CS205508B1

CS205508B1 - Diluent for the conservation of the boar sperm

Info

Publication number: CS205508B1
Application number: CS271779A
Authority: CS
Inventors: Jaroslav Hovorka
Original assignee: Jaroslav Hovorka
Priority date: 1978-09-15
Filing date: 1978-09-15
Publication date: 1981-05-29

Description

Vynález řeší konzervaci kančího semene se zaměřením na zdravotní aspekty této problematiky.The invention solves the conservation of boar semen with a focus on the health aspects of this issue.

V současná době se při zpraoování semene plemennýoh kanoů používá technologie, která zajišťuje konzervaci semene při 15 až 16 °C po dobu 24 h bez poklesu březosti a plodnosti· V podstatě se používají dva typy ředidel: a) bez žloutku, podle Pllška, b) se žloutkem, podle Sadovnikové a podle Serdžuka. Ředidlo podle Pliška je užíváno při nižšíoh poměrech ředění, jeho nevýhodou je, že neobsahuje vaječný žloutek, který zabraňuje shlukování spermií, a tím prodlužuje i použitelnost takto ředěného semene. Proosnto přežívajících spermií ss však 1 při použití tohoto ředidla po 24 h významně snižuje a nezajišťuje podmínky pro dobrou březost a plodnost. Nevýhody bezžloutkového ředidla do značná míry odstraňuji ředidla podle Sadovnikové a podle Serdžuka, která umožňují podstatné prodloužení přežltelnosti spermií. Tato ředidla se liší ve způsobu pufrování a možnosti zvýšeného obsahu žloutku v ředidle podle Serdžuka. Ani jedno z těohto ředidel neřeší optimálně osmotioké poměry v ředěném semeni při nižšíoh stupníoh ředění· Ve všéoh třeoh případeoh uváděnýoh dosud užívaných ředidel js použito k antibiotikování penicilinu a streptomyoinu, Tento způsob antibiotikování nesplňuje požadavky a potřeby současné praxe·At present, the technology used to process the seed of breeding canoes ensures the preservation of the seed at 15 to 16 ° C for 24 hours without decreasing pregnancy and fertility. Basically, two types of diluents are used: a) without yolk, according to Plisk, b) with yolk, according to Sadovnik and Serjuk. The thinner according to Plišek is used at lower dilution ratios, its disadvantage is that it does not contain egg yolk, which prevents sperm agglomeration and thus extends the applicability of such diluted seed. However, the survival rate of spermatozoa ss 1 significantly decreases after 24 hours when using this diluent and does not provide good pregnancy and fertility conditions. The disadvantages of the yolk-free diluent are largely eliminated by Sadovnik and Serjuk diluents, which allow a substantial prolongation of spermatozoa. These diluents differ in the manner of buffering and the possibility of increased yolk content in the Serjuke's diluent. Neither of these diluents solves optimally osmotic conditions in the diluted seed at lower dilution steps · In all three cases of the previously used diluents used to antibiotic penicillin and streptomyoin, this method of antibiotic does not meet the requirements and needs of current practice ·

Výš* uvedené nedostatky jsou odstraněny ředidlem pro konzervaoi semene kanoů podláThe above-mentioned deficiencies are remedied by the canoe seed preservative diluent

205 50tí205 50tí

209 908 vynálezu, které obsahuje na 1 000 ml redestllované vody, 1,8 g natrlumoltrátu dihydrítstpNo. 209 908 of the invention, which contains 1.8 g of dihydrite sodium per 1000 ml of redistilled water

