CS251396B1 - Pohotovostní bakteriologická kultivační souprava - Google Patents

Abstract

Předmětem řešení je pohotovostní bakteriologická kultivační souprava k balení, distribuci, skladování, přípravě a jednorázovému použití pevných mikrobiologických půd, které sestává z průhledné misky s osazením na svém horním obvodě, ze sterilní kultivační půdy uvnitř misky, z průhledného víčka s úchytkou, do nějž miska se sterilní kultivační půdou volně zapadá a, zcela je vyplňuje a s vícevrstvé krycí folie, uzavírající víčko s miskou se sterilní kultivační půdou uvnitř hermetickým, s výhodou peelovým svarem. Půdy v kultivačních miskách si zachovávají kvalitu a vysokou citlivost pro mikroorganismy po dlouhou dobu skladování. Manipulace s miskami při práci Je velmi jednoduché. Kultivační souprava mé Široký okruh použití v humánní i veterinární medicíně, v potravinářství, vodohospodářství, zemědělství a farmacii.

Description

Předmět·· vynálezu je pohotovostní bakteriologická kultivační souprava, obsahující sterilní pevnou mikrobiologickou půdu, určená k balení, distribuci, skladování, přípravě a jednorázovému použití pevných mikrobiologických půd.

Pro mikrobiologické hodkocení kvalitativního i kvantitativního charakteru se využívá růstových vlastností mikroorganismů na mikrobiologických živných půdách o různém složení, závislém ne vlastnostech mikroorganismů.

Mikrobiologická půdy jsou citlivým biologickým materiálem, u něhož dochází snadno ke znehodnocení. Půdy připravované a skladovaná běžným způsobem rychle vysýchají a snadno se během skladování kontaminují. Proto se hledá řeěení jak zajistit jejich standartní kvalitu při skladování, přepravě a manipulaci.

V mikrobiologické praxi je velice rozšířené používání tzv. pevných mikrobiologických živných půd různého složení, tj. půd, které po zchladnutí ztuhnou do gélovltého stavu v důsledku přídavku určitého množství ageru do živné půdy.

Příprava těchto pevných mikrobiologických živných půd se provádí rozvařením určitého množství suchá půdy obvykle v práškovém nebo granulovaném stavu ve vodě, sterilizací takto získaného roztoku a jeho rozlitím do předem vysterilizovených, nejčastěji skleněných, ale i plastových - polystyrénových či polyetylenových Petriho misek za aseptických podmínek. Po ochlazení a ztuhnutí roztoku živné půdy v Petriho misce a jejím zakrytí volně loženým víčkem je pevná mikrobiologická živná půda připravena k využití při mikrobiologickém hodnocení.

Uvedený způsob ukládání a přechovávání mikrobiologických půd ve skleněných nebo plas tových Petriho miskách má některé závažné nedostatky. Pevné mikrobiologické živné půdy v Petriho miskách vyžadují časově a materiálově náročnou přípravu, projevující se negativně zejmána tam, kde se neprovádí hromadně mikrobiologická vyšetření, jejich uchování je časově omezená na dobu jednoho až dvou týdnů zpravidla při snížená teplotě a při jejich skladování a transportu ne místo očkování vzniká reálná nebezpečí jejich kontaminace případným oddělením víčka od Petriho mlsky s půdou.

Ve snaze zabránit zejmána posledně uvedenému nedostatku se Petriho misky naplněná půdou balí do obalů z plastických hmot. Tím se sice zabrání nežádoucímu oddělení spodní čáotl a víčka, ale nezamezí se unikání vlhkosti, která podporuje růst mikroorganismů a plísní vně misky. Tím ja ohrožene 1 sterilita vnitřního obsahu mlsky.

Selži vývoj se ubíral k použití plastických misek, jejichž víčko je se spodní částí pevně spojeno pojidlem. 1 v tomto případě dochází k dehydrataci a po několika týdnech skladování i ke kontaminaci.

Oelěí možností je přechovávání půd v několika nádobkách se Šroubovacím víčkem či v zatavených skleněných ampulích. Nevýhodou tohoto řeěení jsou v prvém případě relativně zvýžsné náklady řešení a va druhém případě snadné rozbitelnost ampulí*.

Pojení misek lepicími páskami se ukázalo rovněž jako nedostatečné. Pásky časem křehnou, přestávají lapit a tím 1 bránit dehydrataci půdy.

Dalším z možných řeěení, popsaným v ÚSP 3 532 604, je potahování hotových naplněných misek nebo zkumavek a půdami filmem kopolymerů. Tento způsob uchovávání půd ae jeví jako velmi pracný a ekonomicky náročný.

