CS211784B1 - Spósob přípravy (U-* * 14C) fruktózo-6-fosfátu - Google Patents
Spósob přípravy (U-* * 14C) fruktózo-6-fosfátu Download PDFInfo
- Publication number
- CS211784B1 CS211784B1 CS268580A CS268580A CS211784B1 CS 211784 B1 CS211784 B1 CS 211784B1 CS 268580 A CS268580 A CS 268580A CS 268580 A CS268580 A CS 268580A CS 211784 B1 CS211784 B1 CS 211784B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- phosphate
- glucose
- alpha
- fructose
- preparation
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 8
- GSXOAOHZAIYLCY-UHFFFAOYSA-N D-F6P Natural products OCC(=O)C(O)C(O)C(O)COP(O)(O)=O GSXOAOHZAIYLCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 4
- BGWGXPAPYGQALX-ARQDHWQXSA-N beta-D-fructofuranose 6-phosphate Chemical compound OC[C@@]1(O)O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@@H]1O BGWGXPAPYGQALX-ARQDHWQXSA-N 0.000 title description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 11
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 5
- 102000005731 Glucose-6-phosphate isomerase Human genes 0.000 claims description 5
- 108010070600 Glucose-6-phosphate isomerase Proteins 0.000 claims description 5
- 102000009569 Phosphoglucomutase Human genes 0.000 claims description 4
- 239000012620 biological material Substances 0.000 claims description 4
- 108091000115 phosphomannomutase Proteins 0.000 claims description 4
- 241000195628 Chlorophyta Species 0.000 claims description 3
- 241000192700 Cyanobacteria Species 0.000 claims description 3
- RWHOZGRAXYWRNX-VFUOTHLCSA-N alpha-D-glucose 1,6-bisphosphate Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H]1O RWHOZGRAXYWRNX-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 claims 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 6
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- NBSCHQHZLSJFNQ-GASJEMHNSA-N D-Glucose 6-phosphate Chemical compound OC1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O NBSCHQHZLSJFNQ-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- VFRROHXSMXFLSN-UHFFFAOYSA-N Glc6P Natural products OP(=O)(O)OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O VFRROHXSMXFLSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010073135 Phosphorylases Proteins 0.000 description 3
- 102000009097 Phosphorylases Human genes 0.000 description 3
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- 150000000757 D-fructose derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 2
- 102000005548 Hexokinase Human genes 0.000 description 2
- 108700040460 Hexokinases Proteins 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- RNBGYGVWRKECFJ-ZXXMMSQZSA-N alpha-D-fructofuranose 1,6-bisphosphate Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@](O)(COP(O)(O)=O)O[C@@H]1COP(O)(O)=O RNBGYGVWRKECFJ-ZXXMMSQZSA-N 0.000 description 2
- 229940025237 fructose 1,6-diphosphate Drugs 0.000 description 2
- 230000034659 glycolysis Effects 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000004816 paper chromatography Methods 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- IGBWEXLCOAPIOB-BAOOBMCLSA-N (3s,4r,5r)-1,3,4,5,6-pentahydroxyhexan-2-one;phosphoric acid Chemical class OP(O)(O)=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(=O)CO IGBWEXLCOAPIOB-BAOOBMCLSA-N 0.000 description 1
- -1 Alpha-D-glucopyranosyl Chemical group 0.000 description 1
- 150000000780 D-glucose derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004195 Isomerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000769 Isomerases Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N aldehydo-D-glucose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 description 1
