CS204002B2

CS204002B2 - Process for preparing mercaptoacylaminoacids

Info

Publication number: CS204002B2
Application number: CS781072A
Authority: CS
Inventors: Miguel A Ondetti; David W Cushman
Original assignee: Squibb & Sons Inc
Priority date: 1976-05-10
Filing date: 1978-02-20
Publication date: 1981-03-31

Description

Vynález se týká způsobu přípravy psptidu použitelného pro snižování hyper teraso vyvolané angiatensinem.The invention relates to a process for the preparation of a pseptide useful for reducing angiatensin-induced hyper Terraceo.

Angiotensin II je účinné činidlo stahující cévy, o kterém bylo nalezeno, že je hlavním činidlem působícím při vzniku renovaskulárhí hypertense.Angiotensin II is a potent vascular contracting agent that has been found to be the major agent involved in the development of renovascular hypertension.

Angiotensin II vzniká z angiotensinu I působením enzymu převádějícího angiotensin. Angiotensin I je biologuky inertní dekapeptid odštěpovaný z krevního proteinu ángiófensinogenu působením enzymu reninu [Opařil aj. New England J. of Med., 291, 389—457 (1974)]. Augiotensinogen a renin jsou také biologicky inertní.Angiotensin II is formed from angiotensin I by the action of an angiotensin converting enzyme. Angiotensin I is a biologically inert decapeptide cleaved from the blood protein of angiophensinogen by the action of the renin enzyme [Opařil et al. New England J. of Med., 291, 389-457 (1974)]. Augiotensinogen and renin are also biologically inert.

Angiotensin převádějící enzym je také odpovědný za inaktivaci bradykininu, vasodilatačního činidla účinného při regulaci renákiích funkcí (Erdos, Circulation Research 36,247(1957)].Angiotensin-converting enzyme is also responsible for the inactivation of bradykinin, a vasodilating agent effective in regulating renal functions (Erdos, Circulation Research 36,247 (1957)).

Činidla inhiibující enzym převádějící angiotensin mohou tedy působit proti tlakovému účinku angiotensinu I, protože tento účinek je způsoben pouze převedením na angiotensin II. Tato činidla se mohou použít terapeuticky při léčení forem renovaskulárhí a zhoubné hypertense, jakož i jiných forem hypertense závislé na angiotensinu [Gavrás aj., New England J. of Med. 291, 817 (1974)].Thus, angiotensin converting enzyme inhibiting agents can counteract the pressure effect of angiotensin I, since this effect is only due to the conversion to angiotensin II. These agents can be used therapeutically in the treatment of forms of renovascular and malignant hypertension as well as other forms of angiotensin-dependent hypertension [Gavras et al., New England J. of Med. 291, 817 (1974)].

Pcdle práce Opařila aj. výše, angiotensin II má hlavní roli při udržování cirkulační stejnosměrné stability u živočichů s vyčerpaným sodíkem, ale i normálních živočichů s normálním přísunem solí angiotensin II není vyžadován pro akutní udržování krevního tlaku. U různých stavů, které stlačují systém renin—angOtensin, akutní aplikace inhibitoru enzymu převádějícího angiotensin nebo aplikace blokátoru angiotensinu II snižuje krevní tlak a způsobuje zvýšení aktivity reninu v plasmě.In scaled et al above, angiotensin II has a major role in maintaining circulating DC stability in animals with depleted sodium, but also normal animals with normal angiotensin II salt intake are not required for acute blood pressure maintenance. In various conditions that depress the renin-angOtensin system, acute administration of an angiotensin-converting enzyme inhibitor or angiotensin II blocker reduces blood pressure and causes an increase in plasma renin activity.

Určité merkaptoacylaminokyseliny byly již uvedeny v literatuře. USA patent číslo 3 246 025 z 12. dubna 1966 nárokuje deriváty merkaptopropionylglycinu, které jsou použitelné pro· zesílení funkce jater a jako antidoty pro jedy, jako jsou rtuťnaté a organoarsenité sloučeniny. Viz také DOS čísloCertain mercaptoacylamino acids have already been reported in the literature. U.S. Patent 3,246,025, issued April 12, 1966, claims mercaptopropionylglycine derivatives useful for enhancing liver function and as antidotes for poisons such as mercury and organoarsenite compounds. See also DOS number

349 707. USA patent č. 3 897 480 z 29. července 1957 uvádí použitelnost N-(a-merkajptoacyl) aminokyselin pro profylaxi a terapii při léčení metaboiických nesrovnalostí, diabetes a hepatitidy. USA patent čísloU.S. Patent No. 3,897,480, issued July 29, 1957, discloses the utility of N- (α-mercaptoacyl) amino acids for prophylaxis and therapy in the treatment of metabolic irregularities, diabetes and hepatitis. US Patent Number

857 951 z 31. prosince 1974 uvádí použití 2-meir.kaptO'propionylglycinu a jeho solí s alkalickým kovem při léčení onemocnění dýchacího traktu.No. 857,951, dated December 31, 1974, discloses the use of 2-methoxycapropionylglycine and its alkali metal salts in the treatment of respiratory-tract diseases.

Bylo uvedeno, že 2-merkaptoproipionylglycin, používaný jako prostředek chránicí játra, snižuje krevní tlak při intravenosní injekci anesthesovaným krysám s normálním krevním tlakem [Schulze, Arzneim. Forseh. 22, 1433 (1972)], neslpolehlivý model [Schwarts, Meťhods in Phairmacology, Vol. 1, 12i5 (1971), Berger, Selected Pharmacologieal Testing Methods, Vol. 3, 171, 194 (1968)]; zatímco v ostatních pracích nebyl uveden účinek na krevní tlak [Fujimura et al., Nippon Yakurígaku Zasshi 60, 278—92 (1964)]. Viz také Řípa, Proč. Int. Symp. Thiola, Osaika, )apan 1970, str. 226 až ,2|30, který uvedl, že u krys β normálním krevním tlakem se zvyšuje hladina anglo'tensinogenu a snižuje hladina reninu.It has been reported that 2-mercaptoproipionylglycine, used as a liver protective agent, lowers blood pressure by intravenous injection to anesthetized rats with normal blood pressure [Schulze, Arzneim. Forseh. 22, 1433 (1972)], an unreliable model [Schwarts, Methods in Phairmacology, Vol. 1, 1215 (1971), Berger, Selected Pharmacologieal Testing Methods, Vol. 3, 171,194 (1968)]; whereas in other works the effect on blood pressure was not reported [Fujimura et al., Nippon Yakurigaku Zasshi 60, 278-92 (1964)]. See also Ripa, Why. Int. Symp. Thiola, Osaika, Apan 1970, pp. 226-202, which reported that in rats, β normal blood pressure increases anglo'tensinogen levels and decreases renin levels.

Nyní bylo* nalezeno, že určité merkaptoacylaminokyseliny jsou inhibitory enzymu převádějícího angioteinsin a při aplikaci savcům s vysokým krevním tlakem snižují nebo odstraňují hypertensi vyvolanou angio. tenšinjem.It has now been found that certain mercaptoacylamino acids are inhibitors of the angioteinsin converting enzyme and reduce or eliminate angio-induced hypertension when administered to mammals with high blood pressure. tenšinjem.

Vynález se týká určitých sloučenin použitelných pro snižování nebo odstraňování hypertense u savců. Způsob snižování krevního tlaku u hypertensních savců spočívá v tom, že se aplikuje inhibitor enzymu převádějícího angiotensin, vybraný ze skupiny sloučenin obecného vzorce I,The invention relates to certain compounds useful for reducing or eliminating hypertension in mammals. A method of lowering blood pressure in hypertensive mammals comprises administering an angiotensin-converting enzyme inhibitor selected from the group of compounds of Formula I,

R4 Rí Ra RiR4 Ri Ra Ri

R5—S—(CH)_n—OH—CO—N—CH—COOH (I) kdeR 5 -S- (CH) _n -OH-CO-N-CH-COOH (I) wherein

Rl, R2, Rí, R4 a Rs mají dále uvedený význam, nebo jejich solí.R1, R2, R1, R4 and R5 are as defined below, or a salt thereof.

