CS223511B1 - Spósob zíekav&nia íudského gamaglobulínu z odpadnej frakcle vznlkajúcej pri depyrogenizácii injekčného roztoku - Google Patents

Description

- 1 - 223 Sil

Vynález sa týká spósobu extrakci© 1 lidského gamaglobulínuz odpadnej frakcie vznikajúcej pri depyrogenizácii injekčnéh©roztoku, a to tým epósobom, že pri vhodnéj koncentraci! bielko-vín, pH, iónovej sily a teploty gamaglobulín prechádza do roz-toku a od nebielkovinného podielu je separovaný centrifugáciou.V ďalšej fáze konoentrácia iónov vápnika a fosforu sa znižujedialýzou.

Najznamej šie izolačně postupy 1’udského gamagl obul inu súj

Vysolovanie pomocou soli /Howe P.E.: Physiol. Revs. 5,439»1925, Edsall J.T.í Advances in Protein Chea. III, 383-479, 1947» Nitschmann H.: Vox Sang., 6, 2, 244* 1961/·

Frakcionácia etanolom /Cohn E.J., Strong L.E., Hughes W.L·,Mulford D.J., Ashworth J., MelinM., Taylor H.L.: J. Amer. Chea.Soc., 68* 459« 1946/ a jej modifikácia /Nitschmann H., KistlerP., Lergie W.s Helv· Chim. Acta, 37, 866, 1954, Hořejší J.: Čas. lek. českých, 39, 1067, 1953/· v

Frakcionácia rivanolom /Rejnek J·, Bednarik T., Mašek J.:Csl. farm., 10, 407» 1961, Hořejší J., Smetana R.s Chem. listy,48, 75θ, 1954, Škvařil F.t Čel. farmácia, 9, 522. 1957, SalferA·, lipkin L.E.: Proč. Soc· exp· Biol. Med·, 102, 1* 220-222,1959, Steinbuch M.s Vox. Sanguinis 23, 92-106, 1972/.

Frakcionácia kovmi /Cohn E.J. et.al.s J. Aa. Chem. Soc., 72, 465-474, 1950, Rejnek J., Škvařil F.s Chem. listy, 51, 6,1190-1193, 1957/.

Frakcionácia pólyethylenglykolom /Falksveden I·: PatentŠvédsko, 348, 942, 1972, PolsonA., Ruiz-Bravo C.s Vox Sangui-nis 23, 107-118, 1972/. Gólová filtrácia /Fureman P., Vawier W.E., Goodman H.C.tProč. Soc. exp. Biol. Med., 115, 4, 845-849, 1969, Friedli H.,Fournier E., Volk-T., Kistler P.t Vox Sanguinis, 33, 2, 93-96,1977/. 2 223 511 V případe, že injekčný roztok ludského gamaglobulínu nevy- v hovuje kritériem na obsah pyrogenných látok podlá Csl.3 preve-die sa jeho depyrogenizácia nasledovným spósobom:

Injekčný roztok 1’udského gamaglobulínu sa schladí na teplo-tu + 2 až + 4 Θ0 a po kvaptáeh za stalého miešania přidá sa 1Θobjemových %, 15 % roztoku normálneho fosforečnanu sodného a 5objemových %, 18 % roztoku octanu vápenatého.

Po vytvoření gelu zmes sa ponechá pri teplote + 2 až + 4 ®Cpo dobu 24 hodin, počom sa gel odstraní centrifugáciou. Odpad-ná frakcia představuje nerozpustný fosforečnan vápenatý, ktorýna seba viaže určité množstvo gamaglobulínu. Tát© frakcia vzni-kajúca pri depyrogenizácii injekčného roztoku ludského gamaglo-bulínu doteraz nebola využívaná a představuje odpad.

Na získanie gamaglobulínu z tejto frakci© bol vypracovanýtechnologický postup, kde extrakciou pri vhodnej koncentráciibielkovín, pH a iónovej sily sa získává vyhovujúci gamaglóbulín.Navrhovaný technologický postup extrakcie ludského gamaglobulí-nu z odpadnej frakcie vznikájúcej pri depyrogenizácii ludskéhogamaglobulínu prispieva k ďalšiemu zhodnocovaniu východzej suror·viny ludskej plazmy a uspokojovaniu zdravotnického terénu žiada-ným prípravkom.

