CS215388B1

CS215388B1 - New strain Chlamydomonas qeitleri ETTL strain N-Ae

Info

Publication number: CS215388B1
Application number: CS646980A
Authority: CS
Inventors: Josef Necas; Karel Tetik; Josef Sulek
Original assignee: Josef Necas; Karel Tetik; Josef Sulek
Priority date: 1980-09-25
Filing date: 1980-09-25
Publication date: 1982-08-27

Abstract

Vynález se týká nového produkčního průmyslového kmene řasy Chlamydomonas geitleri ETTL kmen N-Ac 1 produkujícího biomasu, který je schopný dobrého růstu za čistě autotrofních podmínek kultivace a je použitelný při dočištování mírně znečištěných odpadních vod močovinou, amonnými solemi a octanem. Jeho vzorek je uložen ve Sbírce kultur autotrofních mikroorganismů v Botanickém ústavu ČSAV v Třeboni pod ě. A 777.BACKGROUND OF THE INVENTION The present invention relates to a novel industrial biomass production strain of Chlamydomonas geitleri ETTL ETTL strain N-Ac 1, which is capable of good growth under purely autotrophic culture conditions and is useful in purifying slightly polluted wastewater with urea, ammonium salts and acetate. His sample is stored in the Collection of Cultures of Autotrophic Microorganisms at the Botanical Institute of the Czechoslovak Academy of Sciences in Třeboň. A 777.

Description

Vynález se týká nového průmyslového kmene řasy Chlamydomonas geitleri kmen N-Ac 1, produkujícího biomasu, jehož vzorek je uložen ve Sbírce kultur autotrofních mikroorganismů v Botanickém ústavě ČSAV v Třeboni pod č. A 777.The invention relates to a new industrial strain of the algae Chlamydomonas geitleri strain N-Ac 1, producing biomass, a sample of which is deposited in the Collection of Cultures of Autotrophic Microorganisms at the Botanical Institute of the Czechoslovak Academy of Sciences in Třeboň under No. A 777.

V masových kulturách pro produkci řasové hiomasy a jejich hospodářsky významných složek se dosud pěstují převážně chlorokokálni řasy, ale některé vhodné druhy rodu Chlamydomonas se v těchto kulturách již také uplatnily (viz. např. BURLEW, J. S. ed.): Algal culture from laboratory to pilot plant, Carn gie Inst. Wash. Publ. 600, Washington, 357 p., 1964; NEČAS, J. (ed.): Izučenije intěnsivnoj kultury vodoroslej I., ČSAV, Třeboň, 290 p., 1965; NEČAS, J. (ed.): Izučenije intěnsivnoj kultury vodoroslej II., ČSAV, Třeboň, 293 p., 1975). V poslední době se řasy uplatňuji v biologickém čištění odpadních vod a při biologické koncentraci vzácných látek ze zředěných roztoků. Také v této oblasti se dobře osvědčují volvokální řasy (SOEDER, C. J. a BINSACK, R. (ed.): Microalgae for food and feed (Ergebnisse der Limnologie, Heft 11), E. Schweizerbart, Stuttgart, 299 p., 1978).In mass cultures for the production of algal hyomas and their economically important components, mainly chlorococcal algae are still grown, but some suitable species of the genus Chlamydomonas have also been used in these cultures (see, for example, BURLEW, J. S. ed.): Algal culture from laboratory to pilot plant, Carn gie Inst. Wash. Publ. 600, Washington, 357 p., 1964; NEČAS, J. (ed.): Izučenije intěnsivnoj kultury vodoroslej I., ČSAV, Třeboň, 290 p., 1965; NEČAS, J. (ed.): Izučenije intěnsivnoj kultury vodoroslej II., ČSAV, Třeboň, 293 p., 1975). Recently, algae have been used in biological wastewater treatment and in biological concentration of rare substances from dilute solutions. Volvocal algae also prove to be effective in this area (SOEDER, C. J. and BINSACK, R. (ed.): Microalgae for food and feed (Ergebnisse der Limnologie, Heft 11), E. Schweizerbart, Stuttgart, 299 p., 1978).