Příbuzná řežení problému, popisovaná rovněž zejména v US - patentové literatuře, zahrnují fyzikální nebo chemické změny biologického materiálu, jako je například lyofilizace, hluboké zmrazení nebo přídavek chemikálií. Tyto postupy však mění povahu biologického materiálu a navíc vyžadují drahého vybavení.

K odstraněni shora uvedených nedostatků směřuje pohotovostní bakteriologická kultivační souprava, obsahující sterilní pevnou mikrobiologickou půdu, určená k balení, distribuci, skladování, přípravě a jednorázovému použití pevných mikrobiologických půd, podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že souprava sestává z průhledná, plochá, například kulatá misky s osazením na svém horním obvodě, ze sterilní kultivační půdy u uvnitř misky, z průhledného víčka s úchytkou, do nějž miska se sterilní kultivační půdou volně zapadá a zcela je vyplňuje a z vícevrstvé krycí folie, uzavírající víčko 8 miskou se sterilní kultivační půdou uvnitř hermetickým, s výhodou peelovým svarem.

Ve výhodném provedení vynálezu jsou miska i víčko vytvořeny z průhledného, néměkčeného, hlubokotažného plastu o tlouělce 0,20 až 0,50 mm, například z neměkčeného polyvinyl chloridu, vhodného pro blistrová balení.

Konstrukce a materiálové složení vícevrstvé krycí folie, volené s hlavním aspektem k jejím funkčním vlastnostem, mohou být různé. V ověřovací praxi výhodně obstály zejména folie z vrstvy viskózy nebo biaxiálně orientovaného polypropylénu, opatřené za své vnějěí strany polyvinylidénchloridovým lakem, vrstvy polyetylénu nebo polyvinylidenchloridu, folie hliníku o tlouělce 0,01 až 0,04 mm a peelové vrstvy v uvedeném pořadí a folia z vrstvy papíru o ploěné hmotnosti 45 až 100 g.m”², vrstvy polyetylénu o tlouělce 0,03 až 0,09 mm a hustotě v rozmezí 918 až 923 kg.m”^, folie hliníku a tlouělce 0,01 až 0,04 mm a peelové vrstvy v uvedeném pořadí.

Chemické složení peelové vrstvy, umožňující hermetické uzavření jednotlivých částí soupravy ae sterilní půdou v jeden celek, může být taká různá. K danému účelu vyhovuje zejména nitrocelulóza nebo kopolymer typu etylen - vinylkarboxylová kyselina, etylen - ; vinylecetát, vinylchlorid - vinylacetát.

Materiály, z nichž jsou vytvořeny miska a víčkem a vícevrstvá krycí folie, vynikají vedla vlastnosti, vyplývajících již z jejich výěe uvedené charakteristiky, zvláště nízkou propustností pro vodní páru. Zhledlske požadavků kladených na pohotovostní bakteriologickou kultivační soupravu a vytýčeného cíle vynálezu, tj. zamazaní unikání vlhkosti z půdy a vzniku.nežádoucí kontaminace, je tato vlastnost materiálu prvořadou.

Materiál, z něhož je miska a vlčkem vytvořena, je pevný, lehký, amedmo tvarovatelný, lze jej sterilizovat běžnými metodami, je nepropustný pro mikroorganismy, nebrání věak růstu žádoucích mikroorganismů. Jeho použití je praktické i z toho důvodu, io joj lze popisovat laboratorní tužkou na sklo.

Z výrobních důvodů jo výhodná, aby miska i víčko byly zhotoveny z téhož materiálu. Není to věak podmínkou. Důležitá je, aby víčko bylo transparentní a umožňovalo vizuálně sledovat a vyhodnocovat chování studovaného mikroorganismu a průběh kultivace nn naočkované půdě, aniž by bylo z misky snímáno. Neměkčený hlubokotažný polyvinylchlorid tuto podmínku splňuje. Je-li taká miska zhotovena z transparentního materiálu, pak je možné sledování i hodnocení provádět táž v pohledu ze spodu misky.

Pohotovostní bakteriologická kultivační souprava podle vynálezu uspokojuje komplexně všechny vysoké nároky, které souvisejí jednak s jejím praktickým využitím, jednak v vlastním řešením technického problému. Řadí se k nim zejména nepropustnost pro mikroorganizmy, minimální propustnost pro vodní páru, inertnost vůči pevné mikrobiologické půdě, atorilizovatelnost gama nebo UV zářením, tepelná odolnost při kultivačních teplotách, možnost vizuální kontroly sterility půdy a průběhu kultivace při využití soupravy, schopnost uchovávat funkční vlastnosti půdy v průběhu dlouhodobého skladování - alespoň jedem rok, operativní použitelnost - souprava obsahuje všechny nezbytné funkční součásti včetně mikrobiologické půdy k přímému použití, snadná manipulovatelnost při funkčním využití, materiálová dostupnost a ekonomická výhodnost ve srovnání a dosud používanými systémy misksvíčko.

