CS221172B1 - SJaLflzovený roztok hidakéhsi gamagksbalínu o nízkej koncentrácii bieikovín - Google Patents

Abstract

Využitie nachádza v imunologicko-biolo- gickej výrobě liečebných prípravkov. Účelom vynálezu je zlepšenie stability a vzhladu výrobku, ako aj zvýšenie výťažnosti. Zvýšeného účinku, najma stability roztoku ludského gamaglobulínu o nízkej koncentrácii bieikovín, sa dosahuje tým, že k zrie- denému roztoku ludského gamaglobulínu, ktorý obsahuje 0,1 — 6,0 hmotnostných % bieikovín, přidá sa injekčný roztok 1'udské- ho albuminu ako stabilizátor, v množstve 0,05 — 0,15 hmotnostných %.

Description

221172

Vynález sa týká stabilizovaného roztoku1'udského gamaglobulínu o nízké] koncen-trácii bielkovín pomocou 1'udského albumi-nu.

Etanolovou frakcionáciou íudskej plazmy,resp. séra a dalšími vhodnými technologic-kými úkonmi získává sa celá rada plazma-tických bielkovín medzi nimi a] gamaglobu-lín, ktorý v konečne] fáze připravuje sa ako0,5 až 16 %-ný injekčný roztok. Gamaglobu-lín v roztoku sa spravidla stabilizuje amino-kyselinami, popřípadě jednoduchými cukra-ml. Z aminokyselin sa v praxi najviac použí-vá kyselina aminooctová a s-aminokaprono-vá (J. T. Edsall: Advences in Protein Chem. III. 1947; Strassle R.: Expericalie, 9, 1953;Nikitina V. D.; Cholčev N. V., KolesnikovaL. I. a Korableva Z. I.: ŽMEI, 1, 1975 j. Z jednoduchých cukrov je to hlavně glu-kóza (J. T. Edsall: Advences in ProteinChem. III. 1947).

Na niektorých pracoviskách pri príprave1'udského gamaglobulínu o nízkej koncentrá-cii bielkovín obsahujúci histamín ako stabi-lizátor používajú tiosíran sodný (Naučno--issledovatelskij institut vakcin i syvorotokimeni I. I. Mečnikova: Nastavlenie po pri-meneniju suchoga Histaglobulína, 1972 j.

Prax ukázala, že kyselina aminooctová aε-aminokapronová spolahlivo stabilizujú roz-tok 1'udského gamaglobulínu v tom přípa-de, keď tento obsahuje vyššiu koncentráciubielkovín (10 — 16 °/o). Naopak roztok ga-maglobulínu o nízkej koncentrácii bielko-vín (0,5 až 5,0 %) najma po opátovnej lyo-filizácii javí opalescenciu až zákal, čo svěd-čí o tom, že přítomný stabilizátor dostatoč-ne nechrání bielkovinu proti eventuálnymdenaturačným změnám. Experimentálně bo-lo zistené, že u gamaglobulínu s nízkou kon-centráciou bielkovín ani vysoká koncentrá-cia stabilizátora (kyselina aminooctová, ky-selina ε-aminokapronová a glukóza] nepri-náša potřebný stabilizujúci účinok příprav-ku. V literatúre je popísaná izolácia cholin-esterázy z frakcie IV, používaná k intrave-nóznej aplikácii, stabilizácia ktorej sa pre-vádza albumínom koncentrácie 2,5 % (M.Steinbuch, C. Granier, D. Tavernier, A. Fau-re: Vox Sang 36: 142—149, 1979).

Jeden z výrobkov 1'udského gamaglobulí-nu o nízkej koncentrácii bielkovín připravu-je sa z frakcie II získanej etanolovou frak-cionáciou íudskej plazmy. Frakcia II připra-vená do lyofilizovaného stavu sa rozpúšťav 0,01 %-nom roztoku mertiolátu a 2,25 %kyseliny aminooctovej ako stabilizátora na16 %-ný bielkovinný roztok.

Tento sa nariedí s 0,45 až 0,50 %-ným roz-tokom chloridu sodného na 3 % bielkovín apH sa upraví 5 %-nou kyselinou citrónovouna hodnotu 5,75 až 5,80. Potom k roztokugamaglobulínu za stálého miešania sa přidá2 % bentonitu a zmes sa nechá stáť 1 hodi-nu. Vytvořený gél sa odstředí centrifugácioua supernatant sa filtruje cez čeriacu vložku. !Po úpravě pH na hodnotu 6,8 až 6,9 násle-duje filtrácia cez sterilizujúce vložky a zís-kaný gamaglobulín sa nariedí izotonickýmroztokom chloridu sodného na 0,5 až 0,7 %--ný roztok bielkovín. Takto připravený roz-tok gamaglobulínu sa mieša so sterilnýmizotonickým roztokom chloridu sodného ob-sahujúcim histamín tak, aby výsledná kon-centrácia histamínu bola 0,05 až 0,10 ,ug/ml.Po dokonalej homogenizácii sa prípravokrozplňuje, namrazuje a lyofilizuje.