Předmětem vynálezu je způsob přípravy merkaptoacylaminokyselin Obecného vzorce I,The present invention provides a process for the preparation of mercaptoacylamino acids of Formula I,

R4 R3 Ra RiR4 R3 Ra R1

Rs—S—l(CH)_n—CH—CO-N—CH—COOH (I) kdeR 5 —S — 1 (CH) _n —CH — CO — N — CH — COOH (I) wherein

Ri je aminoalkyl s 1 až 7 atomy uhlíku, gulanidinoalkyl β 1 až 7 atomy uhlíku v alkylu a v případě, že n je 1, alkyl s 1 až 7 atomy uhlíku nebo íenylalkyl s 1 až 7 atomy uhlíku v alkylu,R 1 is aminoalkyl of 1 to 7 carbon atoms, gulanidinoalkyl of β 1 to 7 carbon atoms in alkyl, and when n is 1, alkyl of 1 to 7 carbon atoms or phenylalkyl of 1 to 7 carbon atoms in alkyl,

Rž, R3 a R4 jsou stejné nebo různé, a to atom vodíku, alkyl s 1 až 7 atomy uhlíku nebo benzyl a (Rs je atom vodíku, alkanoyl β 1 až 7 atomy uhlíku nebo* benzoyl, n je 0, 1 nebo 2, nebo jejich solí, který se vyznačuje tím, že se sloučenina obeicného vzorce II,R 2, R 3 and R 4 are the same or different, namely hydrogen, alkyl of 1 to 7 carbon atoms or benzyl and (R 5 is hydrogen, alkanoyl β 1 to 7 carbon atoms or * benzoyl, n is 0, 1 or 2, or a salt thereof, characterized in that the compound of formula II,

R4 R3 Ra RiR4 R3 Ra R1

X— (CH )„—CH—CO—N—CH—COOH (H) kdeX - (CH) n - CH - CO - N - CH - COOH (H) wherein

Rl, R2, R3, R4 a n mají výše uvedený význam a kdeR1, R2, R3, R4 and n are as defined above and wherein

X je atom halogenu, nechá reagovat s aroionem thiokyseliny vzorce III,X is a halogen atom, reacted with the aroion of the thioacid of formula III,

Re—COSH (III) kdeRe — COSH (III) where

R6 je alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku nebo fenyl, za vzniku produktu obecného, vzorce I, kde Rs je alkanoyl s 2 až 7 atomy uhlíku nebo benzoyl, který se pak popřípadě převede na produkt obecného vzorce I, kde Rs je atom vodíku, amonolysou a popřípadě se sloučenina obecného vzorce I převede na sůl.R 6 is alkyl of 1 to 6 carbon atoms or phenyl, to give the product of formula I wherein R 5 is alkanoyl of 2 to 7 carbon atoms or benzoyl, which is then optionally converted to the product of formula I wherein R 5 is hydrogen, ammonolysis and optionally converting a compound of formula I into a salt.

Sloučeniny vzorce I a jejich soli, kde n je 0, Ri je aminoalkyl, guanidinoalkyl, Ra, R3, Ri a Rs mají význam uvedený výše, sloučeniny vzorce I a jejich soli, kde n je 1, Rt alkyl, benzyl, aminoalkyl, guanidinoalkyl, R2 a R3 jsou atomy vodíku, alkyly nebo benzyly, R4 je atom, vodíku a Rs má význam uvedený výše, a sloučeniny obecného vzorce a jejich soli, kde n je 2 a Ri, R2, R3, R4 a Rs mají význam uvedený výše, jsou sloučeniny nové. Ostatní sloučeniny jsou sloučeniny známé.Compounds of formula I and salts thereof, wherein n is 0, R 1 is aminoalkyl, guanidinoalkyl, Ra, R 3, R 1 and R 5 are as defined above, compounds of formula I and salts thereof, wherein n is 1, R 1 alkyl, benzyl, aminoalkyl, guanidinoalkyl , R 2 and R 3 are hydrogen, alkyl or benzyl, R 4 is hydrogen, and R 5 is as defined above, and compounds of formula and salts thereof, wherein n is 2 and R 1, R 2, R 3, R 4 and R 5 are as defined above , the compounds are new. Other compounds are known compounds.

Vynález zahrnuje způsob přípravy sloučenin způsobujících snižování nebo zmírňování hypertense vyvolané renin-angiotensinem u savců, jako jsou krysy, psi apod. Tyto typy hypertense způsobené renin-angiotenslnem zahrnují například renovaskulární hypertense a zhoubné hypertense. Vynález se tedy týká nových sloučenin popsaných výše a způsobu odstraňování nebo zmírňování hypertense vyvolané reinin-angiotensinem aplikací sloučeniny nebo sloučenin vzorce I výše. Způsob zahrnuje aplikaci účinného množství inhibitoru enzymu převádějícího angiotensin, vybraného ze skupiny zahrnující sloučeniny vzorce I, savcům s hypertensi vyvolanou renin-angiotensinem.The invention encompasses a method of preparing compounds for reducing or ameliorating renin-angiotensin-induced hypertension in mammals, such as rats, dogs, and the like. These types of renin-angiotensin-induced hypertension include, for example, renovascular hypertension and malignant hypertension. Accordingly, the invention relates to novel compounds described above and to a method of removing or ameliorating reinertin-angiotensin-induced hypertension by administering a compound or compounds of Formula I above. The method comprises administering to a mammal with renin-angiotensin-induced hypertension an effective amount of an angiotensin-converting enzyme inhibitor selected from the group consisting of compounds of formula I.

Pod výrazem alkyl se rozumí uhlovodíkový zbytek s nerozvětveným nebo rozvětveným řetězcem, obsahujícím do sedmi atomů uhlíku, jako je methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, terc.butyl, ipentyl, isopentyl, hexyl, beptyl apod. Alkylenové skupiny jsou stejného druhu. Výhodné jsou alkyly a alkyleny s 1. až 4 atomy uhlíku, a zejména jsou výhodné alkyl s alkyleny s 1 až atomy uhlíku. Alkanoylové skupiny jsou acylové zbytky nižších mastných kyselin, jako je acetyl, propionyl, butyryl apod. Výhodné jsou acyly s 2 až 4 atomy uhlíku.The term alkyl refers to a straight or branched chain hydrocarbon radical containing up to seven carbon atoms, such as methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, tert-butyl, ipentyl, isopentyl, hexyl, beptyl and the like. kinds. C 1 -C 4 alkyls and alkylenes are preferred, and C 1 -C 4 alkyls are particularly preferred. Alkanoyl groups are acyl residues of lower fatty acids such as acetyl, propionyl, butyryl and the like. Acyls having 2 to 4 carbon atoms are preferred.

SWITH

Sloučeniny ze skupiny vzorce I jsou odvozené od aminokyselin nebo zahrnují •struktury aminokyselin alaninu, leucinu, fenylalaninu, argininu, sarkosinu, šeřinu, asparaginu, lysinu, glutaminu, histidinu, tryptofanu, cysteinu, methioninu, threoninu, lysinu, tyrosinu·, leucinu, valinu nebo asparagové kyseliny, a zejména výhodné jsou arginin, alanin, fenylalanin a leucin. Rs je s výhodou atom vodíku.Compounds of formula I are amino acid-derived or include amino acid structures of alanine, leucine, phenylalanine, arginine, sarcosine, serine, asparagine, lysine, glutamine, histidine, tryptophan, cysteine, methionine, threonine, lysine, tyrosine ·, leucine, valine or aspartic acids, and arginine, alanine, phenylalanine and leucine are particularly preferred. Preferably R5 is hydrogen.

Experimentální důkazy uvádějí, že N“-(3-merkapto-2-methylpropanoyl) -L-arginin,Experimental evidence suggests that N '- (3-mercapto-2-methylpropanoyl) -L-arginine,

N“-i (.3-mierkaptopr opanoy 1 ] -L-arginin, N- (3 -merkaptopropanoyl)-L-fenylalanin a N-(3-merkaptopropanoyl-L-leucin jsou neiúčinnější výhodnou skupinou a tvoří zejména výhodný rys vynálezu.N '- 1 (3-mercaptopropanoyl) -L-arginine, N- (3-mercaptopropanoyl) -L-phenylalanine and N- (3-mercaptopropanoyl-L-leucine) are the most effective preferred group and constitute a particularly preferred feature of the invention.

Sloučeniny vzorce I také tvoří soli s různými anorganickými a organickými bázemi, které rovněž spadají do rozsahu vynálezu. Tyto soli zahrnují amonné soli, soli s alkalickými kovy, jako je sodík a draslík, soli s kovy alkalických zemin, jako je vápník a hořčík, soli s organickými bázemi, jako jsou například dicyklohexylamin, benzathin, hydrabamin a N-methyl-D-glukamin.The compounds of formula I also form salts with various inorganic and organic bases, which are also within the scope of the invention. These salts include ammonium salts, alkali metal salts such as sodium and potassium, alkaline earth metal salts such as calcium and magnesium, salts with organic bases such as dicyclohexylamine, benzathine, hydrabamine and N-methyl-D-glucamine .

Sloučeniny podle vynálezu .mají jeden, dva nebo· .tři asymetrické atomy uhlíku, jestliže substituenty Ri, Rs a R4 jsou jiné než atom vodíku. Tyto uhlíkové atomy jsou označeny hvězdičkami u vzorce I. Sloučeniny tedy existují v diastereoisomerních formách nebo· v racemických směsích. Veškeré tyto sloučeniny spadají do rozsahu vynálezu.The compounds of the invention have one, two or three asymmetric carbon atoms when R 1, R 5 and R 4 are other than hydrogen. These carbon atoms are indicated by the asterisks of formula I. Thus, the compounds exist in diastereoisomeric forms or in racemic mixtures. All of these compounds are within the scope of the invention.

