CS199085B1 - Způsob přípravy kultur buněk psích ledvin vhodných έ pomnožení viru parotitidy - Google Patents
Způsob přípravy kultur buněk psích ledvin vhodných έ pomnožení viru parotitidy Download PDFInfo
- Publication number
- CS199085B1 CS199085B1 CS775988A CS598877A CS199085B1 CS 199085 B1 CS199085 B1 CS 199085B1 CS 775988 A CS775988 A CS 775988A CS 598877 A CS598877 A CS 598877A CS 199085 B1 CS199085 B1 CS 199085B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- propagation
- cultures
- medium
- preparing
- incubated
- Prior art date
Links
- 206010034038 Parotitis Diseases 0.000 title claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 title 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 17
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 12
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 claims description 11
- 241000282465 Canis Species 0.000 claims description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 7
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 claims description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 17
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 6
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 5
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 5
- 244000309466 calf Species 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001894 hemadsorption Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000711386 Mumps virus Species 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 241000606651 Rickettsiales Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 229960003704 framycetin Drugs 0.000 description 1
- PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N framycetin Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O2)N)O[C@@H]1CO PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000004519 grease Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229940095293 mumps vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
Vynález se týká způsobu přípravy buněčných kultur, u něhož se řeěí otázka zlepěení podmínek kontrolního vyšetření jejioh kvality a otázka zvýěeného efektu pomnožení virového agens.
Jednou ze základních podmínek uspokojivého výsledku reprodukce viru je vyhovující kvalita buněčných kultur. Podle dostupných literárních údajů i dosavadní běžné praxe se k pomnožování při výrobě nebo provozu užívá kultur v období prvého až sedmého dne po nasazení buněk (viz např. Lennette E.H. et al., Laboratorní metody vyšetřovací virových a rickettsiálních nákaz, Avicenum, Praha, 1974), výjimečně desátého až dvanáctého dne (činétl J. et al., Tkáňové a buněčné kultury, SZN, Praha, 1968, str. 144) po nasazení. Tato, poměrně krátká doba celkové inkubace před infikováním může postačit k rozpoznání hrubých kvalitativních nedostatků kultur, avšak ke konečnému posouzení jejioh vhodnosti pro náročnější účely je zpravidla zapotřebí delšího časového období, čím později jsou eventuelní závady zjištěny, tím větší materiální i časové ztráty mohou vzniknout, úměrně i významu sledovaného cíle (např. příprava větší šarže očkovací látky).
Běžným požadavkem pomnožování mikrobiálního inokula je získání materiálu o co nejvyšším obsahu infekčního agens (např. pro přípravu žádaného produktu), anebo - při
199 085 využití v diagnostice - pomnožení infekčního Inokula postačující ke spolehlivému odečtení testu. V některých systémech buněčné kultura-virus může být dosažení uspokojivého výsledku obtížné, jak jsme zjišťovali i v případě pomnožovéní některých atenuovaných kmenů Viru parotitidy v primárních kulturách buněk psích ledvin.
U dosud známých postupů pomnožovéní virového agens v buněčných kulturách tedy 1) může docházet k ekonomickým ztrátám zaviněným zahájením práce na nevhodných buněčných kulturách, 2) není, alespoň v některých případech, dosahováno optimálního pomnožovacího efektu.
Oba výěe uvedené nedostatky, přinejmeněím v případě pomnožovéní kmene Jeryl Lynn Viru parotitidy v primárních kulturách buněk psích ledvin, je možno odstranit novým řeSením, jehož podstata spočívá v užití dodatkově, respektive prolongované inkubovaných kultur.
Nový způsob vychází ze studia přípravy živé očkovací látky proti příušnicím, z výsledků získaných za experimentálních podmínek, kdy infekční inokulum (atenuovaný kmen Jeryl Lynn) bylo aplikováno na primární kultury buněk psích ledvin dodatkově (po nárůstu buněk v kultivační nádobě, bez výměny média) inkubovaných, zpravidla při teplotě +25 °C po dobu tří týdnů.
Toto období dodatkové inkubace poskytuje (proti dosud běžnému postupu infikování kultur 5 až 7 dní po nasazení) pro kontrolní účely navíc 21 dní (podle výsledků orientačních pokusů věak není vyloučena možnost dalěího prodloužení - sledováno 35 dní), což vytváří podmínky pro snížení eventuálních ztrát vzniklých vyřazováním nevyhovujících kultur z produkce.
Z dodatkově inkubovaných kultur byla (při stejné dávce infekčního inokula na jednu kultivační nádobu) získávána virová tekutina o titrech infekční aktivity významně vyšších než z kultur užitých dosavadním způsobem, v období 1. až 11. zisku byl průměrný rozdíl titru 1,7 log TKID^q, eož představuje cca 5Onásobně vyěěí množství získaného infekčního viru (sledováno při užití mádla s neomycinem, bez příměsi inaktivovaného telecího séra).
