CS225868B1 - Spdsob přípravy A antigénu na imunodifúznu diagnostiku Markovej choroby - Google Patents
Spdsob přípravy A antigénu na imunodifúznu diagnostiku Markovej choroby Download PDFInfo
- Publication number
- CS225868B1 CS225868B1 CS659481A CS659481A CS225868B1 CS 225868 B1 CS225868 B1 CS 225868B1 CS 659481 A CS659481 A CS 659481A CS 659481 A CS659481 A CS 659481A CS 225868 B1 CS225868 B1 CS 225868B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- mark
- antigen
- disease
- supernatant
- minutes
- Prior art date
Links
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims description 21
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims description 21
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 14
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 18
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 18
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 11
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 10
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 7
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 5
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 5
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 4
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 3
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 3
- 239000012620 biological material Substances 0.000 claims description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 claims description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 2
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 claims description 2
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 6
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 101710098119 Chaperonin GroEL 2 Proteins 0.000 description 1
- 241000224483 Coccidia Species 0.000 description 1
- 101710088235 Envelope glycoprotein C homolog Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 235000008708 Morus alba Nutrition 0.000 description 1
- 240000000249 Morus alba Species 0.000 description 1
- 208000027954 Poultry disease Diseases 0.000 description 1
- 150000004683 dihydrates Chemical class 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003746 feather Anatomy 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000011206 morphological examination Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 229940057847 polyethylene glycol 600 Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 description 1
- 238000002525 ultrasonication Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
ČESKOSLOVENSKÁ SOCIALISTICKÁ REPUBLIKA ( 19 ) POPIS VYNALEZU K AUTORSKÉMU OSVĚDČENI U 225868 (O) <B1) (51) int. Cl.3 A 61 K 39/255 G 01 N 33/54 (22) Přihlášené 08 09 81(21) (PV65W-81) (40) Zverejnené 29 07 83 ÚŘAD PRO VYNÁLEZY A OBJEVY (45) Vydané 15 10 85 (75)
Autor vynálezu
LEŠNÍK FRANTIŠEK doc. MVDr. CSc., DANIHEL MILAN MVDr., KOŠICE (54) Spósob přípravy A antigénu na imunodifúznu diagnostiku Markovej choroby 1
Vynález sa týká spfisobu přípravy A antigénu na imunodifúznu diagnostiku Markovej cho-roby hydiny. V súčasnosti bolo vyvinutých iba niekoTko spolehlivých metod používaných v praxi nadiagnostiku Markovej choroby hydiny. Jedná se predovSetkým o imunofluorescentnú metodu,ktorou sa dokazuje přítomnost virusu Markovej choroby v organizme vySetrovanej hydiny. Tá-to metoda je Sašovo náročná, nakoTko vyžaduje přípravu a kultiváciu buňkových kultúr, naj-SastejSie kačacích fibroblastov, ktoré sa připravují z málo přístupných kačacích embryíalebo kuřácích obličiek. Posledně menovaná buňková kultúra patří medzi relativné náročnébuňkové kultúry, nakoTko ich kultivácla vyžaduje přítomnost COg a kurčatá, z ktorých sapripravujú obličkové kultúry mali by byt geneticky vnímavé k virusu Markovej chorobya prosté Specifických patogénov.
Uvedené nedostatky sú odstránené u spfisobu přípravy A antigénu na imunodifúznu cha-rakteristiku Markovej choroby podl’a vynálezu, ktorý spočívá v odobraní, připadne prípravebiologického materiálu, jeho homogenizácie, centrifugácií a čistění dialýzou, alebo preci-pitáciou a lyofilizácii a ktorého podstatou je, že koža odstránená a zmrazená minimálně na-20 °C z infikovaných virulentným vírusom Markovej choroby alebo koža odstránená a zmrazenána -20 °C minimálně, z čerstvých kadavérov hydiny pozitývnych na Markovu chorobu alebo kul-tivačně médium buňkových kultúr s pomnoženým virulentným vírusom Markovej choroby sa homo-genizuje za súčasného chladenia, Sálej sa na homogenát pfisobí ultrazvukem, a to najmenej6-krát 25 až 35 a pri 4 °C použitím 12 až ,5 amplitúd; homogenát z koží sa Sálej centrifu-guje při 5 000 až 10 000 obrátkách, min“' 10 až 25 minút za získania supernatantu, ktorýsa Sálej centrifuguje pri 8 000 až 10 000 g 20 až 30 minút, připadne eěte Sálej pri 80 000až 100 000 g jednu hodinu. 225868 225868 2 fialej sa takto získaný supernatant zahustí dialýzou při 4 °C za použltia polyetylén-glykolu alebo precipitáciou roztokem síranu amonného a to minimálně na jednu desetinu pO-vodného objemu a získaný dialyzát resp. koncentrát sa lyofilizuje.
