CS241325B1 - Spasob pripravý sodnej soli 2-[4-(l-amino-2-suIfoantracIiinón- -4-ylamíno) řenylsulfonyl] etylxylánu - Google Patents

Description

241325

Vynález sa týká sposobu přípravy soďňejsoli 244<l'-aftí[rrb-2-sulfoaetřbehión-4ryl- iauiínojfenylsulfonylletylxyláni^ pre kvanti-tativné stanovenie xylanázovej akťíWťy.'

Farebné deriváty polysacharidov, v kto-rých je farbivo viazané kovalentnou vazbouna polymép, sa fv poslednom čase s výho-dou používajú ako substráty pre kvantita-tivné stanovenie enzýmovej aktivity pří-slušných polysacharid-hydroláz. Pre tieto ú-čely boli připravené farebné substráty zamylózy, hydroxyetylcelulózy, celulózy škro-bu, manánu, chitínu aj pektínu [J. F. Ken-nedy: Advan. Carbohyd. Chem. and Bio-chem. 29, 305 (1974), B. V. Mc Cleary: Car-bohydr. Res. 67, 213 (1978), D. A. Friend,G. W. Chang: J. Agric. Food Chem. 30, 982(1982)].

Najčastejšie sa na přípravu týchto' fareb-ných polysacharidov používajú dva typyfarbív, a to, triazínové a vinylsulfonylové,ktoré reagujú s hydroxylovou skupinou po-lysacharidu v alkalickom prostředí za vzni-ku étericke] vazby [J. F. Kennedy: Advan.Carbohyd. Chem. and Biochem. 29, 305 (1974)].

Uvedené farebné substráty pre stanove-nie polysacharid-hydrolázovej aktivity sapripravujú vd formě nerozpustnej alebo roz-pustnej vo vodě. Pri enzýmovej hydrolýzevodonerozpustných substrátov, sa odštepu-jú farebné fragmenty polysacharidov, kto-ré prechádzajú do roztoku, kde'šá sťario-via spektrofotometricky. Ak je však poly-sacharid vodorozpustný, je potřebné ho předalebo po reakcii s farbivom previesť na ne-rozpustná formu sie(ováním, alebo postu-poval pri stanovení polysacharid-hydrolá-zovej aktivity iným sposobom, t. j. previesťenzymatický atak polysacharidu v roztokua vyzrážať nerozštiepený polysacharid or-ganickým rozpúšťadlom. Farebný xylánvhodný pre stanovenie xylanázovej aktivi-ty sa připravil vo vodonerozpustnej forměsieťovaním farebného xylánu epichlórhyd-rínom (Čs. AO 192 202). Nevýhodou tohtosubstrátu je sposob jeho přípravy, pri kto-rom třeba xylán popři reakcii s farbivompodrobit aj siefovaniu s epichlórhydrínom.Ďalšou nevýhodou nerozpustného farebné-ho sletovaného xylánu ako substrátu je,že v inkubačných zmesiach, ktorých objemje vačší ako napúčací objem substrátu, ne-dochádza k vytváraniu enzým-substrátové-ho komplexu v celom objeme vzorky ak satáto nemieša, keďže substrát nie je v zme-si homogénne suspendovaný.

Uvedené nevýhody v podstatnej miere od-straňuje sposob přípravy sodnéj soli 2-[4-- (l-amíno-2-sulf oantrachinón-4-ylamíno) -fenylsulfonyljetylxylánu podlá vynálezu,ktorého podstata spočívá v tom, že xylánreaguje vo vodnom roztoku s obsahom 1až 3 % hydroxidu sodného alebo< draselné-ho za přítomnosti solí ako je octan sodný,síran sodný a chlorid sodný pri teplote 15až 50 °C počas 1 až 2 h s dvojsodnou sofou l-amíno-2-sulf O-4- [ 4- (2-sulf átoetylsulf onyl- ánilíno.) jantráchiňónu- pri váhových pome- roch dvojsodná sol l-amíno-2-sulfo-4-[4-(2- -siil^o^týlsíilf onylanilíno) jantrachinónu : : xýlan : hydroxid sodný alebo draselný == 0,3 až 1,6 : 1 : 0,4 až 1,2, načo sa zafar-bený xylán vyzrájža 2 objemami etylalkoho-lu alebo metylalkoholu a nenaviazané far-bivo a farebné nízkomolekulárne frakciexylánu sa odstránia vymýváním s roztokomobsahujúcim 0 až 1 objem 0,6 až 1 % vod-ného roztoku octanu sodného, síranu sod-ného alebo chloridu sodného a 2 objemy e-tylalkoholu alebo metylalkoholu až-do bez-farebného filtrátu. Výhodou navrhovaného sposobu přípra-vy je, že sa získá jednoduchým, energetic-ky nenáročným sposobom vodorozpustnýsubstrát vhodný pre rýčhle stanovenia ak-tivity xylanáz, ktorý nie je zatial k dlspo-zícii na našom a ani zahraničnom trhu. Ďal-šou výhodou je, že tento substrát je zráža-ný a vymývaný za přítomnosti octanu sod-ného t. j. za podmienok zhodných s pod-mienkaml zrážania enzymaticky nerozštie-pených farebných makromolekul pri sta-novení aktivity xylanáz. Výhodou je tiež to,že základné suroviny sú dostupné. Přikladl 1 g xylánu sa rozpustí za miešania v 20milíliťroch destilovanej vody pri teplote 20stupňov Celsia. Potom sa postupné přidává0,3 g dvojsodnej soli l-amíno-2-sulfo-4-[4-- (2-sulf átoetylsulf onylanilíno) ] antrachinónu(Remazol Brilliant Blue R), 0,5 g síranusodného rozpuštěného v 10 ml destilovanejvody a nakoniec 10 ml 4 % vodného roz-toku hydroxidu draselného.

