CS200564B1

CS200564B1 - Diagnostic slip for determination of azocouplable substances in biological liquids

Info

Publication number: CS200564B1
Application number: CS979A
Authority: CS
Inventors: Vlastimil Svoboda; Bozena Sedlinska
Original assignee: Vlastimil Svoboda; Bozena Sedlinska
Priority date: 1979-01-02
Filing date: 1979-01-02
Publication date: 1980-09-15

Description

Vynález se týká způsobu přípravy stabilních diagnostických proužků pro důkaz a semikvantitativni stanovení azokopulovatelných látek v biologických materiálech.The invention relates to a method for preparing stable diagnostic strips for the detection and semi-quantitative determination of azo-copulators in biological materials.

Kvalitativní detekce a kvantitativní stanoveni různých součásti moče, krve, mozkomišniho moku a jiných tělních kapalin se stává v posledních letech jednou z nejdůležitějšich diagnostických metod. V mnoha případech dovoluje určit diagnosu onemocněni dřivé, než se toto projeví klinicky. Obzvláštní význam mají pak stanoveni, Jtaerá lze provést pomocí takzvaných rychlých testů, Jako jsou například diagnostické proužky, neboř tyto testy je možná použit i mimo dosah specielně vybavené laboratoře, například v ordinaci praktického lékaře, u lůžka pacienta a podobně.Qualitative detection and quantitative determination of various components of urine, blood, cerebrospinal fluid and other body fluids has become one of the most important diagnostic methods in recent years. In many cases, the diagnosis allows the disease to be diagnosed before it manifests clinically. Of particular importance is the determination that these can be carried out by means of so-called rapid tests, such as diagnostic strips, since these tests may also be used outside the reach of a specially equipped laboratory, for example in the general practitioner's office, at the patient's bed and the like.

Mezi diagnosticky velmi významná vyšetřeni patři mimo jiné i důkaz a kvantitativní stanoveni látek, poskytujících s diazoniovými solemi výrazně zbarvené sloučeniny. Typickými představiteli takovýchto azokopulovatelných látek v biologických materiálech, zejména moči, jsou dvě hlavni žlučová barviva, bilirubin a urolobilinogen. Dejich důkaz a kvantitativní stanoveni například v moči, dovoluje nejen podpořit diagnosu různých krevních, Jaternich nebo žlučníkových onemocněni, ale často umožňuje jako Jediná metoda rozpoznat tato onemocněni dřivé, než dojda k jejich klinické manifestaci.Diagnostically very important investigations include, but are not limited to, evidence and quantitative assays for compounds that produce distinctly colored compounds with diazonium salts. Two major bile dyes, bilirubin and urolobilinogen, are typical representatives of such azocopulable substances in biological materials, especially urine. Dejich's evidence and quantitative determination, for example in the urine, allows not only to support the diagnosis of various blood, liver or gall bladder diseases, but often makes it possible, as the only method, to recognize these diseases before they are clinically manifested.

<. ’ Pro citlivý, specifický důkaz a stanoveni bilirubinu v biologických materiálech je používána takzvaná Van dsn Berghova azokopulačni reakce, založená na vzniku barevné azo200 564<. For sensitive, specific evidence and determination of bilirubin in biological materials, the so-called Van dsn Bergh's azocopulation reaction, based on the formation of azo2006 color, is used.