Pro všechny standardní kultury Chlamydomonas geitleri, kam přísluší nový kmen, je charakteristické (ETTL, H.: Nova Hedwigia 49, J. Cramer, Vaduz, 1122 p., 1976): Buňky 20 až 24 μιη dlouhé a 15 až 22 μιη široké jsou vejčité nebo vejčitě elipsoidní, vpředu poněkud zúžené, na bázi více zakulacené. Někdy mají poněkud asymetrickou formu, alt: neodchylují se příliš od základního tvaru. Mladé dceřiné buňky nabývají vejčitého tvaru ještě uvnitř mateřské buňky. Buněčný obal je poměrně pevný, ale ne příliš tlustý, nejčastěji dobře přilehá k protoplastu. Buňky předcházejí vpředu ve zřetelnou, ale ne zvlášť nápadnou papilu. V rovině nasazení bičíků je papila zkosená s mírně zvýšeným okrajem a bičíky vybíhají ze dvou vychlípených hrbolků. Bičíky jsou asi dvakrát tak dlouhé jako podélný rozměr buňky. Chloroplast je nástěnný, plášťovitý, vybíhající v četné laloky a vyznačující se hlubokými zářezy, hvězdicovitě se rozbíhajícími. U mladých buněk je chloroplast méně členitý, s jejich růstem členitosti přibývá. Pyrenoid je zřetelný, dosti velký, elipsoidní, okrouhlý nebo až polygonální, uložený v nápadné ztlustlině chloroplastu, zpravidla blízko poloviny delšího rozměru buňky nebo blíže báze buňky. Někdy je členěn do dvou až tří dílů vzájemně spojených. Červená, světločivá skvrna je dosti veliká. Jádra buňky jsou v přední části buňky. Zpravidla dvě pulsující vakuoly bávají rovněž umístěny v přední třetině buňky, blíže papily.For all standard cultures of Chlamydomonas geitleri, to which the new strain belongs, it is characteristic (ETTL, H.: Nova Hedwigia 49, J. Cramer, Vaduz, 1122 p., 1976): Cells 20 to 24 μιη long and 15 to 22 μιη wide are ovoid or ovoid-ellipsoid, somewhat narrowed in front, more rounded at the base. Sometimes they have a somewhat asymmetrical form, alt: they do not deviate much from the basic shape. Young daughter cells acquire an ovoid shape still inside the mother cell. The cell envelope is relatively firm, but not too thick, most often it adheres well to the protoplast. The cells precede in front in a distinct, but not particularly noticeable papilla. In the plane of the flagellar attachment, the papilla is beveled with a slightly raised edge and the flagella extend from two protruding tubercles. The flagella are about twice as long as the longitudinal dimension of the cell. The chloroplast is wall-shaped, sheath-like, extending into numerous lobes and characterized by deep notches, diverging in a star-like manner. In young cells, the chloroplast is less segmented, but with their growth, segmentation increases. The pyrenoid is distinct, quite large, ellipsoidal, round or even polygonal, located in a noticeable thickening of the chloroplast, usually near half of the longer dimension of the cell or closer to the base of the cell. Sometimes it is segmented into two or three interconnected parts. The red, light-colored spot is quite large. The cell nuclei are in the anterior part of the cell. As a rule, two pulsating vacuoles are also located in the anterior third of the cell, closer to the papilla.

Vegetativně se množí dělením na 2, 4, 8, 16 dceřiných buněk podle růstových podmínek, za kterých probíhají buněčné cykly (TETÍK, K. a NEČAS, J.: Arch. Hydrobiol. (Suppl 51), Algological Studies 19: 164—183, 1977). Během dělení mizí pyrenoid a světločivná skvrna a chloroplast se tvarově zjednodušuje. Vyvinuté zoospory se uvolňují rozšířeným otvorem v obalu mateřské buňky.It reproduces vegetatively by dividing into 2, 4, 8, 16 daughter cells according to the growth conditions under which the cell cycles take place (TETÍK, K. and NEČAS, J.: Arch. Hydrobiol. (Suppl 51), Algological Studies 19: 164—183, 1977). During division, the pyrenoid and photosynthetic spot disappear and the chloroplast becomes simplified in shape. The developed zoospores are released through an enlarged opening in the mother cell envelope.