- HXXFSFRBOHSIMQ-VFUOTHLCSA-N alpha-D-glucose 1-phosphate Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O HXXFSFRBOHSIMQ-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- UMFQPQLYSOSXSB-UHFFFAOYSA-N azanium;2-methylpropanoic acid;hydroxide Chemical compound [NH4+].O.CC(C)C([O-])=O UMFQPQLYSOSXSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000001177 diphosphate Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 229950010772 glucose-1-phosphate Drugs 0.000 description 1
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- CIJQGPVMMRXSQW-UHFFFAOYSA-M sodium;2-aminoacetic acid;hydroxide Chemical compound O.[Na+].NCC([O-])=O CIJQGPVMMRXSQW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
(54) Spósob přípravy (U-* * 14C) fruktózo-6-fosfátu
Vynález nesi sposob přípravy /U- C/ fruktozo-6-fosfátu následným účínkom enzýmov fosfoglukomutázy /alfa-D-glukozo-1,6-difosfát: alfa-D-glukozo-1-fosfát fosfotransferáza, EG 2.7.5.1/ a glukozofosfát izomerázy /D-glukózo-6-fosfát ketol-izomeráza, EC 5.3.1.9/ na alfa-D-glukopyr anozy lf o sf át /U-^C/ o vysokej mólovej aktivitě, připravený účínkom enzýmu fosforylázy na vodorozpustný polysacharid typu alfa/Ί 4/6 /} g lukánu pod la /A.O. č. 194 587 / izolovaný z rádioaktívneho biologického materiálu, s výhodou zo zelených a modrozelených rias, v procese komplexného spracovania rádioaktívnej biomasy /Čs. pat. 121 808/, pričom produkt enzýmovej reakcie sa separuje z reakčnej zmesi chromatograficky, o výtažku až 44 % pre fruktózo-1,6-difoefát áž 23 Z pre fruktózo-6-fosfát a až 23 % pre glukózo-6-fosfát.
£ biochemických metod přípravy glukózo-^-fosfátu /U-1Z*C/ je uvádzaný postup využívajúci D-glukózu /U-^C/ a enzym hexokinázu /EC 2.7.1.1/, pričom reakcia prebieha za přítomnosti ATP. Aj keď výfažok v tejto reakcii je vysoký, nevýhodou je, že sa spracováva D-glukoza a nie východzí zdroj D-glukozy, vodorozpustný alfa/Ί —> 4/6/Jglukán /U-^C/.
Táto nevýhoda je riešená postupom podle vynálezu, kedy východzou látkou přípravy je priamo vodorozpustný polysacharid, připravený v rámci komplexného spracovania rádioaktívnej bioraasy /Čs. pat. č. 121 808/.
Podstata vynálezu spočívá v tom, že na vetvený polysacharid typu alfa/1 —> 4/ glukánu s větvením alfa/1 —> ^/ vazbami, izolovaný z rádioaktívneho biologického materiálu, s výhodou so zelených, resp. modrozelených rias, v procese komplexného spracovania rádioaktívnej biomasy sa pósobí enzýmom fosforylázou /alfa-1,4-glukán ortofosfát glukózy1 transferáza, EC 2.4.1.1./ v přítomnosti pufrovaného roztoku fosfátu o pH 6 až 7 /A.O. č. 194 587/, pričom na získaný alfa-D-glukopyranozylfosfát /U- qC/ sa posobí pufrovaným roztokom fosfoglukomutázy v přítomni í 7 8 4
1784 nosti cysteinu, síranu horečnatého a glukozo-1,6-difosfátu /pH 7,5 až 8,0/ a na získaný glu14 kozo-6-fosfát /U- C/ sa posobí puťrovaným roztokom glukozo-6-fosfát izomerázy pri pH 9,0 a vytváraný fruktozo-6-fosfát sa oddělí chromatografiou na papieri. Vzhtadom na alf a-D-glukopyr a nozy 1 f o sf á t /U-*ZtC/ je výčažok f r ukt o zo-6-f o s f á tu až 76 X.
Výhodou navrhovaného sposobu přípravy /U- C/ značených fosforylovaných derivátov D-glukozy a D-fruktózy je, že:
celý postup přípravy je velmi jednoduchý v technickom převedení a umožňuje ukončenie reakčného procesu na úrovní jednotlivých medziproduktov glykolytickej dráhy, poskytuje ďalsiu možnost využitia vodorozpustného gluk.ánu /U aktívneho biologického materiálu,
C/, izolovaného z rádíovšetky enzýray potřebné k prevedeniu naznačených postupov sú komerčně dostupné, pr padne pripraviteIné v laboratórnych podmienkach.