Mechanismus pozorovaného jevu nelze zatím objasnit. Zvýšení pomnožovacího efektu bylo pozorováno u kultur dodatkově inkubovaných při teplotách kolem +25 °C po dobu od jednoho do pěti týdnů. Vedle teplotního a časového faktoru se zde mohou uplatňovat některé dalěi vlivy, jako např. složení média, jeho pH apod.
Podle dostupné literatury nebyl nový způsob přípravy buněčných kultur při pomnožování viru parotitidy ani jiných virů dosud popsán, ani není autorům známo, že byl někde využíván.
Podstatou vynálezu je tedy způsob přípravy kultur buněk psích ledvin vhodných k pomnožení viru parotitidy spočívají v tom, že se kultury buněk psích ledvin po nasazení v laktalbuminhydrolyzátovém médiu inkubují při teplotě od 35 do +38 °C po dobu potřebnou k nárůstu konfluentního monolayeru a potom se kultura dodatečně inkubuje v témž médiu při teplotě od +15 do +30 °C po dobu 7 až 28 dní.
Příklad konkrétního provedení vynálezu
Pomnožováni atenuovaného kmene Jeryl Lynn viru parotitidy v primárních kulturách buněk psích ledvin.
Příprava a inkubace buněčných kultur:
Ve 150 ml růstového laktalbumin-hydrolyzátového média VEL (médium Sevao III s příměsí 10 % inaktivovaného telecího séra, 1,2 ml roztoku 7,5 % NaHCO^ na 100 ml média,
100 j. penicilinu a 100 jig streptomycinu na 1 ml média) je do jedné láhve podle Rouxe objemu 1200 ml (kultivační plocha stěny 220 cm£) inokulovéna suspenze 10 x 10° trypsinovaných buněk psích (beagle) ledvin a lahve se v horizontální poloze inkubují stacionárně při teplotě +37 °θ po době pěti až sedmi dnů, do vytvoření konfluentní buněčné vrstvy na stěně kultivační nádoby. Potom jsou kultury bez výměny média inkubovény ve stejné poloze při teplotě +25 °C po dobu tří týdnů (dodatková inkubace).
Infikování buněčných kultur a získání virové tekutiny:
Dodatkově inkubované kultury jsou infikovány virem příušnic (atenuovaný kmen Jeryl Lynn adaptovaný na buňky psích ledvin) v multlplicitě inokula 10“^ až 10-1 num log TKID^q na jednu buňku, ve 100 ml čerstvého Parkerova média 199 původního složení (Morgan et al., Proč. Soc. Exp. Biol. Med., N.Y., 73,1, 1950) s příměsí 5 % inaktivovaného telecího séra, 2,1 ml roztoku 7,5 % NaHCO^ na 100 ml média, 100 j. penicilinu a 100 jig streptomycinu na jeden ml média. Pak se Inkubují stacionárně při teplotě +34 °G, přičemž se zisky virové tekutiny, spojené s výměnou média (100 ml původního Parkerova média 199 bez příměsi telecího séra, s 2,1 ml roztoku 7,5 % NaHCO-j na 100 ml média a s příměsí 25 fig Neomycinu B na Jeden ml média), provádějí ve zvolených (např. jedno- až třídenních) intervalech.
Získané virová tekutina s příměsí vhodného stabilizátoru (např. 1 % sacharózy, sorbitu, eventuálně lidského sérového albuminu) se do dalšího zpraoování ukládá ve zmraženém stavu, nejlépe při -70 °C.
Stanovení titru Infekční aktivity (TKID^q):
Test se provádí ve zkumavkových kulturách buněk heteroploidní linie Věro (10 replik na každé ředění vzorku, 10-n) e odečítáním cytopatického efektu a hemadsorpce resp. hemaglutlnace kuřecích.erytrocytů.
S výhodou lze užít techniky inokulace vyšetřovaného vzorku (a 0,2 ml) do suspenze buněk (300 tisíc buněk v 1,3 ml média na jednu zkumavku) v modifikovaném Eagleově minimálním esenciálním médiu s galaktozou a natrium pyruvátem (Baugh C.L. et al., Life Science, 6, 371, 1967; SlonimD., J. Biol. Stahdardization, 2, 51, 1974; IzbickýA.,
199 095
Zprávy SEVAC, δ. 3, 81 až 89, 1974) s desetidenní stacionární Inkubací v šikmé poloze při +37 °C, bez výměny média.
Po skončení inkubace se do zkumaVkových kultur přidá (po 0,2 ml na zkumavku s 1,5 ml média) suspenze třikrát promytých 3% kuřecích erytrocytů v roztoku PBS (Dulbecco, Vogt, J. exp. Med., 99, 167 až 182, 1954) bez Ca++ a Mg++, zkumavky se po důkladném protřepéní inkubují 30 minut při +37 °C a potom při laboratorní teplotě do vytvoření sedimentu v kontrolních zkumavkách. Sleduje se aglutinace krvinek a mikroskopicky výskyt hemadsorpce a cytopatlckého efektu. Vypočtené hodnoty TKID^q (Heed L.J., Muench H.,
Amer. J. Hyg., 27, 493, 1938) se vyjadřují v negativních loglo.