Pohlavně se množí jen po indukci přechodu buněk z buněčného do životního cyklu (např. převodem do bezdusíkatého média). Potom se z vegetativních buněk vytvářejí isogamety. Nový kmen je stejně jako kmen homothalický (NEČAS, J. a PAVINGEROVÁ, D.: Arch. Hydrobiol. (Suppl.), Algological Studies (v tisku), (1980). Isogamety mají tvarově zjednodušený chloroplast. Po splynutí gamet se vytvářejí kulovité zygoty (průměr 12 až 16 z<m) s pevnou, tlustou, na povrchu hluboce zvrásněnou stěnou. Zygoty klíčí hromadně a rovnoměrně teprve po třítýdenním až čtyřtýdenním zrání ve tmě po přenesení na světlo. Vznikají z nich nej častěji 4, vzácněji 8 zoospor, které se mohou libovolně dlouho množit, opět vegetativně.Sexual reproduction occurs only after induction of the transition of cells from the cellular to the life cycle (e.g. by transfer to nitrogen-free medium). Then, isogametes are formed from vegetative cells. The new strain is homothallic, just like the strain (NEČAS, J. and PAVINGEROVÁ, D.: Arch. Hydrobiol. (Suppl.), Algological Studies (in press), (1980). Isogametes have a simplified chloroplast. After the fusion of gametes, spherical zygotes (diameter 12 to 16 μm) with a solid, thick, deeply wrinkled wall on the surface are formed. Zygotes germinate en masse and evenly only after three to four weeks of maturation in the dark after being transferred to the light. Most often, 4, rarely 8 zoospores are formed from them, which can reproduce for any length of time, again vegetatively.

Fyziologické a biochemické charakteristiky druhu Chlamydomonas geitleri jsou dosud jen málo prostudovány, neboť druh byl popsán teprve v roce 1969. Již v tomto popisu se upozorňuje na možnost očekávat u něho zvýšené fotosyntetické produkce i v nižších úrovních ozáření vzhledem ke stavbě chloroplastu. Potvrdilo se to již v prvních studiích jeho produkční aktivity. Produkčně významná je schopnost Chlamydomonas geitleri . růst a produkovat biomasu za mnohem· nižších teplot, než je tomu u dosud převážně používaných chlorokokálních řas v produkčních velkokulturách (10 až 25 °C). Tento druh není vhodný pro kultury rostoucí v teplotách nad 30 °C. Vyšší teploty nejdříve brzdí a potom zcela blokují průběh buněčných cyklů.The physiological and biochemical characteristics of the species Chlamydomonas geitleri have not been studied much, as the species was described only in 1969. This description already points out the possibility of expecting increased photosynthetic production even at lower levels of irradiation due to the structure of the chloroplast. This was confirmed in the first studies of its production activity. The ability of Chlamydomonas geitleri to grow and produce biomass at much lower temperatures than is the case with the chlorococcal algae that have been mainly used in large-scale production cultures (10 to 25 °C) is important for production. This species is not suitable for cultures growing at temperatures above 30 °C. Higher temperatures first slow down and then completely block the course of cell cycles.

Běžným způsobem růstu a produkce biomasy je pro Chlamydomonas geitleri autotrofie. Schopnost růst v médiích s octanem sodným za mixotrofních nebo i čistě heterotrofních podmínek může být šlechtitelským cílem podle analogie s jinými druhy rodu Chlamydomonas. Regulace metabolismu změnami růstových podmínek nebylo u tohoto druhu dosud propracována.Autotrophy is the common mode of growth and biomass production for Chlamydomonas geitleri. The ability to grow in sodium acetate media under mixotrophic or even purely heterotrophic conditions may be a breeding goal by analogy with other species of the genus Chlamydomonas. The regulation of metabolism by changes in growth conditions has not yet been studied in this species.

