CS231766B1 - Sposob přípravy farmaceuticky účinnej látky z propolisu a iných včelích produktov - Google Patents

Sposob přípravy farmaceuticky účinnej látky z propolisu a iných včelích produktov Download PDF

Info

Publication number
CS231766B1
CS231766B1 CS82392A CS39282A CS231766B1 CS 231766 B1 CS231766 B1 CS 231766B1 CS 82392 A CS82392 A CS 82392A CS 39282 A CS39282 A CS 39282A CS 231766 B1 CS231766 B1 CS 231766B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
propolis
extract
transcriptase
enzyme
active substance
Prior art date
Application number
CS82392A
Other languages
English (en)
Slovak (sk)
Other versions
CS39282A1 (en
Inventor
Jozef Simuth
Jan Trnovsky
Original Assignee
Jozef Simuth
Jan Trnovsky
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jozef Simuth, Jan Trnovsky filed Critical Jozef Simuth
Priority to CS82392A priority Critical patent/CS231766B1/cs
Publication of CS39282A1 publication Critical patent/CS39282A1/cs
Publication of CS231766B1 publication Critical patent/CS231766B1/cs

Links

Landscapes

  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Description

2317S0
Použitie pro,polišů v 1'udovom lekárstveje všeobecne známe. Propolis je názov preživičnú hmotu, ktorú zbierajú včely z nai-róznejších rastlín. Utesňujú ním medzoryv úli, upevňujú včelie pláste a z propolisuje aj jemný povlak celého vnútorného po-vrchu úl’a. Je to prirodzená, ochranná akonzervačmá „výmurovka“ úfa.
Pokrok vo výskume propolisu prinieslipoznatky získané sledováním jeho antibajk-teriélnych a antiifungálnych vlastností. Vkoneemtráciách menších ako 0,1 mg/ml vy-kazuje propolis baktariostatický, fungista-tický, baktericídny a fungicídny efekt vo-či značnému počtu mikroorganizmov [E. L.Ghisalberti: Bee World, 60, (1979) str. 59——84], Pozorovali sa tiež anestetické a inévlastnosti propolisu (Zborník referátov II.medziinárodného sympózia o propolise, Bra-tislava 1976, vydal Ústredný výbor Slovens-kého zvazu včelárov, Bratislava 1980.1.
Najvážnejšia výhrada voči používaniupropolisu pro terapeutické účely spočívá vjeho vedíajších, často synergických účim-koch, prejávujúcich sa prudkými alergický-mi ochoreniami (I. Gunter: American BeeJournal, Apríl 1967, str. 131], Propolis mo-že byť tiež znečistěný inými mechanickými,alebo organickými prímesami.
VzhTadom k tomu, že propolis obsahujeznačné množstvo chemických zlúčenín, kto-rých zloženie kolíše podlá teritoria prísluš-nej fauny, nemálo by sa jeho použitie v me-dicínské] praxi přijímat bez výhrad. Aby samohli liečebné účinky propolisu použit bezrizika vedíajších neznámých účinkov, jepotřebné jednotlivé látky izolovat. Doterai-šie přístupy, t. j. chemické rozdelenie pro-polisových extraktov, neviedli k určeniu far-maceuticky významnej látky.
Nevýhodou tohoto stavu je 1. že sa nepozná, ktorá látka je účinná aakým sposobom zasahuje do buňkovéhometabolizmu, 2. že izolácia příslušných chemických zlú-čenín z extraktov včelích produktov sarobí náhodné a Ion spatné sa izolovanýmlátkám určujú ich biologické vlastnosti, 3. že izolačně postupy sú často zdíhavé apočas nich može dojsť k dezaktivácii, ale-bo chemickej premene biologicky účin-nej láitky.
Tieto nevýhody odstraňuje sposob přípra-vy farmaceuticky účinnej látky z extraktovvčelích produktov za využitia molekulár-no-biologických metod, na základe špecific-kej vazby s enzýmami syntetizujúcimi nu-kleové kyseliny. Výhoda spdsobu podlá vynálezu spočíváv tom, že specifickou vazbou účinnej látky(posobiacej ako inhibitor alebo aktivátor)s enzýmami syntetizujúcimi nukleové kyse-liny sa: 1. biologická látka naviaže priamo na en-zým, čím sa oddělí od ostatných zložiekextraktu, 2. izolácia vedie cielema za účelom přípra-vy biologicky účinnej látky z prirodze-ného materiálu, 3. bez predchádzajúcich izolačných postu-pov získá biologicky účinná látka.
Vynález vychádza z dokážu, že v propo-lise sa nachádza látka, ktorá specificky za-stavuje syntézu RNK in vitro [tah. č. 1).Zastavenie syntézy RNK je sposobené vaz-bou účinnej látky z propolisu s transkrip-tázou (polymerázou ribonukleových kyselinzávislou od deoxyribonukleovej kyseliny).
Po naviazaní účinnej látky na transkrip-tázu dochádza k inaktivácii enzýmu a účin-lá látka sa z tohoto komplexu inhibitor —— enzým nedá odstrániť dialýzou. Tátovlastnost sa móže využit pri přípravě a i-dentifikácii biologicky účinných látok zpropolisu a ostatných včelích produktov.
Pre získanie účinnej látky z propolisu sazmiesa 5 kg propolisu s 50 1 vodného roz-toku etylalkoholu (60 obj. %). Po 7 dňovejextrakcii za obyčajnej teploty sa olobe-rie rozpustný podiel, ktorý sa v ďalšom o-značuie ako extrakt I. Tento sa zrledi des-tilovanou vodou v objem, pomere 1 : 1.Vznikne biola suspenzia, ktorá sa odcentri-fuguje pri 103 000 g (30 minút pri 1.5 °C).Círy supernatant sa za mrazu odpaří (lyo-filizuie saj a odparok sa rozpustí v takommnožstve vody, aby koncentrácia roztokubola 3 mg sušiny/ml. T&nto roztok sa vďalšom označuje ako extrakt II. a uchová-vá sa pri 4 °C.
