CS243617B1 - Způsob přípravy typově specifického antigenu viru herpes simplex HSV-2 - Google Patents
Způsob přípravy typově specifického antigenu viru herpes simplex HSV-2 Download PDFInfo
- Publication number
- CS243617B1 CS243617B1 CS837818A CS781883A CS243617B1 CS 243617 B1 CS243617 B1 CS 243617B1 CS 837818 A CS837818 A CS 837818A CS 781883 A CS781883 A CS 781883A CS 243617 B1 CS243617 B1 CS 243617B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- hsv
- antigen
- preparing
- virus
- herpes simplex
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Způsob přípravy HSV-2 antigenu, využitelný k detekci typově specifických protilátek HSV-2. Popsaná matoda přípravy HSV-2 antigenu na kolonce lektinu hlemýždě zahradního vázaného na agarosu 4B a vymytím 0,0IM roztoku cukru N-acetylgalaktosaminu umožňuje připravit specificky reagující HSV-2 antigen.
Description
(54) Způsob přípravy typově specifického antigenu viru herpes simplex HSV-2
Způsob přípravy HSV-2 antigenu, využitelný k detekci typově specifických protilátek HSV-2. Popsaná matoda přípravy HSV-2 antigenu na kolonce lektinu hlemýždě zahradního vázaného na agarosu 4B a vymytím 0,0IM roztoku cukru N-acetylgalaktosaminu umožňuje připravit specificky reagující HSV-2 antigen.
Vynález se týká přípravy typově specifického antigenu virus herpes simplex typ 2 (HSV-2) k detekci typově specifických protilátek proti· HSV-2.
Herpes simplex typ 1 (HSV-1) orální a typ 2 (HSV-2) genitální jsou geneticky příbuzné a většina jejich antigenů křížově reaguje. Současně používané metody pro určování přítomnosti specifických protilátek typu HSV-2 v lidských sérech prozatím užívají bu3 metod nepřímých, např. neutralizační test (Rawls a spol., 1970, J. Immunol. 104, 599 až 606), kdy na základě výpočtu poměru hodnot titrů protilátek proti HSV-1 a proti HSV-2 (II/I index) se stanovuje přítomnost HSV-2 protilátek, vysyoováním typově společných protilátek buněčným extraktem (Porghani a spol., 1975, J. Clin. Microbiol. 2, 410 až 418), blokováním křížově reagujících antigenů heterotypickými protilátkami (Vestergaard a spol., 1979, Acta Path. Microbiol.
Scand. 85, 261 až 263).
Současně používané přímé metody využívají elektroforeticky izolovaný (Dreesman a spol., 1979, Intervirology 12, 115 až 119) nebo radioimunoprecipitačně detekovaný (Eberle a Courtney 1981, Inf. Immun. 31, 1062 až 1070) antigen HSV-2.
Nevýhodou těchto metod je zdlouhavost, pracnost, nízká účinnost. Olofsson se spolupracovníky (1981, J. Virol. 38, 564 až 570) navázali glykoprotein C viru HSV-1 na lectin hlemýždě zhradniho kovalentně navázaného na agarosu a z tohoto jej vymyli roztokem N-acetylgalaktosaminu .
Okolem vynálezu je vyřešit odstranění typově společných antigenů viru herpes simplex typ 1 (HSV-1) a herpes simplex typ 2 (HSV-2), a tím umožnit zjištění přítomnosti HSV-2 protilátek u jedinců infikovaných rovněž HSV-1 virem.
Vynález řeší úkol tím, že používá afinitní chromátografie na lectinu hlemýždě zahradního k přípravě typově specifického HSV-2 antigenu. Suspenze infikovaných buněk HSV-2 virem se nanese na kolonku lectinu vázaného na agarosu 4B. Po promytí kolonky 10 objemy 1% Tritonu v roztoku pufru TRIS-HC1 (0,15M NaCl, 0,02M TRIS-HC1 pH = 7,5) se antigen uvolní přidáním 0,01M roztoku N-acetylgalaktosaminu v pufru TRIS-HC1 obohaceném 1% Tritonem X-100. Takto izolovaný antigen je využitelný přímo béz dalšího čištění v nejrůznějších serologických testech (radioimunostanovení-RIA, enzymatické imunostanovení-ELISA, radioimunostanovení-RIPA).
Popis konkrétního provedení.
Suspenze buněk, infikovaných HSV-2 virem při vysoké multiplicitě infekce se po promytí fyziologickým fosfátovým pufrem se smíchají se směsí 1% deoxycholátu sodného a 1% Tweenu 80, ponechají se 1 hod. při 37 °C. Centrifugací (100 OOOxg) 1 hod. se odstraní nerozpustné složky a supernatant se nanese na kolonku lecitinu, vázaného na agarosu 4B. (Výhodný je poměr 4x10? buněk na 0,1 ml objemu kolonky).
Po promytí kolonky 10 objemy 1% Tritonu v roztoku pufru TRIS-HC1 (0,15M NaCl, 0,02M TRIS-HC1 pH = 7,5) se antigen uvolní přidáním 0,01M roztoku N-acetylgalaktosaminu opět v pufru TRIS-HC1 obohaceném 1% Tritonem X-100. K detekci typově specifických protilátek je výhodné použít takto připravený HSV-2 antigen bez dalšího opracování v metodě RIA nebo ELISA.
