CS199122B1 - Method for the isolation of proteins - Google Patents
Method for the isolation of proteins Download PDFInfo
- Publication number
- CS199122B1 CS199122B1 CS145578A CS145578A CS199122B1 CS 199122 B1 CS199122 B1 CS 199122B1 CS 145578 A CS145578 A CS 145578A CS 145578 A CS145578 A CS 145578A CS 199122 B1 CS199122 B1 CS 199122B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- proteins
- isolation
- potassium chloride
- eluted
- column
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title description 5
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 4
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 claims description 4
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 claims description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 3
- 238000000164 protein isolation Methods 0.000 claims 1
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 5
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186984 Kitasatospora aureofaciens Species 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000009088 enzymatic function Effects 0.000 description 1
- YUPQOCKHBKYZMN-UHFFFAOYSA-N ethylaminomethanetriol Chemical compound CCNC(O)(O)O YUPQOCKHBKYZMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
ČESKOSLOVENSKASOCIALISTICKÁREPUBLIKA( 19 )
POPIS VYNÁLEZU
K AUTORSKÉMU OSVEDČENIU 199122 (II) (Bl)
(«) (23) Výstavná priorita(22) Přihlášené 08 03 78(21) PV 1455-78 (5l)lnt.ci.3 o 07 G 7/028
ÚŘAD PRO VYNÁLEZY
A OBJEVY (40) Zveřejněné 17 09 79(45) Vydané 3Q 09 82 (75)
Autor vynálezu SlMUTH J0ZEF Ing.CSc. TIMKO JOZEF Ing.CSc.
TURŇA JÁN
ZELINKA JÁN doc.ing.DrSc., BRATISLAVA (54) Spósob lzolácle bielkovín
Predmst PV sa dotýká lzolácle blelkovin z biologického materiálu, ktoré majú afinituk nukleovým kyselinám. Pře exaktně Stádium enzýmov a blelkovin zúčastňujúcich sa metabolizmu nukleovýchkyselin v živých eyatémoch je potřebné získat leh v Čletom stave. Doteraz sa používájúk izolécii blelkovin obecné deliace metody, ktoré využívajá rozdlely v leh molekulovýchváhách a ionogénnych vlastnostiach. Tieto metody sú značné zdlhavé (trvájá niekoiko dníaž týždňov), vyžadujú náročné přístrojové vybavenie a vysoká odborná kvallfikáclu pra-covníkov. Zdlhavosl operácií má za následek zníženie výlažkov enzýmových aktivit čočasto sávlsí aj so stratou leh natívnej Struktury.
Tieto nedostatky odstraňuje sposob lzolácle podlá tohto vynálezu, při ktorom savyužívá schopnost týchto blelkovin Specificky sa vlazat na chromatografický iontomenič,ktorý tvoří dezoxyribonukleová kyselina navlazaná na polyetylenimin-karboxymetyl-celulózu.Podmienkou použitia tohto iontomenlča pre aflnitná chromátografiu blelkovin je, abyz biologického materiálu bolí odstránené nukleové kyseliny.. Příklad δ. 1
Izolácia RNA-polymerézy zo Streptomyces aureofacies. 199 122
Claims (1)
- 2 199122 10 g premytých bunlek 8. aureofaciens ea dezintegruje e 20 ml 0,09M Tris-hydroxymetyl--aminoetan pH 7,9, O,lmll chelaton III a centrlflkuje sa při 30 OOOg 2 hod pri 2 °C.Supernatant ea zmieáa a 9g polyetalenimin-karboxymetyl-celulózy a přidá ea také množstvochloridu draselného, aby výsledná koncentrácla bola 0,3M. UleSa ea 1/2 bod. a centrlfu-guje sa při 30 OOOg. K eupernatanťu «a přidá 20 ml tlmivého roztoku bez chloridu drasel-ného a nanesie ea na kolonu 2x9 cm rýchloslou 3 ml/hod. Z tejto kolony sa eluuje tlmi-vým roztokom, v ktorom sa zvySuje ionová sila postupné 0,3M, 0,5K, 1M, 2M chlorid draselný. Aktívny enzým sa eluoval vo frakcii s 1M a 2M chloridom draselným. V obldvoch* 2 případech stupen puriflkácie je řádové 9.10 a funkcia enzýmu je plné závislá na ONA.Celý proces puriflkácie trvá necelých 36 hodin. Příklad 25. 