CS205722B1 - Spfisob pripravy polysacharid-bielkovinových komplexov - Google Patents
Spfisob pripravy polysacharid-bielkovinových komplexov Download PDFInfo
- Publication number
- CS205722B1 CS205722B1 CS106979A CS106979A CS205722B1 CS 205722 B1 CS205722 B1 CS 205722B1 CS 106979 A CS106979 A CS 106979A CS 106979 A CS106979 A CS 106979A CS 205722 B1 CS205722 B1 CS 205722B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- polysaccharide
- protein
- preparation
- epichlorohydrin
- protein complexes
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 14
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 16
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 16
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 14
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 claims description 5
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 5
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 5
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 5
- 125000001302 tertiary amino group Chemical group 0.000 claims description 4
- -1 N, N-diethylamino-2-hydroxypropyl Chemical group 0.000 claims description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 2
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 2
- 229920001425 Diethylaminoethyl cellulose Polymers 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 11
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 11
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 9
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 9
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 241000248770 Salea Species 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- OHVLMTFVQDZYHP-UHFFFAOYSA-N 1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-2-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]ethanone Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)C(CN1CCN(CC1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)=O OHVLMTFVQDZYHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 101000740205 Homo sapiens Sal-like protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100037204 Sal-like protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000006225 natural substrate Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Chemical class 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Description
-ČESKOSLOVENSKÁ SOCIALISTICKÁ
REPUBLIKA (19) POPIS VYNÁLEZU 205 722 M : (Bi)
K AUTORSKÉMU OSVEDČENIU
(61) (23) Výstavná priorita (22) Přihlášené 19 02 79 (21) PV 1069-79 (51) Int. Cl. C 08 L 5/00
ÚŘAD PRO VYNÁLEZY
AOBJEVY * (40) Zverejnené 29 08 80(45) Vydané Q1 θ9 g3
Autor vynálezu GEMEINER PETER ing., CSc., DROBNICA tUDOVÍT doc. ing. DrSc., ANTAL MIROSLAVprom. chem. a KUNIAK tUDOVÍT ing. CSc., BRATISLAVA (54) Spdsob přípravy polysacharid-bielkovinových komplexov 1
Vynález sa týká spfisobu přípravy polysacharid-bielkovinových komplexov vhodných naizoláciu a purifikáciu proteolitických enzýmov. V poslednej době sa dosiahli dobré výsledky při izolácii a purifikácii proteolytickýchenzýmov použitím afinitnej chromatogrefie. Ako afinanty sa tu používali napr. modifikova-né D-aminokyseliny, peptidy zložené z D-aminokyselín či špecifické inhibitory bielkovino-vej povahy (Methods in Enzymology 19 (Proteolytic Enzymes) 1970; Methods in Enzymology 34(Affinity Techniques) 1974). VSčšina z generálnych afinantov tohto typu vzhTadom k náročnéjpřípravě zatial’ nenašla praktické uplatnenie. Z tohto hlediska sa ako afinanty perspektiv-né javia Tahšie dostupné bielkoviny, napr. sérové či vaječné albuminy, ktoré sú prirodze-nými substrátmi proteolytických enzýmov. Použitie takýchto afinantov je ovšem spojené s ichúpravou vedúcou k strate substrátových vlastností pri zachovaní afinity voči proteolytic-kým enzýmom.
VzhTadom k tomu, že vSčšina uvedených afinantov sa viaže na polysacharidy cez svojeaminoskupiny, pri ich viazaní sa vychádzalo z polysacharidov predtým aktivovaných vysoko-toxickým bromkyánom'(P. Cuatrecasas, J. Biol. Chem. 245/. 1970/3059; J. Porath, T. Kristian-sen, The Proteine, 3rd edn, Vol. 1, pp. 95-179; 1975)·
Naše výsledky výskumu v tejto oblasti ukázali, že polysacharid-bielkovinové komplexyje možné pripraviť jednostupnovpu reakciou polysacharidu obsahujúceho terciárně aminosku-piny s bielkovinou v přítomnosti epichlorhydrínu tak, že ich potom možno použiť na izolá- 205 722 2057221 ciu a purifikáciu proteeolytických enzýmov.
Podstata vynálezu spočívá v tom, že polysacharid obsahujáci terciárně eminoskupiny,výhodné 0-/N,N-<dietylamino-2-hydroxy-propyl .(DEAHP) sieťovaný Škrob alebo O-/N,N-dietyl-aminoetyl (DEAE) celulóza, sa nechá reagovat s bielkovinou výhodné vaječným alebo sérovýmalbumínom rozpuštěným v tlmivom roztoku pH 8' až 9 za použitia 2 až 80 % epichlórhydrínu naváhu suchého polysacharidu, za stálého miešania, po dobu 1,5 až 3 hodin, pri laboratórnejteplote, pri hydromodule 10 až 11, načo sa produkt premýva vodou, 1 M chloridom sodným,znovu vodou až do negativnéj reákcie na bielkoviny u každého z eluentov., a nakoniec naj-prv vol’ne a potom vákuovo pri 40 °C sa vysuší.