Pre stanovenie biologickej aktivity far-maceuticky významných látok v propolisea ostatných včelích produktoch sa pódiavynálezu používá reakcia, v ktorej sa sle-duje syntéza nukleových kyselin in vitroza použitia enzýmov podieíajúcieh sa nasyntéze nukleových. kyselin (napr. repliká-za, transkriptáza alebo reverzná transkrip-táza, ktoré sa izolujú z roznych organiz-ntov).
Standartný transkripčný systém pre sta-novenie biologicky aktívnej látky v propo-lisových extraktoch obsahuje: 0,01 mól/1Tris (hydroxymetyl amiuometánj, pH 8,2;0,01 mól/1 chlorid horečnatý; 10-4 mol/lchelatón III; 2.10~4 mól/1 hydrofosforeč-nan draselný; 0,01 mól/1,2-merkaptoetanol;2 . 10-4 mól/1 nukleozid 5‘-trifosfát adenínu,guanínu, cytozlnu a uraciilu; 50 kBq/ml 3H--uridín 5‘-trífoefátt; 0,1 mg/ml deoxyribonu-kleová kyselina; 0,04 mg/ml transkriptáza. K 0,04 ml štandartného transkripčného systému sa přidá extrakt I, alebo extrakt II o koncentrácii uvedených v tah. č. 1. In- kubuje sa 30 minút pri 37 °C. Ďalej sa po- stupuje tak ako je uvedené v práci R. R.
Burgess, A. A, Travers, J. J. Dunn a E, K. F.Bautz, Nátuře (1969], 221, str. 43—46.
Množstvo syntetizované] RNK v nepřítom-nosti extraktu I alebo II sa považuje akokontcolná vzorka a představuje 100 % en-zýmovej aktivity transkriptázy.
Pro izoláciu účinnej laicky z propolisu sak extraktu II v mnořstve 0,3 g/300 ml des-tilované] vody přidá 0,1 g transkriptázy aza občasného miešania sa nechá stát pri4 °C 30 minút. Potom sa táto zmes vleje dodialyzačného sáčku a nechá se cez noc dia-lyzovaf pri 4 °C oproti 500-násobnému pře-bytku tlmivého roztoku obsahujúcom 0,01miól/1 tris/hydroxymetyl aminometán; 0,01mól/1, síranu amonného; 10-4 mól/1 chela-tón III; 10“4 mól/1 2-merkaptoetanol; 5 °/o--ný glycerín.
Takto dialyzovaná transkriptáza sa po-užila namiesío transkriptázy v štandardnomtranskripčnom systéme in vitro.
Za podmienok uvedených vyššie, trans-kriptáza, na ktorú sa působilo propoliso-vým extraktom II a dialyzovala sa, bota vuvedenom systéme úplné inhibovanó.
Ako kontrola k tomuto experimentu slú-žila transkriptáza, dialyzovaná oproti to-mu istému tlmivámu roztoku, ale k trans-kriptáze sa před dialýzou nepřidal extraktII. V tomto případe sa aktivita enzymu ne-změnila.
Ked sa za uvedených podmienok dialyzo-val samotný extrakt II, zistilo sa, že stra-til schopnost inhibovať transkriptázu. Sku-točnosť, že transkriptáza stratila po účin-ku extraktu II a následné] dialýze aktivitua samotný extrakt II účinnú látku dialý-zou stráca, poukazuje na to, že transkrip-táza vytvára s účinnou látkou komplex ty-pu enzým — inhibitor. Z tohoto sa vychádzapri přípravě účinné] látky z propolisu.Tabulka č . 1
Vplyv extraktu I a II na aktivitu transkriptázy
Aktivita transkriptázy Extrakt I (%] (/ťg/ml) *· 100 0,00 75 30,00 50 53,00 25 80,00 5 230,00
Tabulka č. 2
Vplyv extraktu II na syntézu bielkovín invitro
Translačná aktivita4 Extrakt II (%) (jug/ml) 6 Pře získanie účinné] látky z komplexuúčinná látka — transknbláza sa postupujetak, že: — sa nízkomolekulové látky z tohoto kom-plexu odstránia dialýzou, alebo použitímgélovej chromatografie sa účinná látka uvolní z komplexu stranskriptázou přídavkem soli (KOI ale-bo NaCl) za vzniku 1 molárneho rozto-ku.
Potom sa uvolněná aktívna látka extra-huje do etylalkoholu, alebo iného organic-kého rozpúšťadla. Z příslušného rozpúšťadlasa účinná látka získá odpařením rozpúš-ťadla za nízakej teploty, Identita účinnejlátky sa potom určí běžnými metodami or-ganické] analýzy a fyzikálno-chemickýmimetódami.
Takto připravená látka sa móže použit presled vaňte 'ej chemoterapeutického účin-ku pri roznych chorobách. O špecifite účinku inhibície transkriptá-zy účinnou látkou z propolisu svedčia ex-perimenty, v kterých sa zistilo, že v zrov-naíelných koncentráciách nemá extrakt IIvplyv na in vitro syntézu bielkovín (tab. č.2), na aktivitu RNázy (tab. č. 3] a aktivitupolynukleotidíosforylázy znižuje iba o 10pere. [tab. č. 4). Z uvedeného možno uza-tvoriť, že specificky sa aktívna látka z pro-polisového extraktu II viaže len s trans-kriptázou, čo sa dá využit pri jej izolácii ak výrobě.
Po získaní údajov o štruktúre účinnej lát-ky připraven©]’ týmto postupom sa móže preje] výrobu v sériovom převedení použit běž-ná izolačná technológia za předpokladu je]dostatočne] stability.
Extrakt II(i«g/ml) 0,004,007,50 10,5060,00 + Translačná aktivita sa stanovila v bez-buaikovom proteosyntetickom systéme ria-denom endogénnou mRNA a poly(U] tak,ako je uvedené v práci: Trnavský J., Ši-múth J., Zelinka J., Biológia (Bratislava],(1982), 37, 4, 369—375. 100 0,00 112 12,00 118 60,00 120 300,00

