CS239826B1 - A method of preparing a salivary alpha amylase isoenzyme - Google Patents

A method of preparing a salivary alpha amylase isoenzyme Download PDF

Info

Publication number
CS239826B1
CS239826B1 CS843856A CS385684A CS239826B1 CS 239826 B1 CS239826 B1 CS 239826B1 CS 843856 A CS843856 A CS 843856A CS 385684 A CS385684 A CS 385684A CS 239826 B1 CS239826 B1 CS 239826B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
alpha amylase
solution
enzyme
amylase
alpha
Prior art date
Application number
CS843856A
Other languages
Czech (cs)
Slovak (sk)
Other versions
CS385684A1 (en
Inventor
Jiri Zemek
Ludovit Kuniak
Viera Krajnakova
Original Assignee
Jiri Zemek
Ludovit Kuniak
Viera Krajnakova
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiri Zemek, Ludovit Kuniak, Viera Krajnakova filed Critical Jiri Zemek
Priority to CS843856A priority Critical patent/CS239826B1/en
Publication of CS385684A1 publication Critical patent/CS385684A1/en
Publication of CS239826B1 publication Critical patent/CS239826B1/en

Links

Landscapes

  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

Vynález sa týká spósobu přípravy slinného izoenzýmu alfa amylázy z biologického materiálu. Podstata spósobu přípravy slinného izoenzýmu alfa amylázy spočívá v tom, že acetonový roztok slin po oddělení mechanických nečistot a rýchlo sedimentujúčich podielov obsahujúci enzýmový glyikoprotein slinnej alfa amylázy sa nechá reagovat s kovalentne imobilizovanýim Tektínom izolovaným zo zemiakov alebo; z pšenice, špecifickým k N-acetyl-D-glukóze alebo kyselině sialove. Z uvedeného komplexu sa enzým alfa amyláza uvolní účinkom pufrovaného roztoku N-acetyl-D-glukózoamínu álebo roiztokom glytkogénu o pH 7 až 7,2. Vynález má využitie v kliniekej biochemii r v prfprave čistých biochemikálií a pri izolácii enzýmových glykoproteimov amylázového typu.The invention relates to a method for preparing salivary alpha amylase isoenzyme from biological material. The essence of the method for preparing salivary alpha amylase is that an acetone solution of saliva after separation of mechanical impurities and rapidly sedimenting fractions containing the enzyme glycoprotein of salivary alpha amylase is reacted with covalently immobilized Tectin isolated from potatoes or wheat, specific for N-acetyl-D-glucose or sialic acid. The enzyme alpha amylase is released from the above complex by the effect of a buffered solution of N-acetyl-D-glucosamine or a solution of glycogen with a pH of 7 to 7.2. The invention is used in clinical biochemistry, in the preparation of pure biochemicals and in the isolation of enzyme glycoproteins of the amylase type.

Description

239826239826

Vynález sa týlka spós-obu přípravy slin-riého izoenzýmu alfa amylázy.The invention relates to the preparation of a saline isoenzyme of alpha amylase.

