CS207931B1 - Způsob pomnožování parazitů pro přípravu antigenů z produkčních zvířat - Google Patents

Abstract

Vynález řeší problém zvýšení výtěžku a čistoty parazitární suspense.Podstatou vynálezu je aplikace imunosupresivního zásahu,kterým se sníží přirozená resistence produkčního zvířete a tím se umožní pomnožení většího množství parazitů.Tento vynález je možné využít v mikrobiologii, imunologii a parazitologii jak pro přípravu vakcin,tak i diagnostických preparátů i k výzkumným účelům.

Description

Vynález se týká způsobu pomnožování parazitů na produkčních zvířatech při přípravě parazitárních antigenů,určených pro vakcinaci nebo pro diagnostické účely.Způsobem podle vynálezu ae dociluje zvýšení výtěžku parazitů i zvýšení čistoty parazitární suspense.

Pomnožování parazitů na laboratorních zvířatech se obvykle provádí tak,že se těmto zvířatům injikuje živá suspense parazitů a po určité době se zvířata usmrtí a odebírá se jim buá orgán,nebo tělní tekutina,ve které se paraziti pomnožili.Na př.při kultivaci prvoků Toxoplasma gondii se bílým myškám intraperitoneálně naočkují živé toxoplasmy,třetí den se myši usmrtí,pitvají a sterilně se jim odebírá peritoneální exaudát,obsahující pomnožené parazity.který obsahuje také myší leukocyty.Tímto způsobem dostaneme suspensi prvoků,jejichž množství je omezeno vlivem působení ochranného mechanismu hostitelského zvířete a tato suspense obsahuje i značné množství leukocytů.

Vynález byl učiněn na základě znalostí z odborné literatury o imunosupresivním účinku různých látek a skutečností,že v imunosuprlinovaném organismu dochází k častým infekcím.Na př. Mayer V.(Acta virol. 16,323,1972) prokázal zvýšené pomnožení virů v imunosuprimovaných zvířatech.Snížení resistenoe imunosupresivními látkami se běžně využívá na klinikách při transplantacích orgánů.

Způsobem podle vynálezu se kultura parazitů inj,ikuje produkčním zvířatům,na které bylo před infikováním působeno imunosupresivně.Při pomnožování Toxoplasma gondii na imunosuprimovaných myších se potřeba zvířat i pracnost sníží na méně než polovinu při zvýšení kvality suspense.Myším se podá imunosupresivní látka a potom se provede inokulace živých toxoplazem.Toxoplasmy se v takto ovlivněných myších pomnoží podstatně více,než v myších neovlivněných.Získá se tak v průměru z jedné myši nejméně dvojnásobek toxoplazem,jak ukazuje tabulka z pokusů,provedených vždy na 100 myších:

Pokus č.	Počet toxoplazem z myší, ovlivněných imunosupresivní látkou	Počet toxoplazem z myší neovlivněných(kontrola)
1/79 0	113 miliard	0 36 miliard
2/79	'298	32
3/79	295	130 «
4/79	146	63
5/79	143	75
6/79	288	196
Průměr z pokusů	214 miliard	88 miliard

Kultivací podle vynálezu se v porovnání se známým postupem přípravy parazitárních antigenů zvýší také jejich kvalita.Suspense těchto toxoplazem,připravených podle vynálezu,obsahuje větší množství prvoků v poměru k přibližně konstantnímu množství myších leukocytů,obsažených v peritoneálním exsudátu myší.Proto antigeny,vyráběné podle vynálezu,nepotřebují další purifikaci,která je spojena se značnými ztrátami,viz K.N.Masihi:Toxoplasma gondii:Large scale purification by zonal density gradient centrifugation.Exp.Parasitol. 39,81-87,1976, K.N.Masihi:Studies of purification of Toxoplasma gondii zoites by sintered glass filters, Acta parasitol.,23,653-658,1975,

A.Valkoun:Příprava čištěných suspensí Toxoplasma gondii z myšího peritoneálního exsudátu a tkáňových kultur,Zprávy Čs.spol.parasitol. 18,3-4,20-22,1978.

Celkový ziak parazitů u normálního,neovlivněného zvířete je limitován působením ochranného mechanizmu hostitelského organizmu.Tento důvod je také příčinou neetandartního zisku parazitů z jednotlivých zvířat.

Snížením resistence produkčního zvířete imunosupresivním zásahem,t.j.aplikací imunosupresivhš působící látky (na př.cyklofosfamidu,azathioprinu,6-merkaptopurinu, cortizonu),antilymfocytámím sérem(antimakrofágové,antithymové sérum) nebo ozářením Rtg paprsky se sníží brzdící účinek imunitního mechanizmu a tím se vytvoří lepší podmínky pro pomnožení parazitů,dosáhne se vyššího výtěžku a kvalitnějšího antigenu.

Příklady provedení:

Příklad 1):

100 bílým myškám o hmotnosti 20-24 g bylo aplikováno intramuskulámě 3 mg cyklofosfamidu do obou stehen.Druhý den podána týmž způsobem stejná dávka.Čtvrtý den byly myšky naočkovány intraperitoneálně inokúlem,obsahujícím živé toxoplasmy,Třetí den po infekci byly myši usmrceny stržením vazu,pitvány a sterilně odebrán exsudát, obsahující toxoplasmy.

Exsudát byl vyšetřen mikroskopicky,provedeny zkoušky sterility a nato byl odstředěn.Průměrná výtěžnost na 1 myš byla 113 miliard toxoplazem(kontrola bez podání imunosupresivního prostředku 36 miliard toxoplazem).Sedimentované toxoplasmy byly dále zpracovány na Toxoplasmin a diagn.antigen IFR.

Příklad 2):

Bílým myškámdOO ks) o hmotnosti 20-24 g se aplikovalo 0,8 mg azathioprinu (Imurenu) intramuskulámě.Druhý den podána stejná dávka a dále postupováno jako v příkladě 1).Průměrný výtěžek na 1 myš činil 146 mld toxoplazem.

Příklad 3):

100 bílým myškám o hmotnosti 20-24 g se subkutánně naočkovalo 0,2 ml antithymového séra,druhý den podána stejná dávka.Dále postupováno jako v příkladě 1).Průměrný výtěžek byl 143 mld toxoplazem na 1 myš.

Příklad 4) :

Bílé myšky (100 ks) o hmotnosti 20-24 g byly ozářeny dávkou 14,19 . lO^C.kg^-^ (550 R-250 R/10 g hmotnosti) Rtg paprsků.Dva dny po ozáření byly myšky naočkovány intraperitoneálně inokúlem,obsahujícím živé toxoplasmy.Dále bylo postupováno jako v příkladě 1),výtěžnost činila 288 mld toxoplazem/1 myš.

Claims (4)

1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU

   1) Způsob pomnožování parazitů pro přípravu antigenů z produkčních zvířat, spočívající v tom,že se kultura parazitů injikuje produkčním zvířatům,vyznačující se tím,že před infikováním se na produkční zvířata působí imunosupresivně.
2. 2) Způsob podle bodu 1),vyznačující se tím,že imunosupresivní působení na produkční zvířata se provádí podáváním imunosupresivních látek,jako cyklofosfamidu, azathioprinu,6-merkaptopurinu nebo cortizonu.
3. 3) Způsob podle bodu 1),vyznačující se tím,že imunosupresivní působení na produkční zvířata se provádí injikováním antilymfocytárního séra,jako antimakrofágového nebo antithymového séra.
4. 4) Způsob podle bodu 1),vyznačující se tím,že imunosupresivní působení na produkční zvířata se provádí ozářením Róntgenovými paprsky.