2 Izolácia restrikčnej endodezoxyribonukleázy Sau I. zo Streptomyces aureofaciens. K 10 g preaytých bunlek zo S. aureofaciens sa přidá 20 ml Ο,ΟΙίί Trie-hydroxymetyl--aminometan tlmivého roztoku. Po dezlntegrácii aa zmes centrifuguje při 109 0C0 g 2 hod.pri 2 °C. Celá zmes sa nanesie na chromatografickú kolonu 2x10 cm a eluuje sa postupné0,01M fosforečnanovým tlmlvým roztokom s obsahom O,lmtí chelatonu III, lmM 2-merkaptoeta-nolu a 108 glycerínom. Frakcia obsahujúca restrikSnú endonukleázu bola z kolony eluovanóO,1M chloridom draselným v uvedenom tlmivom roztoku. Této frakcia bola nanošené nakolonku 1x8 cm s obaahom dezoxyribonukleové kyselina polyetylenimin-karboxymetyl-celu.ló-zy a eluovala sa postupné 0,1, 0,3, 0,9M chloridom draselným. Aktívny enzým sa eluovalvo frakcii s 0,9M chloridom draselným. Enzým bol zbavený nespecifických nukleéz. Týmto spósobom ea móžu izoloval rózne bielkoviny z biologických materiélov, ktorémajú afinitu k nukleovým kyselinám. Tleto enzýmy majú Široké použitie v molekulárno--biologlckýoh experimentoch a génovom inžinlerstve. PSE DME T VYNÁLEZU SpÓsob izolácle bielkovín vyznačujúcl sa tým, že sa bielkoviny viažu na iontomeničidezoxyribonukleové kysellna-polyetylenimin-karboxymetyl-celulóza, z ktorého sa uvolňujúionovou silou od 0.1 do 1.9 M pri pH od 7,0 - 9,2. Cena 2,40 Kčs TZ 6/70
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS145578A CS199122B1 (en) | 1978-03-08 | 1978-03-08 | Method for the isolation of proteins |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS145578A CS199122B1 (en) | 1978-03-08 | 1978-03-08 | Method for the isolation of proteins |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS199122B1 true CS199122B1 (en) | 1980-07-31 |
Family
ID=5348965
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS145578A CS199122B1 (en) | 1978-03-08 | 1978-03-08 | Method for the isolation of proteins |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS199122B1 (cs) |
-
1978
- 1978-03-08 CS CS145578A patent/CS199122B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wilchek | Affinity chromatography | |
| Williamson et al. | Translation of mouse globin messenger ribonucleic acid from which the poly (adenylic acid) sequence has been removed | |
| Carmichael et al. | The host factor required for RNA phage Qbeta RNA replication in vitro. Intracellular location, quantitation, and purification by polyadenylate-cellulose chromatography. | |
| EP1448799B2 (en) | Methods of selective nucleic acid isolation | |
| EP0550771B1 (en) | Immunoglobulin-binding artificial protein | |
| AU684134B2 (en) | Nucleic acid transfection efficiency increase by use of isopropanol in aqueous solutions | |
| Lippmann et al. | Prokaryotic elongation factor Tu is phosphorylated in vivo. | |
| Piccolomini et al. | Glutathione transferase in bacteria: subunit composition and antigenic characterization | |
| Jahn et al. | Histidine tRNA guanylyltransferase from Saccharomyces cerevisiae. II. Catalytic mechanism. | |
| Sakai | Contractile Properties of Protein Threads from Sea Urchin Eggs in Relation to Cell Divison | |
| Vioque et al. | Affinity chromatography with an immobilized RNA enzyme. | |
| Jakubowski et al. | The Plant Aminoacyl‐tRNA Synthetases: Purification and Characterization of Valyl‐tRNA, Tryptophanyl‐tRNA and Seryl‐tRNA Synthetases from Yellow‐Lupin Seeds | |
| CS199122B1 (en) | Method for the isolation of proteins | |
| Lanka et al. | Escherichia coli dnaB protein. Affinity chromatography on immobilized nucleotides | |
| Ruggieri et al. | Techniques for nucleic acid purification from plant, animal, and microbial samples | |
| Kristensen et al. | Purification of Poly (ADP‐ribose) Polymerase from Ehrlich Ascites Tumor Cells by Chromatography on DNA‐Agarose | |
| von der Haar | [11] Affinity elution: Principles and applications to purification of aminoacyl-tRNA synthetases | |
| Dixon et al. | Hydrophobic esters of cellulose: properties and applications in biochemical technology | |
| Bayer et al. | [23] Colorimetric enzyme assays for avidin and biotin | |
| Doonan | General strategies | |
| Wang et al. | Aqueous two-phase extraction of dehydrogenases using triazine dyes in PEG/phosphate systems | |
| Becker | Mechanisms of regulation of glycogen phosphorylase activity in Saccharomyces carlsbergensis | |
| Markey | Rapid purification fo deoxyribonuclease I using fast protein liquid chromatography | |
| Janski et al. | NADP-agarose: an affinity adsorbent for tobacco extracellular nuclease and other nucleases | |
| Kumar et al. | Purification of Lac repressor protein using polymer displacement and immobilization of the protein |