Popři chromolytických metodách na gé-locli z molekulových sít a ionexov, medzi•techniky separácie a izolácie enzýmov pat-ří metoda afinitnej chromatografie. E. Star-kenstein a O. Holmbergh k izolácii alfa a-mylázy z biologického- materiálu použili n-a-tívny škrob [Έ. Stadkenstein, O. Holmbergh:Biochem. Z. 24, 21-0 (1910); O. Holmbergh:Biochem. Z. 25-8, 134 (1933)]. Natívny škrobako afinant obecného typu bol ďalej použitýaj k izolácii alfa amylázy z Clostridium ace-to-butilicum [D. J. D. Hockenhull, D. Her-bert: Biochem. J. 39, 102 (1945) ] a alfa a-mylázy iz ja-čmeňa [S. Schwimmer, A. K.Balls: J. Biol. Chem. 179, 1063 (1949)]. Ako-afinitný ligand bol použitý a) glyko-gén, via-zaný kovalentnou vazbou na povrch modifi-kovaného dextránu [R. Tkachuk: FEBS Lett.52, ©6 (1975)]. Natív-ny škrobový substrát soh-1'adom na -nehomogenitu partikul a ne-vhodné .hydrodynamické vlastnosti nemá vy-hovujúice vlastnosti ani afinitný ligand a-mylolytických enzýmov [R, M. Sandsted, S.Ueda: Japan Soc. Starch. Sci. 17 215 (1969)].Tento- postup ani použitie dalších afinantovna báze modifikovaných alfa-glukáncv ne-zabezpečoval ochranu amylázového glyko-proteinu slinnej izoamylázy pre-d účink-ombak-teriálnych hydroláz nachádzajúcich -sav dutině ústnej [Μ. P. Silvanovich, R. D.Hill: Anal. Biochem. 73, 430 (1976)]. Opti-málný postup neza-bezpečuje -ani použitieproteinového i-nhibítora alfa amylázy izolo-vaného z frakcie albumínov pšeničných zrna viazaného.-na modifikovaný dextrán kova-lentnou vazbou. Uplatňujú sa totiž vysokénešpeicificlké sorpcie nosné] matrice vočisprievodným proteinom a nízká účinnostafinitného liganda viazaného n-a povrch ma-trice bez pacera, na čo poukazujú výsledkys alfa amylázou slepačieho pankreasu, fu-d-ských stín a alfa -amylázou larvy Tenebriomoli-tor [V. Bu-onocore, E. Poerico, F. Gra-menzi. V. Síláno:. J. Chromatogr. 114, 109(1975)].In addition to the chromolytic methods on gel-locel from molecular sieves and ion exchangers, the techniques of separation and isolation of enzymes include the affinity chromatography method. E. Starkenstein and O. Holmbergh used n-starch starch to isolate alpha-mylase from biological material. Stadkenstein, O. Holmbergh: Biochem. Issue 24, 21-0 (1910); O. Holmbergh: Biochem. Z. 25-8,134 (1933)]. Native starch starch of the general type was further used to isolate alpha amylase from Clostridium ace-to-butilicum [D. J. D. Hockenhull, D. Herbert: Biochem. J. 39, 102 (1945)] and alpha a-mylases from ja-n. Schwimmer, A. K.Balls: J. Biol. Chem. 179, 1063 (1949)]. The affinity ligand used was a) a glyco gene, covalently linked to the surface of the modified dextran [R. Tkachuk: FEBS Lett. 52, © 6 (1975)]. Native starch substrate with respect to particle homogeneity and unsuitable hydrodynamic properties does not possess the properties or affinity ligand of α-myolytic enzymes [R, M. Sandsted, S.Ueda: Japan Soc. Starch. Sci. This procedure, or the use of other affinity bases of modified alpha-glucan, did not provide protection of the amylase glycoprotein of salivary isoamylase pre-d effect of ombacid terralas located in the oral cavity [Μ]. P. Silvanovich, R. D. Hill: Anal. Biochem. 73, 430 (1976)]. The optimal procedure does not prevent the use of a protein alpha-amylase inhibitor isolated from the fraction of wheat grain albumin bound to the modified dextran by covalent bonding. In fact, the high-specific carrier sorption of the matrix is applied to the prion-free protein and the low efficacy of the affinity ligand bound to the n-α surface without the pacifier, as indicated by the results of the alpha pancreatic amylase, fu-shade and alpha-amylase of the Tenebriomolor [V. Buonocore, E. Poerico, F. Gramenzi. V. Sielano :. J. Chromatogr. 114, 109 (1975)].