Postupovat je možné aj tak, že v případe použltia kultivašného média s A antigénomsa médium po homogenizécii a pOsobení ultrazvukem centrifuguje pri 8 000 až 10 000 obrát-kach. min“' 15 až 25 minút a supernatant sa precipituje roztokom síranu amonného, Sálejsa sískaný precipitát reeuspenduje najmenej na jednu desatinu pdvodného objemu a dialyzu-je proti destilovanej vodě 40 až 50 hodin pri 4 °C. Získaný dialyzát je připadne možné Sá-lej dialyzovat minimálně na desatinu pOvodného objemu za použltia polyetylénglykolu a Sá-lej lyofilizovať. A antigén, resp. kožný antigén virusu Markovej choroby sa lokalizuje predovSetkým ·v epitelových buňkách peřových folikulov hydiny, infikovanej virulentným vírusom Markovejchoroby, prišom nositelom, respektive producentom tohto antigénu je iba virulentný virus.Připravený A antigén, je kožný antigén virulentného vorušu Markovej choroby a využívá sana dOkaz precipitaSných protilátek v sére, proti tomuto antigénu, za použltia referenSnéhoséra obsahujúceho Specifické protilátky proti A antigénu, respektive kožnému antigénu. Výhodou spOsobu přípravy podlá vynálezu je to, že lyofilizované referenčné sérum jemožné uskladňovat pri teplote 4 °C po dobu minimálně jedného roka.
Predmet vynálezu je opísaný na príkladoch prevedenia. Příklad 1
Použila sa kota s 30-dňových kurSiat, ktoré boli v prvý deň života infikované viru-lentným vírusom Markovej choroby a to Standardným virulentným kmeňom HRPS-16. Koža odstrá-nená z kurSiat sa až do SalSej přípravy uchovala pri teplote -20 °C. fialej sa koža homoge-nizuje pomocou běžného mixéru tak, aby nepřišlo k jeho prehriatiu za pridávania Pádovýchkociek destilovanej vody. Po získaní homogénnej pasty sa homogenát vystavil pOsobeniu ultra-zvuku a to šestkrát 30 sekúnd pri 40 °C použitím 12 až 15 amplitúd. Homogenát sa Sálejcentrifugoval na laboratórnej centrifúge pri 8 000 obrátkach/min“'. Získaný supernatantsa Jalej centrifuguje pri 10 000 obrátkach/min“' 30 minút a pri 100 000 obrátkach/min“'jednu hodinu..Posledný supernatant sa zahustí dialýzou proti 35% polyetylénglykolu o mole-kulové j hmotnosti 6 000 a získaný dialyzát sa lyofilizuje. Příklad 2
Postupovalo sa ako v příklade 1 s tým rozdielom, že sa použila koža z čerstvých kade-verov hydiny, u kterých v rámci patologicko-anatomického vyšetrenia bolo zistené, že sú po-sitivně na akútnu - nádorová Markovu chorobu. Námiesto dialýzy sa posledný supernatant zahustil solnou precipitáciou roztokom 50%síranu amonného a to na jednu desatinu pOvodného objemu. Získaný koncentrát sa lyofilizuje. Příklad 3
Postupovalo sa ako v příklade 1, 3 tým rozdielom, že sa použilo kultivaSné médiums A antigénom. Na rozdiel od příkladu 1 sa centrifugácia uskutočňovala pri 3 000 obrát-kach/min“' ,20 minút a zo supematantu sa precipitoval A antigén s použitím 50% síranu amon-ného. Získaný precipitát se resuspenduje na jednu desatinu pSvodného objemu a dialyzujeproti destilovanej vodě najmenej 48 hodin pri 4 °C a lyofilizuje.
Claims (2)
- 3 225868 Příklad 4 Postupovalo sa ako v příklade 3i s tým rozdielom, že dialyzát získaný spdsobom pódiapříkladu 3 sa zahustil na desetinu svojho objemu, dialýzou proti 35% polyetylénglykolu 600a získaný koncentrát sa lyofilizoval. Molekulová hmotnost získaného A-antigénu je okolo70 000. Spdsob pódia vynálezu je možné použit na přípravu A antigénu na imunodifúznu diagnosti-ku Markovej choroby v agarovom géli za použitia pozitívneho referenčného séra. Přítomnostprotilátok proti tomuto antigénu poukazuje na infikovanosť, resp. vakcináciu hydiny víru-som Markovej choroby. Spdsob přípravy A antigénu na imunodifúznu diagnostiku Markovej choroby bol overenýu piatich vyšetřovaných skupin kureniec z rdznych lokalit a výsledky boli porovnané s pa-tologicko-morfologickým vyšetřením hydiny. U jednej skupiny bola potvrdená Markova chorobaa to v spolupdsobení s kokcidiami a kolibacilózou. f PREDMET VYNÁLEZU1. Spdsob přípravy A antigénu na imunodifúznu diagnostiku Markovej choroby, ktorýspočívá v odobraní připadne príprave biologického materiálu, jeho homogenizácií, centri-fugácií a čištěni dialýzou alebo precipitáciou a lyofilizácii, vyznačený tým, že kožaodstránená a zmrazená minimálně na -20 °C z kurčiat infikovaných virulentným vírusom Mar-kovej choroby alebo koža odstránená a zmrazená minimálně na -20 °C z čerstvých kadaverovhydiny positivnych na Markovu chorobu alebo kultivačně médium buňkových kultúr s pomnože-ným virulentným vírusom Markovej choroby sa homogenizuje za chladenia, Sálej sa na hornoge-nát pdsobí ultrazvukom a to najmenej 6-krát 25 až 35 a pri 4 °C použitím 12 až 15 amplitúd,homogenát z koží sa áalej centrifuguje pri 5 000 až 10 000 obrátkach/min”1 10 až 15 minútza získania supernatantu, ktorý sa Jalej centrifuguje při 8 000 až ,0 000 g 20 až 30 mi-nút, připadne ešte Sálej pri 80 000 až 100 000 g jednu hoinu a supernatant sa zahustí dia-lýzou při 4 °C za použitia polyetylénglykolu alebo precipitáciou roztokem síranu amonnéhona minimálně jednu desetinu pdvodného objemu a získaný dialyzát alebo koncentrát sa lyofi-lizuje. 2
