CS198489B1 - Způsob mikroextrakoe pro stanovení frakcí 17-ketosteroidů a derivátů progesteronu z moče - Google Patents
Způsob mikroextrakoe pro stanovení frakcí 17-ketosteroidů a derivátů progesteronu z moče Download PDFInfo
- Publication number
- CS198489B1 CS198489B1 CS369777A CS369777A CS198489B1 CS 198489 B1 CS198489 B1 CS 198489B1 CS 369777 A CS369777 A CS 369777A CS 369777 A CS369777 A CS 369777A CS 198489 B1 CS198489 B1 CS 198489B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- urine
- fractions
- determination
- microextraction
- progesterone
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 11
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 title claims description 11
- 238000004853 microextraction Methods 0.000 title claims description 4
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 title 2
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 title 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 title 1
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 4
- 150000003145 progesterone derivatives Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims 1
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 claims 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 9
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGXBDMJGAMFCBF-UHFFFAOYSA-N Etiocholanolone Natural products C1C(O)CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC21 QGXBDMJGAMFCBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- FFUAGWLWBBFQJT-UHFFFAOYSA-N hexamethyldisilazane Chemical compound C[Si](C)(C)N[Si](C)(C)C FFUAGWLWBBFQJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 2
- PIXFHVWJOVNKQK-CJWOFWMHSA-N 11-Hydroxyandrosterone Chemical compound C1[C@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3[C@H](O)C[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@H]21 PIXFHVWJOVNKQK-CJWOFWMHSA-N 0.000 description 1
- QGXBDMJGAMFCBF-BNSUEQOYSA-N 3alpha-hydroxy-5beta-androstan-17-one Chemical compound C1[C@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@@H]21 QGXBDMJGAMFCBF-BNSUEQOYSA-N 0.000 description 1
- QGXBDMJGAMFCBF-HLUDHZFRSA-N 5α-Androsterone Chemical compound C1[C@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@H]21 QGXBDMJGAMFCBF-HLUDHZFRSA-N 0.000 description 1
- 102000009133 Arylsulfatases Human genes 0.000 description 1
- FMGSKLZLMKYGDP-UHFFFAOYSA-N Dehydroepiandrosterone Natural products C1C(O)CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CC=C21 FMGSKLZLMKYGDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 description 1
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229940061641 androsterone Drugs 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N dehydroepiandrosterone Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC=C21 FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 1
- 229960002847 prasterone Drugs 0.000 description 1
- -1 pregnanone diol Chemical class 0.000 description 1
- 150000003146 progesterones Chemical class 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 108060007951 sulfatase Proteins 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
Vynález se týká způsobu mikroextrakce pro stanovení frakcí 17-ketosteroidú a derivátů progesteronu z moče pomocí chromátografioké nebo fotometrloká analýzy. Vynález umožňuje získat čistý extrakt uvedených steroidních hormonů, přičemž se celý extrekční a čisticí proces provádí v jediné zkumavce a to bez nároků na speciální technické zařízení. Pod pojmem frakce 17-ketosteroidů a deriváty progesteronu ee rozumí tyt© látky: androsteron, etiocholanolon, dehydroepiandrosteron, 11-keto-androsterw, il-keto-aticholanolon, 11-hydroxy-androsteron, 11-hydroxy-etioholanolon, pregnaadiol, pernantriol a pregnantriolon.
Dosud známé způsoby extrakce jsou vícenásobné extrakce, přičemž vycházejí ze vzorku moče o objemu 4 až 100 ml, jsou pracné a vyžadují značné množství chemických činidel a několik laboratorních nádob. Tyto způsoby nelze použít jako mikrometodu, neboť neumožňují dosáhnout dostatečného množství a čistoty výtěžku pro delší analýzu. Značné efektivní je postup podle článku Evaluation of a gas-liquid chromatographic method for the determination of urinary steroide using high-reeolution open-tubular glaes čepiliary oolumns,
Bailey E. - Penoughty M. - Chapman J. R., Journal of Chromátography, 96/1974» str. 33-46, Elsevier, Amsterdam. Citovaný postup je dvojnásobná extrakce, která se provádí takto:
K vzorku moči o objemu 4 ml se přidá 0,8 ml acetátového pufru a 0,04 ml extraktu Helix pomátlá, poté se dvakrát extrahuje s 20 ml dietyleteru. Přitom se používají tři dělící nálevky o objemu vězším než 25 ml.
