CS209698B1

CS209698B1 - Method of preparation of sample for fixing the carbon monoxide in biological liquid

Info

Publication number: CS209698B1
Application number: CS687579A
Authority: CS
Inventors: Hanniel Dubsky; Helena Samkova; Marie Kosikova; Karel Hana
Original assignee: Hanniel Dubsky; Helena Samkova; Marie Kosikova; Karel Hana
Priority date: 1979-10-10
Filing date: 1979-10-10
Publication date: 1981-12-31

Description

Vynález se týká způsobu přípravy vzorku ke stanovení kysličníku uhelnatého v biologické kapalině,například v krvi.The invention relates to a method of preparing a sample for the determination of carbon monoxide in a biological liquid, for example blood.

V toxikologických 1aboratořich,například v lékařství se stanoví' kysličník Uhelnatý po přechozím uvolnění kyrboxyhemoglob inu ferrikyanidem draselným v alkalickém prostředí. Uvolněný kysličník uhelnatý se shromažďuje v určeném objemu .vzduchu. Celkový objem směsi plynu se pak dávkuje do plynového chromatografu vybaveného tepelně vodivostními clonami, kolonou plněnou molekulárním sítem 5A, přičemž nosný plyn tvoří vodík.In toxicological laboratories, for example in medicine, carbon monoxide is determined after the release of cyrboxyhemoglobin by potassium fericyanide in an alkaline medium. The released carbon monoxide is collected in a specified volume of air. The total volume of the gas mixture is then fed into a gas chromatograph equipped with thermal conducting orifices, a column packed with molecular sieve 5A, the carrier gas constituting hydrogen.

Dosavadní zařízení k tomuto účelu sestává ze dvou injekčních stříkaček vertikálně umístěných, tak, aby ústím směřovaly k sobe.The prior art device for this purpose consists of two syringes vertically positioned so that the mouths face each other.

Do první injekční stříkačky se nasaje 2 ml vodou zředěné krve v poměru 1 : 3, poté se nasaje 1 ml vzduchu. Do druhé injekční stříkačky se nasaje 3 ml reakčního činidla obsahujícího ferrikyanid draselný v alkalickém roztoku. Nyní se výstup obou inejkčních stříkaček propojí gumovou hadičkou.2 ml of 1: 3 diluted water is drawn into the first syringe, then 1 ml of air is drawn in. 3 ml of a reagent containing potassium ferricyanide in an alkaline solution is drawn into a second syringe. Now the outlet of both syringes is connected with a rubber tube.

Po spojení obou injekčních stříkaček se obsah první injekční stříkačky převede do druhé spodní injekční stříkačky, načež se obě upevní ve třepačce, v níž se obsahy obou intenzívně promíchávají cca 20 minut. Poté se do první injekční stříkačky přetlačí plynná fáze z prostoru nad reakční směsí a ta se dávkuje do plynového chromatograf u k vyhodnocení.After the two syringes have been connected, the contents of the first syringe are transferred to the second lower syringe and then fixed in a shaker, where the contents of both syringes are vigorously mixed for about 20 minutes. The gas phase is then forced into the first syringe from the space above the reaction mixture and fed to the gas chromatograph for evaluation.

Aby se mohl vyjádřit v procentech objem kysličníku uhelnatého v krvi, bere se 2 ml téže krve zředěné 1 ; 3 jako v předchozím případě, ale před analýzou se tato zředěná krev sytí dvacet minut kysličníkem uhelnatým a vzorek se analyzuje stejným způsobem jak v předchozím případě, Obsah kysličníku uhelnatého v tomto případe se považuje za 100/*.In order to express the volume of carbon monoxide in the blood as a percentage, 2 ml of the same blood is taken diluted 1; 3 as before, but prior to analysis, this diluted blood is saturated with carbon monoxide for twenty minutes and the sample is analyzed in the same manner as in the previous case. The carbon monoxide content in this case is considered to be 100%.

Nevýhodou dosavadního uspořádání je, ze celý objem plynné fáze se musí vnést do chromatografu jednorázově. V tomto uspořádání nelze odebrat s dostatečnou přesností ekvivalentní podíl plynné fáze vzhledem k přítomnosti pěny v krvi, i když se z větší části odstraní oktanolem přesto sé do kolony chromatografu vnáší částečně reakční směs, která znehodnocuje náplň kolony.A disadvantage of the prior art is that the entire volume of the gas phase must be introduced into the chromatograph once. In this arrangement, the equivalent fraction of the gas phase due to the presence of blood foam cannot be withdrawn with sufficient accuracy, even though it is largely removed by octanol, but the reaction mixture is partially introduced into the chromatographic column, which destroys the column charge.

Další nevýhodou dosavadního stavu je, že analýzu z jedné dávky krve lze provést pouze jednou. Zdrojem chyb analýzy může být například netěsnost injekční stříkačky, špatné dávkování apod? Při sebelepší kontrole občas se stane, že hadička spojující obě injekční stříkačky se uvólní a tím se naruší plynulost pos tupu.A further disadvantage of the prior art is that analysis from a single dose of blood can only be performed once. Sources of analysis errors could be, for example, a syringe leak, poor dosing, etc.? At best control, the tubing connecting the two syringes will occasionally become loose, thereby disturbing the flow of the procedure.