200 564 sloučeniny azobilirubinu, která-ee vytvoř! z bilirubinu působením vhodná diazoniové soli. Při metodách spektrofotometrických so pro tuto reakci néjčastěji používá diazotované kyselina sulfanilové, u tabletových testů pak například p-nitrobenzendlazonium-p-toluensulfonát (viz patent DE 1 102 444); v diagnostických proužcích jsou pak užívány diazoniové soli, odvozené od různé substituovaných hlavně halogenovaných anilinů, jako jsou například 2,4-dichloraniliny, 2,5-dichloraniliny nebo 2,6-dichloraniliny (viz například patenty US i 208 762 a 1 300 311 nebo patenty GB i 389 386 a 1 389 368). Ke stanoveni urobilinogenu je pak užívána analogická azokopulační reakce, avšak s použitím diazoniové soli, substituované na aromatickém jádře elektropositivními radikály,, jako.Jsou například nlžši alkylová zbytky, alkoxylové zbytky a podobné (viz patent.GB 1 343 247). Indikační zčna těchto proužků obsahujících uvedené diazoniové soli, sestává z nosiče, například filtračního papíru nebo rouna zo syntetických vláken, který byl napojen roztokem vhodné silné kyseliny jako například kyseliny šFavelová, eulfosalicylová, metafosforečná e podobně a roztokem diazoniové soli a vysušen; diazoniové sůl ee při tom může použit již jako takové ve stabilizované formě tetrafluoroborátu, p-toluensulfonátu, tetrachlorozlnečnanu a podobně (viz patenty GB 1 343 247, 1 389 366 a 1 389 368) nebo se k impregnaci nosiče použije roztok výchozího substituovaného aromatického aminu a dusitanu, takže k vytvořeni diazoniové soli dojde teprve v tomto impregnačním roztoku (viz US patenty 1 298 762 a 1 300 311 a GB patenty 1 343 248 a 1 3B9 368), čel. autorské osvědčení č. 164 557 pak popisuje možnost vytvořeni této diazoniové soli přímo ns nosiči z příslušného triazenu a vhodné kyseliny.200,564 of an azobilirubin compound that is formed; from bilirubin by treatment with a suitable diazonium salt. In spectrophotometric methods, diazotized sulfanilic acid is most commonly used for this reaction, and in pill tests, for example, p-nitrobenzenedlazonium p-toluenesulfonate (see DE 1 102 444); diazonium salts derived from various substituted mainly halogenated anilines such as 2,4-dichloroanilines, 2,5-dichloroanilines or 2,6-dichloroanilines are used in the diagnostic strips (see, for example, U.S. Pat. Nos. 208,762 and 1,300,311; or and U.S. Patent Nos. 389,386 and 1,389,368). An analogous azocopulation reaction is then used to determine urobilinogen, but using a diazonium salt substituted on the aromatic ring with electropositive radicals, such as lower alkyl radicals, alkoxy radicals and the like (see GB 1,343,247). The indicator strip of these strips containing said diazonium salts consists of a carrier, for example filter paper or synthetic fiber web, which has been bonded with a solution of a suitable strong acid such as oxalic acid, eulfosalicylic acid, metaphosphoric acid and the diazonium salt solution and dried; the diazonium salt can be used as such in the stabilized form of tetrafluoroborate, p-toluenesulfonate, tetrachloro-zincate and the like (see patents GB 1 343 247, 1 389 366 and 1 389 368) or a solution of a substituted substituted aromatic amine is used to impregnate the carrier. nitrite, so that the formation of the diazonium salt occurs only in this impregnating solution (see US patents 1 298 762 and 1 300 311 and GB patents 1 343 248 and 1 3B9 368). No. 164,557 describes the possibility of forming this diazonium salt directly with carriers from the corresponding triazene and a suitable acid.

Ve všech těchto případech hotové proužky obsahuji vedle silné kyseliny, potřebné pro průběh azokopulační reakce, diszoniovou sůl, která, je však i ve sv,é stabilizované formě nestálá a rychle se rozkládá, jeou-li proužky vystaveny působeni vzdušné vlhkosti nebo světla. Proužky obsahující vysoce reaktivní diazoniové soli, jako jsou například soli odvozené od halogenových aromatických amidů, dávají navld reakce 1 s řadou. Jiných součásti vyšetřovaného biologického materiálu. Tak například proužky určené ke stanoveni bilirubinu v moči ee barvi v některých močích poměrně intensivně žlutě až oranžově; při visuálnlm hodnoceni takto nespecificky zbarvených proužků pak může dojit k tomu, že ee slabě růžový až fialový odstín skutečně positivní reakce na bilirubin bu3 nepostihne, nebo? je překryt silnějším oranžovým nespecifickým zbarvením, nebo naopak Jestoto nespecifická zabarveni považováno za skutečně positivní reakci.In all these cases, the finished strips contain, in addition to the strong acid required for the course of the azocopulation reaction, a diszonium salt which, however, is unstable in its stabilized form and decomposes rapidly when exposed to atmospheric moisture or light. Strips containing highly reactive diazonium salts, such as those derived from halogenated aromatic amides, give an extra reaction 1 with a series. Other components of the biological material under investigation. For example, strips intended for the determination of bilirubin in urine and color in some urines are relatively intense yellow to orange; in the visual evaluation of such unspecificly colored bands, it may result in a slightly pink to violet shade of a truly positive reaction to either bilirubin, or? It is overlaid with a stronger orange nonspecific coloration, or vice versa. This nonspecific coloring is considered a truly positive reaction.

