RU2077583C1 - Штамм "тапхар" вируса блютанга febris infecthiosa catarhaliss ovium, используемый для изготовления вакцины - Google Patents
Штамм "тапхар" вируса блютанга febris infecthiosa catarhaliss ovium, используемый для изготовления вакцины Download PDFInfo
- Publication number
- RU2077583C1 RU2077583C1 RU95100514A RU95100514A RU2077583C1 RU 2077583 C1 RU2077583 C1 RU 2077583C1 RU 95100514 A RU95100514 A RU 95100514A RU 95100514 A RU95100514 A RU 95100514A RU 2077583 C1 RU2077583 C1 RU 2077583C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- virus
- strain
- blue
- titer
- tongue virus
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Использование: ветеринарная вирусология. Сущность изобретения: выделен новый штамм вируса блютанга, размножаемый с перевиваемой культуре клеток почки сибирского горного козерога (ПСГК) и применяемый для изготовления вакцины против циркулирующего в данной местности серотипа. Штамм "Тапхар" вируса блютанга размножается в культурах клеток ПСГК в титре 6,5-7,0 lg ЦПД 50/мл, почки зеленой мартышки (CV-1) в титре 5,5-6,0 lg ЦПД 50/мл, почки овцы (ПЯ) в титре 5,0 - 6,0 lg ЦПД 50/мл на мышах 1-2 дневного возраста в титре 8,7-9,0 lg МЛД 50/мл. При типировании в реакции нейтрализации (РН) по индексу нейтрализации штамм отнесен к 16 серотипу вируса блютанга. С помощью электронно-микроскопических и иммуноэлектронно-микроскопических исследований обнаруживают вирусные частицы размером 55-70 нм, которые тождественны морфологически представителям орбивирусов, семейства реовирусов. 3 табл.
Description
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности, к штамму вируса блютанга (ВБ), используемого для изготовления вакцины, который может быть применен для производства вакцины против заболевания овец в научно-исследовательских учреждениях и различных отраслях биологической промышленности.
В настоящее время известны 24 серотипа возбудителя блютанга, которые вызывают сходную клиническую картину при заражении восприимчивых животных. Вирус блютанга 10 серотипа, выделенный в США, имел следующие характеристики: размножался в культуре клеток ВНК-21 в титре 6,0 lg ЦПД 50/мл. Вирусные частицы имели электронно-микроскопическую структуру, присущую вирионам рода орбивирусов [1]
Известен штамм Ильичевский вируса блютанга, выделенный в 1986 г. Нахичеваньской автономной области Армянской ССР.
Известен штамм Ильичевский вируса блютанга, выделенный в 1986 г. Нахичеваньской автономной области Армянской ССР.
Предположительно он был отнесен к 12-му серотипу вируса блютанга. Вирус размножался в культуре клеток почки новорожденного хомяка (ВНК-21) с титром 6,5-7,0 lg ЦПД 50/мл. На основе данного изолята была разработана инактивированная гидроокисьалюминиевая вакцина (ТУ 46-21-239-76). Нейтрализующие антитела, вырабатывающиеся в организме, обеспечивают защиту от заражения только гомологичным серотипом блютанга. В связи с этим вирусвакцины применяют против тех серотипов, которые циркулируют в данной местности [2]
Задачей настоящих исследований является выделение нового штамма вируса блютанга, размножающегося в перевиваемой культуре клеток почки сибирского горного козерога (ПСГК), типирование его и применение для изготовления вакцины против циркулирующего в данной местности серотипа.
Задачей настоящих исследований является выделение нового штамма вируса блютанга, размножающегося в перевиваемой культуре клеток почки сибирского горного козерога (ПСГК), типирование его и применение для изготовления вакцины против циркулирующего в данной местности серотипа.
Штамм "Тапхар" вируса блютанга размножается в культурах клеток ПСГК в титре 6,5-7,0 lg ЦПД 50/мл, почки зеленой мартышки (CV-1) в титре 5,5-6,0 lg ЦПД 50/мл, почки овцы (ПО) в титре 5,0-6,0 lg ЦПД 50/мл и на мышах 1-2 дневного возраста в титре 8,7-9,0 lg МЛД 50/мл. При типировании в реакции нейтрализации (РН) по индексу нейтрализации штамм отнесен к 16 серотипу вируса блютанга.