1,6 g ohelatonu III, 0,5 g hydrogenuhličitanu sodného, 50 až 60 g glukózy pro analýz!, až 50 ml vaječného žloutku a antibiotiokou srnče, která je tvořena 200 až 300 mg Linkomyolnu, 200 až 300 mg Erythromyolnu a 500 mg Streptomyolnu, Respektuje fyzlologioké požadavky spermií v ředčném semeni z hlediska osmotlokýoh poměrů podle stupně ředění, kvality a osmotloké úrovně získaných ejakulátů, oož má praktický význam při použití po 24 hodinách konzervace a déle. Možnost zvýšeného obsahu žloutku umožňuje v závislosti na jeho kvalitě prodloužení přežltelnostl spermií. Zásadní otázkou věak je způsob antlblotlkování, který se významnou měrou podílí na zajištění zdravotní nezávadnosti inseminační dávky. Tím js dána nejen úroveň výsledků reprodukoe, ale 1 úroveň zdravotního stavu vyprodukovaného potomstva.1.6 g of ohelatone III, 0.5 g of sodium bicarbonate, 50 to 60 g of glucose for analysis, up to 50 ml of egg yolk and roe deer antibiotic consisting of 200 to 300 mg of Linkomyolin, 200 to 300 mg of Erythromyolin and 500 mg of Streptomyolin It respects the physiological requirements of semen in the dilute semen in terms of osmotloxal ratios according to the degree of dilution, quality and osmotlox level of the ejaculates obtained, which is of practical importance when used after 24 hours of preservation and longer. The possibility of increased yolk content allows, depending on its quality, prolongation of spermatozoa. However, the fundamental question is the method of antlblotting, which plays an important role in ensuring the safety of the insemination dose. This gives not only the level of reproduction results, but 1 level of health of the offspring produced.

U varianty I zvýšením osmotlokého tlaku ředidla dojde k tomu, že se vyrovnají osmotloké poměry v ředěném semeni k hranioi blízké fyzlologiokému optimu. Tím se zamezí možnosti bobtnání až svlékání akrosomů a tím 1 unikání akrosomálníoh enzymů do semenné plasmy, což jo spojeno so snížením fertility takto ředěného semene. Snižuje se 1 možnost použití po 24 h konzervace z toho důvodu, že se dostavuje snížení březosti a plodnosti. Snižuje se pohyblivost ředěného semene a kvalita tohoto pohybu. Tato varianta má své plné opodstatnění při použití do ředění lt5.In variant I, by increasing the osmotic pressure of the diluent, the osmotic ratios in the diluted seed to the near-physiological optimum boundary are equalized. This avoids the possibility of swelling or stripping of the acrosomes, and thus the escape of the acrosomal enzymes into the seminal plasma, which is associated with a decrease in the fertility of the diluted seed. One possibility of use after 24 hours of preservation is reduced because of a decrease in pregnancy and fertility. The mobility of the diluted seed and the quality of this movement are reduced. This variant is fully justified when used in lt5 dilution.

Varianta II je na úrovni osmotlokýoh poměrů ředidla podle Sadovnlkové a Serdžuka, přičemž nejvhodnější ředění jsou z hlediska osmotlokýoh poměrů ředění nad 1:5« Je však nutno počítat s tím, že při ředěních nad 1:10 může dojít ke snížení počtu selat ve vrhu.Option II is at the level of the osmotlokyoh diluent ratios of Sadovnlkov and Serjuk, with the most suitable dilutions in terms of osmotlokyoh dilution ratios above 1: 5. However, dilutions above 1:10 may reduce the number of piglets in the litter.

