CS198425B1 - Process for preparing cephalosporine c by fermentation - Google Patents

Process for preparing cephalosporine c by fermentation Download PDF

Info

Publication number
CS198425B1
CS198425B1 CS749576A CS749576A CS198425B1 CS 198425 B1 CS198425 B1 CS 198425B1 CS 749576 A CS749576 A CS 749576A CS 749576 A CS749576 A CS 749576A CS 198425 B1 CS198425 B1 CS 198425B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
strain
production
hours
inoculum
methionine
Prior art date
Application number
CS749576A
Other languages
English (en)
Slovak (sk)
Inventor
Ladislav Welward
Rudolf Kosalko
Richard Frimm
Original Assignee
Ladislav Welward
Rudolf Kosalko
Richard Frimm
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ladislav Welward, Rudolf Kosalko, Richard Frimm filed Critical Ladislav Welward
Priority to CS749576A priority Critical patent/CS198425B1/cs
Publication of CS198425B1 publication Critical patent/CS198425B1/cs

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

ČESKOSLOVENSKÁ SOCIALISTICKÁ
REPUBLIKA (19)
ÚŘAD PRO VYNÁLEZYA OBJEVY
POPIS VYNÁLEZU
K AUTORSKÉMU OSVEDCENIU (22) Přihlášené 22 11 76(21) (PV 7495-76) (40) Zverejnené 17 09 79 (45) Vydané 30 08 82 198425 (11) (Bl) (51) Int. Cl.'s I 12 35/06 (75) , ~
Autor vynálezu WELWARD LADISLAV ing. CSc., BÁNSKÁ BYSTRICA, KOSALKO RUDOLF
ing. CSc. a FRIMM RICHARD doc. ing. CSc., BRATISLAVA
(54) Sposob fermentačnej výroby cefalosporínu C Předložený vynález popisuje spósob fermentačnejvýroby cefalosporínu C s pomocou kmeňa Acre-monium chrysogenum CCM F-644 za submerznýchaerobných podmienok.
Objavenie cefalosporínu C (ďalej CFS-C) vyvolalointenzívny záujem v oblasti chemoterapie, preťožetoto antibiotikum je účinné na G+ a G_ mikroorga-nizmy, hlavně stafylokoky rezistentně voči peni-cilínom. Mechanizmus jeho pósobenia je zhodnýs penicilínom - zasazuje syntézu bunečnej steny.Samotný CFS-C má velmi nízku aktivitu, alederiváty jeho skeletu 7-aminocefalosporánovej ky-seliny sú látky klinicky vysoko účinné. CFS-C jev literatúre široko popísaný napr. v práci E. H.Flynn: Cephalosporins and Penicillins AcademiePress, New York and London, 1972, kde je napří-klad zdóvodnená aj jeho mikrobiálna syntézavznikom heterocyklických tripeptidov zloženýchz α-aminoadipovej kyseliny, cysteinu a valínu.CFS-C je produkovaný mikroorganizmami z roduCephalosporium a Emericellopsis súčasne s inýmilátkami majúcimi antibakteriálne vlastnosti akosú napr. cefalosporín N a cefalosporín P. Příprava CFS-C s kmeňom Cephalosporium Sp.kmen F-12 je chráněná patentom NSR - 2239321z 22. 2. 1973, ďalej s kmeňom Cephalosporium poly-aleurum - US patent 3,816,257 z 11. 5. 1974 a tiežstarším patentom US - 3,082,155 z 19. 10. 1963, kde ako produkčný kmeň sa používá Cephalospo-rium acremonium IMI49137. Námi navrhovaný spósob fermentačnej výrobyCFS-C sa vyznačuje tým, že sa od doterajšíchpostupov líši v príprave produkčného kmeňaa tým v celej pomnožovaeej časti. Jeho novost spo-čívá v tom, že kmeň po vyočkovaní zo šikméhoagaru sporulačnej pódy je submerzne pomnoženýv baničkovej inokulačnej pode na rotačnom trepa-com stroji pri teplote 28 °C za 72 hodin.