Uvedené nedostatky rieši tento vynález,ktorého podstatou je, že čerstvý sekrét l'ud-ských slin, ale-bo biologických tekutin ob-sahujúci slinný izoenzým alfa amylázy -sazriedi desatinou objemu acetóno-m a získanýroztok sa centrifuguje pri 2 000 až 3 000 gpo dobu 10 až 20 rninú-t, supernatant sa ad-justuje na pH 7 a pomocou acetonu vychla-deného na teplotu —10 až —-20 °C sa upravípo kvapíkách výsledná kon-centrácia aceto-nu v roztoku -na 40 až 50 θ/o objemových -azískaná suspenzia sa centrifuguje pri 2000až 30-00 g po dobu 10 až 20 minút, načo sazískaný supernatant obsahujúci alfa amy-lázu přečistí afinitnou metodou pomocoulektínu specifického k N-acetyl-D-glukóz-a--mínu a ku kyselině siálovej viaza-nej kova-lentnou vazbou, -na povrch perlovej celuló-zy a následovně sa uvolní enzým alfa amy-láza z komplexu s lektínom účinko-m 0,02 4 až 0,1 mol. 1_1 roztoku N-acetyl-D-glukóza-mínu, alebo 2 až 5 % hmotnostných glyko-gén u v 0,0il až 0,05 mol. I”1 fosfátovom ú-strojnom roztoku a pH až 7,2 a objeme 5 až10 násobné vyššom ako je napúčací objempoužitého afinantu. Výho-dou navrhovaného spós-obu je vyso-ká afinita kóvalentne viazaného lektínu,specifického k N-acetyl-D-gluikózamínu akyseli-ne -siálovej ku enzýmovému glykopro-teinu silného izoenzýmu alfa amylázy atým aj vysoká účinnost in-terakcie, nízké vý-robně náklady a skuto-čnosť, že alfa amylá-za sorbovaná na povrchu nosiča :s koválent-ne viaz-a-ným lektínom .uvedeného typu jestabilizovaná proti inaktivačným vplyvomhydroláz mikroorganizmov, přítomných vdutině ústnej. Přikladl Čerstvý sekrét fudských slin (200 ml) sazriedi 20 ml acetonu a získaný roztok sacentrifuguje pri 2000 g po dobu 20 minút azískaný supernatant sa--adjustuje n-a pH 7pomocou 22-0 ml 0,02 mol. I“1 fosfátovýmpufrom a přidá sa po kvapkách (30 ml zaminutu) 330 ml acetonu vychla-deného nateplotu —10 °C. Vytvořená suspenzia sa cen-trifuguje při 2 000 g po dobu 20 minut a zís-kaný supernatant obsahujúci -alfa amyláz-o-vú aktivitu sa přidá k 40 ml gélu napučanejperlovej celulózy, aktivova-nej pomocou 2--chlórmetyloxiránu -na oxirán celulózy (su-šina 1-3%; stupeň substitúcie celulózy oxi-rámu 0,42 mmol.g"1) s kóvalentne navia-zaným lektínom, specifickým k N-acetyl-D--glulkózamínu a kyselině si-alovej (připra-vený z Triticum vulgarisj o koncentrácii40 -mg . g1_ celulózy. Enzým alfa e-myláza saviaže -na imobilizovaný lektí-n ipo do-bu 1hodiny za miešania pri teplote 20 °C, perlo-vá celulóza s kóvalentne viazaným lektí-nom a -afinttne vi-azan-ou alfa amylázou saoddělí dakantáciou a premyje 500 ml 0,2mol. Γ1 fosfátového ús-tojného roztoku opH 7 a přečištěný enzýmový glykoproteí-nslinnej alfa amylázy sa uvolní 400 ml 0,02mol. I-1 N-acetyl-D-glukózamínu v 0,01 m-oíl. . 1_1 fosfátovom ústojnom roztoku o pH 7.Celková aktivita alfa amylázy 1 mkat o špe-cifickej aktivitě 0,25 pkat, mg"1 -a stuipniprečistenia 14,1. Příklad 2The present invention solves these shortcomings, which is that fresh secretions of human saliva or biological fluids containing salivary alpha amylase isoenzyme are diluted by one tenth of the volume of acetone and the resulting solution centrifuged at 2,000 to 3,000 gpo 10-20 min, the supernatant is adjusted to pH 7 and the resulting concentration of acetone in solution at 40-50 ° C is added dropwise with acetone cooled to -10 to -20 ° C. The volume of the obtained suspension is centrifuged at 2000 to 30-00 g for 10 to 20 minutes, and then the recovered alpha amylation-containing supernatant is purified by affinity using N-acetyl-D-glucose-α-mine and acid-affinity to the surface of the bead cellulose, and subsequently the enzyme alpha amylase is liberated from the complex with lectin effect of 0.02 to 0.1 mol. 11 µl of N-acetyl-D-glucose-mine solution, or 2 to 5% by weight of glycogen in 0.0 µl to 0.05 mol. I ' 1 phosphate solution and pH up to 7.2 and a volume of 5-10 times higher than the swelling of the used affinity. The advantage of the proposed coupling is the high affinity of the co-bound lectin, specific to N-acetyl-D-glucosamine and alkyl-silane to the enzyme glycoprotein of the strong alpha amylase isoenzyme, and the high efficacy of the inactivity, low In addition, the cost and the fact that alpha amylase is sorbed on the surface of the support: with a covalently bonded lectin of the type described herein is stabilized against the inactivating effects of the hydrolases of the microorganisms present in the oral cavity. EXAMPLE 1 Fresh secretion of human saliva (200 ml) is diluted with 20 ml of acetone and the resulting solution is centrifuged at 2000 g for 20 minutes and the recovered supernatant is adjusted to pH 7 with 22-0 ml of 0.02 mol. The phosphate buffer was added dropwise and 330 ml of acetone, cooled to -10 ° C, was added dropwise (30 ml). The resulting suspension is centrifuged at 2000 g for 20 minutes, and the supernatant containing -alpha-amylase-o-activity is added to 40 ml of swollen cellulose gel activated with 2-chloromethyloxirane-cellulose oxirane ( dry matter 1-3%; degree of substitution of the oxi-frame cellulose 0.42 mmol.g "1) with a co-bound N-acetyl-D-glulcosamine specific acid-specific lectin (prepared from 40 mg / ml cellulose Triticum vulgarisj Immobilized lectin alpha-mylase enzyme for 1 hour with agitation at 20 ° C, pearl cellulose with co-bound lectin-α-tartrate the azan alfa amylase is separated by dacantation and washed with 500 ml of 0.2 mol / l phosphate buffer solution of opH7 and the purified enzyme glycoprotein-alpha-alpha amylase is released with 400 ml of 0.02 mol / l N-acetyl-D-glucosamine in 0.01 µmol / l phosphate buffer solution pH 7. Total activity a 1α amylase 1 cattle at a specific activity of 0.25 pkat, mg -1, and staple purification of 14.1. Example 2