Vyřešením účinného antlbiotikování ředidla pro přípravu lnseminačních dávek je dána možnost cíleně zasáhnout a ovlivňovat mikrofloru se vztahem k reprodukčnímu aparátu jak ze strany kanoe, tak i prasnice, zábrana přenosu zárodků k antibiotikům citlivých prostřednictvím inseminační dávky. Speciálně je to použití antibiotik, které likvidují zárodky ze skupiny Myooplasmat, které dnes používaná antibiotika nepotlačují. Nelze opomenout účinný zásah proti zárodkům, působícím hnisavé endomotritldy, které jsou v dnešní době převážně k používaným antibiotikům necitlivé. Instilaoe těohto účinných nespermioldníoh antibiotik do dělohy prasnice v inseminační dávce vede k eliminaci veškeré podmíněně patogenní mlkroflory k antibiotikům citlivá, což má příznivý vliv na reprodukční ukazatele, zejména březost a plodnost. Použití nespermloidního Streptomycinu má své místo v případech výekytu mlkroflory k tomuto antibiotiku citlivé.By solving the effective anti-biotics of the diluent for the preparation of seed doses, it is possible to specifically target and influence the microflora related to the reproductive apparatus by both the canoe and the sow, preventing the transfer of germs to antibiotics sensitive through the insemination dose. Specifically, it is the use of antibiotics that kill Myooplasmat germs that do not suppress the antibiotics used today. One should not forget the effective action against germs that cause purulent endomotrites, which today are mostly insensitive to the antibiotics used. Instillation of these potent non-sperm antibiotics into the uterus of the sow at the insemination dose results in the elimination of all conditionally pathogenic microflora sensitive to antibiotics, which has a beneficial effect on reproductive performance, in particular pregnancy and fertility. The use of non-spermloid Streptomycin has its place in cases of occurrence of microflora sensitive to this antibiotic.

Složení ředidla:Solvent composition:

Komponenty: Components: Varianta I Variant I Varianta II Variant II Agua redestillata Agua redestillata 1000 ml 1000 ml 1000 ml 1000 ml Glukóza pro analýzi Glucose for analysis 60 g 60 g 50 až 51 g 50 to 51 g Natriumoitrát dlhydrát Sodium citrate dlhydrate 1,8 g 1.8 g 1,8 g 1.8 g Hydrogenuhličitan sodný Sodium bicarbonate 0,5 S 0.5 S 0,5 g 0.5 g

Chelaton III 1,6 g 1,6 gChelaton III 1.6 g 1.6 g

Vaječný žloutek 30 až 50 ml 20 až 40 mlEgg yolk 30 to 50 ml 20 to 40 ml

205 508205 508

Použití při poměru ředění do 1:5 nad 1:5 antibiotlkování:Use at dilution ratio up to 1: 5 over 1: 5

Línkorayoin 200 až 300 mgLinkorayoin 200-300 mg

Srythromyein 200 až 300 mgSrythromyein 200-300 mg

Streptomyein 500 mgStreptomyein 500 mg

Příprava ředidla:Solvent preparation:

Destilovaná voda se nechá přejít varem a zchladí se na 35 °C. Přidá se navážená množství citrátu, bicarbonátu, chelatonu a glukózy, nechá se rozpustit (takto připravený roztok se může uchovávat při 15 °C ve tmě po dobu 24 hodin. Těsně před použitím se přidá vaječný žloutek a antibiotika. Antibiotika se předem rozpustí v malém objemu připravovaného ředidla, potom v celém objemu. Před zařazením každé nové šarže antibiotik nutno provést zkoušku na spermloldnost. Sterilně připravený vaječný žloutek se před použitím řádně rozmlxuje. Ředidlo se po přidání chelatonu nesmí zahřát na teplotu vyšší, než 35 °C. Připravené ředidlo musí mít pH 6,6 až 6,9, teplota uchování ředěného semene je 14 až 16 °C.The distilled water was boiled and cooled to 35 ° C. Add weighed amounts of citrate, bicarbonate, chelatone and glucose, allow to dissolve (this solution can be stored at 15 ° C in the dark for 24 hours. Egg yolk and antibiotics are added just prior to use. Antibiotics are previously dissolved in a small volume The sterile prepared egg yolk must be thoroughly comminuted before use, before the addition of each new antibiotic batch The diluent must not be heated above 35 ° C after the addition of chelatone. pH 6.6 to 6.9, the storage temperature of the diluted seed is 14 to 16 ° C.

Vaječné žloutky zdravotně nezávadné by bylo možné použit 1 mražené. Ředidlo podle vynálezu by bylo možné vyrábět i centrálně tak, že jako 1.komponenta by byl citrát, bikarbonát a ohelaton, 2. komponentou glukosa a 3. komponentou antibiotika. Další dvě komponenty» tj. vaječný žloutek a redestllovaná voda by byly dodávány až na plemenářské staniol.Healthy egg yolks could be used 1 frozen. The diluent according to the invention could also be produced centrally such that as component 1 it would be citrate, bicarbonate and ohelatone, component 2 glucose and component 3 antibiotic. The other two components, ie egg yolk and redistilled water, would be supplied to the breeding tinfoil.