Bylo nalezeno, že pro dosažení signifikantního' stupně biologické aktivity má mít asymetrický uhlík nesoucí Ri zbytek L-konfiguraci a tato stereospecifita nebyla v předcházejících patentech uvádějících merkaptoacylaminokyseliny uvedena. Sloučeniny s L-konfigurací jsou výhodné.It has been found that to achieve a significant degree of biological activity, the asymmetric carbon bearing R 1 should have an L-configuration and this stereospecificity has not been reported in previous patents disclosing mercaptoacylamino acids. Compounds with L-configuration are preferred.

Inhibice enzymu převádějícího angiotensin sloučeninami vzorce I byla měřena in vitro s enzymem převádějícím angiotensin isolovaným z králičích plic postupem popsaným v práci Cushman and Cheung [Biochem. Pharmacol., 20, 1637 (1971)] a testem s vyříznutým hladkým svalem [Ε. O¹Keefe aj,, Federation Proč. 31, 511 (1972)].Inhibition of angiotensin-converting enzyme by compounds of formula I was measured in vitro with rabbit angiotensin-converting enzyme isolated from rabbit lung as described by Cushman and Cheung [Biochem. Pharmacol., 20, 1637 (1971)] and the smooth muscle cut test [Ε. O ¹ Keefe aj ,, Federation Proc. 31, 511 (1972)].

Při těchto testech jsou sloučeniny silnými inhibitory stahovacího účinku angiotensinu I a potenciátory stahovacího účinku bradykininu.In these assays, the compounds are potent inhibitors of the contraction effect of angiotensin I and potentiators of the contraction effect of bradykinin.

Aplikací směsi obsahující jednu nebo více inhibitorů enzymu převádějícího angiotensin nebo odpovídajících fyziologicky vhodných solí hypertensnímu savci, kde hypertense je způsobena angiotensinem, se ovlivňuje sekvence renin -> angiotensin I -> angiotensin II a hypertensní stav se snižuje nebo zmírňuje.By administering a composition comprising one or more angiotensin-converting enzyme inhibitors or corresponding physiologically acceptable salts to a hypertensive mammal, wherein the hypertension is caused by angiotensin, the sequence renin -> angiotensin I -> angiotensin II is affected and the hypertension is reduced or alleviated.

Jedna dávka nebo* s výhodou dvě až čtyři rozdělené dávky denně v množství 1 až 1000 miligramů na kg za den, s výhodou 10 až 50Q mg na kg za den a zejména 30 až 300 miligramů na kg za den, jsou vhodné pro snížení krevního tlaku způsobeného angiotensinem. Pokusy s živočišným modelem popsané S. L. Engel, T. R. Schaeíer, Μ. H. Waugh a R. Rubín, Proč. Soc. Exp. Biol. Med. 143, 483 (1973) poskytují cenné informace. Směs se s výhodou aplikuje orálně, může se však také použít parenterální cesta, jako •například podkožně, intramuekulárně, intravenosně nebo intraperitoneálně.A single dose or preferably two to four divided doses per day in an amount of 1 to 1000 milligrams per kg per day, preferably 10 to 50 milligrams per kg per day, and in particular 30 to 300 milligrams per kg per day, are suitable for lowering blood pressure. caused by angiotensin. The animal model experiments described by S. L. Engel, T. R. Schaeier, Μ. H. Waugh and R. Ruby, Proc. Soc. Exp. Biol. Copper. 143, 483 (1973) provide valuable information. Preferably, the composition is administered orally, but a parenteral route may also be used, such as subcutaneously, intramuecularly, intravenously, or intraperitoneally.

Sloučeniny vzorce I se používají pro zmírňování hyper.tense způsobené angiotensinem a mohou se upravovat na formu tablet, kapslí nebo nálevů pro orální aplikace. Sterilní roztoky nebo suspenze se mohou použít pro parenterální aplikace. Asi 10 až 500 miligramů sloučeniny nebo směsi sloučenin vzorce I nebo fyziologicky vhodné soli se smísí s fyziologicky vhodným nosičem, přísadou, pojidlem, ochranným prostředkem, stabilizátorem, ochucovadlem apod. a připraví se jednotková dávková forma vhodná pro farmaceutickou praxi. Množství aktivní sloučeniny ve směsi takové dávkové formy je v mezích dávek uvedených výše.The compounds of formula I are used to alleviate angiotensin-induced hyper-tension and can be formulated as tablets, capsules or infusions for oral administration. Sterile solutions or suspensions may be used for parenteral administration. About 10 to 500 milligrams of a compound or mixture of compounds of Formula I or a physiologically acceptable salt is mixed with a physiologically acceptable carrier, excipient, binder, preservative, stabilizer, flavoring and the like, and a unit dosage form suitable for pharmaceutical practice is prepared. The amount of active compound in the composition of such dosage form is within the dosage ranges set forth above.

Příklady přísad, které se mohou přidávat do tablet, kapslí apod., jsou následující: pojidla, jako je tragant, acacie, kukuřičný škrob nebo želatina, přísady, jako je fosforečnan vápenatý, desintegrační činidla, jako je kukuřičný škrob, bramborový škrob, alginová kyselina apod., mazadla, jako je stearát hořečnatý, sladidla, jako je sacharosa, laktosa nebo sacharin, chuťové látky, jako je mátový olej, olej z libavky, třešňová tresť. Jestliže se jako jednotková dávková forma používají kapsle, mohou tyto obsahovat kromě látek výše uvedeného typu kapalné nosiče, jako,jsou oleje. Různé materiály se mohou použít pro povlékání nebo jiné zvyšování farmaceutické elegance těchto preparátů. Například tablety se mohou povlékat šslakem, cukrem apod. Sirupy nebo 'nálevy mohou obsahovat aktivní sloučeninu, sacharosu, jako sladidla, methyl- a propylparabeny jako ochranné prostředky a barviva a chuťové látky, jako je tresť třešňová nebo pomerančová.Examples of ingredients that can be added to tablets, capsules and the like are: binders such as tragacanth, acacia, corn starch or gelatin, ingredients such as calcium phosphate, disintegrating agents such as corn starch, potato starch, alginic acid and the like, lubricants such as magnesium stearate, sweeteners such as sucrose, lactose or saccharin, flavoring agents such as peppermint oil, oil of wintergreen, cherry essence. When capsules are used as the unit dosage form, these may contain, in addition to substances of the above type, liquid carriers such as oils. Various materials can be used to coat or otherwise enhance the pharmaceutical elegance of these preparations. For example, tablets may be coated with cream, sugar, and the like. Syrups or infusions may contain the active compound, sucrose as sweeteners, methyl and propylparabens as preservatives and colorings and flavors such as cherry or orange.

Sterilní směsi pro injekce .se mohou připravit postupem běžně používaným ve farmaceutické praxi tak, že se rozpustí nebo suspenduje aktivní sloučenina v běžném nosiči, jako je voda pro injekce, v přírodním rostlinném oleji, jako je sesamový, kokosový, podzemnicový olej, olej z bavlníkových semen apod., nebo v syntetických tukových nosičích, jako je ethyloleát apod. Popřípadě se také mohou (použít pufry, ochranné prostředky, antioxidanty apod.Sterile injectable compositions may be prepared by a method commonly used in pharmaceutical practice by dissolving or suspending the active compound in a conventional carrier, such as water for injection, in a natural vegetable oil such as sesame, coconut, peanut oil, cottonseed oil seeds or the like, or in synthetic fat carriers such as ethyl oleate and the like. Alternatively, they may also be used (buffers, preservatives, antioxidants and the like).

Vynález je blíže objasněn v následujících příkladech. Teploty jsou uvedeny ve stupních Celsia.The invention is illustrated by the following examples. Temperatures are given in degrees Celsius.

Příklad 1Example 1

N- (3-benzoylthici'propanoyl j -L-alaninN- (3-benzoylthi-propanoyl) -L-alanine

L-alanin (4,45 g) se rozpustí ve vodném IN hydroxidu sodném (50 ml) a roztok se za míchání ochladí v lázni s ledem. Přidá se postupně 2N hydroxid sodný (27 ml) a 3-bro.mpropiónylchlorid (8,5 g), směs se vyjme z lázně s ledem a míchá se tři a půl hodiny při teplotě místnosti. Přidá se směs ithiobenzoové kyseliny (7,5 g) a uhličitanu draselného (4,8 g) ve vodě (50 ml) a směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Po okyselení koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou ,se vodný roztok extrahuje ethylacetátem a organická fáze se promyje vodou, vysuší a zahustí k suchu. Odparek (14,9 gramu) se krystaluje z etheru a získá se 7,1 g N-(3-benzoylthiopropanoyl)-L-alaninu, t. ,t. 99—100°.L-alanine (4.45 g) was dissolved in aqueous 1 N sodium hydroxide (50 mL) and the solution was cooled in an ice bath with stirring. 2N sodium hydroxide (27 ml) and 3-bromopropionyl chloride (8.5 g) were added sequentially, the mixture was removed from the ice bath and stirred for three and a half hours at room temperature. A mixture of ithiobenzoic acid (7.5 g) and potassium carbonate (4.8 g) in water (50 mL) was added and the mixture was stirred at room temperature overnight. After acidification with concentrated hydrochloric acid, the aqueous solution is extracted with ethyl acetate and the organic phase is washed with water, dried and concentrated to dryness. The residue (14.9 g) was crystallized from ether to give 7.1 g of N- (3-benzoylthiopropanoyl) -L-alanine, m.p. 99—100 °.

