)
- Ρ ΐί E e Pí É Τ V Y N a L ΪΞ Z Ui. Druhově specifické analogy gonadoliberinů /GnrtH/ obecného vzorce IGlp-H is-T rp-Se r-X-Pro-Gly-UH^ /1/, kde X značí nebo neboHis-D-Tle-Trp-TyrTyr-D-Tle-Leu-3lnTyr-D-Tle-Trp-Leu
- 2. Způsob výroby analogů gonadoliberinů podle bodu 1, vyznačující se tím, že na polymerni nosič polystyrénového typu s benzhydryLamí novými skupinami se zakotvi karboxyterminálni aminokyselina připravovaného analogu a postupnou kondenzaci se vystaví peptidický řetězec, načež chráněný analog se odštěpí z polymerniho nosiče a přečistí se.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS864664A CS254850B1 (cs) | 1986-06-25 | 1986-06-25 | Druhově specifické analogy gonadoliberinů /GnRH/ a způsob jejich pripravy |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS864664A CS254850B1 (cs) | 1986-06-25 | 1986-06-25 | Druhově specifické analogy gonadoliberinů /GnRH/ a způsob jejich pripravy |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS466486A1 CS466486A1 (en) | 1987-06-11 |
| CS254850B1 true CS254850B1 (cs) | 1988-02-15 |
Family
ID=5389918
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS864664A CS254850B1 (cs) | 1986-06-25 | 1986-06-25 | Druhově specifické analogy gonadoliberinů /GnRH/ a způsob jejich pripravy |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS254850B1 (cs) |
-
1986
- 1986-06-25 CS CS864664A patent/CS254850B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS466486A1 (en) | 1987-06-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4897445A (en) | Method for synthesizing a peptide containing a non-peptide bond | |
| KING et al. | A cleavage method which minimizes side reactions following Fmoc solid phase peptide synthesis | |
| US6008058A (en) | Cyclic peptide mixtures via side chain or backbone attachment and solid phase synthesis | |
| EP0257742B1 (en) | Method of synthesizing a peptide containing a non-peptide bond | |
| Atherton et al. | Peptide synthesis. Part 7. Solid-phase synthesis of conotoxin G1 | |
| Maerki et al. | Total solid-phase synthesis of porcine gut gastrin releasing peptide (GRP), a mammalian bombesin | |
| VALERIO et al. | Multiple peptide synthesis on acid‐labile handle derivatized polyethylene supports | |
| Gutte et al. | Reactivation of des (119-, 120-, or 121–124) ribonuclease A by mixture with synthetic COOH-terminal peptides of varying lengths | |
| CZ287710B6 (cs) | Způsob přípravy peptidů s vysokou účinností | |
| JP2733591B2 (ja) | 固相ペプチド合成法 | |
| KISO et al. | Efficient solid phase peptide synthesis: Use of methanesulfonic acid α‐amino deprotecting procedure and new coupling reagent, 2‐(benzotriazol‐1‐yl) oxy‐1, 3‐dimethylimidazolidinium hexafluorophosphate (BOI) | |
| Wang et al. | SOLID PHASE SYNTHESIS OF BOVINE PITUITARY GROWTH HORMONE‐(123–131) NONAPEPTIDE | |
| Gorman | An apparatus for simultaneous manual solid-phase synthesis of multiple peptide analogs | |
| Funakoshi et al. | Chemoselective one-step purification method for peptides synthesized by the solid-phase technique. | |
| NO844123L (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av nonapeptider og dodekopeptider | |
| US4764589A (en) | [N-alpha-acyl,8-glycine, des-19-leucine]-calcitonin | |
| CS254850B1 (cs) | Druhově specifické analogy gonadoliberinů /GnRH/ a způsob jejich pripravy | |
| Bhargava et al. | Synthesis of a cyclic analog of oxidized glutathione by an intersite reaction in a swollen polymer network | |
| Miranda et al. | Synthesis of human CCK26-33 and CCK-33 related analogs on 2, 4-DMBHA and TMBHA | |
| LE‐NGUYEN et al. | Use of carboethoxysulfenyl chloride for disulfide bond formation | |
| BAGLEY et al. | Synthesis of insulin‐like growth factor I using N‐methyl pyrrolidinone as the coupling solvent and trifluoromethane sulphonic acid cleavage from the resin | |
| EP1008656A1 (en) | Process for producing lh-rh derivatives | |
| Pena et al. | Synthesis and properties of human growth hormone fragments | |
| US5059653A (en) | Method for synthesizing a peptide containing a non-peptide bond | |
| Funakoshi et al. | A modified benzhydrylamine as a handle reagent for the solid phase synthesis of peptide amides based on the fluorenylmethoxycarbonyl method |