Výsledky zkoušekTest results

Tabulka I uvádí výsledky vyšetření motility v procentech živých spermií po 48 a 72 hodinách konzervace v ředidle v současné době používaném (spodní číslo) a v ředidle novém (horní číslo). Získaný ejakulát byl zpracován obvyklou technologií, která je používána na plemenářských stanicích. Před vlastním ředěním byl rozdělen na část, která byla zpracována používaným ředidlem a část, která byla zpracována ředidlem podle vynálezu.Table I shows the results of motility testing as a percentage of live spermatozoa after 48 and 72 hours of preservation in the diluent currently used (lower number) and in the new diluent (upper number). The obtained ejaculate was processed by the usual technology, which is used at breeding stations. Prior to dilution, it was divided into a portion that was treated with the diluent used and a portion that was treated with the diluent of the invention.

Tabulka I motilitaTable I motility

Státní registr kance State Boar Register poměr ředění dilution ratio po 48 h after 48 h po 72 h after 72 h RR 88 RR 88 1:6 1: 6 60 60 60 60 50 50 40 40 Ter 10 Ter 10 1:6 1: 6 60 60 50 50 60 60 50 50 Bít 71 Hitting 71 1:6 1: 6 80 80 80 80 60 60 50 50 Pt 4 Pt 4 1:10 1:10 80 80 80 80 40 40 30 30 Kom 9 Kom 9 1:6 1: 6 80 80 80 80 40 40 20 20 May Jao 7 Jao 7 1:10 1:10 90 90 90 , 90, 60 60 50 50 Kom 43 Kom 43 1:10 1:10 60 60 50 50 65 65 55 55 Jac 19 Jac 19 1:10 1:10 50 50 30 30 60 60 50 50 Jao 9 Jao 9 1:10 1:10 50 50 40 40 50 50 40 40 Te 1 Te 1 1:10 1:10 70 70 50 50 50 50 30 30

203 S08203 S08

Celkem vzorků 10 10 nevyhovuje ČSN pokuenýoh 0 2 nevyhovuje CSN kontrolních 2 5Total samples 10 10 do not comply with CSN 0 0 does not meet CSN control 2 5

Tabulka II uvádí vliv rozdílná konoentraoe glukózy na počet vzorků se zbobtnalými akrosoay u více než 10 % spermií. Semeno bylo fixováno roztokem podle Hankooka a barveno metodou podle Glemay. Nátěry byly zhotoveny ze semene neředěného a ředěného po 24 h. konzervaci při použití ředidla s 60 g a 51 g glukózy.Table II shows the effect of different glucose concentra- tion on the number of swollen acrosoam samples in more than 10% of spermatozoa. The seed was fixed with a Hankook solution and stained by the Glemay method. The coatings were made from seed undiluted and diluted after 24 h. Preservation using 60 g and 51 g glucose diluent.

Tabulka II při použití 60 g glukózy počet vzorků poměr ředění do 1:5 21 nad 1:5 20 při použití 51 g glukózy poměr ředění do 1:5 38 nad 1:5 24 nevyhovujíoíoh neředěných ředěnýohTable II using 60 g glucose number of samples dilution ratio up to 1: 5 21 over 1: 5 20 using 51 g glucose dilution ratio up to 1: 5 38 over 1: 5 24 not satisfactory undiluted diluted

22

11

2828

1212

Do ředění 1:5 je zajištěna mořfologioká neporušenost akrosomu při dávce glukózy 60 g, při vyěěíoh ředěních nad 1:5 při 60 g i 51 g, při 51 g a ředění nad 1:5nedochází k nárůstu dalžího poškození akrosomu.Up to a 1: 5 dilution, the morphologic integrity of the acrosome is assured at a glucose dose of 60 g, at higher dilutions above 1: 5 at 60 g and 51 g, at 51 g and a dilution above 1: 5 there is no increase in further damage to the acrosome.