Nyni však bylo 8 přokvapenim zjištěno, že všechny tyto nedostatky lze do značné míry odstranit, použiji-li ee k důkazu a stanoveni azokopulovatelných látek, zejména bilirubinu a urobilinogenu, v biologických kapalinách diagnostické proužky dle tohoto vynálezu, jejichž indikační zSna, sestávající z nasákavého nosiče, obsahuje kysele reagující látku, například kyselinu citrónovou, šfavelovou, amidoeulfonovou, mstafosforečnou, kyselý eiren draselný nebo arylsulfonovou kyselinu o počtu atomů uhlíku 6 až 12 a s 1 až 3 sulfonovými skupinami nebo jejich směs a triazen obecného vzorce (I),However, it has now surprisingly been found that all of these deficiencies can be largely eliminated by using the diagnostic strips of the present invention, the indicating components of which are absorbent carriers, to detect and determine azo-coupling agents, particularly bilirubin and urobilinogen, in biological fluids. , contains an acidic reagent, such as citric, oxalic, amidoeulfonic, metaphosphoric, potassium eirene or arylsulfonic acid of 6 to 12 carbon atoms and 1 to 3 sulfonic acid groups or a mixture thereof and triazene of formula (I),

20G 564 v němž substituenty X, Y a 2 znáči stejné nebo rozdílné atomy nebo skupiny, například vodík, halogen, nltroskupinu, alkylový nebo alkoxylový zbytek 3 l.až 3 atomy uhlíku, nebo aralkoxylový zbytek so 7 až 8 atomy uhlíku, skupinu hydroxylovou, nebo aminoskupinu popřípadě dálo ocetylovanou nebo benzoylovanou, nebo skupiny -COR nebo -SO^R, v nichž R značí hydroxylový zbytek, alkylovou nebo aminoskupinu s 1 až 2 atomy uhlíku a symboly R^ a R₂ značí nezávisle na sobě vodík, alkylový zbytek, hydroxyalkylový zbytek, karboxyalkylový zbytek nebo sulfoalkylový zbytek o 1 až 4 atomy uhlíku nebo jeden ze symbolů R^ nebo Rg představuje aromatický zbytek obočného vzorce (II),20G564 wherein X, Y and 2 are the same or different atoms or groups, for example, hydrogen, halogen, nitro, an alkyl or alkoxy radical of 3 to 3 carbon atoms, or an aralkoxy radical of 7 to 8 carbon atoms, a hydroxyl group, or amino optionally di-acetylated or benzoylated, or -COR or -SO 2 R wherein R is a hydroxyl radical, an alkyl or amino group having 1 to 2 carbon atoms and R 1 and R ₂ independently of one another are hydrogen, alkyl, a hydroxyalkyl radical, a carboxyalkyl radical or a sulfoalkyl radical having 1 to 4 carbon atoms or one of R @ 1 or R @ 8 represents an aromatic radical of formula (II),

v němž substituenty X, Y a 2 mají shora uvedený význam, přičemž alespoň jeden z nich je karboxylová nebo sulfoskupina. Tyto triazeny mohou být při tom v indikační zóně proužku obsaženy bučí volné nebo s výhodou ve formě soli s ionty alkalických kovů nebo alkalických zemin, například s ionty lithia, draslíku, sodíku, vápníku, barya nebo stroncia a podobně.wherein X, Y and 2 are as defined above, wherein at least one of them is carboxyl or sulfo. These triazenes can be present in the indicator zone of the strip either free or preferably in the form of an alkali metal or alkaline earth ion salt, for example lithium, potassium, sodium, calcium, barium or strontium ions and the like.

Podstata vynálezu, ve srovnáni oe současným stavem techniky, tedy spočívá v tom, že indikační část papírků dle vynálezu, neobsahuje diazonlovou sůl, ale příslušný výše definovaný triazen, ze kterého se azokopulace schopná diazoniové sůl generuje působením přítomné kysele reagující látky teprve v okamžiku použiti papírku, to znamená při namočeni do vodné biologické kapaliny. Přitom se podle účelu použití proužku volí s ohledem na substituenty X, Y ε Z takový triazon, aby z něho v okamžiku použiti vznikla diazoniové sůl, specifická pro danou azokopulovatelnou látku. Tak například proužky pro stanoveni bilirubinu obsahující s výhodou vo své indikační zóně triazen, v němž substituenty X, Y a Z tvoři elektronogativní atomy nebo skupiny, například X a 1-C1, Y = H á Z a 6-Clj naopak pro získáni proužků spocifických pro urobllinogen je výhodné použit takové triazeny, v nichž převažuji 'substituenty olektropositivní, například triazen, v němž X=Y«HaZ« 4-methoxy nebo 4-bonzyloxy skupina.The present invention, in comparison with the prior art, consists in the fact that the indicator portion of the papers according to the invention does not contain the diazonium salt, but the corresponding triazene defined above, from which the azocopulation-capable diazonium salt is generated by the acidic reagent present. i.e. when soaked in an aqueous biological liquid. Depending on the intended use of the strip, the triazone is chosen with respect to the substituents X, Y and Z to produce a diazonium salt specific to the azocoupleable substance at the time of use. For example, bilirubin strips preferably containing triazene in their indicator zone, wherein the X, Y and Z substituents form electronegative atoms or groups, for example, X and 1-C1, Y = H and Z, and 6-Clj, respectively, to obtain strips specific for makinginogen, it is preferable to use triazenes in which the electropositive substituents predominate, for example triazene, in which X = Y, H, Z, 4-methoxy or 4-bonzyloxy.