Teplota reakčnej zmesi sa zvýši na 50 °Ca mieša sa 2 h pri tejto teplote. Zafarbený,xylán sa vyzráža 80 ml etylalkoholu za in-tenzívněli o miešania. Zrazenina sa odfiltru-je na nuči a premýva 60 °/o vodným rozto-kom etylalkoholu až do bezfarebného fil-trátu. Potom sa zrazenina premyje 96 % e-etyl alkoholom a acetónom a nechá sa vol-né vysušit. Získá sa 0,95 g farebného xy-lánu s obsahom 4 % sodnéj soli 2-[4-(l-amí-no-2-sulfoantrachinón-4-ylamíno jfenylsul-fonyl]etyl-. ' I ' ' Příklad 2

Postupuje sa ako v příklade 1 s tým roz-dielom, že sa použije 1,6 g dvojsodnej solil-amíno-2-sulf O-4- [ 4- (2-sulf átoetylsulf onyl-anilíno) ] antrachinónu, 0,5 g chloridu sod-ného a 10 ml 12 % vodného roztoku hydro-xidu sodného. Reakcia prebieha 1 h pri15 °C. Na vyzrážanie sa použije metylalko-hol a na vymývanie roztok obsahujúci 1objem 1 % vodného roztoku chloridu sod-ného a 2 objemy metylalkoholu. Získá sa1,1 g farebného xylánu s obsahom 20 °/o

Claims (1)

1. 241 5 sodné] soli 2-[4-(l-amíno-2-sulfoantrachi-nón-4-ylamíno ] f enylsulf onyl ] ety 1-. Příklad 3 Postupuje sa ako v příklade 1 s tým roz-dielom, že sa použije 100 g xylánu rozpuš-těného v 2 1 destilovanej vody, 100 g dvoj-sodnej soli l-amíno-2-sulfo-4-[4-(2-sulfáto-etylsulfonylanilínoj jantrachinónu, 1 1 2,7 pere. vodného' roztoku octanu sodného a116% vodného roztoku hydroxidu sodné-ho. Reakcia prebieha 1,5 h pri teplote 25stupňov Celsia. Zrážanie sa robí do 2 1 e- 25 6 tylalkoholu. Zrazenina farebného xylánu sapřefiltruje cez nuč a premýva roztokom ob-sahujúcim 1 objem 0,6 % vodného roztokuoctanu sodného a 2 objemy etylalkoholu dobezfarebného filtrátu, potom 80 % vodnýmroztokom etylalkoholu a nakoniec etylal-koholom a acetónom. Získá sa 110 g fareb-ného xylánu s obsahom 13 % sodnej soli2 - [ 4- (l-amíno-2-sulf oant rachinón-4-ylamí-no jf enylsulf onyl ] etyl-. Vynález má využitie v biochémii ako sub-strát pri identifikácii a stanovení aktivityxylanáz. PREDMET Sposob přípravy sodnéj soli 2-[4-(l-amí-no-2-sulfoantrachlnón-4-ylamínojfenylsul-fonyljetylxylánu, ktorý sa vyznačuje tým, žexylán reaguje vo vodnom roztoku s obsa-hom 1 až 3 % hmot. hydroxidu sodného ale-bo draselného za přítomnosti solí ako je oc-tan sodný, síran sodný a chlorid sodný priteplote 15 až 50 °C počas 1 až 2 h s dvoj-sodnou sofou l-amíno-2-sulfo-4-[4-(2-sulfá-toetylsulfonylanilíno) jantrachinónu prihmotnostných pomeroch dvojsodná sol' 1- VYNÁLEZU -amíno-2-sulf 0-4- [ 4- (2-sulf átoetylsulf onyl-anilínoj jantrachinónu : xylán : hydroxidsodný alebo· draselný — 0,3 až 1,6 : 1 : 0,4až 1,2, načo sa zafarbený xylán vyzráža 2cbjemami etylalkoholu alebo metylalkoho-lu a vymývá roztokom obsahujúcim 0 až 1objem 0,6 až 1 % vodného roztoku octa-nu sodného, síranu sodného alebO' chloridusodného a 2 objemy etylalkoholu alebo me-tylalkoholu až do bezfarebného filtrátu.