- 2. Spdsob podlá bodu 1, vyznačený tým, že v případe použitia kultivačného média s Aantigénom sa médium po homogenizácii a pdsobení ultrazvuku centrifuguje pri 8 000 až 10 000obrátkach/min“1 15 až 25 minút a supernatant sa precipituje roztokom síranu amonného, a Sálej sa získaný precipitát resuspenduje najmenej na jednu desetinu pdvodného objemua dialyzuje proti destilovanej vodě 40 až 50 hodin pri 4 °C, připadne sa 5alej dialýzujeminimálně na jednu desetinu pdvodného objemu za použitia polyetylénglykolu a koncentrátsa lyofilizuje.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS659481A CS225868B1 (cs) | 1981-09-08 | 1981-09-08 | Spdsob přípravy A antigénu na imunodifúznu diagnostiku Markovej choroby |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS659481A CS225868B1 (cs) | 1981-09-08 | 1981-09-08 | Spdsob přípravy A antigénu na imunodifúznu diagnostiku Markovej choroby |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS225868B1 true CS225868B1 (cs) | 1984-03-19 |
Family
ID=5413353
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS659481A CS225868B1 (cs) | 1981-09-08 | 1981-09-08 | Spdsob přípravy A antigénu na imunodifúznu diagnostiku Markovej choroby |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS225868B1 (cs) |
-
1981
- 1981-09-08 CS CS659481A patent/CS225868B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Stanley et al. | STUDIES ON THE PATHOGENESIS OF A HITHERTO UNDESCRIBED VIRUS (HEPATO-ENCEPHALOMYE-LITIS) PRODUCING UNUSUAL SYMPTOMS IN SUCKLING MICE. | |
| Taylor et al. | The epidemiology of peste des petits ruminants in the Sultanate of Oman | |
| Malmquist et al. | Isolation, immunodiffusion, immunofluorescence, and electron microscopy of a syncytial virus of lymphosarcomatous and apparently normal cattle | |
| US3984539A (en) | Bovine immunoglobulin isolation process | |
| Schechtman | Uptake and transfer of macromolecules by cells with special reference to growth and development | |
| Stair et al. | Spontaneous bluetongue in Texas white-tailed deer | |
| JP5099623B2 (ja) | 免疫蛋白質の製造方法 | |
| Yong et al. | ‘Arc 5’antibodies in sera of sheep infected with Echinococcus granulosus, Taenia hydatigena and Taenia ovis | |
| Witter et al. | Studies on the in vivo replication of turkey herpesvirus | |
| Uren | Bovine ephemeral fever | |
| Duffus et al. | Initial studies on the properties of a bovine lymphoid cell culture line infected with Theileria parva | |
| CS225868B1 (cs) | Spdsob přípravy A antigénu na imunodifúznu diagnostiku Markovej choroby | |
| Naqi et al. | Purification and concentration of viruses associated with transmissible (coronaviral) enteritis of turkeys (bluecomb) | |
| Rangan | Origin of the fibroblastic growths in chicken buffy coat macrophage cultures | |
| US4180627A (en) | Process for in vivo transfer of cell-mediated immunity in mammals with alcoholic precipitates of Bovine Transfer factor | |
| US4541953A (en) | Preparation of anti-T-lymphocyte globulin | |
| JPS5991880A (ja) | 組織培養及び細胞増殖の促進物質及びその製造法 | |
| Timoney | Adenovirus precipitating antibodies in the sera of some domestic animal species in Ireland | |
| 高瀬公三 et al. | Pathogenic characteristics of highly virulent avian reovirus, strain 58-132, isolated from a chicken with tenosynovitis. | |
| JPS60243019A (ja) | 肝細胞増殖因子 | |
| Corbel et al. | Arthropathy associated with Brucella abortus strain 19 vaccination in cattle. I. Examination of field cases | |
| Kaleta et al. | Persistent viraemia of a cell‐associated herpesvirus in white storks (Ciconia ciconia) | |
| RU2112799C1 (ru) | Способ получения ростовых протеинов из сывороток крови различных видов животных | |
| CH380302A (de) | Verfahren zur Herstellung einer kombinierten Vaccine für Hunde | |
| AT227876B (cs) |