Příprava takovýchto papírků se provádí tak, že se vhodný nasákavý nosič, naimpregnuje vodným roztokem kyselin nebo jejich směsi a dokonale vysuší v proudu teplého vzduchu. Poté se na nosič nanese roztok triazenu nebo jeho soli v novodnóm rozpouštědle a nosič se opět vysuší. Oeko nevodné rozpouštědla soužící k přípravě roztoku triazenu nebo jeho soli, se při tom rozum! taková aprotické rozpouštědle, v nichž nedochází k rozkladu triazenu na příslušnou diazoniovou sůl působením H* -iontů. Typickými přiklady takovýchto rozpouštědel jsou aceton, ethylacetát, benzen, toluen, dimethylsulfoxid, dimethylformamid a jiné. Z hlediska rozpustnosti triazenů v těchto rozpouštědlech je obecně vhodnější použit směs dvou nebo více různých rozpouštědel, jako například směs dimethylsulfoxidu a acetonu nebo ethylacetátu, nebo toluenu. Takto neimpregnovaný nosič se poté rozřeše na malé ětyřúhelniky o rozměrech například 6 χ 6 mm, které se přípoji na jeden konec úzkého proužku folie z plastické hmoty, například způsobem popsaným v patentu OE 2 118 455‘<nebo patentu GB 1 073 596, Jako nasákavý nosič ja možné ve smyslu tohoto vynálezu použit jakoukoliv vhod200 564 nou a pro tento účel používanou látku, jako jo filtrační papír, rouno ze syntetických vláken, nebo konečně i tenký film porézního syntetického polymeru nebo polykondensátu. Dálo je výhodné, 1 když ne bezpodmínečné nutné, aby indikační zóna proužků podle tohoto vynálezu obsahovala ještě také některé pomocné látky, například stabilizátory, aktivátory azokopulačni reakce, takzvaná zahušfovadla a podobné. Deko 3tabilisátory, jejichž úkolem je etabilieovat diazonlovou sůl, vzniklou po namočeni proužku do vyšetřované kapaliny tak dlou ho, než zreaguje s azokopulovatelnou součásti této kapaliny se ve smyslu tohoto vynálezu rozumí známé a pro tento účel užívané sloučeniny, například kyseliny tetrefluoróborltá nebo její soli nebo kyseliny arylsulfonové, například kyseliny ρ-toluenoulfonová, kyselina 2,5-diméthýlbenzensulfonóvé, kyseliny 1,5-naftalendisulfonová a 2,7-naftalendisulfonová, kyseliny naftalentrieulfonové a podobně. 8 výhodou lze některé z těchto stabilizátorů, například kyselinu p-toluensulfonovou nebo kyseliny 1,5-naftalendieulfonovou nebo 2,7-naftelendisulfonovou, použit i jako látky, které současně vedle svého stabilisačniho účinku vytvářejí na nosiči doetatečně nizké pH, potřebné v okamžiku použiti pro přeměnu triazenu na diazonlovou sůl a pro průběh azokopulační reakce.The preparation of such papers is carried out by impregnating a suitable absorbent carrier with an aqueous solution of acids or mixtures thereof and thoroughly drying in a stream of warm air. A solution of triazene or a salt thereof in a new aqueous solvent is then applied to the support and the support is dried again. The non-aqueous solvent used to prepare a solution of the triazene or a salt thereof is understood to be understood. aprotic solvents in which the triazene does not decompose to the corresponding diazonium salt by the action of H @ + ions. Typical examples of such solvents are acetone, ethyl acetate, benzene, toluene, dimethylsulfoxide, dimethylformamide and others. In view of the solubility of triazenes in these solvents, it is generally preferable to use a mixture of two or more different solvents, such as a mixture of dimethylsulfoxide and acetone or ethyl acetate, or toluene. The unimpregnated carrier is then cut into small quadrilaterals, for example 6 χ 6 mm, which are attached to one end of a narrow strip of plastic film, for example, as described in the patent OE 2 118 455 'or GB 1 073 596, as absorbent For example, the carrier may be any material useful in the present invention, such as filter paper, synthetic fiber web, or, ultimately, a thin film of porous synthetic polymer or polycondensate. It is further preferred, although not absolutely necessary, that the indicator zone of the strips according to the invention also contain some auxiliaries, for example stabilizers, activators of the azocopulation reaction, so-called thickeners and the like. Deco stabilizers intended to etabilize a diazonyl salt formed after the strip has been soaked in the test liquid for as long as it has reacted with the azocopulable component of the liquid are understood in the sense of the present invention and known compounds, for example tetrefluoroboronic acid or its salts or acids arylsulfonic acids such as ρ-toluenilphonic acid, 2,5-dimethylbenzenesulfonic acid, 1,5-naphthalenedisulfonic acid and 2,7-naphthalenedisulfonic acid, naphthalentrieulfonic acid and the like. Advantageously, some of these stabilizers, for example p-toluenesulfonic acid or 1,5-naphthalenedieulfonic acid or 2,7-naphthalenedisulfonic acid, can also be used as substances which, in addition to their stabilizing effect, produce on the carrier a low enough pH required at the time of use. conversion of triazene to diazonyl salt and for the course of the azocopulation reaction.

