CS199122B1 - Spósob izolácie bielkovin - Google Patents
Spósob izolácie bielkovin Download PDFInfo
- Publication number
- CS199122B1 CS199122B1 CS145578A CS145578A CS199122B1 CS 199122 B1 CS199122 B1 CS 199122B1 CS 145578 A CS145578 A CS 145578A CS 145578 A CS145578 A CS 145578A CS 199122 B1 CS199122 B1 CS 199122B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- proteins
- isolation
- potassium chloride
- eluted
- column
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title description 5
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 4
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 claims description 4
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 claims description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 3
- 238000000164 protein isolation Methods 0.000 claims 1
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 5
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186984 Kitasatospora aureofaciens Species 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000009088 enzymatic function Effects 0.000 description 1
- YUPQOCKHBKYZMN-UHFFFAOYSA-N ethylaminomethanetriol Chemical compound CCNC(O)(O)O YUPQOCKHBKYZMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Predmet PV sa dotýká izolácie bielkovin z biologického materiálu, ktoré majú afinitu k nukleovým kyselinám.
Pře exaktně Stádium enzýmov a bielkovin zúčastňujúcich sa metabolizmu nukleových kyselin v živých systémech je potřebné získat ich v Čtstom stave. Doteraz sa používajú k izolécii bielkovin obecné deliace metody, ktoré využívajú rozdiely v ich molekulových váhách a ionogénnych vlastnostiach. Tieto metody sú značné zdlhavé (trvajú niekoiko dní až týždňov), vyžadujú náročné přístrojové vybavenie a vysokú odbornú kvalifikáciu pracovníkcv. Zdlhavosí operácií má za následok zníženie výtažkov enzýmových aktivit čo často súvisí aj so stratou ich natívnej Struktury.
Tieto nedostatky odstraňuje spósob izolácie podlá tohto vynálezu, při ktorom sa využívá schopnost týchto bielkovin Specificky sa viazat na chromatografický iontomenič, ktorý tvoří dezoxyribonukleová kyselina naviazaná na polyetylenimin-karboxymetyl-celulózu. Podwienkou použitia tohto iontomeniča pre afinitnú chromatografiu bielkovin je, aby z biologického materiálu boli odstránené nukleové kyseliny..
Příklad δ. 1
Izolácia RNA-polymerézy zo Streptomyces aureofacies.
199 122 g premytých bunlek 8. aureofaciens ea dezintegruje e 20 ml 0,05M Tris-hydroxymetyl-aminoetan pH 7,9, O,lmll chalaton III a centrlflkuje sa při 30 OOOg 2 hod pri 2 °C. Supernatant ea zmieša a 5g polyetalenimin-karboxymetyl-celulózy a přidá ea také množstvo chloridu draselného, aby výsledná koncentrácia bola 0,3M. Uiaša ea 1/2 hod. a centrifuguje sa při 30 OOOg. K eupernatantU sa přidá 20 ml tlmivého roztoku bez chloridu draselného a nanesie ea na kolonu 2x5 cm rýchloslou 3 ml/hod. Z tejto kolony sa eluuje tlmlvým roztokom, v ktorom sa zvyšuje ionová sila postupné 0,3M, 0,5M, 1M, 2M chlorid draeelný. Aktívny enzým sa eluoval vo frakcii s 1M a 2M chloridom draselným. V obidvoch * 2 prípadoch stupen puriflkácie je řádové 5.10 a funkcia enzýmu je plné závislá na DNA. Celý proces puriflkácie trvá necelých 36 hodin.
Příklad 2Č. 2
Zzolácia restrlkčnej endodezoxyribonukleézy Sau I. zo Streptomyces aureofaciens.
K 10 g preaytých buniek zo S. aureofaciens sa přidá 20 ml 0,01M Trie-hydroxymetyl-aminometan tlmivého roztoku. Po dezlntegrácii sa zmes centrifuguje při 105 0C0 g 2 hod. pri 2 °C. Celá zmes sa naneeie na chromatografickú kolonu 2x10 cm a eluuje sa postupné 0,01M fosforečnanovým tlmlvým roztokom s obsahom O,lmtí chelatonu III, lmM 2-merkaptoetanolu a 108 glycerínom. Frakcia obsahujúca restrikčnú endonukleázu bola z kolony eluovanó O,1M chloridom draselným v uvedenom tlmivom roztoku. Této frakcia bola nanesené na kolonku 1x8 cm e obeahom dezoxyribonukleové kyselina polyetylenimin-karboxymetyl-celulózy a eluovala sa postupné 0,1, 0,3, 0,5M chloridom draselným. Aktívny enzým sa eluoval vo frakcii s 0,5M chloridom draselným. Enzým bol zbavený nespecifických nukleáz.