Příklad 2Example 2

N- (3-merkap topropanoyl) -L-alaninN- (3-mercap topropanoyl) -L-alanine

N-( 3-benzoylthiopropanoyl)-L-alanin (4,2 gramu se rozpustí ve směsi vody (7,5 ml) a koncentrovaného hydroxidu amonného (8 mililitrů). Po jedné hodině se směs zředí vodou, filtruje se a filtrát se extrahuje ethylacetátem. Vodná fáze se okyselí koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou a extrahuje se ethylacetátem. Organická fáze se promyje vodou, vysuší se a zahustí ve vakuu k suchu. Odparek se krystaluje ze směsi ethylacetátu a hexanu a získá se 1,87 gramu N-( 3-merkaptopropanoyl )-L-alaninu, t. t. 79—81°.Dissolve N- (3-benzoylthiopropanoyl) -L-alanine (4.2 g in a mixture of water (7.5 ml) and concentrated ammonium hydroxide (8 ml). After one hour, dilute with water, filter and extract the filtrate. The aqueous phase was acidified with concentrated hydrochloric acid and extracted with ethyl acetate, the organic phase was washed with water, dried and concentrated in vacuo to dryness, and the residue was crystallized from ethyl acetate / hexane to give 1.87 g of N- (3-mercaptopropanoyl). -L-alanine, mp 79-81 °.

Příklad 3Example 3

N- (3-benzoyl'thi opr opanoyl) -L-leucinN- (3-benzoylthiopyranoyl) -L-leucine

Záměnou L-leucinu (6,55 g) za L-alanin v postupu podle příkladu 1 se získá 16.7 g surového N- (3-ben;zoylthiopropanoyl) -L-leucinu. Tento materiál se rozpustí ve směsi ethylacetátu '(209 ml) a dicyklohexylaminu. Krystalická sůl se filtruje a vysuší. Výtěžek 19,5 g, t. t. 178—180°. Dicyklohexylamoniová sůl se nechá reagovat se směsí ethylacetátu (200 ml) a 10% vodného kyselého siřičitanu draselného (50 mlj. Organická fáze se vysuší síranem hořečnatým, zahustí se k suchu ve vakuu a odparek se překrystaluje ze směsi ethylacetátu a hexanu a získá se 8,8 g čistého N-(3-benzoylthioipropanoyl]-L-leuclnu, t. t. 99—101°.Substitution of L-leucine (6.55 g) with L-alanine in Example 1 gave 16.7 g of crude N- (3-benzoylthiopropanoyl) -L-leucine. This material was dissolved in a mixture of ethyl acetate (209 mL) and dicyclohexylamine. The crystalline salt was filtered and dried. Yield 19.5 g, mp 178-180 °. The dicyclohexylammonium salt was treated with a mixture of ethyl acetate (200 mL) and 10% aqueous potassium sulfite (50 mL). The organic phase was dried over magnesium sulfate, concentrated to dryness in vacuo, and the residue was recrystallized from ethyl acetate-hexane to give 8. 8 g of pure N- (3-benzoylthioipropanoyl) -L-leucine, mp 99-101 °.

Příklad 4Example 4

N- (3-merkaptopropanoyl} -L-leuicinN- (3-mercaptopropanoyl) -L-leucine

Záměnou N- (3-beuzoylthiopropanoyl j-L-leucinu (6,40 gj za N-(3-benzoylthiopropanoylj-L-alanin v postupu podle příkladu 2 se získá 2,75 g N-(3-merkaptopropanoyl j-L-leucinu, t. t. 131—132°. Tento materiál se překrystaluje z acetonitrilu.The substitution of N- (3-beuzoylthiopropanoyl) -L-leucine (6.40 g for N- (3-benzoylthiopropanoyl) -L-alanine in Example 2 gives 2.75 g of N- (3-mercaptopropanoyl) -L-leucine, m.p. 132 DEG C. This material was recrystallized from acetonitrile.

P ř í k 1 a d 5Example 1 a d 5

N-(3-benzoylithiqpropanoyl )-L-fenylalaninN- (3-benzoylithipropanoyl) -L-phenylalanine

Záměnou L-fenylalaninu (8,25 g) za L-alanin v postupu podle příkladu 1 se získá 18,8 g. surového N-(3-ibenzoylthiopropanoyl)-L-fenylalaninu. Tento materiál se krystaluje z acetonitrilu a získá se 11,1 g produktu, t. t. 123—124°.Substitution of L-phenylalanine (8.25 g) with L-alanine in the procedure of Example 1 affords 18.8 g. Of crude N- (3-ibenzoylthiopropanoyl) -L-phenylalanine. This material was crystallized from acetonitrile to give 11.1 g of the product, mp 123-124 °.

PříkladeExample

N- (3-mer.kapt opropanoyl) -L-f eny lalaninN- (3-mercaptopropanoyl) -L-phenylalanine

Nm (3-benzoylthiopropanoyl) -L-f enylalanin (1,78 g) se rozpustí ve směsi vody (70 ml) a IN roztoku hydroxidu sodného (5,5 ml). K tomuto roztoku se přidá koncentrovaný hydroxid amonný (20 mlj a pak voda (20 mlj. Po třech hodinách se reakční směs extrahuje ethylacetátem, okyselí se koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou a znovu extrahuje ethylacetátem. Druhý ethylacetátový extrakt se promyje vodou, vysuší síranem hořečnatým a zahustí se ve vakuu ik suchu. Odparek se chromatografuje na koloně silikagelu směsí benzenu a kyseliny octové a získá se 0,47 g N-(3-merkaptopropanoyl)-L-fenylalaninu, t. t. 106—107°.Nm (3-benzoylthiopropanoyl) -L-phenylalanine (1.78 g) was dissolved in a mixture of water (70 ml) and 1 N sodium hydroxide solution (5.5 ml). To this solution was added concentrated ammonium hydroxide (20 mL and then water (20 mL). After three hours, the reaction mixture was extracted with ethyl acetate, acidified with concentrated hydrochloric acid and extracted again with ethyl acetate. The second ethyl acetate extract was washed with water, dried with magnesium sulfate and concentrated. The residue is chromatographed on a silica gel column with a mixture of benzene and acetic acid to give 0.47 g of N- (3-mercaptopropanoyl) -L-phenylalanine, mp 106-107 °.

P ř í k 1 a d 7Example 1 a d 7

N“-/( 3-benzoylthiopropanoyl) -L-argininN '- [(3-benzoylthiopropanoyl) -L-arginine]

L-arginin (8,7 g) se rozpustí v IN vodném roztoku hydroxidu sodného (50 mlj a roztok se ochladí za míchání v lázni s ledem.. Přidá se 2N roztok hydroxidu sodného (25 mlj a přidá se 3-brompropionylchlorid (8,5 g), načež se směs odstraní z ledové lázně a míchá se dvě hodiny při teplotě místnosti. Přidá se směs thiobenzoové kyseliny (7,5 gj a uhličitanu draselného (2,4 g) ve vodě (10 ml) a isměs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Pak se přidá iontoměničová pryskyřice [ipolystyrensulfoúová pryskyřice Dowex 50 (Mikeš, Laboratory Handbook of Chromatographic Methods, Van Nostrand, 1961, str. 256}] (100 ml) a suspenze se nanese na ikolonu stejné pryskyřice (300 ml). Po vymytí kyselých materiálů vodou se eluuje N“-( 3-benzoylthiopropanoyl) -L-arginin pufrem pyridin-kyselina octová-voda, pH 6,5. Frakce obsahující požadovaný materiál se spojí, zahustí ve vakuu k suchu a odparek se rozmělní s etherem. Získá se 7 g produktu, t. t. 345° (razkl. j.L-arginine (8.7 g) was dissolved in 1N aqueous sodium hydroxide solution (50 ml) and the solution was cooled with stirring in an ice bath. 2N sodium hydroxide solution (25 ml) was added and 3-bromopropionyl chloride (8 ml) was added. 5 g), after which the mixture was removed from the ice bath and stirred at room temperature for two hours, a mixture of thiobenzoic acid (7.5 g) and potassium carbonate (2.4 g) in water (10 ml) was added and the mixture was stirred over Ion exchange resin (Dowex 50 ipolystyrene sulfone resin (Mikeš, Laboratory Handbook of Chromatographic Methods, Van Nostrand, 1961, p. 256)) was then added (100 mL) and the suspension was applied to an icolone of the same resin (300 mL). After washing the acidic materials with water, N - (3-benzoylthiopropanoyl) -L-arginine is eluted with pyridine-acetic acid-water buffer, pH 6.5 The fractions containing the desired material are combined, concentrated to dryness in vacuo and the residue triturated with ether to give 7 g of product m.p. 345 ° (stamp.

