CS208592B1 - Streptomyces aureofaciens microorganism strain - Google Patents

Streptomyces aureofaciens microorganism strain Download PDF

Info

Publication number
CS208592B1
CS208592B1 CS710979A CS710979A CS208592B1 CS 208592 B1 CS208592 B1 CS 208592B1 CS 710979 A CS710979 A CS 710979A CS 710979 A CS710979 A CS 710979A CS 208592 B1 CS208592 B1 CS 208592B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
production
strain
aureofaciens
streptomyces aureofaciens
microorganism strain
Prior art date
Application number
CS710979A
Other languages
Czech (cs)
Inventor
Karel Zeleny
Gabriela Chudackova
Vlasta Matelova
Karel Culik
Michal Bucko
Milan Bertan
Original Assignee
Karel Zeleny
Gabriela Chudackova
Vlasta Matelova
Karel Culik
Michal Bucko
Milan Bertan
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Karel Zeleny, Gabriela Chudackova, Vlasta Matelova, Karel Culik, Michal Bucko, Milan Bertan filed Critical Karel Zeleny
Priority to CS710979A priority Critical patent/CS208592B1/en
Publication of CS208592B1 publication Critical patent/CS208592B1/en

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Vynález se týká nového kmene mikroorganismu Streptomyces aureofaciens CCM 3406 produkujícího chlortetracyklin.The invention relates to a new strain of the microorganism Streptomyces aureofaciens CCM 3406 producing chlortetracycline.

Description

Vynález se týká kmene mikroorganismu Streptomyces aureofaciens, produkujícího chlortetracyklin. Jak je známo, získává se toto antibiotikum aerobní kultivací vhodného produkčního kmene v tekuté živné půdě, obsahující základní potřebné složky. Průmyslová výroba chlortetracyklinu, která se realizuje již po značně dlouhou dobu, dospěla postupným pokrokem zlepšujícím všechny parametry do takového stadia, kdy další zvýšení produkce jednoduchými zásahy již není možné. Určité východisko představují zásadní změny v technologii výroby (přestavba fermentačních tanků, míchadel, dávkovačích zařízení apod.); to jsou ovšem záležitosti velice nákladné a jejich možnosti jsou omezené. Ani v obměně složení živných půd, v použití nových složek půd nebo ve vedení fermentačního procesu nelze již získat ekonomicky významné rezervy, jednou z mála možností je nalezení, výběr nebo vyšlechtění nového produkčního kmene, který by na půdě obvyklého složení, v běžném zařízení a bez náročných zásahů do průběhu fermentace produkoval chlortetracyklin ve vyšších výtěžcích než dosud a rovněž v příznivém poměru k tetracyklinu, který vzniká současně. Vyšlechtění nového kmene, poskytujícího vysoké výtěžky, je záležitost zdlouhavá a náročná. Mnohem jednodušší a rychlejší je uplatnění jednoduchých mutagenních zásahů na vysokoprodukční kmen, který je k dispozici, s cílem pokusit se tak o získání nového kmene se žádanými vlastnostmi.The invention relates to a strain of the microorganism Streptomyces aureofaciens, producing chlortetracycline. As is known, this antibiotic is obtained by aerobic cultivation of a suitable production strain in a liquid nutrient medium containing the basic necessary components. The industrial production of chlortetracycline, which has been carried out for a considerable time, has reached a stage where further increase in production by simple interventions is no longer possible, through gradual progress improving all parameters. A certain starting point is fundamental changes in production technology (reconstruction of fermentation tanks, mixers, dosing devices, etc.); however, these are very expensive matters and their possibilities are limited. Even in changing the composition of nutrient media, in using new soil components or in conducting the fermentation process, it is no longer possible to obtain economically significant reserves; one of the few possibilities is to find, select or breed a new production strain that would produce chlortetracycline in higher yields than before on soil of the usual composition, in conventional equipment and without demanding interventions in the fermentation process and also in a favorable ratio to tetracycline, which is formed at the same time. Breeding a new strain providing high yields is a lengthy and demanding matter. It is much easier and faster to apply simple mutagenic interventions to a high-production strain that is available, with the aim of trying to obtain a new strain with the desired properties.