Příklad
K 0, akt ív i te kov / A. 0 .
ml 1 Z roztoku vodorozpustného polysaeharidu /U-^C/ 17 kBq sa přidal t ml 0,2 M fosfátového pufru o pH 6,0 c. 194 588/ a reakčná zmes sa inkubovala pri 35 °C po zo zelených rías o a 1 ml fosforylázy dobu 5 hodin.
celkovej z o z em i a Po přeběhnuti reakcie sa nastavilo pH reakčnej zmesi na hodnotu 7,5 pomocou 0,5 M fosfát pufru /pH 8,0/ a přidal sa cystein na výsledná konc. 50 mM , síran horečnatý na 6 mM konc.' a glukozo- 1 , 6-difosfát na 0,1 mM konc. a 10 1 fosfoglukomutázy /z kvasiniek, 0,34 U/ a reakčná zmes sa inkubovala dalšie 2 hodiny prí 35 °C.
Po ukončení reakcie s fosfoglukomutážou pH hodnota reakčnej zmesi sa nastaví na 9,0 pomocou 0,5 M glycin - hydroxid sodný tlmivého roztoku /pH 10/ a přidá sa kvasničná glukozo-6o
-fosfát izomeráza /10 ^1, 0,23/ a inkubácia prebieha po ďalsiu hodinu pri 35 C.
Po spracovaní reakčnej zmesi sa separácia fosforylovaných derivátov prevedie v systéme kyselina ízomaslová-čpavok-vo.da /66:1:32/ papierovou chromatografiou po dobu 100 hodin. Fruktózo-6-fosfát sa získal o výtažku /U-^C/ 5,9 kBq /76 7f.
Fosforylované metabolity D-fruktózy sú dóležité biochemikálie, ktoré v značenom stave ako /U-l^c/ rádiochemikálie možno použit k studiu enzýmových procesov prebiehajúcich in vitro ako aj hí stochemickým štúdiam a sledovsniu priebehu glykolýzy v buňkách. Možno ich považovat aj za dóležité východzie látky k chemickým syntézám v oblasti chemie cukrov.
Tabulka I
Hodnoty chromátografických pohyblivostí niektorých fosfátov D-glukózy a D-fruktózy, vzta hované na glukózo-6-fosfát v systéme kyselina izornáslová-Čpavok-voda /66:1:33/.
Glukózo-6-fosfát 1,0
F ru k tÓzo-6-f o s f á t 1,31
Fruktózo-1,6-difosfát 0,51
Alfa-D-glukopyranozylfosfát- 1 , T 1
Claims (1)
- PREDMET VYNÁLEZU14Spósob přípravy /U- C/ f r u k Co 20-6-f o sf á tu z rádioaktívneho biologického materiálu, s výhodou větveného vodoro zpustného alfa/Ί —> 4/6/Zglukánu zo zelených alebo modrozelených rias, význačujúci sa tým, že na roztok získaného a1fa-D-glukopyranozylfosfátu /U-14C/ sa posobí pufrovaným roztokom fosfoglukomutázy pri pH 7,5 až 8,0 v přítomnosti cysteinu, glukózo-1,6-difosfátu ,a horečnatých solí a na získaný /u-^C/ g lu kó z o-6-f o s f á t sa pósobí pufrovaným roztokom glukózo-6-fosfát izomerázy pri pH 9,0 a vzniknutý produkt sa izoluje chromatografiou na pap i er i .