Nové druhy v rámci druhu Chlamydomonas geitleri, vhodné pro různé způsoby svého praktického použití, je možno získávat výběry v rámci populací vykazujících přirozenou dědičnou variabilitu nebo po její indukci účinnými mutageny. Vzhledem k možnosti indukce gametogenese u tohoto druhu je možno využívat pro tvorbu nových forem také hybridisace. V široce variabilních populacích kmenů sbírkových nebo isolovaných z přírody je možno získávat nové typy hromadnými výběry dlouhodobým pasážováním kultur v selektivních médiích nebo za selektivních růstových podmínek. Jedinci se změnami větších rozměrů se isolují individuálními výběry a vedením isolátů v udržovací kultuře s opakovaným klonováním.New species within the species Chlamydomonas geitleri, suitable for various methods of its practical use, can be obtained by selections within populations showing natural hereditary variability or after its induction by effective mutagens. Given the possibility of induction of gametogenesis in this species, hybridization can also be used to create new forms. In widely variable populations of strains collected or isolated from nature, new types can be obtained by mass selections by long-term passage of cultures in selective media or under selective growth conditions. Individuals with larger changes are isolated by individual selections and maintenance of isolates in maintenance culture with repeated cloning.

Původ nového kmeneOrigin of the new tribe

Chlamydomonas geitleri kmen N-Ac 1 se získal několikaletou pasáži isolovaného potomstva jedné zygoty z prokřížení původní kultury po indukci gametogenese. Dlouhodobou pasáží tohoto potomstva za mixotrofniho růstu v médiu A 41 (Prát et al. 1971) s dvojnásobnou koncentrací živin a s 0,1 % octanem sodným se získala populace buněk, které již dobře rostou na tomto médiu. Původní kmen na něm záhy po naočkování buď zcela odumírá, nebo jenom živoří. Pasáží se zřejmě vyselektovaly klony schopné růstu na médiu s acetáty. Současně se zjistilo, že roste rovněž dobře na agarovém médiu s močovinou a čpavkovou formou dusíku. Původní kmen roste jen v tekutém médiu také s močovinovou formou dusíku, ale nikoliv na agarovém médiu s touto formou dusíku. Nový kmen má tedy širší použití co se týče typu použitelných médií a bylo možno ho také použít ve zkušebních kulturách dočišťujících odpadní vody za snížených teplot ve venkovních kulturách.Chlamydomonas geitleri strain N-Ac 1 was obtained by several years of passage of isolated progeny of one zygote from the crossing of the original culture after induction of gametogenesis. Long-term passage of this progeny under mixotrophic growth in medium A 41 (Prát et al. 1971) with double the concentration of nutrients and 0.1% sodium acetate resulted in a population of cells that already grow well on this medium. The original strain either dies completely or only survives on it soon after inoculation. The passage apparently selected clones capable of growing on acetate medium. At the same time, it was found that it also grows well on agar medium with urea and ammonia form of nitrogen. The original strain grows only in liquid medium also with urea form of nitrogen, but not on agar medium with this form of nitrogen. The new strain therefore has a wider application in terms of the type of usable media and it could also be used in test cultures purifying wastewater at reduced temperatures in outdoor cultures.

Morfologické, vývinové a fysiologické charakteristiky nového selektovaného kmene Chlamydomonas geitleri N-Ac 1 je možno shrnout takto:The morphological, developmental and physiological characteristics of the new selected strain Chlamydomonas geitleri N-Ac 1 can be summarized as follows:

Morfologické a cytologické znakyMorphological and cytological features

Morfologické a cytologické znaky nového kmene se dobře shodují s' popisem standardní kultury Chlamydomonas geitleri, (Ettl 1976), jak je uveden vpředu (obr. 1 a 2). Za nízkých teplot nebo naopak při teplotách nad 30 °C, kde je inhibován průběh buněčného cyklu, mohou buňky tohoto kmene dosáhnout větších rozměrů. V podmínkách intenzivního růstu převládají buňky dělicí se na vyšší počty zoospor (8 nebo 16).The morphological and cytological features of the new strain agree well with the description of the standard culture of Chlamydomonas geitleri, (Ettl 1976), as given above (Figs. 1 and 2). At low temperatures or, conversely, at temperatures above 30 °C, where the cell cycle is inhibited, the cells of this strain can reach larger sizes. Under conditions of intensive growth, cells dividing into higher numbers of zoospores (8 or 16) predominate.