Postupuje sa ako v příklade 1 s tým roz--dielom, že roztok enzýmu zriedený desa-tinou objemu acetonu sa centrifuguje pri3 000 g po dobu 10 minút, adjustovaný su-pernataňt 0,02 mol. I-1 fosfátovým tlmivýmroztokom na pH 7 sa upravuje s 226 acetó-nuvyichl-adeného na teplotu —20 °C po kvap-kách, získaná suspenzia sa centrifuguje pri3 000 g po dobu 10 minút. K afinitnému pre-čisteniu sa použil obdobný typ lektínu imo-The procedure is as in Example 1, except that the enzyme solution diluted with 10% acetone is centrifuged at 3000 g for 10 minutes, adjusted to 0.02 moles. The pH of 7-phosphate buffer solution I-1 is adjusted dropwise with 226 acetone buffered to -20 ° C, and the resulting suspension is centrifuged at 3000 g for 10 minutes. For affinity pre-purification, a similar type of imin

Claims (1)

239826 5 bilizovaného za ro-vnakýeh podmienok akov příklade 1, izolovaný bol však zo zemiakov(Solárium). Vytesnenie enzymu alfa amylá-zy z komplexu s imobilizovanýim lektínomsa previedlo- 400 ml 0,05 mol. I-1 fosfátovýmústrojným roztokom o pH 7,2, 'obsahujúcom0,1 mol. k J N-acetyl-D-glukózamín. Výta-žek alfa amylázy a stupeň prečistenia boltaký alko je uvedené v příklade 1. P r í k 1 a d 3 Postupuje sa alko v příklade 1 s tým roz-dielom, že k vytesneniu enzýmu alfa amylá-zy z komplexu s lektínom sa použilo 200 mlroztoku 2 % hmotnostných glýkogénu (z ipe-čene zajacaj. Výťažok alfa amylázy bol 1,04mkat o špecifickej aktivitě 0,24 jukat.mg-1a stupni prečistenia rovnakom ako v příkla-de 1. Přikládá Postupuje se ako v přiklade 2 s tým roz- dielom, že ik vytesneniu enzymu alfa amy-lázy sa použije 200 ml rozteku 5 θ/o hmot-nostných glýkogénu (z kvasiniek Saccharo-myces cerevisiaej. Získala sa alfa amyláza*o celkovej aktivitě 1,08 mkat a sípecifičkejaktivitě 0,25 ,ukat. mg-1. Stupeň prečisteniabol 13,8. Výnález može nájsť široké uplatnenie vmedicíně a klinickej biochemii pri prípraveenzýmových štandardov glyfcozylovanýchalfa amyláz o vysokej čistotě, pre účely kon-troly správnosti a přesnosti metod použí-vaných v rutinnej analýze tělových tekutin,predovšetikým pri diferenciálnej biochemic-kej diagnostike poruch pankreasu a paro-tis. Slinný izoenzým -alfa amylázu možnoďalej použit v základnom biochemickom aenzymo-logickom výskume a pre přípravuvzácných oligosacharidOv maltózového typu. r R E D Μ E T Sposob přípravy stinného izoenzýmu alfaamylázy vyznačený tým, že čerstvý sekret1'udských slin, alebo biologických tekutinohs-ahujúci stinný izoenzým alfa amylázy sazriedl desatinou objemu acetónom a získa-ný roztok sa oentrifdguje pri 2 000 až 3 000gramov po dobu 10 až 20 minút, supernatantsa adjustuje na pH 7 a pomocou acetonuvychladeného na teplotu —10 až —20 °C saupraví po kvapkách výsledná koncentráciaacetonu v roztoku na 40 až 50 % objemo-vých a získaná suspenzia sa centrifugujepri 2 000 až 3 000 g po dobu 10 až 20 minút, VYNÁLEZU nač-ο sa získaný supernatant obsahujúci alfaamylázu přečistí afinitnou metodou pomo-cou lektínu specifického k N-a-cetyl-D-glu-kózamínu a ku kyse-line sialovej viazanejkov-alentnou vazlbou na povrch perlovej ce-lulózy a následovně