CS211786B1 - Spdsob přípravy (U-14C) fruktózo-1,6-difosfátu - Google Patents
Spdsob přípravy (U-14C) fruktózo-1,6-difosfátu Download PDFInfo
- Publication number
- CS211786B1 CS211786B1 CS268780A CS268780A CS211786B1 CS 211786 B1 CS211786 B1 CS 211786B1 CS 268780 A CS268780 A CS 268780A CS 268780 A CS268780 A CS 268780A CS 211786 B1 CS211786 B1 CS 211786B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- phosphate
- diphosphate
- glucose
- fructose
- preparation
- Prior art date
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
211786 (II) (Bl) ČESKOSLOVENSKASOCIALISTICKÁREPUBLIKA( 1» )
POPIS VYNÁLEZU
K AUTORSKÉMU OSVEDČENIU
/22/ Přihlášené 17 04 80UM /PV 26-87-80/ (51) Int Cl? C 07 Η I1/04 (40) Zverejnené 31 07 81
ÚŘAD PRO VYNÁLEZY
A OBJEVY (45) Vydané ,5 05 83 (75)
Autor vynálezu ZEMEK JURAJ ing. CSc., KUCÁR STEFAN RNDr. CSc., BRATISLAVA, KOLÍNA
JOZEF ing. CSc., PRAHA (54) Sposob přípravy (U-14C) fruktózo-1,6-difosfátu 1
Vynález riesi sposob přípravy /U-^C/ f r u k C ó zo - 1 , 6-d i f o s f á tu následným účinkom enzýmovfosfoglukomutázy /alfa-D-glukozo-t,6-difosfát: alfa-D-glukozo-1-fosfát fosfotransferáza, EC2.7.5.1/ a glukózofosfát izomerázy /ú-glukózo-6-tosrát ketol - izoraeráza, EC 5.3.1.9/ a fosfo-fruktokinázy /ATP: D-fruktózo-6-fosfát 1-fosfotransferáza,EC 2.7.1.11/ na alfa-D-glukopyrano-zylfosíát /U-4Gt o vysokej mólovej aktivitě, připravený účinkom enzymu fosforylázy na vodo-rozpustný polysacharid typu alfa/Ί —* 4 /6/.7 glukánu /podlá A.0. č. 194 587/’ izolovaný z ráaio-aktívneho biologického materiálu, s výhodou zo zelených a modrozelených rias, v procese kom-plexného spracovania rádioaktívnej biomasy /Ss. pat. 121 808/, pričom produkt enzýmovej re-akcie sa separuje z reakcnej zmesi chromatograficky, o výfažku až 44 X pre fruktózo-1,6-difos-fát až 23 X pre fruktózo-6-fosfat a až 23 pre glukózo-6-fosfát. Z biochemických metod přípravy glukozo-6-fosfátu /U-^C/ je uvádzaný postup využívajúciD-glukózu /U-^c/ a enzým nexokinázu /EC 2.7.1.1/, pricom reakcia prebieha za přítomností ATP .Aj ked výťažok v tejto reakcii je vysoký, nevýhodou je, že sa spracováva D-glukóza a nie vý-chodzí zdroj D-glukózy, vodorozpustný alfa/Ί —? 4/6/7 glukán /U-^C/. Táto nevýhoda je riešená postupom podlá vynálezu, kedy východzou látkou přípravy je pria-mo vodorozpustný polysacharid, připravený v rámci komplexného spracovania rádioaktívnej bioraa-sy /Cc. pat. č. 121 808/.
