CS237620B3 - Použití modrého afinantního celulózového sorbentu - Google Patents

Abstract

Vynález se týká způsobu použití modrého afinantního celulozového sorbentu k separaci a izolaci sérového albuminu ze séra. Podstata vynálezu spočívá v použití modrého afinantního celulózového sorbentu připraveného podle čs. autorského osvědčení č. 225 971 pro separaci a izolaci sérového albuminu ze séra afinitní chromatografii. Použití modrého celulózového nosiče na bázi makroporéznl sférické celulózy nebo jejich hydroxyalkyldarivátů s kovalentně vázanou reaktivní modří 2 (color index 61211) vede k téměř 9091 separaci a 75 až 90% izolaci albuminu obsaženého v séru.

Description

Vynález ae týká použiti modrého afinantního celulózového sorbentu k separaci a izolaci sérového albuminu ze séra.

Separace a izolace albuminu ze séra afinitní chromatografii pomocí modrého afinantního sorbentu se používá jak pro analytická tak pro preparativní účely v chemii, biochemii a aedicínS.

Sérum obsahuje směs téměř 100 proteinů různé struktury a s různou funkcí, přičemž albumin je s podílem zhruba 50% hmotnostních dominantní složkou.

Pro izolaci albuminu bylo vyvinuto více postupů, která jsou založeny na selektivním srážení nebo chromatografických děleních, a často probíhají v mnoha reakčních krocích. Dnes není důležité jen získání albuminu v preparativním měřítku. Význam má právě tak jednoduché, specifické a téměř kvantitativní odstranění albuminu ze séra především pro mediclnsko-diagnostické účely nebo při získání speciálních sérových proteinů, například n-fetoproteinu.

Pro obě oblasti použití byly v posledních letech vyvinuty postupy na základě afinitní chromatografie, které využívají adsorpci albuminu modrým barvivém označovaným jako reaktivní modř 2 (color index 61 211) (obchodní názvy Cibacronová modř F3G-A; Ostazinová modř H-3G) navázaným na polysacharidovém nosiči. ' *

Pokusy, nahradit tyto nosiče celulózou, která je ve srovnání s ostatními polysacharidovými 'nosiči ekonomicky výhodnější byly dosud neúspěšné. Ve srovnání agarózovými nosiči byla vazba albuminu na odpovídajícím celulózovém sorbentu lOx menší (S. Angal, P.D.G. Dean: Biochem. J.167, 301, (1977) nebo nebyla zjištěna vazba žádná (G. Birkenmeyer, Dizertace, Lipsko 1981). ·

Dosavadní nedostatky odstraňuje způsob separace a izolace sérového albuminu ze séra podle vynálezu, který spočívá v použití modrého celulózového sorbentu připravenéhů podle ’ čs. autorského osvědčení č. 225 971 k separaci a izolaci sérového albuminu ze séra*afinitní chromatografii.

Vazba albuminu na reaktivní barvivo navázané na nosiči při kontaktu se sérem je specifická, vazebná kapacita je vyšší než 10 mg albuminu na ml nosiče. Sluce pak probíhá o sobě známým způsobem.

Adsorpce ze séra nebo zředěného séra se provádí při pH 5 až 9, přednostně při pH)8, při teplotě od 1 do 40 °C kolonovým nebo vsádkovým způsobem. Sérové proteiny,· které se nesorbují, se vymývají adsorpčnim pufrem.

Desorpce albuminu se provádí působením pufrů, které obsahují 1 až 2 M chlorid sodný (KaCl) nebo 0,2 až 1 M tiokyanatan draselný (KSCN).

t Výhodou způsobu podle vynálezu je, že nosič se může použít opakovaně bez pozorovatelného zhoršení vazební kapacity. . .

’ «Γ *

Použití nosiče na bázi makroporézní sférické celulózy n^bo jejich hydrtf«yelkylderivátů s kovalentnš vázanou reaktivní modří 2 (color index 612 11) vede k téměř 90¾ separaci a 75 až 90% izolaci albuminu obsaženého v séru.

«I , i

Ve srovnání s ostatními polysacharidovými nosiči je modrý celulozový nosič na bázi makroporézní sférické celulózy efektivnější a ekonomicky výhodnější.

Vynikajíc! mechanické a adsorpčnl ^víastnosti nosiče dosvolnjí jeho pbužitl ve velkém měřítku.

e·

Způsob je objasněn na několika případech, které však vynález nijak neomezují.

Přikladl ml makroporézní sférické modré celulózy (2,9 až 7,3 pmol reaktivní modři 2 - color index 61 211 (Cibacronová modř/g mokrého nosiče) «e ekvilibruje v koloně o průměru 1,3 om pufrem 0,05 U Iris (HC1) 0,5 M NaCl pH 8, při teplotě místnosti a pak se na kolonu nanese 2 ml lidského sérového albuminu (40 mg/ml pufru). Eluuje se 25 až 30 ml pufru. Zachytl se 88 až 94 % albuminu. Desorpce se provádí pufrem 0,05 M Iris (HC1) pli 3, který obsahuje 0,2 až 1 U KSCN (výtěžek 75 až 90 %).

P ř,í k 1 a d 2 ml makroporézní sférická modré celulózy (2,9 až 7,3 pmol barviva/g mokrého nosiče) se ekvilibruje pufrem 0,05 M Iris (HC1) 0,5 M NaCl pH 8 a nanese 2 ml séra buá přímo nebo zředěného ekvilibračním pufrem (1 : 5 až 1 : 10). Adsorpce albuminu)'probíhá v kolonovém nebo vsádkovém uspořádání (1 až 5 hodin) při teplotě místnosti. Neadsorbované sérové proteiny (30 až 45 % celkového obsahu proteinů) se eluují ekvilibračním pufrem. Zachytí se 93 až 96 % albuminu. Eluce adsorbovaného albuminu probíhá jak je popsáno v příkladu 1.

Claims (1)

1. Použití modrého afinantnihoicelulózového sorbentu připraveného podle čs. autorského osvědčeni č. 225 971 pro separaci a izolaci sérového albuminu ze séra afinitni chromatografii.