sa uvolni enzým alfaz komplexu s lektínom účinkom 0,02 až 0,1mol. I-1 roztokom N-acetyl-D-gluikózamínu,alebo 2 až 5 % hmotnostných glýkogénu v0,01 až 0,05 mol. I-1 fosfátovom ús-tojnomroztoku a pH 7 až 7,2 a objeme 5 až 10 ná-sobné vyššom alko je n-apúčací objem použi-tého -afinantu.However, it was isolated from potatoes (Solarium). Displacement of the alpha amylase enzyme from the complex with immobilized lectin transferred 400 ml of 0.05 mol. I-1 with a phosphate buffer solution of pH 7.2 containing 0.1 mol. to N-acetyl-D-glucosamine. The yield of alpha amylase and the degree of purification of the alcohols is given in Example 1. EXAMPLE 3 The alcohol in Example 1 was followed except that 200 was used to displace the alpha amylase enzyme from the lectin complex. ml of solution 2% by weight of glycogen (from the rabbit. The alpha amylase yield was 1.04 m with a specific activity of 0.24 jukat.mg-1 and the purification step of Example 1. Example 2 is followed by in that 200 ml of 5 θ / o weight glycogen (from Saccharomyces cerevisiae yeast are used to displace the alpha amylase enzyme), giving alpha amylase * with a total activity of 1.08 and a specific activity of 0.25, Purpose of purification was found to be widespread in medical and clinical biochemistry for the preparation of high purity glyphosylated alpha amylase standards for the purpose of checking the accuracy and accuracy of the methods used in the present invention. h in routine analysis of body fluids, especially in differential biochemical diagnosis of pancreatic and paro-thyroid disorders. Saline isoenzyme -alpha amylase can continue to be used in basic biochemical and enzymatic research and for maltose-type recombinant oligosaccharides. r RED Μ ET A method of preparing a shaded alpha-amylase isoenzyme, characterized in that fresh secreted saliva or biological fluid-bearing shaded alpha amylase isozyme is diluted with one-tenth of the volume with acetone and the resulting solution is centrifuged at 2,000 to 3,000grams for 10 to 20 minutes, the supernatants were adjusted to pH 7 and the resulting acetone concentration in the solution was adjusted dropwise to 40-50% by volume with acetone cooled to -10 to -20 ° C and the suspension obtained was centrifuged at 2,000 to 3,000 g for 10-20. minutes, the obtained alphaamylase-containing supernatant is purified by affinity method using N -cetyl-D-glucosamine-specific lectin and acidic sialic bound binding to the surface of pearl cellulose and subsequently released by the enzyme a complex of lectin complexes having an effect of 0.02 to 0.1 mol. I-1 with a solution of N-acetyl-D-glucosamine, or 2 to 5% by weight of glycogen in 0.01 to 0.05 mol. The I-1 phosphate buffer solution and the pH of 7 to 7.2 and the volume of 5 to 10 co-higher alcoal is the n-appendant volume of the used.
CS843856A 1984-05-23 1984-05-23 A method of preparing a salivary alpha amylase isoenzyme CS239826B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS843856A CS239826B1 (en) 1984-05-23 1984-05-23 A method of preparing a salivary alpha amylase isoenzyme