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS268580A CS211784B1 (sk) | 1980-04-17 | 1980-04-17 | Spósob přípravy (U-* * 14C) fruktózo-6-fosfátu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS268580A CS211784B1 (sk) | 1980-04-17 | 1980-04-17 | Spósob přípravy (U-* * 14C) fruktózo-6-fosfátu |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS211784B1 true CS211784B1 (sk) | 1982-02-26 |
Family
ID=5364659
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS268580A CS211784B1 (sk) | 1980-04-17 | 1980-04-17 | Spósob přípravy (U-* * 14C) fruktózo-6-fosfátu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS211784B1 (sk) |
-
1980
- 1980-04-17 CS CS268580A patent/CS211784B1/sk unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Gokhale et al. | Chemical synthesis of GDP-fucose analogs and their utilization by the Lewis* A (1→ 4) fucosyltransferase | |
| Slein | Xylose Isomerase from Pasteurella pestis, Strain A-11221 | |
| Moore et al. | Biosynthesis of extracellular polysaccharides by the blue-green alga Anabaena flos-aquae | |
| Heath et al. | The enzymatic synthesis of guanosine diphosphate colitose by a mutant strain of Escherichia coli | |
| Thiem et al. | Chemoenzymatic syntheses of sialyloligosaccharides with immobilized sialidase | |
| BEAU et al. | Chemical behaviour of cytidine 5′‐monophospho‐N‐acetyl‐β‐d‐neuraminic acid under neutral and alkaline conditions | |
| Schmidt et al. | Metabolism of 2‐Deoxy‐2‐fluoro‐d‐[3H] glucose and 2‐Deoxy‐2‐fluoro‐d‐[3H] mannose in Yeast and Chick‐Embryo Cells | |
| Percy et al. | Acceptor specificity of cellobiose phosphorylase from Cellvibrio gilvus: synthesis of three branched trisaccharides | |
| Fry et al. | Sugar-nucleotide precursors of arabinopyranosyl, arabinofuranosyl, and xylopyranosyl residues in spinach polysaccharides | |
| Wilson et al. | Metabolism of L-rhamnose by Escherichia coli: II. The phosphorylation of L-rhamnulose | |
| Biely et al. | Lysis of Saccharomyces cerevisiae with 2-deoxy-2-fluoro-D-glucose, an inhibitor of the cell wall glucan synthesis | |
| Pontis et al. | Measurement of UDP‐Enzyme Systems | |
| Ryu et al. | Catalytic reversibility of Pyrococcus horikoshii trehalose synthase: Efficient synthesis of several nucleoside diphosphate glucoses with enzyme recycling | |
| CS211784B1 (sk) | Spósob přípravy (U-* * 14C) fruktózo-6-fosfátu | |
| Hanna et al. | Synthesis of α-d-Glucose 1, 6-Diphosphate, α-d-Mannose 1, 6-Diphosphate, α-d-Ribose 1, 5-Diphosphate, and N-Acetyl-α-d-glucosamine 1, 6-Diphosphate | |
| EP0704536B1 (de) | Verfahren zur Isolierung und Reinigung von nukleotidaktivierten Zuckern aus biologischen Quellen | |
| JP2780062B2 (ja) | 精製されたショ糖‐合成酵素，その製造方法及びその使用方法 | |
| Duff et al. | Identification of 6-O-acetyl-d-glucopyranose in Bacillus megaterium cultures. Synthesis of 6-O-acetyl-d-glucopyranose and 6-O-acetyl-d-galactopyranose | |
| Iriki et al. | The scope of interanomeric glycosyl transfer reactions: Hetero-dialdoside synthesis by enzymic glucosylation of d-galactose and d-mannose | |
| US5866378A (en) | Process for the synthesis of nucleotide-6-deoxy-D-xylo-4-hexuloses | |
| EP0259598A2 (de) | Verfahren zur enzymatischen Synthese eines N-Acetyl-neuraminsäure-haltigen Trisaccharids | |
| CS211786B1 (cs) | Spdsob přípravy (U-14C) fruktózo-1,6-difosfátu | |
| CS211785B1 (sk) | Spósob přípravy (U-* 14C) glukózo-6-fosfátu | |
| SHIBASAKI | STUDIES ON THE TRANSGLUCOSIDATION OF SCHIZOSACCHAROMYCES POMBE (Part 3) SYNTHESIS OF OLIGOSACCHARIDES FROM GLUCOSE | |
| Alton et al. | Use of N-acetylglucosamiyltransferases I and II in the synthesis of a dideoxypentasaccharide |