Uvedeného cíle se podařilo dosáhnout podle vynálezu novým kmenem Streptomyces aureofaciens, označeným NMUXXIII/61, uloženým v Čs. sbírce mikroorganismů University J. E. Purkyně, Brno, tř. Obránců míru 10, pod číslem CCM 3406.The stated goal was achieved according to the invention with a new strain of Streptomyces aureofaciens, designated NMUXXIII/61, deposited in the Czechoslovak Collection of Microorganisms of the J. E. Purkyně University, Brno, class Obránců míru 10, under the number CCM 3406.

Tento kmen byl získán z produkčního kmene, který byl používán po řadu let při komerční výrobě chlortetracyklinu s průměrnou výtěžností 6100 až 6300 ^g/ml, pod označením Streptomyces aureofaciens Gamma X/237 (interní označení Výzkumného ústavu antibiotik a biotransformací v Roztokách u Prahy J. Na výchozí kmen bylo působeno následnou řadou mutagenních zásahů a pasivních selekcí, především ethylmethansulfonátem, nitrosomethylmočovinou, paprsky gama a ultrafialovým světlem. Posledním mutagenním zásahem bylo působení nitrosomethylmočoviny v koncentraci 0,15 M po dobu 100 minut ve fosfátovém pufru s hodnotou pH 6,8 na sporovou suspenzi kmene Gamma X/237, získanou smytím vysporulované kultury vodou s 0,1 % neiontogenního smáčedla. Během působení byla mutační směs míchána na elektromagnetickém míchadle při 25 °C. V časových intervalech po 30, 45, 60 a 100 minutách pů2 sobení nitrosomethylmočoviny byly odebírány vzorky a ředěny ředicí řadou s koeficientem 10 za současného zřeďování nitrosomethylmočoviny na neúčinnou koncentraci. Zředěné vzorky byly vysety na Petriho misky se sporulačním dextrinovým agarem se sacharózou tak, aby nedocházelo ke vzájemnému kontaktu kolonií, a po vysporulování byly samostatné kolonie přeočkovány na šikmé agary. Kultury získané na šikmých agarech představovaly výchozí materiál pro celý proces produkčního hodnocení, prováděný podle následujícího schématu:This strain was obtained from a production strain that was used for many years in the commercial production of chlortetracycline with an average yield of 6100 to 6300 µg/ml, under the name Streptomyces aureofaciens Gamma X/237 (internal name of the Research Institute of Antibiotics and Biotransformations in Roztoky u Prahy J. The initial strain was subjected to a series of subsequent mutagenic interventions and passive selections, primarily with ethyl methanesulfonate, nitrosomethylurea, gamma rays and ultraviolet light. The last mutagenic intervention was the treatment of nitrosomethylurea at a concentration of 0.15 M for 100 minutes in phosphate buffer with a pH of 6.8 on the spore suspension of strain Gamma X/237, obtained by washing the sporulated culture with water with 0.1% non-ionogenic surfactant. During the treatment, the mutation mixture was stirred on an electromagnetic stirrer at 25 °C. At time intervals after At 30, 45, 60 and 100 minutes of exposure to nitrosomethylurea, samples were taken and diluted in a dilution series with a factor of 10 while simultaneously diluting nitrosomethylurea to an ineffective concentration. The diluted samples were plated on Petri dishes with sporulation dextrin agar with sucrose so that there was no contact between the colonies, and after sporulation, individual colonies were re-inoculated onto agar slants. The cultures obtained on agar slants represented the starting material for the entire production evaluation process, carried out according to the following scheme:

I. vegetativní generace -* II. vegetativní generace -> fermentace.I. vegetative generation -* II. vegetative generation -> fermentation.

Kmen mikroorganismu Streptomyces aureofaciens CCM 3406 převyšuje produkci v současnosti používaných kmenů, včetně kmenů produkčních, například S. aureofaciens Gamma X/237, průměrně o 20 až 30 °/o, při zachování všech vhodných technologických vlastností, i příznivého poměru vznikajícího chlortetracyklinu k tetracyklinu (CTC:TCj.The microorganism strain Streptomyces aureofaciens CCM 3406 exceeds the production of currently used strains, including production strains, for example S. aureofaciens Gamma X/237, by an average of 20 to 30%, while maintaining all suitable technological properties, including a favorable ratio of chlortetracycline to tetracycline (CTC:TCj.

Kmen mikroorganismu S. aureofaciens CCM 3406 tvoří při kultivaci na dextrinovém agaru kolonie velikosti 10,5 mm, s okrajovou nesporulující zónou 1,5 mm.The microorganism strain S. aureofaciens CCM 3406 forms colonies measuring 10.5 mm when cultivated on dextrin agar, with a marginal non-sporulating zone of 1.5 mm.