Příklad 8Example 8

N“- (3-merkaptopropanoyl) -L-argininN '- (3-mercaptopropanoyl) -L-arginine

N“-(3-benzoylthiqpropanoyl) -L-arginin (1 gram) se rozpustí za intenzivního míchání ve směsi vody (5 ml) a koncentrovaného amoniaku (5 ml). Po jedné hodhiě se roztok extrahuje ethylacettátem a zahustí ve vakuu k suchu. Odparek se chromatcgrafuje na koloně DEAE Sephadex [anioptová íontoměničová pryskyřice odvozená od dextranu (Mikeš, výše, str. 328)] (85 ml) pufrem 0,005M kyselého uhličitanu amonného Frakce obsahující N“->(3-merkaptopropanoyl)-L-arginin (jak je prokázáno pozitivní thiolovou a Sakaguchiho reakcí) se spojí a lyofilizací se odstraní kyselý uhličitan aroonný. Výtěžek 200 mg produktu, t. t. 230° (počátek 'rozkladu 200°).N - (3-benzoylthi-propanoyl) -L-arginine (1 gram) was dissolved with vigorous stirring in a mixture of water (5 ml) and concentrated ammonia (5 ml). After one hour, the solution was extracted with ethyl acetate and concentrated to dryness in vacuo. The residue is chromatographed on a DEAE Sephadex column (dextran-derived ion exchange ion exchange resin (Mikeš, supra, p. 328)) (85 ml) with 0.005M ammonium bicarbonate buffer. Fractions containing N '-> (3-mercaptopropanoyl) -L-arginine ( as shown by a positive thiol and Sakaguchi reaction) were combined and aroonic acid carbonate was removed by lyophilization. Yield 200 mg, m.p. 230 ° (decomposition start 200 °).

Příklad 9Example 9

N- (3-benzoylthiOprqpanoyl ] sarkosinN- (3-benzoylthiproppanoyl) sarcosine

Záměnou sarkosinu (4,45 g) za L-alanin v postupu podle příkladu 1 se získá 7,9 g N-( 3-benzoylthiopropanoyl) sarkosinu, t. t. 139-140°.Substitution of sarcosine (4.45 g) with L-alanine in Example 1 gives 7.9 g of N- (3-benzoylthiopropanoyl) sarcosine, m.p. 139-140 °.

Příklad 10Example 10

N- (3-merkaptopropanoyl) sarkosinN- (3-mercaptopropanoyl) sarcosine

Záměnou N- (3-benzoylthiopropanoyl) sarkosinu (2,8 g) za N-(3-benzoylíthiopropanoyl)-L-alanin v postupu podle příkladu 2 se získá 1,65 g surového N-(3-merkaptopro'panoyl) sarkosinu. Tento materiál se převede na dicyklohexylamonlovou sůl (2,7 g), t. t. 157—158° a vyčištěná sůl se převede na volnou kyselinu roztřepáním mezi ethylacetát a 10% kyselý siřičitan draselný.By substituting N- (3-benzoylthiopropanoyl) sarcosine (2.8 g) for N- (3-benzoylthiopropanoyl) -L-alanine in the procedure of Example 2, 1.65 g of crude N- (3-mercaptopropanoyl) sarcosine is obtained. This material was converted to the dicyclohexylammonium salt (2.7 g), m.p. 157-158 °, and the purified salt was converted to the free acid by shaking between ethyl acetate and 10% potassium sulfite.

Příklad 11Example 11

N- (3-merkaptopropanoyl) -L-serinN- (3-mercaptopropanoyl) -L-serine

Záměnou L-serinu za L-alanin v postupu podle příkladu 1 a pak reakcí produktu postupem podle příkladu 2 se získá N-(3-benzoylthiopropanoyl)-L-serin a N->(3-merkaptopropanoyl) -L-serin.Substitution of L-serine with L-alanine in Example 1 followed by reaction of the product of Example 2 gives N- (3-benzoylthiopropanoyl) -L-serine and N - (3-mercaptopropanoyl) -L-serine.

Příklad 12Example 12

N- (3-merkaptopropanoyl) -L-aspar aginN- (3-mercaptopropanoyl) -L-aspartin

Záměnou L-asparagtnu za L-alanin v postupu podle příkladu 1 a pak reakcí produktu postupom podle příkladu 2 se získá N- (3-bsnzoyl(thiO'propanoyl) -L-asparagin aSubstitution of L-asparagine with L-alanine in Example 1 followed by reaction of the product according to Example 2 affords N- (3-benzoyl (thiO-propanoyl) -L-asparagine) and

N- (3-merkaptopropanoyl) -L-asparagin. Příklad 13N- (3-mercaptopropanoyl) -L-asparagine. Example 13

N°- (3-merkaptopropanoyl) -L-lysinN ° - (3-mercaptopropanoyl) -L-lysine

Záměnou N^s-terc.butyloxykarbonyl-L-lysinu [R. Schwyzer a W. Rittel, Helv. Chim. Acta 44, 159 (1961)] za L-alanin v postupu podle příkladu 1 a pak reakcí produktu postupem podle příkladu 2 se získá N^K-(3-benzoylthiopropanoyl) -Neteře, butyloxykarb ony 1-L-lysin a N“-( 3-merkaptopropanoyl )-NMerc.butyloxykarbonyl-L-lysin. Reakcí tohoto materiálu s trifluoroctovou kyselinou při teplotě místnosti 15 minut se získá N“-(3-benzoylthiopropanoyl)-L-lysin a N^cí-(3-merkaptopr opanoy 1) -L-lysin.By substitution of N ^with -tert-butyloxycarbonyl-L-lysine [R. Schwyzer and W. Rittel, Helv. Chim. Acta 44, 159 (1961)] for L-alanine in the procedure of Example 1 and then reacting the product according to Example 2 yields N ^K - (3-benzoylthiopropanoyl) -Neteře, 1 they butyloxycarbonyl-L-lysine and N '- ( 3-mercaptopropanoyl) -N-tert-butyloxycarbonyl-L-lysine. Reaction of this material with trifluoroacetic acid at room temperature for 15 minutes to give N '- (3-benzoylthiopropanoyl) -L-lysine and N ^Affairs - (3-merkaptopr opanoy 1) -L-lysine.

Příklad 14Example 14

N“- (3-m9rkaptc(propanoyl) -L-histidinN '- (3-mercapto (propanoyl) -L-histidine)

Záměnou L-histidinu za L-alanin v postupu podle příkladu 1 a pak reakcí produktu postupem podle příkladu 2 se získá N“-(3-benzoylthioprcpanoyl)-L-histidin a N“-(3-nierkaptopropanoyl) -L-histidin.Substitution of L-histidine with L-alanine in Example 1 followed by reaction of the product according to Example 2 gives N - (3-benzoylthioprcpanoyl) -L-histidine and N - (3-neraptopropanoyl) -L-histidine.

Příklad 15Example 15

N- (3-merkaptopropanoyl) glycinN- (3-mercaptopropanoyl) glycine

Záměnou glycinu za L-alanin v postupu podle příkladu 1 a pak reakcí produktu postupem podle příkladu 2 se získá (3-benzoylthiopropanoyl) glycin a N-( 3-merkaptopropanoyl) glycin.Substitution of glycine with L-alanine in Example 1 followed by reaction of the product of Example 2 yields (3-benzoylthiopropanoyl) glycine and N- (3-mercaptopropanoyl) glycine.

Příklad 16Example 16

N- (3-merkaptcpropanoyl) -L-tryptofanN- (3-mercaptopropanoyl) -L-tryptophan

Záměnou L-tryptofanu za L-alanin v postupu podle příkladu 1 a pak reakcí produktu postupem podle příkladu 2 se získá N- (3-benzoylthiopropanoyl) -L-tryptofan a N- (3-merkaptopr opanoy 1) -Ldryptof an.Substitution of L-tryptophan with L-alanine in Example 1 followed by reaction of the product of Example 2 affords N- (3-benzoylthiopropanoyl) -L-tryptophan and N- (3-mercaptopropanoyl) -Ldryptophan.

Příklad 17Example 17

N- (3-merikaptopropanoyl) -L-cyetetnN- (3-mercaptopropanoyl) -L-cyano

Záměnou L-cysteinu za L-alanin v postupu podle příkladu 1 a pak reakcí produktu postupem podle příkladu 2 se získá N-(3-benzoylthiopropanoyl)-L-cystein a N-{3-merkaptopropanoyl) -L-cystein.Substitution of L-cysteine with L-alanine in Example 1 followed by reaction of the product of Example 2 gives N- (3-benzoylthiopropanoyl) -L-cysteine and N- (3-mercaptopropanoyl) -L-cysteine.