Tabulka III uvádí výsledky bakteriologického vyšetření semene neředěného a semene ředěného. Pro srovnání se uvádějí výsledky bakteriologického vyšetření při použití antibiotlkování podle současného stavu.Table III shows the results of bacteriological examination of undiluted seed and diluted seed. For comparison, the results of bacteriological examination using antibiotic according to the present state are presented.

Tabulka IIITable III

Státní reg. kanoe State Reg. Canoe semeno neředěné seed undiluted semeno ředěné seed diluted Nik 59 Nik 59 bez nálezu without finding bez nálezu without finding Ntl 44 Ntl 44 E.ooli E.ooli bez nálezu without finding Ntl 45 Ntl 45 E.ooli E.ooli bez nálezu without finding Vso 90 Vso 90 E.ooli, mikrokoky E.ooli, micro cocci bez nálezu without finding Mg 51 Mg 51 E. ooli, mikrokoky E. ooli, micro cocci bez nálezu without finding Mg 67 Mg 67 E.ooll E.ooll bez nálezu without finding Jor 65 Jor 65 E.ooli, Próteus E.ooli, Proteus bez nálezu without finding Hap 5 Hap 5 E.ooli, Próteus E.ooli, Proteus bez nálezu without finding Ori 17 Ori 17 oolifonaní zár. oolifonaní zár. bez nálezu without finding Sh 29 Sh 29 oolifonaní zár. Próteus oolifonaní zár. Proteus bez nálezu without finding Ost 11 Ost 11 oolifonaní zár. oolifonaní zár. bez nálezu without finding Mks 14 Mks 14 oolifonaní zár. Próteus oolifonaní zár. Proteus bez nálezu without finding Zak 112 Zak 112 oolifonaní zár. Próteus oolifonaní zár. Proteus bez nálezu without finding Mg 69 Mg 69 oolifonaní zár. Próteus oolifonaní zár. Proteus bez nálezu without finding Vso 87 Vso 87 oolifonaní zár. Próteus oolifonaní zár. Proteus bez nálezu without finding

205 508205 508

AI 5 AI 5 oolifoxraní zár. Próteus oolifoxraní zár. Proteus bez nálezu without finding He 1 He 1 colif. zár. Plavobaoter Pseudomoaas aerug. colif. heat. Plavobaoter Pseudomoaas aerug. bez nálezu without finding Ost 7 Ost 7 colif, z. Plavobact., mikrokoky colif z. Plavobact., micrococci bez nálezu without finding Bil 2 Bil 2 E.coli E.coli bez nálezu without finding OA 25 OA 25 coliformní zár. Próteus coliformní zár. Proteus bez nálezu without finding Kom 43 Kom 43 Próteus, E.coli Proteus, E. coli bez nálezu without finding Pl 198 Pl 198 Próteus, E.coli Proteus, E. coli bez nálezu without finding Celkem Total 22 vzorků 22 samples 22 vzorků 22 samples bez nálezu without finding 1 vzorek 1 sample 22 vzorků 22 samples

Statistická vyhodnocení» X²^)- 40,17 - vysoce statisticky průkazné saíSeaí počtu kontaminovaných vzorků po ředění navrženým ředidlemStatistical evaluation »X ² ^ - 40,17 - highly statistically significant number of contaminated samples after dilution with the proposed diluent

Srovnání se současným stavem:Comparison with the current situation:

Ředidlo s penicilinem - ze 68 vzorků ředěných 17 bez nálezu ze 74 vzorků neředěných bylo 14 bez nálezuThinner with penicillin - out of 68 samples diluted 17 without finding out of 74 samples undiluted 14 without finding

2*₍₁₎- °»T7 nelze prohlásit, že má vliv na bakteriologické nálezy2 * ₍₁₎ - ° »T7 cannot be said to affect bacteriological findings