Najvýhodnejší z polysacharidov je sieťovaný Škrob pre značná reaktivitu jeho hydroxy-lových skupin, relativné velké rozměry zrna a dobrá filtrovatelnosť. Zavedenie DEAHP sku-piny ako terciárneho aminu vo funkcii vnátorného katalyzátore je výhodné tak z ekonomic-kých dčvodov, ako i s ohladom na vlastnosti konečného produktu (čs. autorské osvedčenieč. 168 055)'.
Sieťovénie Škrobu s epichlorhydrinom je volené tak, aby napáčací objem sa pohybovalv medziech 10 až 15 ml/g, viazanie terciárnych aminoskupín na polysacharid zase tak, abyvýměnná kapacita anexu vykazovala hodnoty 0,6 až 1 mekv/g. Bielkovinu je potom možné via-zať už a malými prídavkami epichlórhydrínu, pričom produkt·obsahuje do 0,2 g bielkovinynaviazanej na 1 g polysacharidu. Takýto produkt má hydrodynamické vlastnosti východiskové-ho polysacharidu.
Po ukončení reakcie je nutné produkt dĎkladne odsať a před sušením jemne rozotrieťna filtračnom papieri. -
Suchý polysacharid-bielkovinový komplex s obsahom bielkoviny 0,2 g/g polysacharidu.je vhodným materiálom na izoláciu a purifikáciu proteolytických enzýmov. Výhodou navrhovaného spĎsobu přípravy polysacharid-bielkovinových komplexov pre izo-láciu a purifikáciu proteolytických enzýmov je, že: - umožňuje připravit produkty 8 obsahom do 1 g. bielkoviny na 1 g polysacharidu, - viazanie bielkoviny na polysacharidový nosič je jednostupňové, - vychádza z netoxických chemikálií, , ť* - preparáty možno vyrábať z, domácích lacných surovin poměrně jednoduchým technologickýmpostupom, - viazanie bielkoviny na polysacharidový nosič prebieha v miernych podmienkach, - viazanie bielkoviny na polysacharidový nosič možno viesť tak, aby bielkovina stratilasvoje substrátové vlastnosti pri zachovaní afinity voči proteolytiekým enzýmom. Příklad 1 11 g suchého DEAHP siěťovaného škrobu s napáčacímobjemom 12,5 ml/g a s výměnnou ka-pacitou 0,6 mekv/g sa nechá napúčať v 110 ml 0,5 uhličitanového tlmivého roztoku pH 9 ob—sahujáceho 27,5 g vaječného albuminu a za stálého miešania, při laboratorněj teplote, sa 2J) S 722 prikvapkáva 0,55 ml epichlorhydrínu. Zmes aa nechá miešať 2 hodiny, produkt sa premyje vo-dou, 1 M chloridom sodným a znovu vodou do negativnéj reakcie na bielkoviny v ka'ždom z eluátov. Po dĎkladnom odsáti sa produkt volné vysuší na filtračnom papieri a vákuovo dosuší při40 °C. Preparát obsahuje 2,2 g naviazaného albuminu. Příklad„2 \ .
Postup podl’a příkladu 1 s tým rozdielom, že prikvapkávame 2,8 ml epichlorhydrínu,a Sálej pokračujeme ako v příklade,1.
Preparát obsahuje 8,1 g naviazaného albuminu. Příklad 3
Postup podlá příkladu 1 s tým rozdielom, že prikvapkávame 5,15 ml epichlorhydrínu,a Sálej pokračujeme ako v příklade 1. *
Preparát obsahuje 10,2 g naviazaného albuminu. Příklad 4
Postup ako v příklade 1 s tým rozdielom, že prikvapkávame 7,45 ml epichlorhydrínu,a Sálej pokračujeme ako v příklade 1.
Preparát obsahuje 10,8 g naviazaného albuminu. Příklad 5
Postup podlá příkladu 1 s tým rozdielom, že použijeme 0,5 M fosforečnanový tlmivýk pH 8, a Sálej pokračujeme ako v příklade 1. ♦
Preparát obsahuje 1,35 g naviazaného albuminu. Příklad 6
Postup podlá příkladu 1 s tým rozdielom, že použijeme 11 g DEAE celulózy s výměnnoukapacitou 1,0 mekv/g, a Sálej pokračujeme ako v příklade 1.
Preparát obsahuje 1,8 g naviazaného albuminu. Příklad 7
Postup podlá příkladu 4 s tým rozdielom, že přidáme 8,25 g vaječného albuminu, a Sálejpokračujeme ako v příklade 4.