Z hlediska analytického není výhodná ani přítomnost vzduchu ve zkoumané směsi plynů vzhledem k tomu, še při chromatografické analýze vstupuje do detektoru napřed velká frakce kyslíku, asi pětkrát ještě větší frakce dusíku a teprve pak kysličník uhelnatý, jehož frakce proti předchozím frakcím je relativně malá.From the analytical point of view, the presence of air in the gas mixture to be investigated is also not advantageous, since in the chromatographic analysis a large fraction of oxygen enters the detector, about five times larger fractions of nitrogen and only carbon monoxide, whose fraction compared to previous fractions is relatively small.

Pro tyto účely je nutno používat velmi dlouhou kolonu, která by směs dobře oddělila. Naproti tomu čím je kolona delší, tím je detekční citlivost nižší. Náplň kolony je nutno velmi často měnit, aby byla dosažena vhodná separační účinnost.For this purpose, a very long column should be used to separate the mixture well. In contrast, the longer the column, the lower the detection sensitivity. The packing of the column must be changed very often in order to obtain suitable separation efficiency.

Tyto dosavadní nevýhody odstraňuje způsob přípravy vzorků ke stanovení kysličníku uhelnatého v biologické kapalině,například v krvi, jehož podstatou je, že do reakční trubice se nejprve napustí roztok kapaliny hustší než je zkoumaná biologická kapalina, například nasycený roztok chloridu sodného a poté se nadávkuje předem určené množství biologické kapaliny, trubice se uzavře a po odvzdušnění se přes uzávěr nadávkuje reakční ferrikyanidové činid-J.0 a plynná směs vodíku s metanem, 10:1 přičemž vzorky ke stanovení plynné fáze se odebírají po promíchání.The method of sample preparation for the determination of carbon monoxide in a biological liquid, for example blood, is to overcome these disadvantages by first impregnating the reaction tube with a liquid solution denser than the biological liquid of interest, for example saturated sodium chloride solution and then dosing a predetermined The amount of biological liquid is sealed, the tube is sealed, and after venting, the ferriyanide reagent 1.0 and gaseous hydrogen / methane gas mixture 10: 1 are metered through the cap and samples for gas phase determination are taken after mixing.

Hlavní předností způsobu podle vynálezu je možnost opakované reprodukce vzorku /není nutné znát přesné množství odebíraného vzorku, protože je přítomen metan jako vnitřní standard/, výhodou je, že kysličník uhelnatý snadněji difunduje do prostředí vodíku než vzduchu. Výhodou zařízení je, že umožňuje zpracovat velký počet vzorků najednou, nebot manipulace a obsluha jednoduchá, čištění a sterilizace je velmi snadná.The main advantage of the method according to the invention is the possibility of repeated reproduction of the sample (it is not necessary to know the exact amount of the sample taken, since methane is present as an internal standard), the advantage is that carbon monoxide diffuses more readily into hydrogen than air. The advantage of the device is that it allows to process a large number of samples at the same time, because handling and operation is simple, cleaning and sterilization is very easy.

Vynález blíže objasní přiložený výkres, kde na obr. 1 je v osovém řezu naznačena reakční trubice s pevnými uzávěry a s vyrovnávací nádobou, na obr. 2 a' 3 provedení odnímátelného uzávěru.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS The invention is illustrated in greater detail in the accompanying drawing, in which: FIG. 1 shows an axial section of a reaction tube with fixed caps and a buffer vessel; FIGS. 2 and 3 show an embodiment of a removable cap.

Nejjednodušší provedení reakční tr.ubice je uvedeno na obr. 1. Trubka má na obou koncích rozšířené okraje. Trubka _£ je na obou koncích opatřena uzávěry 2_ sestávající z gumových profilovaných zátek 3_> které jsou upevněny hliníkovým prstencem 4_. Reakční trubice je naplněna roztokem 5_ chloridu sodného a vzorkem krve 6.. Injekční jehlí: 7_ spojená hadicí 9. s vyrovnávací nádobou 8. se při plnění reakční trubice propíchne gumovou zátkou 3_.The simplest embodiment of the reaction tube is shown in FIG. 1. The tube has enlarged edges at both ends. The tube 6 is provided at both ends with closures 2 consisting of rubber profiled plugs 3 which are fastened by an aluminum ring 4. The reaction tube is filled with a sodium chloride solution 5 and a blood sample 6. The injection needle 7 connected by a hose 9 to a buffer vessel 8 is pierced with a rubber stopper 3 when filling the reaction tube.