□ako aktivátory azokopulační reakce lze s výhodou použít například estery kyseliny fosforečné, popsané blíže v již citovaných patentech GQ l 389 366 a 1 399 366, nebo 1 vhodná smáčela, zejména anlonaktivniho typu, která obecně zvyšují rychlost proniknuti vyšetřované kapaliny do indikační zóny proužků a tím urychluji průběh přeměny triazenu na diazonlovou sůl a její reakci a azokopulovatelnou složkou vyšetřované kapaliny, navíc použitím esterů kyseliny fosforečné nebo anionaktivnich smáčedel, například laurylsulfátu, dodocylbenzensulfonátu nebo dlalkylesterů kyseliny sulfojantarové, se zyýši i intensita vzniklého zabarvení proužků při positivní reakci, čímž se docili zvýšení citlivosti použků vůči azokopulovatelné složce vyšetřované biologické kapaliny.As the activators of the azocopulation reaction, for example, the phosphoric esters described in more detail in the aforementioned patents GQ 1 389 366 and 1 399 366, or 1 suitable wetting agents, in particular of the anlonactive type, which generally increase the penetration rate of the test liquid into the indicator zone; thereby accelerating the conversion of triazene to the diazonium salt and its reaction and the azocopulable component of the test liquid, moreover using phosphoric acid esters or anionic surfactants such as lauryl sulphate, dodocylbenzene sulphonate or dialkyl sulphosuccinic acid esters will increase the intensity of the reaction the sensitivity of the applications to the azocopulable component of the biological fluid under investigation.