Takto získaným narasteným submerzným ino-kulom - teda nie sporami - sú očkované jačmennékrúpy, ku ktorým bola přidaná arašídová múkaa Czapek-Doxov roztok. Po 11 dňoch inkubovaniapri teplote 23 až 28 °C sa získajú vysporulovanékonzervy s kmeňom Acremonium chrysogenumCCM F-644, ktoré obsahujú asi 10’ až 109 konídiív konzervě. Touto striedavou pasážou produkčnéhokmeňa sa zaistí produkčná aktivita pomnoženejkultúry a rýchly nárast inokula potřebného preočkovanie následného váěšieho objemu. Takétoinokulum zaručuje po kmeňovej stránke štandard-ný nárast Acremonium chrysogenum v produkěnejkultivačnej pode, čím súčasne znižuje riziko kon-taminácie, ktoré je najváčšie právě v týchtopočiatočných rastových fázach. Striedavá pasážpodlá schémý spory - vegetatívna forma - spory 198425 sa osvědčila například při přípravě kmeňa Penicil-lium chrysogenum a je popísaná v L. Welward,Folia Mierobiologiea, 18,. 163, 1973. Kultivačnápóda pre přípravu vegetatívneho inokula je velmijednoduchá - ako zdroj asimilovatelného uhlíka sapoužije polysacharid alebo disacharid připadnemelasa, zdrojom organického dusíka móže byť pep-tón alebo kukuřičný výluh a anorganický dusík savnáša do tejto pódy octanom amonným. Kultivujesa při teplote 23—30 °C aerobne za přítomnostiodpeňovadla podlá podmienok kultivácie 48—72hodin. Takto připravenými 5—10 obj. percentamiinokula sa očkuje produkčná póda, ktorá obecnepozostáva: zo zdroj a asimilovatelného uhlíka, ktorý móžebyť reprezentovaný polysacharidami vo vodě roz-puštěnými alebo nerozpustnými, disacharidami akosú napr. sacharóza,. laktóza, galaktóza, fruktóza,glukóza, manit, sorbit. Móže sa tiež použiť melasa. Ďalšou súčasťou pódy sú látky majúce odpeňo-vacie vlastnosti, ktoré súčasne sú produkčným kme-ňom obvykle asimilovatelné. Sú to z rastlinnýcholejov - sojový, slnečnicový, olivový, lanový, koko-sový, řepkový, zo živočišných tukov - bravčovámasť, loj resp. hydrolyzáty z oboch skupin.Zvlášť vhodnými sú estery - metyl a etyloleát, gly-cerolmonooleát, polyetylénglykolmonooleát alebopolyetylénglykoldioleát. Z anorganických odpeňo-vadiel - silikonový olej. Zdrojom organickéhodusíka móžu byť rastlinné a živočišné proteinya ich hydrolyzáty. Najčastejšie sa používá bavlní-ková, arašídová, sojová, kukuřičná, rybia, kostnámúka, resp. kvasničný extrakt a proteinové zbytkypo róznych fermentáciáeh. Živná póda obsahuje tiež anorganické solizlepšujúce priebeh kultivácie a to: uhličitan vápe-natý, borax, octan amónny resp. niektoré fosfátyalkalických kovov.