Příklad 18Example 18

N- (3-merkaptopropanoyl) -L-methioninN- (3-mercaptopropanoyl) -L-methionine

Záměnou L-meíhioninu za L-alanin v postupu podle příkladu 1 a pak reakcí produktu postupem podle příkladu 2 se získá N- (3-banzoylthiopropanoyl) -L-methionin a N- (3-merkaptopropanoyi) -L-methionin.Substitution of L-methionine for L-alanine in Example 1 followed by reaction of the product of Example 2 gives N- (3-banzoylthiopropanoyl) -L-methionine and N- (3-mercaptopropanoyl) -L-methionine.

Příklad 19Example 19

N- (3-merkaptopropanoyl 1 -N-methyl-L-leucinN- (3-mercaptopropanoyl) -N-methyl-L-leucine

Záměnou N-methyl-L-leucin za L-alanin v postupu podle příkladu 1 a pak reakcí pro204 duktu postupem podle přikladu 2 se získá N- (3-benzoylthiopr opanoyl) -N-methyl-L-leucln a N-(3-merkaptopropanoyl)-N-methyl-L-leucin.Substitution of N-methyl-L-leucine with L-alanine in Example 1 followed by reaction of the prodrug to Example 2 affords N- (3-benzoylthiopropanoyl) -N-methyl-L-leucine and N- (3- mercaptopropanoyl) -N-methyl-L-leucine.

Příklady 20—33Examples 20—33

L-alanin a chloracetylchloridu za 3-brompropionylchlorid při postupu podle příkladu 1 a pak reakcí produktu postupem podle příkladu 2 se získají sloučeniny uvedené ve sloupci II.L-alanine and chloroacetyl chloride followed by 3-bromopropionyl chloride according to Example 1 and then reaction of the product according to Example 2 gave the compounds in column II.

Záměnou aminokyseliny ve sloupci I zaReplacing the amino acid in column I with

příklad example I AND II II 20 20 May glycin glycine N-2-merkaptoacetylglycin N-2-mercaptoacetylglycine 21 21 L-alanin L-alanine N-2-merkaptoacetyl-L-alanin N-2-mercaptoacetyl-L-alanine 22 22nd L-valin L-valine N-2-merkaptoaceityl-L-valin N-2-mercaptoaceityl-L-valine 23 23 L-leucln L-leucln N-2-merkaptoacetyl-L-leucin N-2-mercaptoacetyl-L-leucine 24 24 L-serin L-serine N-2-merkaptoacetyl-L-serin N-2-mercaptoacetyl-L-serine 25 25 L-asparagin L-asparagine N-2-merkaptoacetyl-L-asparagin N-2-mercaptoacetyl-L-asparagine 26 26 N®-Boc-L-lysin N-Boc-L-lysine N“-2-merkapitoacetyl-N^E-Boc-L-lysinN '-2-mercapitoacetyl-N ^E -Boc-L-lysine 27 27 Mar: L-histidin L-histidine N-2-merkaptoacetyl-L-histidin N-2-mercaptoacetyl-L-histidine 28 28 L-fenylalanin L-phenylalanine N-2-merkaptoaceítyl-L-fenylalanin N-2-mercaptoacetyl-L-phenylalanine 29 29 L-itryptoían L-itryptothane N-2-merkapitoacetyl-L-tryptofan N-2-mercapitoacetyl-L-tryptophan 30 30 L-cystein L-cysteine N-2-merkaptoaeetyl-L-cystein N-2-mercaptoacetyl-L-cysteine 31 31 L-methionin L-methionine N-2-merkaptoacetyl-L-methionin N-2-mercaptoacetyl-L-methionine 32 32 sarkosin sarcosine N-2-merkaptoacetylsarkosin N-2-mercaptoacetyl sarcosine 33 33 N-methyl-L-leucin N-methyl-L-leucine N-2-merkaptoacetyl-N-methyl-L-leucin N-2-mercaptoacetyl-N-methyl-L-leucine Příklad 34 Example 34 propionylchlorid při postupu podle příkla- propionyl chloride according to the procedure of

du 7 a reakcí produktu postupem podle přlN-2-merkaptoacetyl-L-lysin kladu 8 se získá N“-2-benzoyiťhioacetyl-L'arginin a N^K-2-merkaptoacetyl-L-arginin.du 7 and reaction of the product according to the procedure of N-2-mercaptoacetyl-L-lysine of Example 8 gave N 2 -2-benzoylthioacetyl-L-arginine and N ^K -2-mercaptoacetyl-L-arginine.

Reakcí N^K-2-meirkaptoacetyl-N⁶-Boc-L-lysi-Reaction of N ^K -2-meercaptoacetyl-N ⁶ -Boc-L-lysi-

nu s trifluoroqtovou kyselinou with trifluoroacetic acid při teplotě at temperature Příklady 3 6—49 Examples 3 6—49 místnosti po dobu 15 minut se room for 15 minutes získá N“-2- gets N “-2- -merkaptoacetyl-L-lysin. -mercaptoacetyl-L-lysine. Záměnou aminokyselin uvedených ve By substituting the amino acids listed in sloupci I za L-alanin a 2-bromproplonyl- column I after L-alanine and 2-bromoproplonyl- Příklad Example 35 35 chloridu za 3-brompropionylchlorId při po- chloride with 3-bromopropionyl chloride stupu poidle příkladu 1 a pak reakcí pro- of the process according to Example 1 and then by reaction of N“-2-merkaptoacetyl-L-arginin N '-2-mercaptoacetyl-L-arginine duktu postupem podle příkladu 2 se získají The product of Example 2 is obtained sloučeniny uvedené ve sloupci II. the compounds listed in column II. Záměnou Confused chloracetylchloridu chloracetyl chloride za 3-brom- for 3-bromo- příklad example I AND II II 36 36 glycin glycine N-2-merkaptopropanoylglycln N-2-mercaptopropanoylglycine 37 37 L-alanln L-alanine N-2-merkaptopropanoyl-L-alanln N-2-mercaptopropanoyl-L-alanine 38 38 L-valin L-valine N-2-merkaptopropanoyl-L-valin N-2-mercaptopropanoyl-L-valine 39 39 L-leucln L-leucln N-2-merkaptopropanoyl-L-leucin N-2-mercaptopropanoyl-L-leucine 40 40 L-serin L-serine N-2-merkaptoprO’panOyl-L-serin N-2-mercaptoprO'panOyl-L-serine 41 41 L-glutamin L-glutamine N-2-merkaptopropanoyl-L-glutamln N-2-mercaptopropanoyl-L-glutamine 42 42 N^E-Boc-L-lysinN ^E -Boc-L-lysine N“-merkaptopropanoyl-N^s-Boc-lysinN-mercaptopropanoyl-N ^with -Boc-lysine 43 43 L-histidin L-histidine N-2-merkaptopropanoyl-L-hlstidi'n N-2-mercaptopropanoyl-L-hlididine 44 44 L-fenylalanin L-phenylalanine N-2-merkaptopropanoyl-L-fenylalanin N-2-mercaptopropanoyl-L-phenylalanine 45 45 L-tryptofan L-tryptophan N-2-merkaptopropanoyl-L-tryptofan N-2-mercaptopropanoyl-L-tryptophan 46 46 L-cystein L-cysteine N-2-merkaptopropanoyl-L-cystein N-2-mercaptopropanoyl-L-cysteine 47 47 L-methionin L-methionine N-2-merkaptopropanoyl-L-mqthionin N-2-mercaptopropanoyl-L-m-thionine 48 48 sarkosin sarcosine N-2-merkaptopropanoylsarkosin N-2-mercaptopropanoylsarcosine 49 49 N-methyl-L-fenylalanin N-methyl-L-phenylalanine N-2-merikaptopropanoyl-L-methyl-L- N-2-mercaptopropanoyl-L-methyl-L- -fenylalanin -phenylalanine

Příklad 50Example 50

N^-merkaptopropanayLL-lysi.nN 1 -mercaptopropane LL L-lysine.n

Reakcí N^a-2-merkaptopropanoyl-N^s-Boc-L-lysinu s trifluoroctovou kyselinou při teplotě místnosti po dobu 15 minut se získá N“-2-m!erkaptopropanoyl-L-lysin.Reaction of N ^and -2-mercaptopropanoyl-N ^with -Boc-L-lysine with trifluoroacetic acid at room temperature for 15 minutes gives N-2-mercaptopropanoyl-L-lysine.

Příklad 51Example 51

N“-2-merka(ptopropanoyl-L-argininN '-2-mercury (ptopropanoyl-L-arginine

Záměnou 2-brompropionylchloridu za 3-brompropionylchlorid při postupu podle příkladu 7 a pak reakcí produktu postupem podle příkladu 8 ss získá N“-2-benzoylthioproípanoyl-L-argínin a N“-2-merkaptopropanoyl-L-arginin.Substitution of 2-bromopropionyl chloride with 3-bromopropionyl chloride in Example 7 and then reaction of the product according to Example 8 with N-2-benzoylthiopropanoyl-L-arginine and N-2-mercaptopropanoyl-L-arginine.

