CS208439B1 - Způsob přípravy radíoligandu (2,3- 3 H)aflatoxinu-B 2 - Google Patents

Description

(54) Způsob přípravy radíoligandu (2,3-³H)aflatoxinu-B₂

Vynález se týká způsobu přípravy rqdioligandu (2,3-³H/aflatoxinu-B₂.

Aflatoxiny produkované plísněmi Aspergillus flavus a Aspergillus parasiticus patří mezi nejnebezpečnější mykqtoxiny. Působí na živočišný organismus nejen jakb iteratogeny a mutageny, ale již ί v nepatrných dávkách také jako kancerogeny. i Z těchto důvodů je detekce přítomnosti a stanové- j ní i velmi malých množství aftaloxinů v krmivu, mléce a dalších článcích potravinového řetězce, závažný problém veterinární, hygienický a lékařský.

i Jednou z nejcitlivějších a nejspecifičtějších metod pro kvantitativní stanovení malých množství ! organických látek v biologickém materiálu je ' radioimunologická analysa (RIA). K provedení této analysy je zapotřebí t. zv. radíoligandu, což je radioaktivní forma molekuly hledané látky nebo jejího nepatrně obměněného derivátu.

Aflatoxin-B₂ v malém množství doprovází v přírodě aflatoxin-Bj (AFBj), který je nej toxičtější alfatoxin. Strukturu aflatoxin-B₂ popsali Asao a spolupracovníci (J. Am. Chem. Soc. 98 (1965) 882), chemicky tato sloučenina připravena dosud nebyla. Tato látka se liší od aflatoxinu-Bj pouze nepřítomností dvojné vazby v poloze 2,3 a proto také nepřekvapuje, že má velmi shodné imunologické vlastnosti s aflatoxinem-Bj a může být tudíž použitelná jako radioligand pri radioimunologické analyse (RIA).

Podstatou způsobu přípravy radíoligandu (2,3³H/aflatoxinu-B₂ je, že se na neradioaktivní aflatoxin-B, působí tritiovým plynem za přítomnosti katalyzátorů ze skupiny platinových kovů v organickém rozpouštědle při neutrálním pH a při teplotě místnosti, načež se surový produkt čistí chromatograficky. , .

Uvédená syntesa probíhá podle schématu:

ί208439

Výhodou tohoto postupu je, že při použití již 50 % | plynného tritia lze získat preparát o vysoké spéci- \ fické aktivitě alespoň 103,6.1O¹⁰ s^_1 . mmol, který je dobře použitelný pri radioimunologickém : stanovení aflatoxinů. Dáleje uveden příklad pří- j pravý (2,3-³H/aflatoxinu-B₂. í i ί / ! !

Příklad N , .

V malé hydrogenační baňce ó objemu cca 3 ml se předredukuje cca 3 mg kysličníku paladnatého v 0,5 ml absolutního suchého dioxanuj vodíkem do konstantní spotřeby (asi 1 hj.j Fót| se dioxan odlyofilisuje a ke zbylénhu katalyzátoru se přidá

2,8 mg aflatoxinu-Bj v 1 ml abs. suchéhp dioxanu při neutrálním pH. i j j

Tritiace se provádí plynným tritičm v tritiační! aparatuře při tlaku 66,6 až 93,3 kŘ^a po dobu 1 hl (podle čs. autorského osvědčení č. Ϊ33 272).'Poté : je dioxan odstraněn lyofilisací a produkt i katalýza-1 tor zbaven labilní aktivity třikrát opakovaným

Claims (1)

1. PŘEDMĚT

   Způsob přípravy radioligandu (2,3-³H/aflatoxinu-B₂, vyznaěený tím, že se na neradioaktivní aflatoxin-Bj působí tritiovým plynem za přítomnosti katalyzátorů ze skupiny platinových kovů oddestilováním T ml tere-butanolu za sníženého tlaku. « í . ^; \

   Produkt se čist} tířn·, že po .rozpuštění v 0,5 ml chloroformu se naneše na rpálý sloupeček silikagelu pro kolonovou chromatoj^rafii;(připraven z 0,3 i až 0,5 g látky). Produkt se vymyje z kolony celkem

   10 ml chloroformu. Rozpouštědlo se odpaří za J sníženého tlaku a zbytek se rozpustí v metanolu, i

   Čistota se stanoví tenkovrstvou chromatografií : [na desce Silufol (Kavalier—ČSSR)] v soustavě: i CHC1₃ : ČHjOH : H₂O = 88 : 12 : 1,5; R_F = 0,6.' ' Hmotnost produktu se stanoví |vážehím odparku i nebo pňe$njěji z ěxtinkce UV při 360 nm.

   , Radioaktivita sfe stanoví kapalně scintilační těchnikou. ‘ :

   ί V daném případě bylo získáno při použití 50% ; tritiového plynu 0,8 mg produktu o celkové aktivitě 196.10⁷s^-1. Výsledná specifická radioaktivita ! : 118,4.10^los^_1 . mmol je v dobré shodě s teorií. ;

   VYNÁLEZU. j v organickém rozpouštědle při neutráíriím pH a pri teplotě místnosti, načež se surový produkt čistí chromatograficky.