Fysiologické znakyPhysiological signs

Fysiologické znaky jsou u původního nového kmene dosud jen málo prostudovány. Biotechnologicky významná je schopnost růst a produkovat biomasu za snížených teplot (rozmezí 5 až 28 °C). Schopnost růst v prostředí s dusíkem ve formě močoviny a čpavku, který se z ní uvolňuje, i v prostředí s očtanem (tab. 1), rozšiřuje možnosti jeho použití v experimentech a pro jiné praktické účely (např. k dočišťování odpadních vod - (tab. 2).Physiological features of the original new strain have been little studied so far. Biotechnologically significant is the ability to grow and produce biomass at reduced temperatures (range 5 to 28 °C). The ability to grow in an environment with nitrogen in the form of urea and ammonia released from it, as well as in an environment with acetate (Table 1), expands the possibilities of its use in experiments and for other practical purposes (e.g. for wastewater treatment - (Table 2).

Biochemické znakyBiochemical signs

Analýza biomasy, původního kmene v komerční analytické laboratoři ukázala obsah bílkovin v sušině nad 60 % (Tetík 1979) a také příznivé aminokyselinové složení (tab. 3). Lze předpokládat, že nový kmen se v tomto směru od původního kmene významně neliší.Analysis of the biomass of the original strain in a commercial analytical laboratory showed a protein content in dry matter of over 60% (Tetík 1979) and also a favorable amino acid composition (Table 3). It can be assumed that the new strain does not differ significantly from the original strain in this respect.

Kultivační charakteristikaCultivation characteristics

Chlamydomonas geitleri kmen N-Ac 1 je možno dobře využít zejména pro autotrofní, ale také pro mixotrofní kultivace v médiích s octanem sodným (0,1 až 0,2 %), a to v kultivačních zařízeních různých typů, mohou-li se přizpůsobit potřebnému režimu kultivace pro tento týp řas. Dobré produkční výkony je možno od nového kmene očekávat i za nižších teplot a nižších úrovní ozáření (Tetík a Nečas 1977). V mixotrofních kulturách s pomalým, ale stálým přísunem acetátu se dosáhne zlepšení fysiologické kondice buněk, a to i v indukčních podmínkách pro přechod z buněčných do životních cyklů (Nečas a Pavingerová 1980). Základní produkční charakteristiky kmenů isolovaných v rámci druhu Chlamydomonas geitleri jsou podrobněji popsány v důkladnějších studiích (Tetík, K. a Nečas J.: Arch. Hydrobiol. (Suppl. 51), Algological Studies 19: 164—183, 1977).Chlamydomonas geitleri strain N-Ac 1 can be used well, especially for autotrophic, but also for mixotrophic cultivations in media with sodium acetate (0.1 to 0.2%), in cultivation devices of various types, if they can adapt to the necessary cultivation regime for this type of algae. Good production performances can be expected from the new strain even at lower temperatures and lower levels of irradiation (Tetík and Nečas 1977). In mixotrophic cultures with a slow but constant supply of acetate, an improvement in the physiological condition of the cells is achieved, even in induction conditions for the transition from cellular to life cycles (Nečas and Pavingerová 1980). The basic production characteristics of strains isolated within the species Chlamydomonas geitleri are described in more detail in more thorough studies (Tetík, K. and Nečas J.: Arch. Hydrobiol. (Suppl. 51), Algological Studies 19: 164—183, 1977).

Z uvedených charakteristik je patrno, že nový kmen Chlamydomonas geitleri N-Ac 1 se shoduje s popisem standardní kultury Chlamydomonas geitleri ETTL téměř ve všech hlavních morfologických znacích, které jsou významné pro jeho rodovou i druhovou příslušnost.From the above characteristics it is evident that the new strain Chlamydomonas geitleri N-Ac 1 coincides with the description of the standard culture Chlamydomonas geitleri ETTL in almost all the main morphological characters that are significant for its genus and species affiliation.