Claims (1)

  1. 2 3 .1 7 O G Tabulka č. 3 Vplyv extraktu II na aktivitu pankreatickejribonukleázy (=RNázy) Aktivita RNázy+ ('%) Extrakt II(/íg/ml) 100 0,00 102 30,00 102 60,00 101 90,00 101 150,00 + Aktivita pankreatickej RNázy sa stano-vila takto: K 1 μΐ pankreatickej RNázy(1 mg/mlj sa přidali postupné sa zvyšu-júce množstvá extraktu II. Po 10-minúto-vej iinikubácii pri taboratórnej teplote sak vzorikám přidalo 10 μΐ štandardneij trans-kriponej zmesi po ukončení syntézy RNAa v inkubácii sa pokračovalo dalších 10minút. Ďalej sa postupovalo tak, ako pri PREDMET Spósob přípravy farmaceuticky účinnejlátky z propolisu a iiných včelích produk-tov vyznačujúici sa tým, že sa z vodno-al-koholického extraktu o obsahu 40 až 75ohj. % etylalkoholu daného včelieho pro-duktu, získá frakcia rozpustná v destilova-nej vodě, ktorá po zmiešaní s enzýmom syn-tetizujúcim nukleové kyseliny, s výhodoutranskriptáza, v pomere 1 hmot. diel enzý-mu s tromi hmot. dielmi účinnej látky vy-tvoří komplex účinná látka — enzým, od určovaní transkriptázy. Za 100%-nú ak-tivitu RNázy sa považovalo množstvo syin-tetizovanej RNK bez přítomnosti etxrak-tu II. Tabulka č. 4 Vplyv extraktu II na syntézu polynukleoti-dov pomocou polynufcleotidfosiforylázy Aktivita polynukleotidfos- Extrakt IIforylázy+ (%] (^g/ml) 100 0,00 99 12,00 91,8 24,00 90,0 60,00 Aktivita polynukleotidfosforylázy sa novila tak, ako je > uvedené v práci: múth J., Zelinka J., Polek B. Biochem.Biophys. Acta (1975), 379, str. 397—407. vynalezu ktorého sa nízkomolekulové látky oddeliadialýzou alelbo gélovou chromatografiou apotom sa účinná látka od enzýmu oddělípo predchádzajúcom působení 0,5 až 1,5molárnym roztokom chloridu draselnéhoalebo chloridu sodného extrakciou orga-nickým rozpúšťadlom, napr. etylalkoholom,z ktorého sa účinná látka získá v čistomstave odpařením rozpúšťadla pri teplote 20až 30 °C. Severografia, n. p., závod 7, Most Cena 2,40 Kčs
CS82392A 1982-01-20 1982-01-20 Sposob přípravy farmaceuticky účinnej látky z propolisu a iných včelích produktov CS231766B1 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS82392A CS231766B1 (cs) 1982-01-20 1982-01-20 Sposob přípravy farmaceuticky účinnej látky z propolisu a iných včelích produktov