Příklad 52Example 52

N^a-4-merkapitobutanoyl-L-argininN ^and -4-mercapitobutanoyl-L-arginine

Záměnou. 4-chlorbutyrylchloridu za 3-brompropionylchlorid při postupu podle příkladu 7 a pak reakcí produktu postupem podle příkladu 8 se získá N“-4-benzoylthlobutanoyl-L-arginin a N“-4-merkaptobutanoyl-L-arginin.Confused. 4-chlorobutyryl chloride to 3-bromopropionyl chloride according to the procedure of Example 7 and then reaction of the product according to the procedure of Example 8, gives N '-4-benzoylthlobutanoyl-L-arginine and N' -4-mercaptobutanoyl-L-arginine.

Racemické formy konečných produktů v každém z předcházejících příkladů vznikají použitím DL forem výchozích aminokyselin místo L-forem.The racemic forms of the end products in each of the preceding examples are formed using DL forms of the starting amino acids instead of the L-forms.

Obdobně D-formy konečných produktů v každém z předcházejících příkladů vznikají použitím D-forem výchozích aminokyselin místo L-forem.Similarly, the D-forms of the end products in each of the preceding examples are formed using the D-forms of the starting amino acids instead of the L-forms.

Příklad 53Example 53

N- (3-merkaptopropanoyl) -N-benzylglycinN- (3-mercaptopropanoyl) -N-benzylglycine

Záměnou N-benzylglycinu za L-alanin v postupu podle příkladu 1 a pak reakcí produktu postupem podle příkladu. 2 se získá N- [ 3-benzoylthiopropanoyl)-N-benzylglycin a N-(3imerkaptopropanoyl)-N-benzylglycin.By substituting N-benzylglycine for L-alanine in the procedure of Example 1, and then reacting the product as in the example. 2, N- [3-benzoylthiopropanoyl) -N-benzylglycine and N- (3-mercaptopropanoyl) -N-benzylglycine are obtained.

P ř í k 1 a d 54Example 54

N-( 3-merkaptopropanoyl )-N-benzyl-L-leucinN- (3-mercaptopropanoyl) -N-benzyl-L-leucine

Záměnou N-benzyl-L-leucin za L-alanin v postupu podle příkladu 1 a pak reakcí produktu postupem podle příkladu 2 se získá N- (3-benzoylthioprotpanoyl ] -N-benzyl-L-leucin a N-( 3-merkaptoprcpanoyl )-N-benzyl-L-leucin.Substitution of N-benzyl-L-leucine with L-alanine in Example 1 and then reaction of the product according to Example 2 gives N- (3-benzoylthioprotpanoyl) -N-benzyl-L-leucine and N- (3-mercaptoprcpanoyl) -N-benzyl-L-leucine.

Příklad 55Example 55

N- (3-m0rkaptopropanoyl) -L-asparagová kyselinaN- (3-mercaptopropanoyl) -L-aspartic acid

Záměnou L-asparagové kyseliny za L-alanin v postupu podle příkladu 1 a pak reakcí produktu postupem podle příkladu 2 se získá N- (3-benzoylthiopropanoyl) -L-asparagová kyselina a N-(3-mer.kaptopropanoyl j-L-asparagová kyselina.Substitution of L-aspartic acid with L-alanine in Example 1 followed by reaction of the product of Example 2 gives N- (3-benzoylthiopropanoyl) -L-aspartic acid and N- (3-mercaptopropanoyl) -L-aspartic acid.

Příklad '56Example '56

1000 tablet obsahujících po 100 mg N-(3-menkaptopropanoylj-L-fenylalaninu se připraví z následujících složek:1000 tablets containing 100 mg of N- (3-mercaptopropanoyl) -L-phenylalanine are prepared from the following ingredients:

N- (3-merkaiptopropanoyl j -L-fenylalaninu 100 g kukuřičného škrobu 50 g želatiny 7,5 g avicelu (mikrokrystalická celulosa) 25 g stearátu hořečnatého 2,5' gN- (3-mercaptopropanoyl) -L-phenylalanine 100 g corn starch 50 g gelatin 7.5 g avicel (microcrystalline cellulose) 25 g magnesium stearate 2.5 'g

N- f 3-merkapitopropanoyl ] -L-fenyl-alanin a kukuřičný škrob se smísí s vodným roztokem želatiny. Směs se vysuší a rozemele na jemný prášek. Avicel a pak stearát horečnatý sé přimísí a provede se granulace. Granulát se vylisuje do tablet a získá se 1000 tablet obsahujících po 100 mg aktivní složky.N- [3-mercapitopropanoyl] -L-phenyl-alanine and corn starch are mixed with an aqueous gelatin solution. The mixture is dried and ground to a fine powder. Avicel and then magnesium stearate are admixed and granulation is performed. The granulate is compressed into tablets to give 1000 tablets containing 100 mg of active ingredient each.

Příklad 57Example 57

1000 tablet, z nichž každá obsahuje po 200 mg N-2-merkaptopropanoylglycinu, se připraví z následujících složek:1000 tablets, each containing 200 mg of N-2-mercaptopropanoylglycine, are prepared from the following ingredients:

N-2-me'rkapto*propoanoylglycinu 200 g lafetosy 100 g avicelu 150 g kukuřičného škrobu 50 g stearátu hořečnatého 5 gN-2-mercapto * propoanoylglycine 200 g lafetose 100 g avicel 150 g corn starch 50 g magnesium stearate 5 g

N-2-merkaptopropanoylglycln, laktosa a avicel se smísí a pak se přidá kukuřičný škrob a nato stearát hořečnatý. Suchá směs se vylisuje do tablet a získá se 1000 tablet z nichž každá má hmotnost 505 mg a obsahuje po 200 mg aktivní složky. Tablety se povléknou roztokem Meithocelu E15 (methylcelulosa) a barevného laku, obsahujícího žluť č. 6.The N-2-mercaptopropanoylglycine, lactose and avicel are mixed, and then corn starch and then magnesium stearate are added. The dry mixture is compressed into tablets to give 1000 tablets each having a weight of 505 mg and containing 200 mg of active ingredient each. The tablets were coated with a solution of Meithocel E15 (methylcellulose) and a colored lacquer containing yellow # 6.

Příklad 58Example 58

Injikovatelný roztok se připraví z následujících složek:The injectable solution is prepared from the following ingredients:

N- (3-merkaptopropanoyl)-Lfenylalaninu 500 g methylparabenu 5 g propylparabenu 1 g chloridu sodného 25 g vody pro injekce, qs. 5 1N- (3-mercaptopropanoyl) -L-phenylalanine 500 g methylparaben 5 g propylparaben 1 g sodium chloride 25 g water for injections, qs. 5 1

Aktivní složka, ochranné látky a chlorid sodný se rozpustí v 3 litrech vody pro injekce a pak se upraví celkový objem na 5 litrů. Roztok se filtruje pres sterilní filtr a asep204002 ticky se plní do sterilních lékovek, které se uzavřou předsterilizovanými gumovými zátkami. Každá lékovka obsahuje 5 ml roztoku, obsahujícího 100 mg aktivní složky na ml roztoku pro injekce.The active ingredient, preservatives and sodium chloride are dissolved in 3 liters of water for injection and then the total volume is adjusted to 5 liters. The solution is filtered through a sterile filter and asep204002 filled into sterile vials which are sealed with pre-sterilized rubber stoppers. Each vial contains 5 ml of solution containing 100 mg of active ingredient per ml of solution for injection.