Podstata vynálezu spočívá v tom, že na vetvený polysacharid typu ¢6/1 —* 4/glukánu s větve-ním alfa/1 —> 6/ vazbami, izolovaný z rádioaktívneho biologického materiálu, s výhodou sozelených, resp. modrozelených rias, v procese komplexného spracovania rádioaktívnej biomasysa posobí enzýraom fosforylázou /alfa-1,4-glukán ortofosfát glukozyltransferáza, EC 2.4.1.1./v přítomnosti pufrovaného roztoku fosfátu o pH 6 až 7 /A.0. Č. 194 587/, pričom na získaný21 1786 211786 al f a-D-g lukopyr anozy 1 f o sf á t /U-^C/ sa posobí pufrovaným roztokou f osfoglukomutázy v přítom-nosti cysteinu, síranu horečnatého a glukózo-1,6-difosfátu /pH 7,5 až 8,0/ a na získaný glukó-zo-6-fosfát /U-1 *C/ sa posobí pufrovaným roztokom glukózo-6-fos£át izomerázy prí pH 9,0 a navytváraný f r u k t o z o-6-f o s f á t pufrovaným roztokom fosfofruktokinázy /pH 8,0 až 8,5/, v přítom-nosti adenozintrifosfátu, cysteinu a horečnatých solí a vzniklý produkt sa oddělí chroraatogra-fiou na papieri. Uvedeným postuponi možno získat fruktózo-1,6-difosfát o výtažku až 44 2. Výhodou navrhovaného sposobu přípravy /U-^C/ značených fosforylovaných derivátov D-glu-kózy a D-fruktózy je,že: celý postup přípravy je velmi jednoduchý v technickom převedení a umožňuje ukončeniereakčného procesu na úrovni jednotlivých med ziproduktov glykolytickej dráhy až po fruktozo--1,6-difosfát 1 4 poskytuje dalšiu možnost využitia vodorozpustného glukánu /U- C/, izolovaného z rádio- aktívneho biologického materiálu všetky enzýmy potřebné k prevedeniu naznačených postupov sú komerčně dostupné, připadnepripravite1né v 1aboratórnych podmienkach. Příklad 1 K 0,1 ml· 1 % roztoku vodorozpustného po 1 y s ac ha r i du /U-^C/ zo zelených rias o celkovejaktivitě 17 kBq sa přidal 1 ml 0,2 M fosfátového pufru o pH 6,0 a 1 ml fosforylázy zo zemia-kov /A.O. č. 194 588/ a reakčná zmes sa inkubovala pri 35 °C po dobu 4 hodin.
Po přeběhnutí reakc.ie sa nastavilo pH reakenej 2mesi na hodnotu 7,5 pomocou 0,5 M fosfát,pufru /pH 8,0/ a přidal sa cystein na výsledné konc. 50 mM, síran horečnatý na 6 mM konc. aglukóz.o-1 , 6-d if o sf át na 0,1 mM konc. a 10 1 f o s f og lu komu t áz y /z kvasiniek, 0,34 U / a re- akčná zme's sa inkubovala ďalšie 2 hodiny pri 35 °C.
Po ukončení reakcie s fosfog1ukomutázou pH hodnota reakenej zmesi sa nastaví na 9,0pomocou 0,5 M g1ycin-hydroxid sodný tlmivého roztoku /pH 10/ a přidá sa kvasničná glukózo--6-fosfát izomeráza /10 /u1, 0,23 U/ a inkubácia prebieha po dalšiu hodinu pri 35 °C. Reakčnázmes po přeběhnutí reakcie s glukozo-6-fosfát izomerázou sa upraví pomocou Tris-HCl pufru napH 8,0, přidá sa adenoz intrifosfát /Na sol, 0,02 M/ a fosfofruktokináza /zo svalu zajaca/ /20 /ul, 4,2 U/ a reakcia sa nechá bežat 3 hodiny pri 35 °C.
Po chromatografíckej separácií fosforylovaných metabolitov , papierovou chroraatografíouna papieri Whatman 1 v systéme kyselina izomaslová-čpavok-voda /66:1:3/ po dobu 100 hodinsa zóna odpovedajúea fruktozo-1,6-difosfátu vystřihla a eluovala 50£ vodným roztokom etano-lu. Výtažok f r u k t o z o - 1 , 6-d if o s f á t u /U-^C/ bol 3,24 kBq /44 52 /.
Fosforylované metabolitý D-fruktózy sú dóležíté biocheraíkálei, ktoré v značenom stave ako14- /U- C/ radiochemiká1 ie možno použit k štúdiu enzýmových procesov prebiehajúcich in vitro,ako aj k histochemickým štúdiam a sledovaniu p.riebehu glykolýzy v buňkách. Možno ich považo-vat aj za důležité východzíe látky k chemickým syntézám v oblsati chemie cukrov.