Velmi dóležitou súčasťou fermentačnej pódy jezdroj organickej síry, najčastejšie DL-metionín.Mechanizmus pósobenia metionínu ide cez metabo-lickú dráhu cysteinu, ktorý slúži ako priamy pre-kurzor jadra 7-aminocefalosporánovej kyseliny.Súčasne metionín inhibuje tvorbu cystein - degra-dačných enzýinov, čím dovoluje udržiavať intra-celulárny systém cesteínu na hladině optimálnejpre tvorbu CFS-C. Sterilná produkčná póda naoč-kovaná 5—10 obj. % inokula sa kultivuje 96—180hodin při teplote 20—30 °C. Vytvořený CFS-C sastanoví spektrofotometricky pódia Claridge, Vaug-han, Kressel a Goureviteh: Antimicrobial Agentsand Chemotherapy, 1969, 131 alebo mikrobiolo-gickým testom na Alcaligenes faecalis ATCC 8750.Příklad č. 1
Produkčný kmen Acremonium chrysogenumCCM F-644 sa z pieskovej konzervy naočkuje našikmý agar nasledovného zloženia: kvasničný extrakt Difco 0,4 % kazeínový enzymatický hydrolyzát 0,3 %glukóza 1,0 %
FeSO4.7H2O 0,005 %
MgSÓ4.7H2O 0,005 % DL-metionín 0,005 % L-cysteín 0,005 % agar Difco 2,5 % pH po sterilizácii 6,5—6,8, naočkované šikméagary vysporulujú v inkubátore při teplote 28 °Cza 11 dní. Takto připravený šikmý agar sa dalejspláchne s 10 ml sterilnej H2O a s 0,3 ml tejtosuspenzie sa očkuje 60 ml inokulačnej pódy (IP)o zložení: sacharóza 1,5% kukuřičný výluh 59% 0,8 % octan amónny 0,5 % DL-metionín 0,1 % metyloleát 0,08 % sojový olej 1 kvapka/banička plnenie 60 ml pódy do 500 ml varných baniek pH po 30 minútach sterilizácie při 120 °C je 6,4—6,8.
Po 72hodinovej kultivácii pri teplote 28 °Cna rotačnom trepacom stroji pri 220 obr./min. sas 5 ml narasteného vegetatívneho inokula očkujú300 ml erlenmayerove banky s lúpaným jačmeňom. Příprava lúpaného jačmeňa: K 500 g lúpanéhojačmeňa vefkosť č. 7 přidáme 300 g arašidovejmúky a 100 ml Czapek-Dox roztoku o zložení:sacharóza 4 %, kukuřičný výluh 100% 0,5 %,NaN03 p. a. 0,3 %, KH2PO4 0,5, MsSO4.7H2O0,25 % . pH po 30 minútovej sterilizácii pri 120 °Cje 5,7—5,9. Po dobrom premiešaní sa rozplňujepo 30 g do 300 ml erlenmayerových baniek a ste-rilizuje pri teplote 110°C30 minut.
Po 24 hodinách sa sterilizácia opáť zopakuje.Naočkovaný lúpaný jačmeň sa uloží a pri teplote28 °C nechá sporulovať 11 dní. Vysporulovanékonzervy sa móžu skladovat pri teplote —15 °Cmaximálně 3 mesiace. Při očkovaní inokula sajáčmenná konzerva zaleje s 50 ml sterilnej vodya 2 hodiny sa na trepacom stroji zmývajů spory.Táto suspenzia postačí na očkovanie 1001 pomno-žovacej pódy (o zložení totožnom s pódou IP),ktorou sa po 72 hodinách aerobnej kultivácies 10 % obj. očkuje produkčná póda následuj úcehozloženia: kukuřičný škrob 4,5 % arašídová múka 6,0 % sacharóza 0,5 % glukóza 1,25 %
CaCO3 1,0 % DL-metionín 1,7 % borax 0,05 % metyloleát 2,5 %
Sterilizácia pri teplote 120 °C 40 minút. Počiatoč-né pH 6,3—6,5, kultivácia v nerezovom tančíkuo objeme 301, vzdušnenie I obj ./obj. pódy/min.,přetlak 0,7 atp, miešanie 500 obr./min., teplotado 24 hodiny kultivácie 28 °C, potom 23 °C dokonca kultivácie t. j. 168 hodin, kedy sa dosiahlaprodukčná aktivita 3800 p.g/ml CFS-C. Příklad č. 2
Pomnožovanie kmeňa, příprava inokula, pod-mienky kultivácie ako v příklade 1, len miestokukuřičného škrobu v produkčnej póde sa použilo:

Claims (1)

  1. a) β % vodorozpustného škrobu. V 160 hodiněkultivácie sa dosiahlo 3950 frg/ml b) 6 % dextrínu. V 160 hodině kultivácie sa do-siahlo 3450 μg/ml c) 6 % zemiakového škrobu. V 160 h. k. sa dosiahlo3850 μ^'ιηΐ. Příklad č. 3 Pomnožovanie kmeňa, příprava inokula, pod-mienky kultivácie ako v příklade 1, len miesto 2,5 % metyloleátu sa použilo v produkčnej pode: a) 2,5 % etvloleátu. V 164 h. k. sa dosiahlo 3780 gg/ml b) 1,5 % glycerolmonooleát a 0,5 % sojového oleja. V 164 h. k. sa dosiahlo 3550 gg/ml c) 1,5 % polyetylénglykoldioleát a 0,5 % slnečni-cového oleja. V 164 h. k. sa dosiahlo 3600 μg/nll d) 1 % metyloleátu, 0,5. % bravčovej masti a 0,5 %destilátu bravčovej masti - Lard oil. V 164 h. k.sa dosiahlo 3400 μg/ml. Příklad č. 4 Pomnožovanie kmeňa, příprava inokula, pod-mienky kultivácie ako v příklade 1, len v produkčnej póde sa použilo misto 4,5 % kukuřičného škrobu a 0,5 % sacharózy: kukuřičného škrobu 3 % sacharózy 2 % po 164 h. k. sa dosiahla produkčná aktivita3780 gg/ml. Příklad č. 5 Pomnožovanie kmeňa, příprava inokula, pod-mienky kultivácie ako v příklade 1, len v pro-dukčnej póde sa miesto 1,7 % DL-metionínua 0,5 % CaCO3 použije: 1 % DL-metionínu 1 % CaCO3 Po 96 hodinách kultivácie sa dosiahla produkčnáaktivita 3200 gg/ml. Příklad č. 6 Pomnožovanie kmeňa, příprava inokula, pod-mienky kultivácie ako v příklade 1, len miestoarašidovej móky sa v produkčnej póde použije: 2 % arašidovej múky 4 % bavlníkovej múky Po 140 hodinách kultivácie sa dosiahla produkčnáaktivita 3850μg/ml. PREDMET Spósob fermentaěnej výroby cefalosporínu Cvyznačujúci sa tým, že sa produkčný kmeň Acre-monium chrysogenum CCM F-644 propagovanýstriedavou pasážou, pričom prevázdkovou kon-zervou je kmeň vysporulovaný na lúpanom jačme-ni, submerzne aerobne kultivuje vo vysterilizova- NÁLEZU ných živných pódach pomnožovacích a produkčnej,obsahujúcich ako asimilovatelné zdroje uhlíkapolysacharidy, disacharidy, respektive monosacha-ridy, dalej zdroje dusíka, síry, anorganické soli,odpeňovadlá a DL-metionín pri kultivaěnej teplote23—30 °C, pH = 6,3 —7,5 za 168 hodin.
CS749576A 1976-11-22 1976-11-22 Process for preparing cephalosporine c by fermentation CS198425B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS749576A CS198425B1 (en) 1976-11-22 1976-11-22 Process for preparing cephalosporine c by fermentation

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS749576A CS198425B1 (en) 1976-11-22 1976-11-22 Process for preparing cephalosporine c by fermentation

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS198425B1 true CS198425B1 (en) 1980-06-30

Family

ID=5424196

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS749576A CS198425B1 (en) 1976-11-22 1976-11-22 Process for preparing cephalosporine c by fermentation

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS198425B1 (cs)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US3634195A (en) Production of lipase
Lara et al. Induction of penicillin biosynthesis by L-glutamate in Penicillium chrysogenum
NO134546B (cs)
Chen et al. Optimization of glycerol feeding for clavulanic acid production by Streptomyces clavuligerus with glycerol feeding
US3677902A (en) Preparation of amyloglucosidase
US3892629A (en) Process for growing a fungus
US3558434A (en) Stimulation of the growth of microorganisms
US3825473A (en) Production of cephalosporin c
US20070142424A1 (en) Process for producing tacrolimus (FK-506) using vegetable oil as sole source of carbon
CS198425B1 (en) Process for preparing cephalosporine c by fermentation
US2936266A (en) Production of ergot alkaloids
HU181488B (en) Process for the hydrolysis of racemic hydantoins into optically active n-carbamoyl-aminoacid derivatives and for preparing the hydrolyzing enzymatic complex
US20080318289A1 (en) Fermentation Processes for the Preparation of Tacrolimus
US3533915A (en) Process for producing higher titers of lydimycin
Porter [1] Cultural conditions for antibiotic-producing microorganisms
D'Amato et al. A chemically defined medium for cephalosporin C production by Paecilomyces persicinus
US4343903A (en) Process for obtaining cholesterol esterase from micro-organisms
CA1339643C (en) Fermentation method for producing polyether antibiotics
SU582773A3 (ru) Способ получени -галактозидазы
US3011951A (en) Preparation of 11alpha, 17alpha-dihydroxyprogesterone
AU634148B2 (en) Use of cellulase preparations in the cultivation and use of cellulose-producing microorganisms
NL194830C (nl) Werkwijze voor het bereiden van cefalosporine C.
IL30058A (en) Process for preparing antibiotic a10388(pyrrolnitrin)
KR100446110B1 (ko) 세팔로스포린 c 생산 미생물
SI9800144A (sl) Nov biotehnološki postopek pridobivanja 3-hidroksi-ML-236B derivatov poznanih kot M-4 in M-4'