Podstata extrakcie ludského gamaglobulínu z odpadnej frak-ci© vznikájúcej pri depyrogenizácii injekčného roztoku spočíváv tom, že táto sa suspenduje v apyrogennej vodě na 2,0 až 6,0hmotnostných % bielkovín, iónovej sily 0,001 až 0,01, pH 5»5 až 5,8 pri teplote + 4 °C. Miešaním po dobu 3 až 5 hodin gamaglo-bulín přejde do roztoku a nerozpustné balastné podiely sa sepa-rujú centrifugáciou. Získaný supernatant sa filtruje cez čeria-ce vložky a filtrát sa dialyzuje oproti 0,35 - 0,85 % - roztokachloridu sodného pri teplote + 4 °θ po dobu 8 až 48 hodin.Dialyzát sa rozplňuje do NTS fliaš, namrazuje, lyofilizujea farmaceuticky spracúva na injekčný roztok gamaglobulínu. Příklad č. 1 1000 g odpadnej frakcie vznikajúcej pri depyrogenizáciigamaglobulínu sa suspenduje v 2000 ml apyrogennej vody. Po dvoj-hodinovom miesaní prevedie sa kontrola hodnoty pH a přidáním35 ml 1 M CH^OOOH upraví sa na hodnotu 5,5. Roztok sa potomešte mieša 3 až 4 hodiny pri teplote + 1 až + 4 °C» počom sacentrifuguje na chladenej vysokoobratkovej centrifuge. Získanýsupernatant sa filtruje cez čeriace vložky a filtrát.sa potom 223 Sil -3 dialyzuje oproti 0,35 % roztoku chloridu sodného po dobu 18 ho-din pri teploto + 1 až + 4 °C. Konečná koncentrácia fosforuv dialyzovanom roztoku má sa znížit pod hrániou 4 mg % a vápni-ka pod hrániou 3*5 mg %· Dialyzát sa rozplňuje do NTS fliaš, na-mrazuje, lyofilizuje. Lyofilizovaný gamaglobulín sa rozpúšťaa farmaceuticky spracúva. Příklad č. 2 1000 g odpadnej frakcie vznikájúcej pri depyrogenizácii ga-maglobulínu sa suspenduje v 4000 ml apyrogennej vody. Po dvojho-dinovom miešaní sa převedlo kontrola hodnoty pH roztoku a přidá-ním 50 ml 1 M CH^COOH upraví sa na hodnotu 5*6. Roztok sa potomešte miešá 3 až 4 hodiny pri teploto + 1 až + 4 °C, počom sa cen-trifugu;) e na ohladenej vysokoobratkovej centrifugo. Zísakný su-pernatant sa filtruje cez čeriace vložky a filtrát sa potom dia-lyzuje oproti 0,45 % roztoku chloridu sodného po dobu 40 hodinpri teploto + 1 až + 4 °C. Konečná koncentrácia fosforu v dialy-zovanom roztoku má sa znížit pod hranicu 2 mg % a vápnika podhranicu 1,75 mg %. Dialyzát sa rozplňuje do HTS fliaš, namrazujea lyofilizuje. Lyofilizovaný gamaglobulín sa rozpúŠťa a farmaceu-ticky spracúva. Výfažnosf

Vyťažnosť takto získaného 16 % injekčnéh© roztoku gamaglo-bulínu sav priemere pohybuje okolo 900 ml z 1000 g odpadnejfrakcie.

Análytioké hodnotenie:

Požadované skúšky Kritéria ČSN 86 3131 Dosiahnuté výsledky Sterilita sterilné vyhovuj e Neškodnost neškodné vyhovuj e Obsah pyrogénnyoh látok apyrogénne vyhovuj e Obsah bielkovín 14,5-17,5 g/100 ml 14,81 g/100 ml Obsah stabilizátora 1,5-3,0 g/100 ml 1,88 g/100 ml Obsah tiomersálu max. 0,01 g/100 ml 0,0088 g/100 ml Obsah NaCl 0,5-0,9 % 0,76 % pH 6,2-7,2 6,93 El ektr of or e t i oká čistota min. 90 % 94,4 % - 4 223 511

Požadované skúšky Kritéria výrobného před-pisu doplnok 1 Dosiahnuté výsledky Obsah vápnika Obsah fosforu max. 11,5 mg %max. 12,0 mg % 10,5 mg % 12,0 mg %

Claims (2)

1. -5- PREDMET VYNÁLEZU 223 Sil 1· Spósob získávania gamaglobulínu z odpadnej frakcie vznikájú-cej při depyrogenizácii injekčného roztoka ludského gamaglo-bulínu vyznačujúci sa tým, že odpadná frakcia sa suspendujev apyrogennej vodě pri teplotě + 1 až + 4 °C na konoeatráciu2,0 až 6,0 hmotnostných % bielkovín/λρΗ 5»5 až 5»8, iónovejsile 0,001 až 0,01 a koncentrácia iónov vápnika a fosforu saznižuje dialýzou oproti 0,35 až 0,85 % roztoku chloridu sod-ného· 2« Spósob přípravy podlá bodu 1 vyznačujúci sa tým, že dialýzazískaného roztoku gamaglobulínu prevádza sa pri teplote + 1až 8· 4 °C po dobu 8 až 48 hodin.