С помощью электронно-микроскопических (ЭМ) и иммуноэлектронно-микроскопических (ИЭМ) исследований обнаруживают вирусные частицы размером 55-70 нм, которые тождественны морфологически представителям орбивирусов, семейства реовирусов.
Пример конкретного выполнения
Выделение вируса проводят путем инокуляции 10%-ной суспензии крови овец, поступившей для экспертизы, в культуру клеток ПСГК и мозг 1-2 дневных новорожденных мышат. Клинические признаки заболевания мышат блютангом обнаружены с первого пассажа при интрацеребральном заражении, титр вируса в крови 2,0 lg МЛД 50/0,02 мл 10%-ной суспензии. Установлены цитопатические изменения в культуре клеток, инокулированной вирус-кровью на уровне 6 пассажа, а при заражении суспензией мозга инфицированных мышат с 1-2 пассажа. Результаты этих исследований представлены в табл. 1.
Выделение вируса проводят путем инокуляции 10%-ной суспензии крови овец, поступившей для экспертизы, в культуру клеток ПСГК и мозг 1-2 дневных новорожденных мышат. Клинические признаки заболевания мышат блютангом обнаружены с первого пассажа при интрацеребральном заражении, титр вируса в крови 2,0 lg МЛД 50/0,02 мл 10%-ной суспензии. Установлены цитопатические изменения в культуре клеток, инокулированной вирус-кровью на уровне 6 пассажа, а при заражении суспензией мозга инфицированных мышат с 1-2 пассажа. Результаты этих исследований представлены в табл. 1.
Как следует из табл. 1, титры выделенного вируса в пробах суспензии мозга на уровне 1-2 пассажей в культуре клеток ПСГК составляет 4,5-6,5 lg ЦПД 50/мл, в пробах крови на уровне 6-7 пассажа 4,5-7,0 lg ЦПД 50/мл.
Для обнаружения антигена вируса прямым вариантом метода флуоресцирующих антител используют культуру клеток ПСГК, выращенную на покровных стеклах. Вируссодержащий материал вносят в разведениях от 1:100 до 1:1000. Вирусный антиген обнаруживают, начиная с 4 пассажа (табл. 2).
Как следует из данных табл. 2, методом флюоресцирующих антител вирус обнаруживают, начиная с 4-го пассажа, еще до проявления цитопатического действия.
Для идентификации выделенного вируса в РДП, РСК и ТФ ИФА готовят концентрированные культуральные антигены из зараженных клеток ПСГК и сахарозо-ацетоновые антигены из мозга инфицированных 2-3 дневных мышат. Положительные результаты получают только при взаимодействии антигенов с поли- и моноклональными антителами, специфичными к антигенам вируса блютанга. Титр культурального антигена в РДП, РСК и ТФ ИФА составляет 1:2 1:4; 1:16-1:32 и 1:64-1: 256, а сахарозо-ацетонового антигена 0; 1; 16 1:32 и 1:64-1:128, соответственно. Для контроля специфичности применяют антигены вирусов эпизоотической геморрагической болезни оленей (ЭГБО), болезней Ибараки (БИ), Акабане (БА), Найроби (БН) и лихорадки долины Рифт (ЛДР). Результаты представлены в табл. 3.
Эти результаты однозначно подтверждают как принадлежность выделенного изолята к вирусу блютанга, так и его чистоту от антигенно-родственных вирусов ЭГБО и болезни Ибараки.
С помощью ЭМ и ИЭМ исследований в культуральных концентрированных и нативных вируссодержащих препаратах обнаруживаю вирусные частицы размером 55-70 нм. Вирионы морфологически тождественны представителям рода Орбивирусов семейства Реовирусов, имеют типичную икосаэдрическую форму симметрии и располагаются одиночно или в виде скоплений.
При проведении ИЭМ положительный результат получают при использовании сахарозо-ацетонового антигена и сыворотки овцы. При постановке ИЭМ материалы используют с цельной сывороткой реконвалесцентов. В пробах обнаруживают группы вирусных частиц, связанных антителами.
В реакции нейтрализации используют культуральный вирус, прошедший 8 пассажей в культуре клеток ПСГК с инфекционной активностью 7,0 lg ЦПД 50/мл, выделенный из крови больных овец (N 4).