198 489
198 489
Po promytí sodným louhem a vodou se extrakt odpaří v rotační vakuové odparoe. Potom se suchý extrakt derivátizuje a dále se zpracuje pro chromatografiokou analýzu.
Postupem podle vynálezu ee uvedené nedostatky známých postupů odstraňují. Podstatou vynálezu je jednonásobná extrakce, která se provádí, včetně čistění a promývání, jen v jediné zkumavce s uzávěrem, která má objem 1 až 3. ml. Díky tomu, že se používá jen jediné zkumavky, sníží se znečistění a ztráty výtěžku, čímž se zvýší účinnost extrakoe.
Postupuje se takto: Vzorek moče o objemu 0,5 až 2 ml se vloží do zkumavky o objemu 1 až' ml. Jako rozpouštědlo se přidá 0,35 až 1,4 ml dichlormetanu. Pak ee tato extrakční směs vytřepe na rotačně-vibrační třepačce. Vodní vrstva se od diohlormetanové oddělí odstředěním. Vodní vrstva je lehčí než dichlormetanová a proto vystoupí nahoru, odkud se shora odsaje. Poté se dichlormetanová vrstva promývá louhem sodným a pak vodou, přičemž se po vytřepání a odstředění vodní vrstva odsaje opět shora. Zbytky vodní vrstvy se odstraní přidáním síranu sodného, vytřepáním a odstředěním. Teprve potom se extrakt přenese do jiné zkumavky k odpaření a k následné analýze.
Vynálezem se dosahuje těchto účinků: extrakci lze provést na vzorcích moče o objemu 0,5 až 2 ml, zvýší se čistota výtěžku, usnadní se manipulace, zkrátí se čas ne provedení a sníží se spotřeba chemických činidel a nádobí.
Příklad
K mikroextrakoi se přistupuje až po předohozí enzymetioké hydrolýze. Enzymatická hydrolýza a oelá extrakce se provádí v jediné uzavíratelné zkumavce s kónickým zúžením o objemu 1,5 ml. Vychází se z 1 ml moče okyselené na pH 4,6 pomocí 1 mol/1 HG1, ke kterému se přidá 50 ul 2 mol/1 acetátového pufru s pH 4,6 , dále 5 ul ^glukuronidázy (arylsulfatázy z Helix pomatle 5,2 U) 2,6 U ne 1 ml, dále 5 ul chloroformu p. e. e dále 2 ug endrostandionu jako vnitřní standard. Zkumavka se uzvaře, promíchá, pak se otevře e nechá se inkubovet 48 hodin při 37 °C. Inkubaoí se daný objem samovolné zahustí na 0,35 ml.
(Začátek postupu podle vynálezu.) K 0,35 ml zahuštěné moče se přidá 0,7 ml dichlormetanu p. a., poté se zkumavka uzavře a třepe se 5 minut na rotačně-vibrační třepačoe, pak se odstřeluje 1 minutu. Horní vodní vrstva se odsaje shora. Ke zbylé dolní dichlormetanová vrstvě se přidá 0,2 ml 0,1 mol/1 NaOH. Pak se opět 2 minuty přepe a 1 minutu odstřeluje při 12 000 ot/min., načež se horní vodní vrstva opět odsaje shora. Tento čisticí proces se opakuje ještě jednou. Pakse přidá 0,4 ml demineralizované vody, 2 minuty se třepe, 1 minutu se odstřeluje a pak se horní vodní vrstva odsaje shora. Tento promývaoí prooes se provede třikrát - až do vymizení alkalioké reakce. Zbytky vodní vrstvy se odstraní přidáním 0,2 g bezvodého síranu sodného p. a., 2 minuty se třepe a 1 minutu odstřeluje. (Konec postupu podle vynálezu.) ·
Stanovení frakcí steroidníoh hormonů,se provede pomooí plynové chromátografle. Extrakt se přenese do zkumavky s kónickým zúžením a kompletně se odpaří. Pak se provede derivatizaoe hormonů pomooí 10 ul směsi silylačního činidla, tj. 1 díl trimetylohlorsilanu, 3 díly hexametyldisilazanu a 9 dílů dimetylformamidu, po dobu 2 hodin při teplotě 60 °C. Do plynového
198 489 ohromatografu se aplikuje 2 ul této směsi.