Příklad 59Example 59

I když ikonveirse angiotensinu I na anglotensin II enzymem převádějícím angiotensin je pravděpodobně nejdůležitější v patologii hypertense, aktivita isolovaného enzymu se s výhodou přesněji měří rychlostí štěpení jednoduššího peptidického substrátu hippuryl-L-histidyl-L-leucinu. Pro stanovení Iso hodnot (koncentrace sloučeniny vyjádřená v roikrogramech/im,l, způsobující 50 % inhibici enzymu převádějícího angiotensln] různých koncentrací každé sloučeniny se do zkumavek 13 X 100 mm přidávají následující složky tak, že je uvedená konečná koncentrace v konečném objemu 0,25 ml : 100 mM draselného fosfátového pufru pH 8,3, 300 mM chloridu sodného, 5 mM hippuryl-L-histidyl-L-leucinu a 5-milijednotek enzymu převádějícího angiotensin, připraveného z králičích plic. Kontroly neobsahující inhibitor (100!% účiněk) a které byly před přidáním enzymu okyseleny (0% účinek) se připraví obdobně. Veškeré enzymatické reakce se iniciují přidáním enzymu. Zkumavky se inkubují 30 minut při 37° a reakce se ukončí přidáním 0,25 ml 1N kyseliny chlorovodíkové. Kyselina hippurová, vzniklá reakcí enzymu převádějícího angiotensin na hippuryl-L-histidyl-L-leucin, se extrahuje do ethylacetátu, extrakt se odpaří k suchu, znovu se rozpustí ve vodě a kvantita se určí z absorbance při 228 nm. Procento inhibice při každé koncentraci sloučeniny se vypočte srovnáním a kontrolními aktivitami při 0 a 100%. Koncentrace reprezentativních sloučenin podle vynálezu, které inhibují účinek enzymu převádějícího angiotensin z 50 % jsou uvedeny v následující (tabulce:Although the angiotensin I to anglotensin II iconveirse angiotensin converting enzyme is probably the most important in hypertension pathology, the activity of the isolated enzyme is preferably more accurately measured by the rate of cleavage of the simpler peptide substrate hippuryl-L-histidyl-L-leucine. To determine the Iso values (concentration of compound expressed in rpm programs / im, 1 causing 50% inhibition of angiotensin-converting enzyme) of different concentrations of each compound, the following components are added to 13 X 100 mm tubes such that said final concentration is in a final volume of 0.25 ml: 100 mM potassium phosphate buffer pH 8.3, 300 mM sodium chloride, 5 mM hippuryl-L-histidyl-L-leucine and 5-milliliter units of angiotensin-converting enzyme prepared from rabbit lung Controls not containing inhibitor (100% effect) All enzymatic reactions are initiated by the addition of the enzyme, incubated for 30 minutes at 37 DEG C. and quenched by the addition of 0.25 ml of 1N hydrochloric acid. enzyme converting angiotensin to hippuryl-L-histidyl-L-leucine, is extracted into ethyl acetate, The amount of inhibition at each concentration of compound is calculated by comparison and control activities at 0 and 100%. The concentrations of representative compounds of the invention that inhibit the effect of the angiotensin converting enzyme by 50% are shown in the following table:

sloučenina dávka počet podle př. ing/kg zvířatcompound dose count according to e.g. ing / kg animals

15 15 Dec 10 100 10 100 ALIGN! 2 2 2 2 36 36 10 10 2 2 30 30 2 2 100 100 ALIGN! 2 2

IR sloučenina podle příkl.IR compound according to Ex.

150 (/tg/ml)150 (/ tg / ml)

2 2 1.2 1.2 4 4 1.8 1.8 6 6 0,86 0.86 8 8 0,17 0.17 10 10 1,8 1,8 15 15 Dec 2,0 2,0 36 36 2.6 2.6

Příklad 00Example 00

Postup pro stanovení inhibice enzymu převádějícího angiotensin I ve vyříznutém ileu morčat se provádí následujícími způsobem: K vyříznutému ileu v lázni Krebsova roztoku se přidají různé koncentrace sloučeniny, směs se provzdušní směsí 95 % Oa a 5 % CO2. Po dvou minutách se přidá angiotensin I (25 <ug/ml) a měří se isotonická kontrakce. Koncentrace reprezentativních sloučenin podle vynálezu (v mikrogramech na ml), které inhibují účinek angiotensinu I z 50% (ICso), jsou uvedeny v následující tabulce:The procedure for determining inhibition of angiotensin I-converting enzyme in excised guinea pig ileum is performed as follows: Different concentrations of compound are added to the excised ileum in the Krebs solution bath, aerated with 95% Oa and 5% CO 2. After two minutes, angiotensin I (25 µg / ml) is added and the isotonic contraction is measured. The concentrations of representative compounds of the invention (in micrograms per ml) that inhibit the effect of angiotensin I by 50% (IC 50) are shown in the following table:

sloučenina podle příkl. the compound of Example. ICso (tíg/ml) IC 50 (tg / ml) 2 2 0,94 0.94 4 4 2,0 2,0 6 6 0,52 0.52 8 8 0,9 0.9 10 10 0,94 0.94 15 15 Dec 4,5 4,5 36 36 2,0 2,0

Příklad 61Example 61

Reprezentativní sloučeniny podle vynálezu se aplikují orálně neanesthesovaným samcům krys kmene Sprague-Dawley o hmotnosti asi 200 g, načež se jim injikuje 0,31 /zg/kg angiotensinu I. V následující tabulce je uveden stupeň získané inhibice.Representative compounds of the invention are administered orally to non-anesthetized male Sprague-Dawley rats weighing about 200 g and then injected with 0.31 µg / kg angiotensin I. The degree of inhibition obtained is shown in the following table.

% maximální inhibice angiotensinu I tlak +SE% maximum inhibition of angiotensin I pressure + SE

34,2 ± 6,7 %34.2 ± 6.7%

61,5 ± 1,2 %61.5 ± 1.2%

29.9 + 3,1 %29.9 + 3.1%

52.9 +15,8%52.9 + 15.8%

64,0 +12,3 %64.0 +12.3%

Příklad 62Example 62

Samci krys CF Nelson kmene se anesthesují etherem a každému se levé renální artérie částečně stáhne stříbrnou svorkou (0,22 mm). Pravá ledvina a renální artérie se ponechají nedotčené. Tento model se běžně označuje jako „2-kidney Goldblatt renal hypertensive rat“ a považuje se za typický pro hyper,tensi závislou na renin-angiotensin reakci [(Gavras aj., Science 188, (1975) j. Abdominální sorta se 5 týdnů po podvázání propojí trubičkou s levou renální artérií. Jeden týden po propojení se sleduje přímo průměrný krevní tlak a rychlost srdce, po dobu 4 a 8 hodin, a během této doby se každýcih 24 hodin, po dva po sobě jdoucí dny, dávkuje 300 mg sloučeniny podle příkladu 36. Následující tabulka udává snížení krevního tlaku u dvou různých krys druhý den dávkování.Male CF Nelson rats are anesthetized with ether and each of the left renal arteries is partially contracted with a silver clamp (0.22 mm). The right kidney and renal artery are left intact. This model is commonly referred to as the "2-kidney Goldblatt renal hypertensive rat" and is considered to be typical of hyper, tensile, dependent on the renin-angiotensin response [(Gavras et al., Science 188, (1975) j. One week after the connection, the mean blood pressure and heart rate are monitored directly for 4 and 8 hours, during which time 300 mg of the compound according to the invention is dosed every 24 hours for two consecutive days. Example 36. The following table shows the blood pressure reduction in two different rats on the second dosing day.

průměrný krevní tlak kPa krysa ΦΦ 9 krysa ΦΦ 10mean blood pressure kPa rat ΦΦ 9 rat ΦΦ 10

před aplikací before application 29,6 29.6 27,5 27.5 po aplikaci after application 1 h 1 h 27,5 27.5 27,1 27.1 2 h 2 h 23,1 23.1 25,3 25.3 3 h 3 h 20,1 20.1 25,2 25.2 4 h 4 h 24,5 24.5 26,5 26.5 5 h 5 h 27,5 27.5 26,0 26.0 6 h 6 h 26,5 26.5 26,3 26.3

Jestliže se stejná dávka aplikuje orálně krysám s normálním krevním tlakem,, nebyl pozorován žádný účinek na krevní tlak.When the same dose was administered orally to rats with normal blood pressure, no effect on blood pressure was observed.

Claims

OBJECT OF THE INVENTION

A process for the preparation of a mercaptoacylamino-R6-COSH selin of the general formula I,

R4 R3 R2 R2 R1

R 5 -S- (CH) n-CH-CO-N-CH-COOH (I) wherein

R 1 is aminoalkyl of 1 to 7 carbon atoms, guanidinoalkyl of 1 to 7 carbon atoms in alkyl, and when n is 1, alkyl of 1 to 7 carbon atoms or phenylalkyl of 1 to 7 carbon atoms in alkyl,

R 2, R 3 and R 1 are the same or different, hydrogen, alkyl of 1 to 7 carbon atoms or benzyl, and

R 5 is hydrogen, C 1 -C 7 alkanoyl or benzoyl, n is 0, 1 or 2, or a salt thereof, characterized in that the compound of formula (II),

R1 R1 R2 R2 R1

X - (CH) n - CH - CO - N - CH - COOH (II) wherein

R1, R2, R3, R1 and n are as defined above and wherein X is a halogen atom, reacts with the thioacid anion of formula III, (III) wherein

R 6 is alkyl of 1 to 6 carbon atoms or phenyl, to give the product of formula I wherein R 5 is alkanoyl of 2 to 7 carbon atoms or benzoyl, which is then optionally converted to the product of formula I where R 5 is hydrogen by ammonolysis and optionally converting a compound of Formula I to a salt.

2. A process according to claim 1, wherein R1 is guanidinopropyl, aminopropyl, aminobutyl, phenylmethyl or isobutyl and R2, R3, R1 are as defined in item 1.

3. The process of claim 1, wherein R1 is phenylmethyl and R3 is hydrogen and R2 and R1 are as defined in 1.

4. The process of claim 1, wherein R1 is isobutyl and R3 is hydrogen and R2 and R1 are as defined in 1.

5. The process of claim 1, wherein R1 is guanidinopropyl and R3 is hydrogen and R2 and R1 are as defined in 1.