Zavedením pohotovostní bakteriologické kultivační soupravy pro jednorázové použití pevných mikrobiologických půd podle vynálezu na specializovaném pracovišti, zabývajícím se mikrobiologickou diagnostikou, odpadá řada úkonů spojených se separátní přípravou živné půdy bezprostředné před použitím. Jsou jím odstrsněny operace naveževéní příslušných složek půdy, jejich rozpouštšní a rozvažování, sterilizace půdy a laboratorního skla - Petriho mlsek pipet, rozlití sterilní půdy do misek a podobni. Uvedené operace jsou nejen časově náročné, ale vyžadují i investiční a energeticky náročné přístroj·, zejména horkovzdušné sušárny a sterilizační autoklévy.

Tělesné vytvoření a uspořádání jednotlivých částí pohotovostní bakteriologické kultivační soupravy podle vynálezu v adjustovaném stavu ja znázorněno na obr. 1 v pohledu shora a na obr. 2 v řezu. Obr. 3 představuje detail jednoho z možných provedení uspořádání b složení vícevrstvé, v daném případě čtyřvrstvé krycí folia podle vynálezu.

Plochá, v daném případě kulatá mlska 1, opatřená oeasením g ne sván horním obvodě a obsahující sterilní kultivační půdu £ uvnitř je uložena v průhledném víčku £ a úchytkou £. Miska £ s osazením g a víčko £ jsou vytvarovány tak, aby miska do víčka při adjustaci soupravy volně sapadla a současně, aby při použití soupravy, po otevření soupravy odloupnutím krycí folia £ naočkování půdy £, vyjmutí resp. vytanutí mlsky £ s víčka £ nejlépe jeho nakloněním, a sakrytí misky víčko £ k misce £ dobře přiléhalo a tím plnilo při kultivaci svou funkci. Úchytka £ slouží k snazšímu odloupnutí krycí folia £.

Vyěrafovená plocha na obr. 1 a plná čára na obr. 2 znázorňují pealový svar £, který hermeticky apojuje vícevrstvou krycí folii £ s obvodovou plochou vlčka £. Aby sa při otevírání soupravy bezprostředně před jejím použitím působením tahové síly na volnou, nepřiváženou část krycí folia £ při vnějším okraji úchytky £ dosáhlo shadného, plynulého a úplného odloupnutí krycí folie £, zasahuje peelový svar £ svým postupně se zužujícím výběžkem z kruhového obvodu do úchytky £.

Obr. 3 znázorňuje uspořádání a složení vícevrstvé krycí folie, popsené v bodě £ předmětu vynálezu.

Podle charakteru laboratorních testů, prováděných rutinně k diagnostichým a kontrolním účelům při sledování sterility a nezávadnosti a založených na hodnocení mikroflory, kultivované na definovaných diagnostických živných půdách, používají se v praxi různé živné půdy, sestavené s ohledem na specifičnost zkoušky a ne očekávanou odpověS, například zkoušení vody, mléka a mléčných výrobků, potravin, reziduji toxických látek, obalového materiálu, filtrační technika, lékařská diagnostika, stanovení aktivit antibiotik, zkouěky sterility, zkoušení farmaceutických surovin a produktů, biochemické testy a podobně.

Z živných půd tuzemské provenience přicházejí v úvahu zejména živný agar č. 1 a č. 2, Endove půda, MacCohkey agar β Saboureudův agar známého standertnlho složení. Živný agar č. 1 je mírně alkalická živná půda, určená pro všeobecná laboratorní použití ke kultivaci růstově nenáročných bakterií, hlavně pro bakteriologické vyšetření pitných a odpadních vod

Živný agar č. 2 se hodí rovněž ku všeobecnému použití » bakteriologii. Déle je určený pro aubkultury různých bakterii a na jejich krátkodobé uchovávání ve sbírce. Endove půda je určená k rozlišení laktózu zkvaěujících a nezkvaěujících mikroorganismů, pocházejících převážně ze sažlvacího traktu. Používá sa především v diagnostické humánní či veterinární bakteriologii, ale též v hygienické bakteriologii k izolaci S. coli z vody, potravin Či jiného prostředí.

MacConkey agar ja určen k izolaci a diferenciaci grsnnegativních červených tyčinek. Velmi dobře se hodí k důkazu přítomnosti a počtu E. coli, jakož 1 důkazu a izolaci salmonel a shogel.