243617 .
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZUZpůsob přípravy typově specifického antigenu viru herpes simplex HSV-2, vyznačený tím, že se suspenze infikovaných buněk HSV-2 virem nanese na kolonku lecitinu hlemýždě zahradního vázaného na agarosu, po promytí- kolonky 10 objemy fyziologicky přijatelného pufru při pH = = 7,5, s výhodou v 0,15M NaCl, 0,02M tris-hydroxymethyl-aminomethanu, doplněném neiontovým detergentem, s výhodou 1% oktylfenol-polyethylenglycoletheru, se antigen uvolní přidáním 0,01M roztoku N-acetylgalaktosaminu ve fyziologicky přijatelném pufru při pH = 7,5 doplněném neiontovým detergentem.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS837818A CS243617B1 (cs) | 1983-10-25 | 1983-10-25 | Způsob přípravy typově specifického antigenu viru herpes simplex HSV-2 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS837818A CS243617B1 (cs) | 1983-10-25 | 1983-10-25 | Způsob přípravy typově specifického antigenu viru herpes simplex HSV-2 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS781883A1 CS781883A1 (en) | 1985-09-17 |
| CS243617B1 true CS243617B1 (cs) | 1986-06-12 |
Family
ID=5428011
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS837818A CS243617B1 (cs) | 1983-10-25 | 1983-10-25 | Způsob přípravy typově specifického antigenu viru herpes simplex HSV-2 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS243617B1 (cs) |
-
1983
- 1983-10-25 CS CS837818A patent/CS243617B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS781883A1 (en) | 1985-09-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Katz et al. | ELISA for detection of group-common and virus-specific antibodies in human and simian sera induced by herpes simplex and related simian viruses | |
| Blacklow et al. | Immune response and prevalence of antibody to Norwalk enteritis virus as determined by radioimmunoassay | |
| Svennerholm et al. | Herpes simplex virus type-selective enzyme-linked immunosorbent assay with Helix pomatia lectin-purified antigens | |
| Magnius | Characterization of a new antigen-antibody system associated with hepatitis B | |
| Vandvik et al. | Long-term persistence of intrathecal virus-specific antibody responses after herpes simplex virus encephalitis | |
| Forghani et al. | Antigen requirements, sensitivity, and specificity of enzyme immunoassays for measles and rubella viral antibodies | |
| Heilman Jr et al. | Isolation of a nucleocapsid polypeptide of herpes simplex virus types 1 and 2 possessing immunologically type-specific and cross-reactive determinants | |
| Halonen et al. | Detection of viral antigens by time-resolved fluoroimmunoassay | |
| Jeansson et al. | Evaluation of solubilized herpes simplex virus membrane antigen by enzyme-linked immunosorbent assay | |
| Bernstein et al. | Antibody response to type‐common and type‐unique epitopes of herpes simplex virus polypeptides | |
| Landini et al. | Serum antibodies to individual cytomegalovirus structural polypeptides in renal transplant recipients during viral infection | |
| Horodniceanu et al. | Assessment of human cytomegalovirus antibody detection techniques | |
| Arvin et al. | Detection of type-specific antibody to herpes simplex virus type 1 by radioimmunoassay with herpes simplex virus type 1 glycoprotein C purified with monoclonal antibody | |
| Joo et al. | A microneutralization test for the assay of porcine parvovirus antibody | |
| Tuokko | Comparison of nonspecific reactivity in indirect and reverse immunoassays for measles and mumps immunoglobulin M antibodies | |
| CA2933697C (en) | A rapid and sensitive serological assay to determine if patients are infected with herpes simplex virus type 1 (hsv-1) and/or type 2 (hsv-2) | |
| Zweerink et al. | Virus-specific antibodies in sera from patients with genital herpes simplex virus infection | |
| Bernstein et al. | Comparison of western blot analysis to microneutralization for the detection of type‐specific herpes simplex virus antibodies | |
| Levy et al. | Determination of iga antibodies to human cytomegalovirus by enzyme‐linked immunosorbent assay (elisa) | |
| CS243617B1 (cs) | Způsob přípravy typově specifického antigenu viru herpes simplex HSV-2 | |
| Kühn et al. | HSV-1 gB and VZV gp-II crossreactive antibodies in human sera | |
| Vuorinen et al. | Enzyme immunoassays for detection of IgG and IgM antibodies to parainfluenza types 1, 2 and 3 | |
| Denoyel et al. | Diagnosis of recent rubella virus infection by demonstration of specific immunoglobulin M antibodies: comparison of solid-phase reverse immunosorbent test with sucrose density gradient centrifugation | |
| Porath et al. | Virus‐specific serum IgG, IgM, and IgA antibodies in cytomegalovirus mononucleosis patients as determined by immunoblotting technique | |
| Lehtinen et al. | Immunoblotting and enzyme-linked immunosorbent assay analysis of serological responses in patients infected with herpes simplex virus types 1 and 2 |