Nové řešení bylo zatím sledováno především s hlediska pomnožování některých aténuovaných kmenů virů parotitidy na primárních kulturách buněk psích ledvin, pokud však zvýšený pomnožovací efekt není vázán výlučně na některou zvláštní charakteristiku uvedeného systému, není vyloučeno, že se uplatní i při pomnožování jiných virových agenB nebo na Jiných typech buněčných kultur.
Výrazným kladem shora uvedeného příkladu nového řešení je vysoká efektivnost pomnožování viru (úspoře buněčných kultur, médií, laboratorního skla, snížení pracnosti), jednoduchost provedení a možnost důkladného prověření kultur před začátkem výrobního procesu.
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZUZpůsob přípravy kultur buněk psích ledvin vhodných k pomnožení viru parotitidy, vyznačující se tím, že se kultury buněk psích ledvin po nasazení v růstovém laktalbumln-hydrolyzátovém médiu inkubují při teplotě od +35 do +38 °C po dobu potřebnou pro nárůst konfluentní buněčné vrstvy na stěně kultivační nádoby a potom se kultura inkubuje v témž médiu při teplotě od +15 do +30 °C po dobu 7 až 28 dni.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS775988A CS199085B1 (cs) | 1977-09-14 | 1977-09-14 | Způsob přípravy kultur buněk psích ledvin vhodných έ pomnožení viru parotitidy |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS775988A CS199085B1 (cs) | 1977-09-14 | 1977-09-14 | Způsob přípravy kultur buněk psích ledvin vhodných έ pomnožení viru parotitidy |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS199085B1 true CS199085B1 (cs) | 1980-07-31 |
Family
ID=5405921
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS775988A CS199085B1 (cs) | 1977-09-14 | 1977-09-14 | Způsob přípravy kultur buněk psích ledvin vhodných έ pomnožení viru parotitidy |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS199085B1 (cs) |
-
1977
- 1977-09-14 CS CS775988A patent/CS199085B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Vogt et al. | An avian leukosis virus related to RSV (O): properties and evidence for helper activity | |
| Kohn | Polykaryocytosis induced by Newcastle disease virus in monolayers of animal cells | |
| JP2749887B2 (ja) | 連続細胞系におけるｉｂｄｖの産生 | |
| McDade et al. | Virulent to avirulent conversion of Legionnaires' disease bacterium (Legionella pneumophila)—its effect on isolation techniques | |
| Baublis et al. | Measles antigen and syncytium formation in brain cell cultures from subacute sclerosing panencephalitis (SSPE) | |
| Hughes | Physical and chemical methods for enhancing rapid detection of viruses and other agents | |
| US6991899B2 (en) | Cells for detection of influenza and parainfluenza viruses | |
| HU220080B (hu) | Eljárás gyengített Varicella zoster vírus vakcina előállítására | |
| Otsuki et al. | Studies on avian infectious bronchitis virus (IBV) II. Propagation of IBV in several cultured cells | |
| US5891624A (en) | Methods of culturing and assaying a virus in a specimen | |
| Nicholson et al. | An established cell line from the Atlantic salmon (Salmo salar) | |
| Moyer et al. | Limited growth period of human lung cell lines transformed by simian virus 40 | |
| WO2021070407A1 (ja) | アフリカ豚コレラウイルスの製造方法及び検出方法 | |
| Cords et al. | Replication of poliovirus RNA induced by heterologous virus | |
| Henle et al. | Effect of herpes simplex virus on cultured Burkitt tumor cells and its failure to influence the Epstein-Barr virus carrier state | |
| JPH10510708A (ja) | 連続継代したアフリカミドリザル腎臓細胞 | |
| US20080138362A1 (en) | Cell Strain Capable of Being Cultured Without Ingredients Derived From Animals, Method of Producing the Same, Method of Producing Virus Using the Same, and Method of Producing Vaccine | |
| CS199085B1 (cs) | Způsob přípravy kultur buněk psích ledvin vhodných έ pomnožení viru parotitidy | |
| Bishop et al. | 14. Plaque Assay for Poliovirus and Poliovirus Specific RNAs | |
| US3585266A (en) | Live rabies virus vaccine and method for the production thereof | |
| Consigli et al. | Plaque assay for polyoma virus on primary mouse kidney cell cultures | |
| Liess et al. | The propagation and growth characteristics of rinderpest virus in HeLa cells | |
| US3255080A (en) | Live rabies virus vaccine and method for the production thereof | |
| Verwoerd et al. | The serological relationship of South African bovine enterovirus strains (Ecbo SA-I and-II) and the growth characteristics in cell culture of the prototype strain (Ecbo SA-I) | |
| Mallucci | Mouse hepatitis virus and interferon production in normal and regenerating liver |