Sabouraudův agar je určen k Izolaci a kultivaci kvasinek a kožních patogenních plísní.

Ze shora uvedeného je zřejmá, Se pohotovostní bakteriologická kultivační souprava podle vynálezu má Široký okruh použití nejen v humánní a veterinární medicíně, ale i ▼ potravinářství, vodohospodářetví, zemědělství a farmacii. Sortiment takto připravovaných pevných živných p&d lze dle potřeby obměňovat e centrálně distribuovat. Výrobek je Vhodný i pro práci v terénu bez nákladného laboratorního vybavení. P&dy v kultivačních nlakáeh sl zachovávají kvalitu a vysokou citlivost pro mikroorganismy po dlouhou dobu skladování. Manipulace a mlskami při práci je velmi jednoduchá.

Přikladyprovedenl

Příklad I

Sladovaná p&da: 2lvný agar č. 1

Sterilizace obalu: vnějěl a vnitřní mlska i krycí materiál byly ozářeny na gama zdroji dávkou 25 kQy.

Plnění půd: Sivný agar byl připraven dle návodu a sterilizován v autoklávu 20 minut při 121 °C. Po zchlazení půdy na cca 45 °C byla půda za aaeptických podmínek v boxu a lamlnáraín proudánín vzduchu rozpínána po 15 ml do vnitřních misek. Po zatuhnutí půdycca 5 minutách - byla no vičku a miskami navařena sterilní krycí folie.

Sledování sterility a záchytnosti půd: soupravy byly akledovány po dobu 12 máaíců při pokojová teplete 20 až 25 °C. Běhen táto doby bylo sledováno zachování sterility a každý něeíc byla testována záchytnost půd pro organismy. Ke sledování citlivosti půdy byla používána B. coli CCU 185. Výsledky záchytnosti byly srovnány s výsledky získanými ma čerstvá připraveném žlvnán agaru č. 1 v Petriho miskách. Živný agar 6. 1 si zachoval i po 12 másících skladování záchytnost na stejná úrovni jako čerstvá připravená půda.

Ma sledovaných kultivačních miskách nebyla po celou dobu skladování zjiátána kontaminace. Viecbny vzorky si uchovaly sterilitu.

Příklad 2

Slááovaná půda: živný agar č. 2

Sterilizace obalu a plnění půd jako v příkladu 1.

Sledování sterility a záchytnosti půd: skladování vzorků i metodika testování jako v příkladu 1, testovací mikroorganismus Staphyeoccus aureua. Sterilita zůstala zachována u váech vzorků po dobu 1. roku sladování. Záchytnost pro Stephylococcus aureua zůstala po celý rok na úrovni čerstvá připravená půdy.

Příklad 3

Sledovaná půda: Bndova půda

Sterilizace obalu a plnání půdy jako v příkladu 1.

Sledování sterility půdy: váechny vzorky si uchovaly sterilitu po dobu 12 misíců.

Sledování záchytnosti půdy: skladování vzorků i metodika testování jako v přikládá 1.

Testovací mikroorganismy: směs B. coli a Shigella sonnei,

Záchytnost se v prních dvou másících sledování snížila, v dalěích měsících až do doby 1 roku se řádově rovnala čerstvě připravená půdě.

Příkladě

Sledovaná půda: MncConkey agar

Sterilizace obalu a plnění půdy jako v přikladu 1.

Sledování sterility půdy:váechny vzorky ai uchovaly sterilitu po dobu 12 měsíců.

Sledování záchytnosti půdy: skladování vzorků i metodika testování jako v příkladě 1.

Testovací mikroorganismy: směs E. coli a Shlgelle sonnei.

Záchytnost pro uvedenou směs mikroorganismů zůstala po celý rok na úrovni čerstvě připraveně půdy.

Přiklad 5

Sladovaná půda: Sabouraudův agar

Sterilizace obalů a plnění půdy jako v příkladě 1.

Sladování atarility půdy: během 12 měsíců skladování byl zjiětin Jeden kontaminovaný vaorak.

Sladování záchytnosti půdy: skladování vzorků i metodika testování jako v příkladě 1

Testovací mikroorganismus: Candia albicans

Záchytnoat pro uvodozý mikroorganismus: zůstale po celou dobu sledování na úrovni čerstvě připravená půdy.

