CS248241B1 - Sposob izolácie 1'udskýcb plazmaíických bielkovín obsahujúcich albumin - Google Patents

Description

248241

Vynález sa týká sposobu izolácie plazma-tických bielkovín obsahujúcich albumin z1'udskej plazmy, prl ktorom sa uplatňujekombinovaný účinok peroxidu vodíka, eta-nolu a kyseliny kaprylovej pri precipitáciibalastných bielkovín, osobitne lipopro-teínov. V súčasnom období stabilně plazmatickébielkoviny obsahujúce albumin, které sa vy-rábajú pod komerčným názvom „Stabilizo-vaný roztok plazmatických bielkovín“ sa vovačšine prípadov izolujú etanolovou frak-cionáciou vo formě frakcie IV + V, z ktorejsa potom extrahujú labilně bielkoviny zoblasti beta a alfa globulínov. Oddelenietýchto bielkovín sa prevádza za pedmienok,ktoré nie sú optimálně a preto nezaručujúich kvantitatívnu precipitáciu a z toho dů-vodu negativné ovplyvňujú stabilitu koneč-ného výrobku. Z najznámejších postupov izolácie plaz-matických bielkovín obsahujúcich albuminmožno spomenúť (Rybák M., Škvařil F.,Andrašina J.: čs. Farmácia 3, 137, 1963;Milár A. a spol.: Stabilný plazmatický roz-tok bielkovín — závěrečná správa 1965;pusko· B., Bulík J.: AO č. 182 921; KyselevA. E., From A. A., Nikitenko A. A., RusanovV. M.: Problemi gematologii i perelivaniakrovi 4, 9, 1967; Rusanov V. M.: Problemigematologii i perelivania krovi 1, 51, 1968 j.

Nevýhodou spomínaných technologickýchpostupov je časová náročnost, pričom kva-lita konečného výrobku nie je standardně,pietože v priebehu uskladňovania hotovýchvýrobku v sporadicky dochádza k zníženiukvality následkom zvýšenia turbidity.

Podstata nového sposobu izolácie l'ud-ských plazmatických bielkovín obsahujúcichprevažne albumin spočívá v tom, že k su-pernatantu obsahujúceho 19 % objemovýchetanolu, získaného z 1'udskej plazmy, po od-dělení fibrinogénu a imunoglobulínov sapH upraví na hodnotu 6,0 až 6,1 a přidá sa0,2 až 0,4 % objemových vodného roztokuperoxidu vodíka a 0,3 až 0,4 % objemovýchkoncentrovanej kyseliny kaprylovej na po-vodný objem supernatantu.

Po vytemperovaní roztoku na teplotu +15až -(-30 °C po dobu 1 až 10 minút sa hod-nota pH zníži na 5,0 až 5,1 a schladí na tep-lotu +15 °C. Potom sa roztok mieša 1 ho-dinu a precipituje po dobu 1 až 12 hodin.Vyzrážané balastné bielkoviny sa od rozto-ku obsahujúceho stabilně plazmatické biel-koviny, prevažne albumin, oddefujú filtrá-ciou alebo centrifugáciou. Takto připravenýbielkovinový roztok sa rozplňuje, namrazu-je, lyofilizuje a farmaceuticky spracúvava běžným technologickým postupom. Přednosti uvedenej technologie sú v tom,že kombináciou peroxidu vodíka, etanolu a kyseliny kaprylovej sa dosahuje dokonalej-ší frakcionačný efekt pri precipitácii ba-lastných bielkovín obsahujúcich vysoké %lipoproteínov. Silný delipitačný účinok pe-roxidu vodíka na lipoproteíny popisuje(From a spol.: patent ZSSR č. 332 831; Sa-mojlenko a spol.: ŽMEI 12, 30, 1983). Dobrýprecipitačný účinok plazmatických bielko-vín z oblastí glgobulínov zvyšuje kyselinakaprylová (Hoch H., Chanutin A.: Arch. of.Biochem. and biophysic 51, 271, 1954],Příklad 1 10 000 ml supernatantu obsahujúceho 19percent objemových etanolu získaného z1'udskej plazmy po oddělení fibrinogénu aimunoglobulínov sa vytemperuje na 0 °C apH sa upraví 0,5M NaOH na hodnotu 6,0až 6,1. Potom sa k roztoku přidá 200 ml 5percentného peroxidu vodíka a 40 ml kyse-liny kaprylovej a teplota roztoku sa zvýšina -(-20 °C na dobu 1 minúty. Po úpravě pH1M kyselinou octovou na hodnotu 5,0 až 5,1 sa roztok schladí na teplotu +15 °C.Roztok sa ďalej nechá miešať 1 hodinu apotom precipitovať balastné bielkoviny podobu 4 hodin.

Vyprecipitované balastné bielkoviny saseparujú centrifugáciou, supernatant sa filt-ruje cez čeriace vložky, podrobí sa ultra-flltrácii alebo dialýze, po ukončení ktorejsa rozplňuje, namrazuje a lyofilizuje. Lyofi-lizovaný polotovar sa spracúvava na injekč-ný roztok známými technologickými operá-ciami. Příklad 2 10 000 ml supernatantu obsahujúceho 19percent objemových etanolu získaného z1'udskej plazmy po oddělení fibrinogénu aimunoglobulínov sa vytemperuje ina 0 °!C apH sa upraví na hodnotu 6,0 až 6,1 0,5MNaOH. Potom sa k roztoku přidá 100 ml5 %-ného peroxidu vodíka a 35 ml kyselinykaprylovej a teplota roztoku sa zvýši na+25 °C na dobu 5 minút. Po úpravě pH 1Mkyselinou octovou na hodnotu 5,0 až 5,1 saroztok schladí na teplotu +15 °C. Roztoksa ďalej nechá miešať 1 hodinu a potomprecipitovať balastné bielkoviny po dobuhodin.

Vyprecipitované balastné bielkoviny saseparujú centrifugáciou, supernatant sa filt-ruje cez čeriace vložky, podrobí sa ultra-filtrácíi alebo dialýze, po ukončení ktorejsa rozplňuje, namrazuje a lyofilizuje. Lyofi-lizovaný polotovar sa spracúvava na injekč-ný roztok známými technologickými operá-ciami.

Claims (1)

1. 248241 Hodnotenie kvality výrobkuPožadované skúšky Požiadavka PNY Výsledky výrobku podlá PV sterilitaapyrogenitatepelná stabilitaelektrof. čistota vyhovujevyhovuje90 n. j.miin. 90 % vyhovujevyhovuje 26,9 n. j. 96,4 % PREDMET Sposob izoiácie 1'udských plazmatickýchbielkovín obsahujúcich albumin zo super-natantu získaného z íudskej plazmy po od-dělení fiibrinogénu a imunoiglobulínov vyzna-čujúci sa tým, že pH supernatantu obsahu-júceho 12 až 20 % objemových etanolu priteplote +15 až +30 °C sa upraví na hod-notu 6,0 až 6,1, přidá sa 0,2 až 4 % obje-mových 5 %-ného vodného roztoku pero- VYNALEZU xidu vodíka a 0,3 až 0,4 % objemových kon-centrované] kyseliny kaprylovej, prioom %sa vztahuje k východziemu objemu super-natantu, pH sa upraví na hodnotu 5,0 až 5,1 a pri teplote +15 °C sa vyzrážajú ba-lastné bielkoviny, ktoré sa oddelia filtrá-ciou od roztoku obsahujúceho stabilně lud-ské plazmatické bielkoviny obsahujúce pře-vážné albumin.