Vedle těchto látok může indikační zóna proužků dle tohoto vynálezu obsahovat s výhodou i některé tak zvaná zahušfovadla, což jeou filmotvorné polymerní látky přirozeného nebo syntetického původu, jako například škrob, želatina, polyvinylalkohol, polyvinylpyrrolidon a podobně. 3ejich úkolem v indikační zóně proužků jo zabránit ve fázi přípravy proužků a jejich skladování před použitím bezprostřednímu styku triazenu a kyselinami a tak zamezit předčasné přeměně triazenu na příslušnou diazonlovou sůl. Vedle této hlavni funkce však přináší jejich použiti v indikační zóně proužků i výhodu jakési egalisace, to je zvýšeni rovnoměrnosti vybarvení celé indikační plošky proužku při positivní reakci s azokopulovatelnou látkou. Tyto pomocné látky mohou být na noeič naneseny v kterékoliv z obou výše uvedených impregnaci, to je bud spolu s roztokem kysalo reagující látky, nebo jako součást roztoku triazenu v nevodném rozpouštědle. Někdy Je dokonce výhodná nanést například zahašfovsdlo ve formě samostatné třetí impregnace po naneseni kysele reagující látky pří impregnací roztokem triazenu, čímž ee docílí vo fázi výroby papírků Ještě dokonalejšího odděleni triazenu od kyeeliny e tim potlačeni jakékoliv možnooti přeměny triazenu na diazonlovou eůl dříve, Aež se proužek namočí do vyšetřované vodné kapaliny. Proti dosud známým diagnostických proužkům, které obsahuji ve své Indikační zóně diazonlovou eůl, mají proužky dle tohoto vynálezu výhodu nejen ve větší stabilitě, nebo? Jak Je obec,.4>·In addition to these substances, the indicator zone of the strips according to the invention may advantageously also contain some so-called thickeners, which are film-forming polymeric substances of natural or synthetic origin, such as starch, gelatin, polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolidone and the like. Their purpose in the strip display zone is to prevent triazene and acids from contacting the triazene prior to use in the strip preparation and storage phase, thereby preventing premature conversion of the triazene to the corresponding diazone salt. In addition to this main function, however, their use in the indicator zone of the strips also has the advantage of some sort of egalisation, that is, an increase in the uniformity of coloration of the entire indicator surface of the strip in a positive reaction with an azocopulable substance. These adjuvants may be applied to the carrier in either of the above two impregnations, i.e. either together with a solution of an acidic reagent, or as part of a solution of triazene in a non-aqueous solvent. Sometimes it is even advantageous to apply, for example, a sapping agent in the form of a separate third impregnation after the deposition of the acidic reagent upon impregnation with a triazene solution, thereby achieving a more complete separation of the triazene from the cyeeline. soak in the aqueous liquid under investigation. The strips of the present invention have an advantage not only in greater stability over the prior art diagnostic strips which contain diazonol gel in their indication zone. As Is the Municipality, .4> ·

200 564 ηδ znáno, Jsou triezeny - na rozdíl od diazoniových soli - látky dokonale stálé 1 za dosti nepříznivých podmínek, například působení světla, zvýšeni teploty i vzdušná vlhkosti. Navíc proužky, jejichž indikační zČna obsahuje místo dlazóniová soli shora definovaný triazen, dávají v biologických kapalinách například močí, podstatně slabší tak zvaná nespecifická reakce; v důsledku tohoto není reakce proužků dle předloženého vynálezu nepříznivá ovlivňována vznikem nespecifického, rušivého žlutého až oranžového zabarvení,200 564 ηδ known, They are tried - unlike diazonium salts - substances perfectly stable 1 under fairly unfavorable conditions, such as exposure to light, temperature increase and humidity. In addition, the bands whose indicator wall contains triazene as defined above instead of the palzonium salt give, for example in urine, a substantially weaker so-called non-specific reaction in biological fluids; as a result, the reaction of the strips of the present invention is not adversely affected by the formation of a non-specific, disruptive yellow to orange color,

Přikladl oIllustrated by

Filtrační papír o plošné hmotnosti 180 g/m byl postupně nalmpregnován následujícími roztoky tak, že po každé impregnací byl dokonale vysušen v proudu vzduchu o teplotě okolo 60 °C.The filter paper having a basis weight of 180 g / m 2 was successively impregnated with the following solutions so that after each impregnation it was completely dried in an air stream of about 60 ° C.

Impregnační roztok 1:Impregnation solution 1:

1,0 g kyselina mstafosforečná 0,19 g citrónové kyselina 0,19 g šťavelová kyselino1.0 g mphosphoric acid 0.19 g citric acid 0.19 g oxalic acid

0,33 g dvojsodná sůl neftalendisulfonové kyseliny0.33 g of disodium salt of naphthalenedisulfonic acid

0,1 ml 25%niho vodného roztoku sodné soli sek-heptadecylsulfátu0.1 ml of a 25% aqueous solution of sec-heptadecyl sulfate sodium salt

0,18 g tetrafluoroboritan sodný ad 10 ml destilovaná voda.0.18 g sodium tetrafluoroborate ad 10 ml distilled water.

Impregnační roztok II;Impregnating solution II;

0,05 g 3-msthyl-3-eulfoethyl-l-(2,6-dichlorfenyl) trlezen 2,0 ml dimethylsulfoxid 15 ml toluen.0.05 g of 3-methyl-3-sulfoethyl-1- (2,6-dichlorophenyl) trleneene 2.0 ml dimethylsulfoxide 15 ml toluene.

Po namočeni do moče obsahující alespoň 0,1 mg bilirubinu ve 100 ml se tento peplr barvi během 10 až 20 s růžově až temně karmlnově, přičemž intensita tohoto zabarveni je přímo úměrná koncentraci bilirubinu. Po namočeni do moče neobsahující bilirubin věak papír zůstane smetanově bílý a toto zbarveni ee nezmění po dobu nejméně 5 minut.When soaked in urine containing at least 0.1 mg of bilirubin in 100 ml, the peperr stains pink to dark carmine in 10 to 20, the intensity of this coloring being proportional to the bilirubin concentration. After soaking in urine not containing bilirubin, the paper remains creamy white and this color does not change for at least 5 minutes.