Přiklad 6

Sledovaná půda: Sabouraudův agar * Sterilizace obalu: Kombinace otylalkohol + UV záření

Platní půdy: Soboursůdův agar byl připraven dle návodu a sterilizován v autoklávu 20 minut při 121 *C. Po zchlazení na cca 45 °C byl v boxu o laninárním prouděním vzduchu rozpínám po 15 ml do předem vyaterlllzovaných alaok. Po zatuhnutí půdy - cca 5,5 minut byl· na vláká a nitkami navařona sterilní krycí folio.

Sledování sterility a šáchytnosti půdy: soupravy byly skladovány po dobu 18 měsíců při pokojová teplotě a bylo u nich sledováno zachování atarility a záchytnosti pro mikroorganismy. Testování citlivosti bylo prováděno každý měsíc kmenem Candida albicans a srovnáno o čerstvě připraveným Sabouraudovým agaram na Potriho miskách. Sledovaná půda al šachovala po celou dobu skladování záchytnoat srovnatelnou a čerstvě připravenou půdou

U skladovaných vzorků byla v 7 · nalezena nežádoucí kontaminace, což bylo zřejmě způsobeno zlebýn zdrojem UV zářením a tudíž nedostatečnou eliminací kontaminace na obalován notoriálu.

Příklad 7

Sladovaná půda: Sndova půda

Sterilizace obalu a plnění půdy jako v příkladě 6.

Sladování sterility půdy: během 8 měsíčního skladování nebyla zjiětěna kontaminace.

Sledování záchytnoati půdy: skladování vzorků i metodika testování jako v příkladě 6, testovací nikroorgeniaky jako v příkladě 3. V prvních dvou měsících byl zazmemenán pogloa záchytnosti, v deláích měsících sa záchytnoat vyrovnala čerstvě připravená půdě.

Příklade

Sledovaná půda: Mac Conkay agar

Sterilizace obalu a plnění půd jako v příkladě 6.

Sladování sterility půdy: během 8 měsíčního skladování byla zjištěna kontaminace a 2 I vzorků.

Sledování záchytnosti půdy: metodika i testovací mikroorganismy jako v příkladě 4. Záchytnoat pro uvedený mikroorganismus zůstala po dobu 8 měsíců na úrovni čerstvě připravená půdy.

Claims (7)

1. Pohotovostní bakteriologické kultivační souprava, obsahující sterilní pevnou mikrobiologickou půdu, určené k balení, distribuci, skladování, připraví a jednorázovému použití pevných mikrobiologických půd, vyznačené tím, že sestává z průhledné, ploché', například kulaté misky (1) a osazením (2) na svém horním obvodě, ze sterilní kultivační půdy (3) uvnitř misky (1), z průhledného vlčka (4) s úchytkou (5), áo ni ji miska (1) se sterilní kultivační půdou (3) volné zapadá a zcela je vyplňuje a z vícevrstvé krycí folie (6), uzavírající víčko (4) s miskou (1) se sterilní kultivační půdou (3) uvnitř hermetickým, s výhodou peelovým svarem (7).

2. Souprava podle bodu 1, vyznačená tím, že miska (1) je vytvořena z průhledného, nemékčeného, hlubokotažného plastu o tlouělce 0,20 ež 0,50 mm, například z něměkčeného pólyvinylchloridu, vhodného pro blistrové balení.

3. Souprava podle bodů-1 a 2, vyznačená tím, že víčko (4) je vytvořeno z téhož materiálu jako miska (I).

4. Souprava podle bodů 1 až 3, vyznačená tím, že vícevrstvá krycí folie (6) sestává z vrstvy viskózy nebo biaxiálně orientovaného polypropylénu, opatřené ze své svějéí strany polyvinylidenchloridovým lakem, vrstvy polyetylénu nebo polyvinylidenchloridu, folie hliníku o tlouělce 0,01 až 0,04 mm a peelové vrstvy v uvedeném pořadí.

5. Souprava podle bodů 1 až 3, vyznačená tím, že vícevrstvá krycí folie (6) sestává z vrstvy papíru o plošné hmotnosti 45 až 100 g.m”^z vrstvy polyetylénu o tloušlce 0,03 až 0,09 mm a hustotš v rozmezí 918 až 923 kg.m^-^, folie hliníku o tloušlce 0,01 až 0,04 nn a peelové vrstvy v uvedeném pořadí.

6, Souprava podle bodů 1 až 5, vyznačená tím, že peelové vrstva sestává z nltrocelu lózy nebo kopolymeru typu etylen - vinylkarboxylová kyselíme, etylen - vinylacetát, vinylchlorid - vinylacetát.

7. Souprava podle bodů 1 až 6, vyznačená tím, že obsahuje sterilní kultivační půdu s agarem, jeko Živný agar č. 1, živný agar č. 2, Endovu půdu, MaeConkey agar nebo Sabouraudův agar.