Liší se však od něho v některých fysiologických a kultivačních charakteristikách. Selektovaný kmen je mnohem vyrovnanější v klonové skladbě, čehož se dosáhlo vnitřním prokřížením výchozího kmene po předchozí indukci gametogenese. Z vybraných potomstev jednotlivých isolovaných zygot se pomocí dlouhodobých pasáží isoloval nový kmen, který proti velmi vyhraněné autotrofii původního kmene je schopen i dlouhodobě růst na močovinovém agarovém médiu s acetátěm. To umožňuje použít nový kmen i v podmínkách pozvolného přísunu octanu a močoviny do čistě minerálního média a zvyšovat tak produkci biomasy při omezeně mixotrofních podmínkách kultivace. Nový kmen je také možno použít k dočišfování mírně znečištěných odpadních vod zmíněnými organickými látkami. Protože nový kmen je potomstvem zygoty, je v tomto kmeni zachována určitá potenciální dědičná variabilita, která umožní při dalším vnitřním prokřížení nebo pomocí indukce mutačního procesu z něho další nové typy pro jejich různé specifické použití.However, it differs from it in some physiological and cultivation characteristics. The selected strain is much more balanced in clonal composition, which was achieved by internal crossing of the initial strain after previous induction of gametogenesis. From the selected offspring of individual isolated zygotes, a new strain was isolated using long-term passages, which, in contrast to the very pronounced autotrophy of the original strain, is able to grow for a long time on urea agar medium with acetate. This allows the new strain to be used even in conditions of gradual supply of acetate and urea to a purely mineral medium and thus increase biomass production under limited mixotrophic cultivation conditions. The new strain can also be used for the final purification of slightly polluted wastewater with the aforementioned organic substances. Since the new strain is the offspring of a zygote, a certain potential hereditary variability is preserved in this strain, which will allow further internal crossing or by induction of the mutation process to create new types for their various specific uses.

Chlamydomonas geitleri ETTL kmen N-Ac 1Chlamydomonas geitleri ETTL strain N-Ac 1

Kmen získaný z výchozího kmene Chlamydomonas geitleri ETTL kmen ETTL 1966/3 dlouhodobou pasáží za podmínek mixotrofního růstu na agarových médiích s močovinou, amonnými solemi a oetanem sodným.The strain was obtained from the parent strain Chlamydomonas geitleri ETTL strain ETTL 1966/3 by long-term passage under mixotrophic growth conditions on agar media with urea, ammonium salts and sodium acetate.

Roste:Growing:

a) dobře za podmínek čisté autotrofie na minerálních médiích typu Bjórkman et. al. (1955) Solution Nr 2 při 1/4 koncentraci a především s nitrátovou (Šetlík 1968), ale také čistě močovinovou formou dusíku (Nečas 1971). Dlouhodobé sbírkové kultury se dobře udržují na agarovém médiu typu Prát et. al. (1971) - Solution Nr A 41 s dvojnásobnou koncentrací a s 10 ml půdního dekoktu na 1 1 média;a) well under conditions of pure autotrophy on mineral media of the type Bjórkman et. al. (1955) Solution Nr 2 at 1/4 concentration and mainly with nitrate (Šetlík 1968), but also purely urea form of nitrogen (Nečas 1971). Long-term collection cultures are well maintained on agar medium of the type Prát et. al. (1971) - Solution Nr A 41 with double concentration and with 10 ml of soil decoction per 1 l of medium;

b) velmi dobře za podmínek omezené mixotrofie při stálém mírném přísunu octanu sodného do čistě minerálního média (Šetlík 1968) v poloviční koncentraci při osvětlení kultury podle odpovídajícího vztahu teploty a ozáření.b) very well under conditions of limited mixotrophy with a constant moderate supply of sodium acetate to a purely mineral medium (Šetlík 1968) in half concentration while illuminating the culture according to the corresponding relationship between temperature and irradiation.

Dále jsou uvedeny tabulky, a to tabulka 1, kde je provedeno srovnání růstu původního a nového kmene řasy na různých médiích, tabulka 2, která sleduje růst nového kmene ve vakuových podmínkách, a tabulka 3, kde je uvedena analýza aminokyselin v čisté bílkovině této řasy.The following tables are provided: Table 1, which compares the growth of the original and new algal strains on different media, Table 2, which monitors the growth of the new strain under vacuum conditions, and Table 3, which presents the analysis of amino acids in the pure protein of this alga.