Ředidlo z penicilinem a streptomycinem - ze 74 vzorků neředěných bylo 14 bez nálezu ze 32 vzorků ředěných bylo 6 bez nálezuThinner with penicillin and streptomycin - out of 74 samples undiluted, 14 were not found out of 32 samples were diluted 6 were not found

X²^- ^0,00 nelze prohlásit, že má vliv na bakteriologické nálezyX ² ^ - ^0,00 cannot be said to have an effect on bacteriological findings

Rozdílné výsledky jsou dány citlivostí zárodků k použitému antibiotiku, která není zřejmě vždy stejná·Different results are due to the sensitivity of the germs to the antibiotic used, which is not always the same.

Využití ředidla podle vynálezu je možné na inseminačních stanicích· Doba použitelnosti je minimálně do 72 hodin po odběru, s možností poměru ředění i více, než 1:10. Itotilita ředěného semene byla zjištěna i po 8 dnech. Zajišíuje ve dvou variantách podle stupně ředění velmi dobrou přežitelnoet a morfologickou neporušenost spermií· Účinné antibiotikování zajišíuje vysoké prooento ejakulátů bez bakteriologického nálezu po 72 až 96 hodinách konzervace a velmi dobrou motilitu· Antibiotlcká kombinace je rovněž účinná proti zárodkům ze skupiny Myooplasmat, které zpravidla nebývají v ejakuláteoh kultivačně prokazatelné.The shelf life is at least 72 hours after collection, with a dilution ratio of more than 1:10. The dilution of the diluted seed was observed after 8 days. Provides very good survivability and morphological integrity of spermatozoa in two variants according to the degree of dilution · Effective antibiotic ensures a high percentage of ejaculate without bacteriological finding after 72 to 96 hours of preservation and very good motility · Antibiotic combination is also effective against Myooplasma germs ejaculate can be cultivated.

Zabráněním vertikálního přenosu infekčních zárodků k antibiotikům citlivých z plemeníka na plemenici lze dosáhnout lepších výsledků v reprodukci 1 v celkovém zdravotním stavu potomstva, oož mé další dopady na výkrmovou schopnost a konverzi živin, projevující se výší průměrných denních přírůstků a průměrné spotřeby krmivá na 1 kg přírůstku· Touto cestou lze preventivně ovlivňovat výskyt respiratorních onemocnění a sípavky, průjmovýoh onemocnění narozených selat, hnisavých a nehnisavých endometritid, sekundárně působených podmíněně patogenními zárodky původem z genitálního traktu prasnice· Podmínkou je vždy oitlivost výše uvedenýoh zárodků k antibiotikům· Použitím tohoto ředidla by bylo možné dosáhnout značných úspor na cestovném, které je dnes z důvodů denního zásobování chovů Insemi—By preventing the vertical transmission of infectious germs to sires susceptible antibiotics to the breed, better reproduction results 1 can be achieved in the overall health of the offspring, which has additional effects on fattening capacity and nutrient conversion resulting in average daily increments and average feed consumption per kg increment · Prevention of respiratory diseases and wheezing, diarrhea of born piglets, purulent and non-purulent endometritis, secondary to conditional pathogenic pathogens originating from the genital tract of the sow can be prevented by this route. Considerable savings on fares, which are today due to daily supply of Insemi farms—

205 508 načními dávkami značně vysoká· Při použití ředidla podle vynálezu by postačilo zásobování ohovA pouze 3krát nebo 2krát týdně·205 508 doses very high · Using the diluent according to the invention, it would be sufficient to supply the fuel only 3 or 2 times a week ·

Claims

Diluent for cannabis canned seed, containing 1000 ml of redistilled water

1.8 g of sodium hydrate dihydrate, 1.6 g of ohelatone III, 0.5 β of sodium bicarbonate,

50 to 60 g of glucose for analysis, 20 to 50 ml of egg yolk and antibiotic mixture, characterized in that the antiblock compound contains 200 to 300 mg of lincomyoin, 200 to 300 mg of srytromyoin and 500 mg of strsptomyol.