Preparát obsahuje 4,75 g naviazaného albuminu. Příklad 8
Postup podlá příkladu 4 s tým rozdielom, že přidáme 13,75 g vaječného albuminu, a Sá-lej pokračujeme ako v příklade 4.
Preparát obsahuje 8 g naviazaného albuminu. Příklad 9
Postup podlá přikladu 4 s tým rozdielom, že použijeme 8,25 g hovfidzieho sérového
Claims (1)
- 205 722 I albuminu, a Sálej pokračujeme ako v přiklade 4· Preparát obsahuje 4,5 g naviazaného albuminu. Vynález má uplatnenie všade, kde je potřebné izolovat alebo purifikovať proteolytickéenzýmy či už v priemyselnej praxi alebo vo výskume. PBBDMET V ϊ N Á L £ Z U Spňaob přípravy polysacharid-bielkovinových komplexov, vyznačujúci sa tým, že polysa-charid obaahujúci terciárně aminoskupiny, výhodné O-/N,N-dietylamino-2-hydroxypropyl/sieťo-vaný škrob alebo 0-/N,N-dietylaminoetyl/celuloza, aa nechá reagovat 8 bielkovinou výhodnévaječným alebo sérovým albumínom rozpuštěným v tlmivom roztoku pH 8 až 9 za použitia 2 až80 % epichlórhydrlnu na váhu suchého polysacharidu, za stálého miešania, po dobu 1,5 až3 hodin, pri laboratorněj teplote, pri hydromodule 10 až 11, načo sa produkt premýva vo-dou, 1 M chloridom sodným, znovu vodou až do negativnej reakcie na bielkoviny u každéhoz eluentov, a nakoniec najprv na vzduchu a potom vákuovo při 40 °C vysuší. Vytiskly Moravské tiskařské závody,provoz 12, Leninova 21, Olomouc Cena: 2,40 Kčs
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS106979A CS205722B1 (cs) | 1979-02-19 | 1979-02-19 | Spfisob pripravy polysacharid-bielkovinových komplexov |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS106979A CS205722B1 (cs) | 1979-02-19 | 1979-02-19 | Spfisob pripravy polysacharid-bielkovinových komplexov |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS205722B1 true CS205722B1 (cs) | 1981-05-29 |
Family
ID=5344118
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS106979A CS205722B1 (cs) | 1979-02-19 | 1979-02-19 | Spfisob pripravy polysacharid-bielkovinových komplexov |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS205722B1 (cs) |
-
1979
- 1979-02-19 CS CS106979A patent/CS205722B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US3788948A (en) | Method of binding,by covalent bonds,proteins and polypeptides to polymers using cyanates | |
| Weetall et al. | The chemistry and use of cellulose derivatives for the study of biological systems | |
| US4330440A (en) | Activated matrix and method of activation | |
| Cuatrecasas et al. | [31] Affinity chromatography | |
| US3645852A (en) | Method of binding water-soluble proteins and water-soluble peptides to water-insoluble polymers using cyanogen halide | |
| US3836433A (en) | Fixation of nitrogenous materials | |
| US4411832A (en) | Polysaccharide matrices comprising macromolecular spacer arms for use as adsorbents in affinity chromatography techniques | |
| Matsumoto et al. | Activation of sepharose with epichiorohydrin and subsequent immobilization of ligand for affinity adsorbent | |
| US4195128A (en) | Polymeric carrier bound ligands | |
| US4229537A (en) | Preparation of trichloro-s-triazine activated supports for coupling ligands | |
| US4822681A (en) | Activated polymer solid bodies and processes for the production thereof | |
| US4269605A (en) | Method and kit for separation of glycoproteins | |
| US4874813A (en) | Proteins bound to a marker or solid phase support matrix using a hydrazone linkage | |
| US4224439A (en) | Activated matrix and method of activation | |
| US3959079A (en) | Insolubilization of proteins by chemical activation of a polymerized support and crosslinking of the protein to the support | |
| Bethell et al. | Investigation of the activation of various insoluble polysaccharides with 1, 1′-carbonyldiimidazole and of the properties of the activated matrices | |
| JPS61181966A (ja) | カルボキシル基でつながれた固定化抗体 | |
| US4245064A (en) | Activated solid carrier and a method of its preparation | |
| US4286964A (en) | Polyfunctional epoxides and halohydrins used as bridging groups to bind aromatic amine group-containing alcohols and thiols to hydroxyl bearing substrates | |
| US3853708A (en) | Coupling biologically active substances to oxirane-containing polymers | |
| Turková et al. | Immbilization on cellulose in bead form after periodate oxidation and reductive alkylation | |
| Steers Jr et al. | [34] β-Galactosidase | |
| WO1988002776A1 (en) | A novel immunoaffinity purification system | |
| Fudem-Goldin et al. | [17] 2-Iminobiotin-containing reagent and affinity columns | |
| CS205722B1 (cs) | Spfisob pripravy polysacharid-bielkovinových komplexov |