Vzdušné mycélium je bílé, ale při sporulaci nabývá hnědého až šedivého zbarvení. Hyfy dosahují podle stáří velikosti 0,7 až 1,5 μτη, spory jsou většinou kulovité až elipsovitá o průměru 1,97+ 40 ^m.The aerial mycelium is white, but becomes brown to grayish during sporulation. Hyphae reach a size of 0.7 to 1.5 μτη depending on age, spores are mostly spherical to elliptical with a diameter of 1.97+ 40 ^m.

Podrobnosti o produkčním hodnocení kmene CCM 3406 vyplývají z následujících příkladů provedení.Details of the production evaluation of strain CCM 3406 are provided in the following examples.

Příklad 1Example 1

Fermentace v laboratorním měřítkuLaboratory-scale fermentation

A. Vegetativní inokulumA. Vegetative inoculum

Vegetativní inokulum se připravuje ve dvou stupních, tj. I. a II. vegetativní generace. Do 500 ml varných baněk se umístí po 80 ml inokulační půdy (s obsahem sacharózy, sojové a arašídové mouky, řepné melasy, kukuřičného výluhu a živných solí J, která se naočkuje kličkou spor ze šikmého agaru a inkubuje na rotační třepačce při 240 obr./min., s výstředností 25 mm, po dobu 24 hodin při teplotě 29 °C. II. vegetativní generace se zaočkuje 5 % I. vegetativní generace, podmínky kultivace jsou shodné s I. vegetativní generací.Vegetative inoculum is prepared in two stages, i.e. I. and II. vegetative generation. 80 ml of inoculum medium (containing sucrose, soy and peanut flour, beet molasses, corn extract and nutrient salts J) is placed in 500 ml boiling flasks, which is inoculated with a loop of spores from slanted agar and incubated on a rotary shaker at 240 rpm, with an eccentricity of 25 mm, for 24 hours at a temperature of 29 °C. The II. vegetative generation is inoculated with 5% of the I. vegetative generation, the cultivation conditions are the same as for the I. vegetative generation.

B. Produkční hodnoceníB. Production evaluation

Produkční baňky se 40 ml produkční půdy (s obsahem sacharózy, sojové a arašídové mouky, kukuřičného výluhu, melasy, živ208 592 ných solí a benzylrhodanidu) byly zaočkovány 10 % vegetativního inokula II. vegetativní generace. Fermentace probíhala na rotačních třepačkách pri 240 obr./min. (výstřednost 25 mm) při 29 °C po dobu 120 h. Vzorky pro stanovení produkce chlortetracyklinu a jeho poměru k tetracyklinu byly odebrány v 96. a 120. hodině kultivace. Množství produkovaného antibiotika bylo stanovováno kolorometricky s reagenčním roztokem 2N kyseliny chlorovodíkové a poměr antibiotik byl stanovován chromatograficky.Production flasks with 40 ml of production medium (containing sucrose, soy and peanut flour, corn extract, molasses, nutrient salts and benzylrhodanide) were inoculated with 10% of the vegetative inoculum of the II. vegetative generation. Fermentation took place on rotary shakers at 240 rpm (eccentricity 25 mm) at 29 °C for 120 h. Samples for determining the production of chlortetracycline and its ratio to tetracycline were taken at the 96th and 120th hour of cultivation. The amount of antibiotic produced was determined colorimetrically with a reagent solution of 2N hydrochloric acid and the ratio of antibiotics was determined chromatographically.

Produkční srovnání:Production comparison:

Produkční srovnání:Production comparison:

Kmen Tribe Produkce CTC CTC Production Poměr CTC:TC Ratio CTC:TC (Ug/ml (Ug/ml % % S. aureofaciens S. aureofaciens Gamma X/237 Gamma X/237 6300 6300 100 100 93:7 93:7 S. aureofaciens S. aureofaciens CCM 3406 CCM 3406 7750 7750 123 123 94:6 94:6

Kmen Tribe Produkce GTC GTC Production Poměr CTC:TC Ratio CTC:TC ^g/ml ^g/ml % % S. aureofaciens Gamma X/237 S. aureofaciens Gamma X/237 4980 4980 100 100 94:6 94:6 S. aureofaciens GCM 3406 S. aureofaciens GCM 3406 6450 6450 128 128 94:6 94:6

Příklad 3Example 3

Fermentace v tancích objemu 20 litrůFermentation in 20 liter tanks

Fermentace byla prováděna obdobně jako v příkladu 1 v tancích objemu 20 litrů, plněných po 10 litrech produkční půdy.Fermentation was carried out similarly to example 1 in 20 liter tanks filled with 10 liters of production soil.