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS843856A CS239826B1 (en) 1984-05-23 1984-05-23 A method of preparing a salivary alpha amylase isoenzyme

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS385684A1 CS385684A1 (en) 1985-06-13
CS239826B1 true CS239826B1 (en) 1986-01-16

Family

ID=5379876

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS843856A CS239826B1 (en) 1984-05-23 1984-05-23 A method of preparing a salivary alpha amylase isoenzyme

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS239826B1 (en)

Also Published As

Publication number Publication date
CS385684A1 (en) 1985-06-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Arai et al. Increase in the glucosylated form of erythrocyte Cu-Zn-superoxide dismutase in diabetes and close association of the nonenzymatic glucosylation with the enzyme activity
Opheim et al. Lysosomal alpha-D-mannosidase of rat liver. Purification and comparison with the golgi and cytosolic alpha-D-mannosidases
Rauvala et al. Studies on cell adhesion and recognition. III. The occurrence of α-mannosidase at the fibroblast cell surface, and its possible role in cell recognition
Johansson et al. Purification and Properties of a Coupling Factor (Ca2+‐Dependent Adenosine Triphosphatase) from Rhodospirillum rubrum
del Campillo et al. An α-galactosidase with hemagglutinin properties from soybean seeds
Dey Characteristic features of an α‐galactosidase from mung beans
Kiyohara et al. Purification and characterization of β-N-acetylhexosaminidases and β-galactosidase from Streptococcus 6646 K
Kojima et al. Glycosaminoglycans and electrokinetic behavior of rat ascites hepatoma cells
Bosmann Ref cell hydrolases: glycosidase activities in human erythrocyte plasma membranes
Dey et al. The lectin nature of α‐galactosidases from Vicia faba seeds
Ginsberg et al. Adsorption of polymorphonuclear leukocyte lysosomal enzymes to monosodium urate crystals
CS239826B1 (en) A method of preparing a salivary alpha amylase isoenzyme
Wilson Purification of a corn ribonuclease
Sensabaugh Genetic and non-genetic variation of human acid phosphatases
Haibach et al. Purification and characterization of a Coffea canephora α-D-galactosidase isozyme
Rossi et al. A general method of purification of adenosine deaminase by affinity chromatography
Marmor et al. Studies on methyl-deficient methionine transfer ribonucleic acid from Escherichia coli
DiCioccio et al. Rapid procedures for determination of endo-N-acetyl-α-d-galactosaminidase in Clostridium perfringens, and of the substrate specificity of exo-β-d-galactosidases
Philip et al. Rabbit muscle phosphorylase derivatives with oligosaccharides covalently bound to the glycogen storage site
Boyd et al. Manipulating the activity of immobilized enzymes with different organo-smectite complexes
Edwards et al. The purification and properties of a β-N-acetylhexosaminidase from Trichomonas foetus
Freese et al. A β-glucosidase in feline kidney that hydrolyzes amygdalin (Laetrile)
Nagasawa et al. Prostaglandin-sepharose: Application to the purification of bovine lung 15 (S)-hydroxyprostaglandin dehydrogenase
Uno et al. The effect of sucrose and other carbohydrates on human alkaline phosphatase isoenzyme activity
Fisher et al. Accumulation of malto-oligosaccharides in the syncytiotrophoblastic cells of first-trimester human placentas