Přiklad 2Example 2

Papírky se připravuji stejným způsobem, věak s použitím těchto impregnačních roztoků:Papers are prepared in the same way, but using the following impregnating solutions:

Impregnační roztok I:Impregnation solution I:

1,0 g metařosforečná kyselina 0,4 g hydrogenairan draselný1.0 g metaphosphoric acid 0.4 g potassium hydrogen sulphate

0,1 ml 25%niho vodného roztoku sodné soli sek-heptadepylsulfétu ad 10 ml HgO dest.0.1 ml of a 25% aqueous solution of sec-heptadepylsulfate sodium and 10 ml of HgO dest.

Impregnační roztok IX:Impregnation solution IX:

0,05 g 3-methyl-3-karbOxyraethyl~l~(2,4-’dlchlorfenyl) triazen 2,0 ml dimethylsulfoxid 5,0 ml aceton0.05 g of 3-methyl-3-carboxy-ethyl-1- (2,4-dichlorophenyl) triazene 2,0 ml dimethylsulfoxide 5,0 ml acetone

200 564200 564

10jO ml octěn ethylnatý10 ml of ethyl acetate

Vlastnosti těchto papírků jeou prakticky etejné, jako papírků připravených dle předchozího přikladu, zbarvení při positivní reakci je však fialové a v močích bez bilirubinu se berví po cca 5 min. světle žlutě. Obdobně papírky připravené s 2,4-dichlorfonyldiazonium-tetrafluoroborátem, ee za stejných podmínek barví v močích bez bilirubinu intensivně oranžově.The properties of these papers are practically the same as those prepared according to the previous example, but the coloring in the positive reaction is violet and in the urine without bilirubin it turns red for about 5 minutes. light yellow. Similarly, papers prepared with 2,4-dichlorophonyldiazonium tetrafluoroborate, under the same conditions, stain intensely orange in bilirubin-free urines.

P ř i k 1 e d 3Example 3

Papírky připraveny s použitím následujicich impregnačních roztoků:Papers prepared using the following impregnating solutions:

Impregnační roztok I:Impregnation solution I:

1,0 g metef03forečné kyselina 0,2 g emidosulfonová kyselina 0,4 g citrónová kyselina1.0 g metaphosphoric acid 0.2 g emidosulfonic acid 0.4 g citric acid

0,7 ml 25/óniho vodného roztoku sodné soli sek-heptadecylsulfétu ad 10 ml H₂0 dest.0.7 ml of 25 / óniho aqueous solution of sodium sec-heptadecylsulfétu ad 10 ml H ₂ 0 dest.

Impregnační roztok II:Impregnation solution II:

0,05 g 3-(2-kerboxy-5-sulfofenyl)-l-(2,5-dlchlorfenyl)-triazen draselné aůl 2,0 ml dimethylsulfoxid 5,0 ml octan ethylnatý 10,0 ml benzen0.05 g of potassium 3- (2-carboxy-5-sulfophenyl) -1- (2,5-chlorophenyl) -triazene 2,0 ml dimethylsulfoxide 5,0 ml ethyl acetate 10,0 ml benzene

Takto připravené papírky dávají s bilirubinem fialově červené zabarveni e v močích bez bilirubinu se barvi jan světle žlutavě. Obdobné papírky, jejichž indikační z6na obsahuje pří slušnou diazoniovou sůl se v močích bez bilirubinu barvi téměř okamžitě sytě žlutě.Papers prepared in this way give a violet-red coloration with bilirubin in the urine without bilirubin, the color is light yellow. Similar papers, the indicator of which contains the appropriate diazonium salt, turn yellow almost immediately in bilirubin-free urines.

Příklad 4Example 4

Papírky připraveny s použitím těohto impregnačních roztoků:Papers prepared using these impregnating solutions:

Impregnační roztok I:Impregnation solution I:

1,0 g metefoeforečné kyselina 0,4 g citrónové kyselina 0,18 g řfavelová kyselina1.0 g metaphosphoric acid 0.4 g citric acid 0.18 g oxalic acid

0,06 ml 25%niho vodnóho roztoku sodné solí esk-heptodocylsulfétu ad 10,0 ml H₂0 dest.0.06 ml of a 25% solution of sodium vodnóho ESK-heptodocylsulfétu ad 10.0 ml H ₂ 0 dest.

