CS254164B1 - Sposob přípravy testovacích tabliet na stanovenie /3(l->3) glukanázy - Google Patents

Description

3 4 254164

Vynález sa týká spósobu přípravy testova-cích tablet na stanovenie (3(1-+3] glukanázy;EC 3.2.1.6. V posleclných rokoch sa na stanovenie po-lysacharid-hydrolázových enzýmových akti-vit používá s úspechom příslušný chromoly-tický polysachariďový substrát, ktorý po en-zýmavej hydrolýze poskytuje farebný ti-trát, intenzita ktorého je úměrná prítomnejenzýmovej aktivitě. Na tomto principe súznáme zahraničně a čsl. chromogénne sub-stráty ako< například Phadebas Amylase Test[Clinical and technical Information Almwu-ist, Wiksells Boktryckeri (1979)], připadneČs. AO 192 202 a 192 210, ktoré sa používa-jú najma v klinickej praxi pri stanovení ak-tivity alfa amylázy v biologických tekuti-nách pre diagnostické účely. Obdobné súznáme i sposoby přípravy celulózového chro-molytického substrátu či už pre meranie Ctzložky celulázovej aktivity [A. O. Stamm:Helv. Clin. Chim. Acta 46, 3008 (1963) ] ale-bo Ci zložky celulázovej aktivity [R. P. Poin-celot, P. R. Day: Appl. Microbiol. 23, 5, 875(1972)]. Pri sériových analýzach je práško-vá forma chromolytického substrátu nevý-hodná, pretože je potřebné pre každú ana-lýzu zvlášť navazovat chromolytický sub-strát, čo znižuje produktivitu práce. Za týmúčelom sa substráty tabletujú tak, že testo-vacia tableta sa v styku s vodným roztokomenzýmu 1'ahko rozpadne, substrát rýchloniekofko násobné napučí a tým sú vytvoře-né podmienky pre priebeh enzýmovej reak-cie.

Zistili sme však, že polysacharidové sub-stráty s kovalentne viazaným farbivom saprakticky nedajú tabletovat, musia sa při-dávat' pomocné látky, ktoré zabezpečujú jed-nak vhodné reologické vlastnosti granulátupři tabletovaní a rovnako neinhibujú vlast-nú enzýmovú reakciu. U amylázových tes-tovacích tablet sa tento problém rieši tým,že amylázový substrát v suchom stave sazmieša s mikrokryštalickou celulózou, kto-rá je inertná ku amylázovým enzýmom azabezpečuje požadované fyzikálně vlastnos-ti jak granulátu tak i hotovej testovacejtablety.

Tento spósob sa však nedá s úspechom po-užit v prípadoch tabletovania substrátov- po-lysacharidov s vazbou /3(1-+3), respektive(3(1-+4), nakolko mikrokryštalická celulózaje polysacharid s vazbou /3(1-+4), t. j. pří-slušný enzým by reagoval nielen s chromo-génnym substrátem, ale i s bezfarebnýmsubstrátom, čím by sa získali nesprávné hod-noty nameranej enzýmovej aktivity. Zistilisme, že sieťovaná mikrokryštalická celuló-za připravená například podlá AO 136 062nevykazuje žiadne substrátové vlastnostipre ^(l-+3) 'glukanázu a preto je vhodná akopomocná látka pri príprave tabletových tes-tovacích foriem na stanovenie /3(1-+3) gluka-názy.

Podstata vynálezu spočívá v tom, že práš- kový chromolytický substrát /3(1-+3) gluká-nu izolovaný z buněčných stien kvasiniekSaccharomyces cerevisiae obsahujúci 6 až8 % hmot. kovalentne viazaného farbivadvojsodnej soli kyseliny 8-amíno-5-[3-(sul-f oetylsulf onyl) anilíno] 6-antrachinónsulfo-novej a napúčacím objemom vo vodě 12 až20 ml. g_1 sa zmieša s mikrokryštalickoucelulózou zosietenou s 10 až 20 % hmot. e-pichlórhydrínom (2-chlórmetyloxiránom) vhmotnostnom pomere 1: 2 až 1:3 a nako-niec sa přidá 2 % hmot. mastenca a po ho-mogenizácii sa tabletuje na tabletovacomstroji na tablety o hmotnosti 100 mg, s pres-nosťou + 3 °/o.