Типирование выделенного вируса по индексу его нейтрализации в культуральном вируссодержащем материале сыворотками, специфичными к двадцати серотипам вируса блютанга, двум серотипам вируса ЭГБО и вирусу болезни Ибараки показало, что наибольший индекс нейтрализации (3,0 lg) наблюдают с сывороткой, специфичной к 16-му серотипу вируса блютанга. Индексы нейтрализации выделенного штамма сыворотками, специфичными к остальным девятнадцати серотипам вируса блютанга, и гетерологичными сыворотками, не превышал 1,0 lg.
Идентификация выделенного штамма "Тапхар" проверена в комиссионных испытаниях (акт от 28.01.94 прилагается).
Приводим пример использования данного штамма для приготовления инактивированной вакцины против блютанга 16-го серотипа.
Для получения производственного вируса отбирают 2-3-х суточную культуру клеток ПСГК с полным равномерным круговым монослоем.
Из роллерных сосудов удаляют ростовую среду и в каждый сосуд вносят по 0,5 л поддерживающей питательной среды. Множественность заражения должна быть 0,01-0,001 ТЦД на клетку. Сосуды с инфицированной культурой помещают в роллерный аппарат. Выращивание вируса проводят при температуре 37±0,5 С и скорости вращения сосудов 10-12 об/ч. При необходимости среду подщелачивают 7,5% -ным раствором соды до рН 7,2-7,4. При хорошо выраженном ЦПД вируса и поражении 70-80% клеток культивирование вируса прекращают, содержимое сосудов встряхивают для отделения пораженных клеток от стекла, вирусную суспензию объединяют и хранят при температуре 2-6oС. Для приготовления инактивированной вакцины используют вирус с активностью 6,5-7,0 lg ЦПД 50/мл.
Биологическую активность вируса определяют титрованием на монослойной культуре клеток ПСГК, выращенной в пробирках.
Инактивацию вируса проводят 0,1%-ным раствором А-24 (1,8,3 6-диэндометилен-1,3,6,8-тетразациклодекан). Предварительно рН суспензии снижают до значений 6,8-6,9. Затем при постоянном перемешивании добавляют 10%-ный водный раствор А-24 в соотношении 1:100. Вирус инактивируют при (37±0,5)oС в течение 72 ч. В течение первых 6 ч суспензию перемешивают каждые 0,5-1 ч, затем каждые 8-10 ч. С помощью 20% -ного раствора фосфорнокислого калия (KH2PO4) поддерживают рН в пределах 7,1-7,3.
Полноту инактивации вируса в полуфабрикате проверяют путем проведения 3-х пассажей инактивированного вируса в культуре клеток ПСГК. Для этого в 10 пробирок с полным монослоем 2-3-х суточной культуры клеток ПСГК вносят по 1 мл вируса в разведении 1:10 и выдерживают 20 мин при температуре (37±0,5)oС, затем монослой дважды отмывают питательной средой и инкубируют в течение 6-7 суток. Питательную среду меняют через одни сутки после заражения. Для проведения пассажей испытуемые культуры клеток кратковременно замораживают-оттаивают и содержимое пробирок переносят в 2-3-х суточную культуру клеток ПСГК и инкубируют 6-7 суток.
Полноту инактивации оценивают по отсутствию ЦПД в культуре клеток ПСГК на третьем пассаже вируса.
К инактивированной суспензии вируса добавляют 6%-ный раствор гидроокиси алюминия (ГОА) до конечной концентрации 5-10 мг/мл, тщательно перемешивают и оставляют при температуре (2-6)oС для адсорбции вирусного антигена. Через 24 ч осторожно, не взбалтывая, декантируют 1/3 надосадка, доливают инактивированную вирусную суспензию до первоначального объема, тщательно перемешивают и выдерживают еще 24 ч.
К полученной технической жидкости (ТЖ) добавляют 10%-ный сапонин до конечной концентрации 0,5-1,0 мг/мл, перемешивают и разливают при помощи специального дозирующего устройства по 50, 100 или 200 мл в стерильные флаконы. Флаконы закрывают резиновыми пробками и закатывают алюминиевыми колпачками. В конце фасовки проводят контроль вакцины на отсутствие бактериальной и грибковой микрофлоры.