Tabulka 1 Růst původního a nového Jcmene Chlamydomonas geitleri ETTL na médiích různého složeníTable 1 Growth of the original and new Chlamydomonas geitleri ETTL on media of different composition

Typ Type Kmen Tribe Kmen Tribe média media ETTL 1966/3 ETTL 1966/3 N-Ac 1 N-Ac 1 1 1 — — + + + + 2 2 — — ++++ ++++ 3 3 + + + + ++ ++ 4 4 — — ++ ++

Typy kultivačního média:Types of culture medium:

1: živný roztok č. 2 podle Bjorknian et al. (1955) ve 1/4 koncentraci;1: nutrient solution No. 2 according to Bjorknian et al. (1955) at 1/4 concentration;

2: týž živný roztok jako č. 1 s 0,10 % octanu sodného;2: same nutrient solution as No. 1 with 0.10% sodium acetate;

3: živný roztok podle Šetlik (1968) v poloviční koncentraci a dusík ve formě KN0₃;3: nutrient solution according to Šetlik (1968) in half concentration and nitrogen in the form of KN0 ₃ ;

4: týž živný roztok jako č. 3 s 0,10 % octanu sodného.4: same nutrient solution as No. 3 with 0.10% sodium acetate.

Tabulka 2 Růst nového kmene Chlamydomonas geitleri ETTL kmen N-Ac 1 ve venkovních podmínkáchTable 2 Growth of the new strain Chlamydomonas geitleri ETTL strain N-Ac 1 in outdoor conditions

Doba kultivace (dnů) Cultivation time (days) Optická hustota (E7.0) Optical density (E7.0) Teplota (°C) Temperature (°C) pH pH 0 0 2,0 2.0 1 1 2,3 2.3 2 2 2,7 2.7 3 3 3,1 3.1 4 4 3,8 3.8 >0 >0 CC 00 CC 00 5 5 4,5 4.5 >ES) >EC) 6 6 5,1 5.1 I- I- CC CC 7 7 6,0 6.0 cO cO 8 8 7,3 7.3 9 9 9,4 9.4 10 10 10,6 10.6

Kultivace na odpadní vodě při zředovaeí rychlosti 0,1 den“¹:Cultivation on wastewater at a dilution rate of 0.1 day" ¹ :

Odstraněno 53 % dusíku a 77 % fosforu.53% nitrogen and 77% phosphorus removed.

Tabulka 3 Obsah aminokyselin v čisté bílkovině řasy Chlamydomonas geitleri ETTLTable 3 Amino acid content in pure protein of Chlamydomonas geitleri ETTL algae

Amino- kyselina Amino- acid Obsah v čisté bílkovině (%) Pure protein content (%) Amino- kyselina Amino- acid Obsah v čisté bílkovině (%) Pure protein content (%) lysin lysine 6,79 6.79 glycin glycine 6,12 6.12 histidin histidine 2,19 2.19 alanin alanine 8,02 8.02 arginin arginine 10,04 10.04 valin valine 6,22 6.22 cystin kys. aspara- cystine aspartic acid 0,67 0.67 methionin methionine 2,65 2.65 gová gova 6,38 6.38 isoleucin isoleucine 4,56 4.56 threonin threonine 5,39 5.39 leucin leucine 9,11 9.11 šeřin kys. gluta- serine acid gluta- 4,87 4.87 tyrosin tyrosine 3,99 3.99 mová prolin proline 12,44 4,77 12.44 4.77 fenylalanin phenylalanine 5,79 5.79

Dále jsou uvedeny obr. 1 a 2. Obr. 1 znázorňuje vegetativní buňky Chlamydomonas geitleri ETTL kmen N-Ac 1, obr. 2 představuje kulturu Chlamydomonas geitleri ETTL kmen N-Ac 1.Fig. 1 and 2 are presented below. Fig. 1 shows vegetative cells of Chlamydomonas geitleri ETTL strain N-Ac 1, Fig. 2 shows a culture of Chlamydomonas geitleri ETTL strain N-Ac 1.

Claims

New production-industrial strain Chlamydomonas geitleri ETTL biomass-producing N-Ac 1 strain, capable of good growth under purely autotrophic cultivation conditions, suitable for treatment of slightly polluted waste water

The sample is stored in the Collection of Cultures of Autotrophic Microorganisms at the Institute of Botany of the Czech Academy of Sciences in Trebon under the number A 777.