CS208873B1 - Způsob určování streptokoků skupiny B - Google Patents

Description

Vynález řeší problém způsobu rychlého určování hlavního infekčního původce mastitid skotu a ostatních streptokoků skupiny B, použitím sfingomyelinázy D jako biopreparátu, vhodného pro veterinární i lékařskou mikrobiologii při izolaci streptokokových kmenů z vyšetřovaného materiálu.

Snaha disponovat metodu, která by umožnila určení streptokoků skupiny B již za 24 hodin vyústila v návrh média, které jeho autoři HAUGE, S. - ELLINGSEN, J. J.: Et selektiv agar-medium (TKT mediet) beregnet til pavisning av gruppe B streptokokker i samlemelk (Leverandor-melkeprover). Nord. Vet. Med., 5, 1953, s. 539-547. KOHLER-ELLINGSEN,

J. - HAUGE, S,: Bavisning av Streptococcus agalactiae i leverandormelk (samlemelk) ved hjelp av T.K.T.-mediet (thallium sulfap-krystall-violett-toxin-mediet). Nord. Vet. Med., 5, 1953, s. 653-662, označili podle obsažených složek (thalium sulfát-krystalová violeí - toxin) jako TKT médium. V principu toto médium identifikuje streptokoky skupiny B na základe hemolytického efektu se stafylokokovým beta-toxinem. Identickou hemolytickou reakci na tomto médiu však kromě streptokoků skupiny B dávají i CAMP-pozitivní kmeny S, uberis.

Ha principu použití beta-toxinu je založeno i médium KTB BECHT, H.s Vorschlag zur I.Iastitis-Diagnostik. Schweizer, Arch. Tierheilk., 103, 1961 , s. 627-630, KUHLMANN, W. - MOLLER, G.: Ober die Kongorot-Toxin-Blutplatte naoht Becht. Arch. Exp. Vet. Med., 18,

i.

208 873

1964, s. 837-843. Dosavadní metody, založené na použití stafylokokového beta-toxinu, nediferencují jednoznačné druh Str. uberis od patogenního druhu Str. agalactiae JELÍNKOVI, J.s Group B streptooocoi in the human population. Curr. Top. Microbiol. Immunol., 76, 1977, s. 127-165, oož je jejich podstatnou nevýhodou, neboí prodlužují možnost vyslovení závěrů nejméně o 48 hodin, což znamená zvýšení nákladů na vyšetření. Časová prodleva se negativně odráží v operativnosti při určování streptokoků lupiny B.

Výše uvedené nedostatky jsou odstraněny způsobem určování streptokoků skupiny B podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že do Edwardsova média, v němž se jako indikátor použije s výhodou 5 % propraných ruminantních erytrocytů, se přidá prepurifikovaná forma sfingomyelinysy D v množství 1 až 5 jednotek aktivity a k takto připravené živné půdě se přidá vyšetřovaný materiál a nechá se inkubovat při teplotě 308 K až

311,5 K 16 až 48 hodin a po této době se vyrostlé kolonie streptokoků skupiny B obklopí širokým dvorcem úplné hemolýzy, zatímco kolonie ostatních streptokoků jsou nehemolytioké Ruminantní erytrocyty jsou ovčí. Vyšetřovaný materiál, kterým je mléko, se v množství 0,05 až 0,1 ml zalije do média a/nebo se nanese na povrch média, stejně jako vyšetřované výtěry z tkání a orgánů.

Výhody určování streptokoků skupiny B ve srovnání se současnou situací se projeví vyloučením možnosti záměny Str. agalactiae za jiné streptokoky. Pouze beta hemolytické streptokoky, zejména skupiny A vyrůstají s úzkou zónou úplné hemolýzy. Závěry lze vyslovit již za 16 hodin po bakteriologickém vyšetření, vzorků, oož výrazně snižuje provozní náklady a spotřeby materiálu. Použití způsobu podle vynálezu zaručuje standardnost výsledků, dosahovaných na různých pracovištích. Způsobem podle vynálezu je možno zjišíovat streptokoky skupiny B v tekutém i pevném materiálu, >

Příklad 1

Při určování Streptococcus agalactiae, který je hlavním etiologickým činitelem mastitid skotu, v sekretu mléčné žlázy bylo postupováno tak, že do rozehřátého Edwardsova média a ochlazeného na 321 K se přidalo 5 % ovčích erytrocytů a 3 jednotky aktivity na 1 ml prepurifikované formy sfingomyelinázy D. Na dno sterilní Petriho misky se napipetuje 0,05 ml vyšetřovaného sekretu. Do misky se nalije připravené médium tak, aby výška média byla 0,5 cm a nechá se to ztuhnout. Inkubace se provede v termostatu při 310 K. Po 20 hodinách inkubace jsou kolonie Streptococcus agalactiae obklopeny širokou zónou úplné hemolýzy, zatímco kolonie jiných streptokokových druhů vyrůstaly bez hemolýzy. Popsaným způsobem byly zjišíovány streptokoky skupiny B v tekutém materiálu.

Příklad 2

Při určování streptokoků skupiny B ve vzorcích odebraných tamponem, byla připravena stejná živná půda obsahujíoí sfingomyelinázu D jako v příkladě 1. Půda se nalila do Petriho misek tak, aby její výška byla 0,5 cm a nechala se v miskách ztuhnout. Kultivace se provedla nátěrem na povrch média. Inkubace a hodnocení bylo stejné, jako v příkladě 1. Popsaným způsobem byly zjišíovány streptokoky skupiny B v pevném i tekutém materiálu.

Claims (3)

1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU

   1. Způsob určování streptokoků skupiny B, vyznačený tím, že do Edwardsova média se použi je jako indikátor s výhodou 5 % propraných ruminantních erytrocytů a přidá ae prepuri fikovaná forma sfingomyelinázy D v množství 1 až 5 jednotek aktivity a k takto připravené živné půdě se přidá vyšetřovaný materiál a nechá se inkubovat při teplotš 308 K až 311,5 K 16 až 48 hodin a po této době se vyrostlé kolonie streptokoků skupiny B obklopí širokým dvorcem úplné hemolýzy, zatímco kolonie ostatních streptokoků jsou nehemolytické.
2. 2. Způsob podle bodu 1, vyznačený tím, že ruminantní erytrocyty jsou ovčí.
3. 3. Způsob podle bodu 1, vyznačený tím, že vyšetřovaný materiál, kterým je mléko, se v množství 0-0,5 až 0,1 ml zalije do média a/nebo se nanese na povrch média, stejně jako vyšetřované výtěry z tkání a orgánů.