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS82392A CS231766B1 (cs) 1982-01-20 1982-01-20 Sposob přípravy farmaceuticky účinnej látky z propolisu a iných včelích produktov

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS39282A1 CS39282A1 (en) 1984-05-14
CS231766B1 true CS231766B1 (cs) 1984-12-14

Family

ID=5335896

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS82392A CS231766B1 (cs) 1982-01-20 1982-01-20 Sposob přípravy farmaceuticky účinnej látky z propolisu a iných včelích produktov

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS231766B1 (cs)

Also Published As

Publication number Publication date
CS39282A1 (en) 1984-05-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Lewis et al. Cardiac mitochondrial DNA polymerase-gamma is inhibited competitively and noncompetitively by phosphorylated zidovudine.
Vedel et al. The antifungal antibiotic sinefungin as a ver y active inhibitor of methyltransferases and of the transformation of chick embryo fibroblasts by rous sarcoma virus
DE69533255T2 (de) ISOLIERTES p27 PROTEIN UND NUKLEINSÄURE DAFÜR KODIEREND
Murad et al. Effects of guanosine 3', 5'-monophosphate on glycerol production and accumulation of adenosine 3', 5'-monophosphate by fat cells
Schwartz et al. Garlic attenuates nitric oxide production in rat cardiac myocytes through inhibition of inducible nitric oxide synthase and the arginine transporter CAT-2 (cationic amino acid transporter-2)
Murray et al. Cyclic adenosine 3′: 5′-monophosphate and microtubule function: Specific interaction of the phosphorylated protein subunits with a soluble brain component
Rosenbaum et al. Simplified preparation and properties of undegraded rat liver transfer ribonucleic acid
AU1300599A (en) Methods and compositions for targeting dna metabolic processes using aminoglycoside derivatives
Bennett et al. Defining the minimal domain of the Plasmodium falciparum protein MESA involved in the interaction with the red cell membrane skeletal protein 4.1
Hamel et al. Tubulin-dependent biochemical assay for the antineoplastic agent taxol and application to measurement of the drug in serum
Volcani Role of silicon in diatom metabolism and silicification
Mescher et al. Activation of maternal mRNA in the absence of poly (A) formation in fertilised sea urchin eggs
Yamashita et al. Cyclic AMP-stimulated protein kinase prepared from bovine thyroid glands
HORI et al. Histochemical study of adenosine triphosphatase in cytoplasm
Rapaport et al. Relationship of the first step in protein synthesis to ppGpp: formation of A (5') ppp (5') Gpp.
CS265224B2 (en) Process for preparing tissue grow regulator
CS231766B1 (cs) Sposob přípravy farmaceuticky účinnej látky z propolisu a iných včelích produktov
Hirata et al. Increase in Ca2+ permeability of intracellular Ca2+ store membrane of saponin-treated guinea pig peritoneal macrophages by inositol 1, 4, 5-trisphosphate
Kliewer et al. B12 coenzyme content of the nodules from legumes, alder and of Rhizobium meliloti
Morris Inhibition of Protein Synthesis by Cyclo-heximide (Actidione) in Chlorella
DE19503685C2 (de) Verfahren zur Herstellung komplexer multienzymatischer lagerstabiler Reaktionsgemische und deren Verwendung
Hernandez et al. Biochemical studies on the iguana
Murakami et al. Stimulation of sea urchin DNA polymerase by protein factors
Shier Activation of self-destruction as a mechanism of action for cytolytic toxins
Sasaki et al. Suppression of nucleic acid synthesis in chromatin of Spirogyra during conjugation process