Claims (1)
- 21t786 Tabulka I Hodnoty chromatografických pohyblivosti níektorých fosfátov D-glukózy a D-fruktozy, vzta-hované na glukozo-6-fosfát v systéme kyselina izomaslová-čpavok-voda /66:1:33/. Glukózo-6-fosfát 1 ,0 Eruktózo-6-fosfát 1 ,3 1 Fruktózo-1,6-difosfát 0,51 alfa-D-glukopyránozylfosfát 1,11 P R E D Μ E T V Y N Λ L. E Z U Spósob přípravy /U-1ZíC/ £ruktózo-1,6-difosfátu z rádioaktívneho biologického materiálu, s výhodou větveného vodorozpustného alfa/Ί —* 4/6/7 glukánu zo zelených alebo modrozelených1 4 rias, vyznačujúci sa tým, že sa na roztok alf a-D-glukopyr ano zylf o-sf á tu /U- C / posobí pufro-vaným roztokom fosfog1ukomutázy pri pH 7,5 až 8 v přítomnosti císteínu, g lukozo-1 , 6-difosfá-tu a horečnatých solí a na získaný /U"1ZtC/ g lu kó zo - 6-f o s f á t sa posobí pilířovaným roztokom glukózo-6~fosfát izomerázv pri pil 9 a na vytvořený fr u k tó zo - 6-£ o s £ á t /IJ- C/ pufrovaným roztokomfosfofruktokinázy pri pH 8 až 8,5 v přítomnosti adenozíntrifosfátu , císteínu a horečnatýchsolí a vzniknutý produkt sa izoluje chromatografíčky na papieri. •Severografis. n. p.. závod 7, Mok
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS268780A CS211786B1 (cs) | 1980-04-17 | 1980-04-17 | Spdsob přípravy (U-14C) fruktózo-1,6-difosfátu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS268780A CS211786B1 (cs) | 1980-04-17 | 1980-04-17 | Spdsob přípravy (U-14C) fruktózo-1,6-difosfátu |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS211786B1 true CS211786B1 (cs) | 1982-02-26 |
Family
ID=5364687
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS268780A CS211786B1 (cs) | 1980-04-17 | 1980-04-17 | Spdsob přípravy (U-14C) fruktózo-1,6-difosfátu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS211786B1 (cs) |
-
1980
- 1980-04-17 CS CS268780A patent/CS211786B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Gokhale et al. | Chemical synthesis of GDP-fucose analogs and their utilization by the Lewis* A (1→ 4) fucosyltransferase | |
| BENNETT et al. | Metabolic studies with carbocyclic analogs of purine nucleosides | |
| Kamel et al. | Chemo-enzymatic synthesis of α-D-pentofuranose-1-phosphates using thermostable pyrimidine nucleoside phosphorylases | |
| Vidal et al. | Non-isosteric C-glycosyl analogues of natural nucleotide diphosphate sugars as glycosyltransferase inhibitors | |
| Zou et al. | One-pot three-enzyme synthesis of UDP-Glc, UDP-Gal, and their derivatives | |
| Schmidt et al. | Metabolism of 2‐Deoxy‐2‐fluoro‐d‐[3H] glucose and 2‐Deoxy‐2‐fluoro‐d‐[3H] mannose in Yeast and Chick‐Embryo Cells | |
| Friedkin | Enzymatic Synthesis of Desoxyxanthosine by the Action of Xanthosine Phosphorylase in Mammalian Tissue1, 2 | |
| Xin et al. | Characterization of the in vitro synthesized arabinan of mycobacterial cell walls | |
| Neufeld et al. | Enzymic phosphorylation of D-glucuronic acid by extracts from seedlings of Phaseolus aureus | |
| Naundorf et al. | Substrate specificity of native dTDP-D-glucose-4, 6-dehydratase: chemo-enzymatic syntheses of artificial and naturally occurring deoxy sugars | |
| Pontis et al. | Measurement of UDP‐Enzyme Systems | |
| Düffels et al. | Chemoenzymatic synthesis of L-galactosylated dimeric sialyl Lewis X structures employing α-1, 3-fucosyltransferase V | |
| Elbein | Carbohydrate Metabolism in Streptomyces hygroscopicus: I. ENZYMATIC SYNTHESIS OF TREHALOSE PHOSPHATE FROM GUANOSINE DIPHOSPHATE d· GLUCOSE-14C | |
| CS211786B1 (cs) | Spdsob přípravy (U-14C) fruktózo-1,6-difosfátu | |
| Ryu et al. | Catalytic reversibility of Pyrococcus horikoshii trehalose synthase: Efficient synthesis of several nucleoside diphosphate glucoses with enzyme recycling | |
| US6569649B2 (en) | Compositions and methods for saccharide synthesis | |
| EP0704536B1 (de) | Verfahren zur Isolierung und Reinigung von nukleotidaktivierten Zuckern aus biologischen Quellen | |
| US5750389A (en) | Purified saccharose-synthase, process for its production and its use | |
| Leloir | Sugar phosphates | |
| Pallanca et al. | Chemo-enzymic synthesis of guanosine 5′-diphosphomannose (GDP-mannose) and selected analogues | |
| PT827549E (pt) | Processo para a galactosilacao enzimatica de monossacaridos e de oligossacaridos | |
| US5866378A (en) | Process for the synthesis of nucleotide-6-deoxy-D-xylo-4-hexuloses | |
| CS211784B1 (en) | Method of preparation of the /u-14c/fructose-6-phosphate | |
| RU2230118C2 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 1-β-D-РИБОФУРАНОЗИЛ-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-КАРБОКСИАМИДА (РИБАВИРИНА) | |
| CS211785B1 (en) | Method of preparation of the /u-14c/glucose -6-phosphate |