Příklad 2Example 2

Fermentace v laboratorních tancích objemu 2 litryFermentation in 2 liter laboratory tanks

Fermentace byla prováděna obdobně jako v příkladu 1 v tancích objemu 2 litry, plněných po 750 ml půdy.Fermentation was carried out similarly to example 1 in 2 liter tanks filled with 750 ml of soil.

Claims (1)

PŘEDMĚT Kmen mikroorganismu Streptomyces aureofaciens CCM 3406 produkující chlortetracyklin. Produkční srovnání: Kmen Produkce CTC Poměr CTC:TC jiíg/ml % S. aureofaciens SUBJECT A strain of Streptomyces aureofaciens CCM 3406 producing chlortetracycline. Production comparison: Strain CTC production CTC: TC ratio µg / ml% S. aureofaciens
CS710979A 1979-10-19 1979-10-19 Streptomyces aureofaciens microorganism strain CS208592B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS710979A CS208592B1 (en) 1979-10-19 1979-10-19 Streptomyces aureofaciens microorganism strain

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS710979A CS208592B1 (en) 1979-10-19 1979-10-19 Streptomyces aureofaciens microorganism strain

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS208592B1 true CS208592B1 (en) 1981-09-15

Family

ID=5419613

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS710979A CS208592B1 (en) 1979-10-19 1979-10-19 Streptomyces aureofaciens microorganism strain

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS208592B1 (en)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Backus et al. The production and selection of a family of strains in Penicillium chrysogenum
KR102083165B1 (en) Novel microorganism of the Genus Euglena having beta-1,3-glucan-producing activity and process for producing Euglena-biomass containing beta-1,3-glucan using the same
CN108026546A (en) Microbacterium bacterial strain is used for the purposes for producing antiseptic
Kropp et al. Increased emergence of spring wheat after inoculation with Pseudomonas chlororaphis isolate 2E3 under field and laboratory conditions
US2576932A (en) Fermentation process for production of vitamin b12
JPH07106155B2 (en) Manufacturing method of antibiotic compounds
RU2001949C1 (en) Strain of fungus trichoderma reesei - a producer of cellulolytic enzymes
Iskandarov et al. Effects of nutrient medium composition and temperature on the germination of conidia and the entomopathogenic activity of the fungi Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae
US5192686A (en) Rhizosphere-competent trichoderma strains
CS208592B1 (en) Streptomyces aureofaciens microorganism strain
GB1604782A (en) Selection process for obtaining a fungal microorganism of the genus trichoderma having advantageous characteristics
CN104877914A (en) High-yield hericium erinaceus induced strain H07 and method for preparing same
US3183169A (en) Preparation of salicylic acid
CN102352317B (en) Micro-culture method of pleuromutilin producing bacteria and high-throughput screening method of high-yield bacteria of pleuromutilin
Afolami et al. Characterization, antibiotic sensitivity patterns, plasmid profile analysis and antagonistic potentials of microorganisms from termitaria on mango trees in Ibule-Soro, Akure, Nigeria
SU939549A1 (en) Method for preparing seed material for producing citric acid
US3467579A (en) Microbiological process for the production of lycopene
RU2535983C1 (en) PRODUCER OF CUCURBIT BACTERIAL SPOT AGENT (Acidovorax citrulli) INHIBITOR
CN104611280A (en) Method for rapidly and selectively breeding terramycin strains
Maw Isolation of fungi from soil samples and preliminary study of antimicrobial activities
KR100592129B1 (en) Liquid Culture Method for Mass Production of Chaga Mushrooms (Inonotus Obliquus)
CS245153B1 (en) Microorganism strain Acremonium chrysogenum
Vezina et al. ANTIMYCIN A FERMENTATION I. PRODUCTION AND SELECTION OF STRAINS
KR100446110B1 (en) Cephalosporin c-producing microorganism having tolerance against high concentration of glycerol
SU738392A1 (en) Method of producing biomixture