Týmto spdsobom sa mdžu izoloval rdzne bielkoviny z biologických materiálov, ktoré majú afinitu k nukleovým kyselinám. Tieto enzýmy majú široké použitie v molekulárno-biologlckýoh experimentoch a génovom inžinlerstve.
Claims (1)
- PREDMET VYNÁLEZUSpósob izolácie bielkovín vyznačujúci sa tým, že sa bielkoviny viažu na iontomeniči dezoxyribonukleové kysellna-polyetylenimin-karboxymetyl-celulóza, z ktorého sa uvolňujú ionovou silou od 0.1 do 1.5 M pri pH od 7,0 - 9,2.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS145578A CS199122B1 (sk) | 1978-03-08 | 1978-03-08 | Spósob izolácie bielkovin |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS145578A CS199122B1 (sk) | 1978-03-08 | 1978-03-08 | Spósob izolácie bielkovin |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS199122B1 true CS199122B1 (sk) | 1980-07-31 |
Family
ID=5348965
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS145578A CS199122B1 (sk) | 1978-03-08 | 1978-03-08 | Spósob izolácie bielkovin |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS199122B1 (sk) |
-
1978
- 1978-03-08 CS CS145578A patent/CS199122B1/sk unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Carmichael et al. | The host factor required for RNA phage Qbeta RNA replication in vitro. Intracellular location, quantitation, and purification by polyadenylate-cellulose chromatography. | |
| Williamson et al. | Translation of mouse globin messenger ribonucleic acid from which the poly (adenylic acid) sequence has been removed | |
| EP1448799B2 (en) | Methods of selective nucleic acid isolation | |
| US5580788A (en) | Use of immunoglogulin-binding artificial proteins as molecular weight markers | |
| Indge | Polyphosphates of the yeast cell vacuole | |
| Piccolomini et al. | Glutathione transferase in bacteria: subunit composition and antigenic characterization | |
| Jahn et al. | Histidine tRNA guanylyltransferase from Saccharomyces cerevisiae. II. Catalytic mechanism. | |
| Vioque et al. | Affinity chromatography with an immobilized RNA enzyme. | |
| Moen et al. | T4 phage deoxyribonucleoside triphosphate synthetase: purification of an enzyme complex and identification of gene products required for integrity | |
| Garcia et al. | A phage-associated murein hydrolase in Streptococcus pneumoniae infected with bacteriophage Dp-1 | |
| Castroviejo et al. | Partial purification and characterization of two cytoplasmic DNA polymerases from ungerminated wheat | |
| CS199122B1 (sk) | Spósob izolácie bielkovin | |
| Wilchek | Affinity chromatography | |
| von der Haar | [11] Affinity elution: Principles and applications to purification of aminoacyl-tRNA synthetases | |
| Kristensen et al. | Purification of Poly (ADP‐ribose) Polymerase from Ehrlich Ascites Tumor Cells by Chromatography on DNA‐Agarose | |
| Dixon et al. | Hydrophobic esters of cellulose: properties and applications in biochemical technology | |
| Slobin | The inhibition of elongation factor 1 activity by heparin | |
| Becker | Mechanisms of regulation of glycogen phosphorylase activity in Saccharomyces carlsbergensis | |
| US6509383B1 (en) | Methods and compositions for screening cloned proteins | |
| JAENICKE et al. | Glutamine synthetase from pig brain: binding of adenosine triphosphate | |
| Markey | Rapid purification fo deoxyribonuclease I using fast protein liquid chromatography | |
| Donham et al. | Characteristics of extracellular protein production by Staphylococcus simulans biovar staphylolyticus during aerobic and anaerobic growth | |
| Janski et al. | NADP-agarose: an affinity adsorbent for tobacco extracellular nuclease and other nucleases | |
| Toorchen et al. | Characterization of multiple extracellular cAMP-phosphodiesterase forms in Dictyostelium discoideum | |
| LeVine III et al. | Two types of brain calmodulin-dependent protein kinase II: morphological, biochemical and immunochemical properties |