Claims (1)
1 Штамм вируса блютанга Febris infecthiosa catarhaliss ovium ВНИИВВиМ N 1882, используемый для изготовления вакцины.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU95100514A RU2077583C1 (ru) | 1995-01-18 | 1995-01-18 | Штамм "тапхар" вируса блютанга febris infecthiosa catarhaliss ovium, используемый для изготовления вакцины |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU95100514A RU2077583C1 (ru) | 1995-01-18 | 1995-01-18 | Штамм "тапхар" вируса блютанга febris infecthiosa catarhaliss ovium, используемый для изготовления вакцины |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU95100514A RU95100514A (ru) | 1997-03-20 |
RU2077583C1 true RU2077583C1 (ru) | 1997-04-20 |
Family
ID=20163971
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU95100514A RU2077583C1 (ru) | 1995-01-18 | 1995-01-18 | Штамм "тапхар" вируса блютанга febris infecthiosa catarhaliss ovium, используемый для изготовления вакцины |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2077583C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2528057C1 (ru) * | 2013-07-25 | 2014-09-10 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии | Штамм "г 244/11" вируса блютанга 14 серотипа для вирусологических исследований, изготовления вакцинных и диагностических препаратов |
-
1995
- 1995-01-18 RU RU95100514A patent/RU2077583C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
1. Campbell C.H. et al. Canadian j of Microbiol&- 1975, v.21, N 12, p.2098. 2. Office Jnternational des Epizooties Bluetongue.- 1990. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2528057C1 (ru) * | 2013-07-25 | 2014-09-10 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии | Штамм "г 244/11" вируса блютанга 14 серотипа для вирусологических исследований, изготовления вакцинных и диагностических препаратов |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU95100514A (ru) | 1997-03-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Rapp et al. | SV40-adenovirus" hybrid" populations: transfer of SV40 determinants from one type of adenovirus to another. | |
US3520972A (en) | Feline virus vaccines obtained by propagation and serial passage attenuation of virulent feline viruses in diploid feline embryo tissue cell serial passage subculture strains | |
EP0027347B1 (en) | Feline infectious peritonitis virus, its preparation and vaccines containing it | |
US4058598A (en) | Cytomegalovirus attenuation method and vaccine | |
EP0011864A1 (en) | Attenuated strain of feline infectious peritonitis virus, method for preparing it and vaccine comprising it | |
RU2077583C1 (ru) | Штамм "тапхар" вируса блютанга febris infecthiosa catarhaliss ovium, используемый для изготовления вакцины | |
US4021302A (en) | Cell cultures | |
CA2178553A1 (en) | Marek's disease vaccine | |
RU2388489C1 (ru) | Способ изготовления вакцины ассоциированной против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий | |
RU2538158C1 (ru) | Способ изготовления вакцины, ассоциированной против эшерихиоза, стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота | |
US3098011A (en) | Process of producing a vaccine against distemper | |
JPH0341034A (ja) | ネコ科動物感染性腹膜炎ワクチン | |
RU2184567C1 (ru) | Штамм feline calicivirus, используемый для контроля иммуногенной активности вакцин, изготовления специфических лечебно-профилактических и диагностических биопрепаратов | |
RU2316345C1 (ru) | Способ изготовления вакцины ассоциированной против колибактериоза, сальмонеллеза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий | |
Wecker | The use of RD cells in the isolation of Echo type 30 virus from patients with aseptic meningitis | |
RU2288002C1 (ru) | Способ изготовления вакцины против энтерококковой инфекции нутрий | |
RU2204599C1 (ru) | Штамм № 1734 "приморский-2000" вируса ящура типа о для изготовления диагностических и вакцинных препаратов | |
Jansson et al. | Search for mycoplasma in rheumatoid arthritis. | |
RU2140452C1 (ru) | Штамм n 1707 "армения-98" вируса ящура типа a для изготовления диагностических и вакцинных препаратов | |
RU2301077C1 (ru) | Способ изготовления вакцины ассоциированной против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий | |
RU2429880C1 (ru) | Способ изготовления вакцины ассоциированной против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов | |
RU2215031C1 (ru) | Штамм feline herpesvirus-1, используемый для контроля иммуногенной активности вакцин, изготовления специфических лечебно-профилактических и диагностических биопрепаратов | |
RU2391114C1 (ru) | Способ изготовления вакцины против блютанга крупного и мелкого рогатого скота (варианты) и вакцина против блютанга крупного и мелкого рогатого скота | |
RU2284830C1 (ru) | Способ получения инактивированной вакцины против вибриоза рыб | |
RU2081912C1 (ru) | Штамм вируса краснухи "орлов-в" для получения вакцины |