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZUZpůsob mikroextrakoe pro stanovení frakcí 17-ketosteroidů a derivátů progesteronu z moče,' vyznačující ee tím, že se do vzorku moče o objemu 0,5 až 2 ml, okyseleného na pH 4,6 a zahuštěného na jednu třetinu svého objemu, přidá 0,35 až 1,4 ml dichlořmetanu, odstředěním vzniklé kapalné vrstvy se oddělí, vodní vrstva se odsává shora, zbylá dichlormetenová vrstva se promývá louhem sodným a vodou, přičemž se pracuje v jedné zkumavce do objemu 3 ml, s výhodou od 1 do 2 ml, vzniklý extrakt se vyhodnocuje ehromatograficky nebo fotomelricky·
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS369777A CS198489B1 (cs) | 1977-06-06 | 1977-06-06 | Způsob mikroextrakoe pro stanovení frakcí 17-ketosteroidů a derivátů progesteronu z moče |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS369777A CS198489B1 (cs) | 1977-06-06 | 1977-06-06 | Způsob mikroextrakoe pro stanovení frakcí 17-ketosteroidů a derivátů progesteronu z moče |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS198489B1 true CS198489B1 (cs) | 1980-06-30 |
Family
ID=5377779
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS369777A CS198489B1 (cs) | 1977-06-06 | 1977-06-06 | Způsob mikroextrakoe pro stanovení frakcí 17-ketosteroidů a derivátů progesteronu z moče |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS198489B1 (cs) |
-
1977
- 1977-06-06 CS CS369777A patent/CS198489B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Rowland et al. | Lignin and cellulose fractionation in decomposition studies using acid‐detergent fibre methods | |
| Axelson et al. | Analysis of profiles of conjugated steroids in urine by ion-exchange separation and gas chromatography—mass spectrometry | |
| Menini et al. | An approach to the systematic analysis of urinary steroids | |
| Albano et al. | Factors affecting the saturation assay of cyclic AMP in biological systems | |
| Brooksbank et al. | The estimation of androst-16-en-3α-ol in human urine. Partial synthesis of androstenol and of its β-glucosiduronic acid | |
| Hamilton et al. | An analysis of the cell walls of Penicillium chrysogenum | |
| Marrian et al. | The isolation of a ketonic dihydroxy Kober chromogen from the urine of pregnant women | |
| Axelson et al. | Selective liquid chromatographic isolation procedure for gas chromatographic-mass spectrometric analysis of 3-ketosteroids in biological materials | |
| Radin | Preparation of psychosines (1‐O‐hexosyl sphingosine) from cerebrosides | |
| DE3856155D1 (de) | Vorrichtung und verfahren zur probenentnahme aus geschlossenen behältern | |
| CS198489B1 (cs) | Způsob mikroextrakoe pro stanovení frakcí 17-ketosteroidů a derivátů progesteronu z moče | |
| CN115677816A (zh) | 一种新的呋甾皂苷单体及其制备方法 | |
| EP0462795A2 (en) | Isolation of glycans | |
| EP0462796B1 (en) | Release and isolation of N-glycans and O-glycans | |
| SAIER et al. | A simplified method for the simultaneous determination of 17-ketosteroids, dehydroepiandrosterone, and 17-hydroxycorticosteroids in serum | |
| CN1621529A (zh) | 微量核酸释放剂 | |
| CN112725413A (zh) | 一种宫颈拭子核酸提取的裂解结合液、试剂盒及方法 | |
| Bianchi et al. | Antitumor agents from Agave schottii (Amaryllidaceae) | |
| Sommerville et al. | A modified method for the quantitative determination of progesterone in human plasma | |
| Taylor et al. | Rapid methods for the analysis of the fatty acids of fermenting wort and beer (C6‐C10) and yeast (C6‐C18) | |
| Linford | Experiments on the use of silicic acid for steroid chromatography | |
| Cargill et al. | The free and esterified sterol present in bovine adrenal cortex and medulla | |
| Chattoraj et al. | A gas chromatographic technique for the simultaneous determination of urinary pregnanediol and pregnanetriol after ammonium sulfate precipitation | |
| Bassiouni | The estimation of heparin in blood | |
| CN101434522B (zh) | 从棉籽脱酚液中制备高纯度棉酚的方法 |