Optimálna velkost častíc ako chromoly-tického substrátu /3(1-+3) glukanátu tak isieťovanej mikrokryštalickej celulózy mábyť v rozsahu 80 až 250 μτα. Aby bola do-statečné potlačená substrátová afinita mik-rokryštalickej celulózy k (3(1-+3) glukanázeje potřebné aby celulóza bola zosietená sepichlórhydrínom tak, že obsahuje 10 až 15percent viazaného epichlórhydrínu na hmot-nost suchej mikrokryštalickej celulózy. Op-timálna hmotnost testovacej'tablety je okolo100 mg pre dostatočnú přesnost stanovenia/3(l-+3)glukanázovej aktivity. Výhodou nového spósobu přípravy table-tového testu na stanovenie /3(1-+3) glukaná-zovej aktivity je, že umožňuje viac násobnézvýšit produktivitu práce pri sériových a-nalýzach predmetnej enzýmovej aktivity, privysokej přesnosti použitej fotokolorimetric-kej metody a bez poklesu citlivosti metody,ktorá by bola nevyhnutná pri použití nesie-ťovanej mikrokryštalickej celulózy ako po-mocného aditíva dosiahnutie optimálnychfyzikálno-mechanických vlastností testova-cích tablet. Příklad 1 100 g chromolytického substrátu /3(1-+3)glukánu izolovaného z buněčných stien kva-siniek Saccharomyces cerevisiae s obsahom6 % hmot. viazaného farbiva dvojsodnej so-li kyseliny 8-amíno-5-[3-(sulfoetylsulfonyl)-anilíno]6-antrachinónsulfonovej a vefkosťoučastíc 80 až 250 a napúčacím objemomvo vodě 12 ml. g_1 sa homogenizuje s 200 gmikrokryštalickej celulózy sieťovanej s 20 %hmot. epichlórhydrínom s prídavkom 6 gmastenca, načo sa homogenizovaný suchýgranulát tabletuje na tabletovacom stroji natablety o hmotnosti 100 mg + 3 mg. Hotovétablety sú vhodné na sériové meranie,/3(1-+3)glukanázovej aktivity. Příklad 2

Postupuje sa podlá příkladu 1 s tým roz-dielom, že sa použije 300 g sieťovanej mik-rokryštalickej celulózy sieťovanej s 10 %hmot. s epichlórhydrínom a chromolytickýsubstrát /3(1-+3) glukán s obsahom 8 % hmot.

Claims (1)

1. 8 4 6 2 5 4 S viazaného farbiva a napúčacím objemom20 ml. g"i. Vynález může nájsť široké použítie v bio- chemii pri stanovení /3(1-3) glukanázovejaktivity, či už pre výskumné účely alebo vpriemyselných aplikáciách. PREDMET Sposob přípravy testovacích tablet na sta-novenie /3(1-3) glukanázy, EC 3.2.1.6 vyzna-čený tým, že práškový chromolytický sub-strát /3(1-3) glukán izolovaný z buněčnýchstien kvasiniek Saccharomyces cervisiae ob-sahujúci 6 až 8 % hmot. kovalentne: viazané-ho farbiva dvojsodnej soli kyseliny 8-amíno--5- [ 3- (sulf oetylsulfonyl) anilíno ] 6-antra- chinónsulfonovej a napúčacím objemom vovodě 12 až 20 ml. mg-* sa zmieša s mikro-kryštalickou celulózou zosietenou s 10 až20 % hmot. epichlórhydrínom v hmotnost-nom pomere 1:2 až 1:3 a potom sa,po přida-ní 2 % hmot. mastenca a homogenizácii tab-letuje na tabletovacom stroji na tablety.