Jiný příklad uzávěrů _2 reakční trubice je naznačen na obr. 2. Trubka je uzavřena šroubovým uzávěrem sestávajícím z převlečné matice 1 0, která přitlačuje gumovou zátku 3 k trubce 1 přitažením na dvoudílný sestavovací prstencový závit 11 . Na obr. 3 je uveden další příklad, kde trubka _1_ je na koncích opatřena závitem 1 2, na nějž se našroubuje převlečná matice 10.Another example of the reaction tube closures 2 is shown in FIG. 2. The tube is closed by a screw cap consisting of a cap nut 10 that presses the rubber plug 3 against the tube 1 by tightening it to a two-piece annular assembly thread 11. FIG. 3 shows another example where the pipe 1 is provided at its ends with a thread 12 on which the union nut 10 is screwed.

Při provádění způsobu podle vynálezu je postup následující: Př^s spodní gumovou zátku 3_ Se zasune do reakční trubice injekčn jehla 7^ Z vyrovnávací nádoby 8 vtéká do. trubky _£ roztok .5 chloridu sodného. Trubka se napustí roztokem 5_ do takové výše, aby zůstal volný .prostor pro umístění zkoumaného biologického materiálu y6, kterým může být krev, štávy, tkáň, která se rozmíxuje například ve vodě. Tím je roztok 5.. s výhodou hustší než zkoumaný biologický materiál 6.In carrying out the process according to the invention, the procedure is as follows: With the lower rubber plug 3, the injection needle 7 is inserted into the reaction tube 7 from the buffer vessel 8 into the reaction vessel. 5 of sodium chloride solution. The tube is impregnated with solution 5 to a level so as to leave a space to accommodate the biological material of interest 6, which may be blood, juices, tissue that is mixed, for example, in water. As a result, the solution 5 is preferably denser than the biological material 6 investigated.

Místo chloridu sodného lze též použít, rtuti, ale to není podmínkou. Poté se trubka 1_ uzavře gumovou zátkou 3_ a hliníkovým prstencem^. Nyní se přes vrchní gumovou zátku .3 prostrčí odvzdušňovací injekční jehla a vyrovnávací nádobka 8^ se vyzvedne nad úroveň vrchní gumové zátky 3 při zasunutí injekční jehly 7/do spodní gumové zátky 3.. Tím vypudí roztok 5_ veškerý přítomný vzduch z reakční trubice. Odvzdušňovací injekční jehla se odstraní. Přes vrchní zátku 3_ vstřikne se do reakční trubice 2 ml ferrikyanidového činidla a plynná směs vodíku s metanem 10:1,Mercury may also be used in place of sodium chloride, but this is not a requirement. The tube 7 is then closed with a rubber stopper 3 and an aluminum ring. A venting injection needle 3 is now passed through the upper rubber stopper 3 and the buffer vessel 8 is lifted above the level of the upper rubber stopper 3 when the injection needle 7 / is inserted into the lower rubber stopper 3. Thus, solution 5 expels all air present from the reaction tube. The venting needle is removed. 2 ml of ferricyanide reagent and a gaseous mixture of hydrogen and methane 10: 1 are injected through the top plug 3,

Činidlo uvolňuje ze vzorku kysličník uhelnatý do reakční trubice. Injekční jehla 7_ se ze spodní gumové zátky vysune. Reakční trubice se připojí na třepačku. Asi po 10 minutách intenzivního protřepání se opět připojí injekční jehla 7 a do reakční trubice se přidá kapka vyššího alkoholu,například oktanolu pro rozraženi pěny a poté se odebírá jisté množství plynu, které se dávkuje do plynového chromatografu a zjistí se poměr zóny kysličníku uhelnatého z metanu.The reagent releases carbon monoxide from the sample into the reaction tube. The injection needle 7 comes out of the lower rubber stopper. The reaction tubes are connected to a shaker. After about 10 minutes of vigorous shaking, the injection needle 7 is reconnected and a drop of higher alcohol, such as octanol, is blown into the reaction tube, and then a certain amount of gas is removed and metered into a gas chromatograph to determine the carbon monoxide zone ratio. .

Další vzorek téže zředěné krve se nasytí proudem kysličníku uhelnatého, pročistí proudem dusíku a analýza se opět provede shora popisovaným postupem. Zjištěný poměr zóny kysličníku uhelnatého z metanu slouží jak k výpočtu procentního obsahu kysličníku uhelnatého ve vzorku zkoumaného v reakční trubici.Another sample of the same diluted blood is saturated with a stream of carbon monoxide, purged with a stream of nitrogen, and the analysis is again performed as described above. The observed ratio of the carbon monoxide zone from methane serves both to calculate the percentage of carbon monoxide in the sample examined in the reaction tube.

Claims

OBJECT OF THE INVENTION

A method of preparing a sample for the determination of carbon monoxide in a biological liquid, for example blood, characterized in that the reaction tube is first impregnated with a liquid solution denser than the biological liquid of interest, for example saturated sodium chloride solution and then dosed with a predetermined amount of biological liquid. The solution is sealed and after deaeration the ferritic acid reagent is metered in and the gaseous mixture of hydrogen and methane 10: 1 and gas phase samples are taken after mixing.