Podstata nového spósobu stabilizácie roz-toku 1'udského gamaglobulínu o nízkej kon-centrácii bielkovín spočívá v tom, že gama-globulín získaný frakcionáciou íudskej plaz-my sa nariedí vhodným roztokom na 0,1 až6,0 hmotnostných % bielkovín a tento sastabilizuje přidáním 0,05 až 0,15 hmotnost-ných % 1'udského albuminu. Výhoda uvedeného spósobu přípravy ga-maglobulínu o nízkej koncentrácii bielkovínoproti doteraz používanému je v tom, že sazlepšuje stabilita a vzhlad výrobku, zvyšujevýťažnosť, znížuje pracnost a skracuje tech-nologický cyklus. Příklad přípravy 0,5 — 0,7 % roztoku lud-ského gamaglobulínu s obsahom histamínu: 100 ml 16 %-ného roztoku 1'udského ga-maglobulínu sa nariedí přidáním 2900 mlizotonického roztoku chloridu sodného na0,55 % bielkovín. K takto připravenému roz-toku gamaglobulínu sa přidá 1,5 g roztoku1'udského albuminu přepočítaného na 100 %bielkovín. pH roztoku sa upraví na hodnotu6,9 ± 0,5 a potom sa tento sterilně filtrujea zmieša so sterilným roztokom histamínutak, aby výsledná koncentrácia histamínu vroztoku bola 0,05 až 0,10 jug/ml. Potom saroztok rozplňuje po 2 ml do penicilinovýchflaštičiek o obsahu 5 ml, namrazuje a lyo-filizuje sa. 100 ml 16 %-ného injekčného roztoku lud-ského gamaglobulínu sa nariedí přidáním2900 ml izotonického roztoku chloridu sod-ného na 0,55 % bielkovín. K takto připra-venému roztoku gamaglobulínu sa přidá 3 groztoku 1'udského albuminu přepočítanéhona 100 % bielkovín. pH roztoku upraví sana hodnotu 6,9 ± 0,5 a potom sa tento ste-rilně filtruje a zmieša so sterilným roztokomhistamínu tak, aby výsledná koncentráciahistamínu v roztoku bola 0,05 až 0,10 ^g/ml.Potom sa roztok rozplňuje po 2 ml do pe-nicilinových flaštičiek o obsahu 5 ml, na-mrazuje a lyofilizuje sa. Výťažnosť

Stávajúcou technológiou zo 100 ml 16 %--ného roztoku gamaglobulínu připravuje sacca 500 až 550 kusov 0,5 až 0,7 %-néhoroztoku gamaglobulínu s obsahom histamí-nu.

Novou technológiou zo 100 ml 16 %-néhoroztoku gamaglobulínu připraví sa cca 1000až 1100 kusov 0,5 až 0,7 %-ného roztoku ga-

Claims (3)

1. 221172 maglobulínu s obsahom histamínu, čím vý-raznost sa zvýši o 100 °/o. Hodnotenie vzhiadu V tabulke č. 1 sú uvedené hodnoty rela-tivného zákalu v % priepustnosti oproti Tabu Druh výrobku Destilovaná voda Výrobok připravený stávajúcou technológiouVýrobok připravený novou technológiou Priemerné hodnoty relativného zákalu uvedené v tabulke č. 1 ukazujú, že vzhladvýrobkov připravených novou technológiouje podstatné lepší ako u výrobkov připrave-ných stávajúcou technológiou. Taktiež rozptýl hodnot relativného zákaluu výrobkov připravených novou technológiouje podstatné nižší ako u výrobkov připrave-ných pódia platnej technologie. Tento pokrok bol dosiahnutý dokonalej- destilovanej vodě meraný Pulfrichovým fo-tometrom (filter č. 3, citlivost 2) a rozptýlhodnot relativného zákalu v % u 0,5 %-néhoroztoku gamaglobulínu s obsahom histamí-nu, připraveného stávajúcou a novou tech-nológiou. 1'ka č . 1 Priemer hodnot Rozptýl hodnot relativného zákalu v % relativného zákalu v % 100 0 69 42 90 12 šou stabilizáciou 0,5 %-ného roztoku l'ud-ského gamaglobulínu obsahujúceho hista-mín. Analytické hodnotenie V tabulke č. 2 sú uvedené analytické hod-noty stanovené u komerčného přípravku apřípravku vyrobeného podl'a vynálezu. Tabulka č . 2 Požadované skúšky Komerčný prípravok Prípravok pódia vynálezu Sterilita vyhovuje vyhovuje Neškodnost vyhovuje vyhovuje Vzhiad vyhovuje vyhovuje Obsah histamínu vyhovuje vyhovuje Obsah bielkovín 0,61 g/100 ml 0,74 g/100 ml Obsah chloridu sodného 0,96 % 0,97 % Obsah vlhkosti 2,01 % 2,25 % Aktuálna acidita 6,70 6,84 Obdobným sposobom iudský albumin mož-no použit k stabilizácii 4,5 — 5,5 %-néhoroztoku gamaglobulínu určeného k intrave- * nóznej aplikácii (Ivega), ako aj 1,3 — 1,8 %- * PREDMET

   1. Stabilizovaný roztok iudského gamaglo-bulínu o nízkej koncentrácii bielkovín, vy-značujúci sa tým, že obsahuje zriedený roz-tok iudského gamaglobulínu v množstve 0,1až 6,0 hmotno.stných %, a ako stabilizátorobsahuje Iudský albumin v množstve 0,05 až0,15 hmotnostných %.
2. 2. Sposob přípravy podl'a bodu 1 vyzna-čujúci sa tým, že na stabilizáciu roztokuIudského gamaglobulínu o nízkej končen- -nému roztoku gamaglobulínu obsahujúcehoiné triedy imunoglobulínov, najma IgA, IgM(IGAM). VYNALEZU trácii bielkovín používá sa Iudský albuminvo formě 4,5 až 22 %-ného injekčného roz-toku.
3. 3. Sposob přípravy pódia bodov 1 a 2 vy-značujuci sa tým, že ako stabilizátor rozto-ku 1'udského gamaglobulínu o nízkej kon-centrácii bielkovín používá sa injekčný roz-tok iudského albuminu o elektroforetickejčistotě minimálně 90 %.