Impregnační roztok II:Impregnation solution II:

0,05 g sodné eoli 3-methyl-3-eulfoethyl-lv(4-benzyloxyfonyl)~trlazenu 2,0 ml dimethylsulfoxid0.05 g of 3-methyl-3-eulfoethyl-lv (4-benzyloxyphonyl) trlazene sodium eoli 2.0 ml dimethylsulfoxide

15,0 ml toluen.15.0 ml toluene.

Po namočeni do moče, obsahující urobllinogen se proužky barvi karmlnově červeně, přičemž intensita tohoto zbarveni je přímo úměrná koncentraci urobilinogenu a může býtesmikvantitatlvně vyhodnocena. Ve srovnání e obdobnými proužky obsahujícími příslušnou diazoniovou eůl, jsou proužky dle vynálezu dokonale stálé za normálních podmínek e nemění evé vlast··When soaked in urine containing dollinogen, the strips stain with carmine red, the intensity of this staining being proportional to the urobilinogen concentration and can be quantitatively evaluated. Compared to similar strips containing the corresponding diazonium gel, the strips of the invention are perfectly stable under normal conditions and do not change

200 564 nosti ani po delší exposici na svčtle.200 564 even after prolonged exposure to light.

Obdobné proužky, v nichž byla sodná sůl triazen nahrazena stejným hmotovým množstvím -methoxy-fenyl)-triazenu vykazovaly naprostoSimilar strips in which the triazene sodium salt was replaced with an equal amount of -methoxy-phenyl) -triazene showed absolutely

3-methyl-3-sulfoethyl-1-(4-benzyloxyfenyl) vápenaté soli 3-methyl-3-karboxymethyl-l-(4· stejné funkční vlastnosti.3-methyl-3-sulfoethyl-1- (4-benzyloxyphenyl) calcium salt of 3-methyl-3-carboxymethyl-1- (4 · the same functional properties).

pRedmEtSubject

Claims

Subject

VYNALEZU

A diagnostic strip for the determination of azocopulable substances in biological fluids, in particular urine, characterized in that its indicator zone consisting of a soaked carrier comprises an acid-reactive substance, for example citric, oxalic, amidosulfonic, metaphosphoric, potassium hydrogansulphate or arylsulfonic acid. carbons of 6 to 12 and ε 1 to 3 sulfone groups or mixtures thereof and triazene of the general formula I (I).

wherein the substituents X, Y and Z denote the same or different nobo atoms, for example hydrogen, halogen, nitro, an alkyl or alkoxy radical having 1 to 3 carbon atoms, or an aralkoxy radical having 7 to 3 carbon atoms, a hydroxyl group, a nobo amino group popřípadS befell acotylovanou or benzoylated or group -CORnebo SOgR.v which R represents a hydroxyl group, an alkyl group having one to two carbon atoms Hebo amino and R ^ and R ₂ independently of soba hydrogen, an alkyl radical of carbon number 1-4 , a hydroxyalkyl radical having 1 to 4 carbon atoms, a carboxyalkyl radical having 1 to 4 carbon atoms or a sulfoalkyl radical having 1 to 4 carbon atoms, or one of R @ 1 or R @ ₂ represents an aromatic radical of the formula II>

(Π).

wherein X, Y and Z are as defined above, wherein at least one of them is a nobo sulfo carboxyl group.

Diagnostic strip according to claim 1, characterized in that it contains triazene in the form of a salt with alkali or alkaline earth ions, for example lithium, potassium, sodium, calcium, barium or strontium ions.

Diagnostic strip according to Claims 1 and 2, characterized in that its indicator zone contains a stabilizer, for example tetrafluoroboric acid or an alkali salt thereof, for example sodium or potassium tetrafluoroborate or arylsulphonic acid, for example

200 564 p-toluenesulfonic acid or 1,5-naphthalene disulfonic acid or 2,7-naphthalene disulfonic acid

Diagnostic strip according to claim 1, characterized in that its indicator zone contains activators of the azocopulation reaction, for example phosphoric acid esters, for example dioctyl phosphate nobo diphenyl phosphate or anionic surfactants, for example lauryl sulphate, dodecyl carbonene sulphate or dioctyl ester of sulphonic acid.

A diagnostic strip according to claim 1 or 2 or 3 or 4, characterized in that its indicator zone comprises organic polymeric film-forming substances, for example starch, gelatin, carboxymethylcellulose, polyvinyl alcohol or polyvinylpyrrolidone.

Tz 66-58301-82

Price 2,40 Kčs