CS197244B2 - Method of isolation of the water solutions components - Google Patents

Method of isolation of the water solutions components Download PDF

Info

Publication number
CS197244B2
CS197244B2 CS751052A CS105275A CS197244B2 CS 197244 B2 CS197244 B2 CS 197244B2 CS 751052 A CS751052 A CS 751052A CS 105275 A CS105275 A CS 105275A CS 197244 B2 CS197244 B2 CS 197244B2
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
components
column
silica gel
extraction
thickening
Prior art date
Application number
CS751052A
Other languages
English (en)
Inventor
Joachim Breiter
Roland Helger
Original Assignee
Merck Patent Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=5908902&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CS197244(B2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Merck Patent Gmbh filed Critical Merck Patent Gmbh
Publication of CS197244B2 publication Critical patent/CS197244B2/cs

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/40—Concentrating samples
    • G01N1/405—Concentrating samples by adsorption or absorption
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/02—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material
    • B01J20/10—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material comprising silica or silicate
    • B01J20/103—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material comprising silica or silicate comprising silica
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/02—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material
    • B01J20/10—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material comprising silica or silicate
    • B01J20/14—Diatomaceous earth
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28002—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their physical properties
    • B01J20/28004—Sorbent size or size distribution, e.g. particle size
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28054—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their surface properties or porosity
    • B01J20/28057—Surface area, e.g. B.E.T specific surface area
    • B01J20/28059—Surface area, e.g. B.E.T specific surface area being less than 100 m2/g
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28054—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their surface properties or porosity
    • B01J20/28069—Pore volume, e.g. total pore volume, mesopore volume, micropore volume
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/282—Porous sorbents
    • B01J20/283—Porous sorbents based on silica
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/291—Gel sorbents
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/3092—Packing of a container, e.g. packing a cartridge or column
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N25/00—Investigating or analyzing materials by the use of thermal means
    • G01N25/14—Investigating or analyzing materials by the use of thermal means by using distillation, extraction, sublimation, condensation, freezing, or crystallisation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/18—Water
    • G01N33/1826—Organic contamination in water
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/94—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving narcotics or drugs or pharmaceuticals, neurotransmitters or associated receptors
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/40—Aspects relating to the composition of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/42—Materials comprising a mixture of inorganic materials
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/54—Sorbents specially adapted for analytical or investigative chromatography
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
    • Y10T436/104165—Lipid, cholesterol, or triglyceride standard or control
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
    • Y10T436/107497—Preparation composition [e.g., lysing or precipitation, etc.]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
    • Y10T436/108331—Preservative, buffer, anticoagulant or diluent
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/25—Chemistry: analytical and immunological testing including sample preparation
    • Y10T436/25375—Liberation or purification of sample or separation of material from a sample [e.g., filtering, centrifuging, etc.]
    • Y10T436/255—Liberation or purification of sample or separation of material from a sample [e.g., filtering, centrifuging, etc.] including use of a solid sorbent, semipermeable membrane, or liquid extraction

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Geochemistry & Mineralogy (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Extraction Or Liquid Replacement (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

(54) Způsob izolace komponent vodných roztoků
Vynález se týká způsobu izolace komponent vodných roztoků, rozpustných v lipofilních rozpouštědlech, jakož i použití určitých zahušťovacích pomocných činidel k provádění tohoto způsobu podle vynálezu.
Extrakce takových komponent nabývá neustále na významu, obzvláště v diagnostice, kde se již ve velké míře provádí důkazy, nebo určení komponent tělních tekutin. Při těchto biologických a lékařských výzkumech se zpravidla extrahují určované komponenty s pomocí lipofilních rozpouštědel z vodných tekutin. Při tom se tyto komponenty oddělují od nežádoucích, často ve velkém přebytku přítomných, doprovodných látek, například cukrů, solí, bílkovin, močoviny, a tím se čistí. Zúžením vznikajícího extraktu mohou být obohaceny také v nepatrném množství přítomné komponenty. Zčásti je tato analytická metoda zpřístupněna teprve tímto· způsobem.
Dosud používané metody však neuspokojují a vykazují obzvláště při extrakci komponent tělních tekutin, jako· je moč, krev, sérum nebo extraktů z částí orgánů nebo tkání podstatné nevýhody.
Při přímé extrakci vodné fáze lipofilními rozpouštědly se tvoří podle zkušeností fázové rozhraní velmi těžko, neboť se často tvoří emulze, která se nedá, nebo se dá jen velmi těžko -rozdělit a tím se znemožňuje kvantitativní extrakce. Rozražení emulse mimoto vyžaduje další čas, což je obzvláště nevýhodné u sériových pokusů.
Již bylo zkoušeno dosáhnout izolace těchto komponent zpracováváním· s pomocnými zahušťovacími prostředky. K · tomuto účelu · byly navrženy velmi početné látky, například · bezvodný síran . sodný, bezvodý síran horečnatý, adsorbenty na bázi silikátů, jako je běžný silikagel nebo florosil, molekulová síta nebo ionogenní estery celulózy. Tyto pomocné zahušťovací látky mají sice vysokou kapacitu zadržující vodu, avšak z jejich směsí s tělními tekutinami nemohou být určované komponenty, výjimečně pomocí příměsí, irreversibilní adsorpcí nebo pomocí výměny iontů, - kvantitativně extrahovány. Obzvláště dosud · používané silikátové adsorbenty mají tu nevýhodu, že desorpce zkoumaných komponent s pomocí lipofilních rozpouštědel, není kvůli aktivitě, popřípadě polaritě · povrchu těchto adsorbentů kvantitativně možná.
Polární sloučeniny, jako morfin, nejsou samy směsí lipofilních a . polárních rozpouštědel bez současné desorpce vody extrahovány.
To platí například také pro postup popsaný v Clinical Chemistry, str. 593 až ·596, 1973, k určení obsahu organických kyselin v moči.
Je zde popsána selektivní extrakce pomocí adsorpční a rozdělovači chromatografie s běžným aktivním silikagelem.
Silikagel má sice velikost zrnění 0,05 až 0,2 mm, ale popsaný způsob ukazuje, ževzhledem k vlastnostem tohoto materiálu jsou polární komponenty silikagelem zadržovány. Také nepolární substance jsou ještě relativně silně adsorbovány a jen zvolna je je možno získat zpět. To vyplývá mimo jiné z množství rozpouštědla, které je potřebné k extrakci a z jeho složení z polárních a nepolárních rozpouštědel. Tak se například na jeden objemový díl zkoušené tekutiny spotřebuje 25 objemových dílů rozpouštědla. Použitý silikagel má tedy příliš vysokou aktivitu. Kromě toho je při tomto známém způsobu potřebné mechanické promíchávání zkoušené tekutiny se silikagelem. To ale znamená při následujícím kvantitativním určování další zdroj chyb. Použije-li se například u mastných kyselin uvedená metoda k extrakci léčiv nebo jejich metabolitů s běžným silikagelem, tak tato metoda selže. Metabolity a jejich základní substance o mnohostranné struktuře jsou dokonce adsorbovány z vodného roztoku. Desorpce nastává jen polárními rozpouštědly a potom probíhá současná extrakce vody; tak se nemůže dosáhnout požadovaného cíle, provést vyčištění a koncentrování komponent.
Vynález se zabývá úkolem odstranit . nevýhody známých způsobů a vypracovat způsob, podle kterého se umožní šetrná a kvantitativní extrakce komponent vodných roztoků rozpustných v lipofilních rozpouštědlech.
Tento úkol je řešen použitím speciálních zahušťovacích koncentračních činidel.
Bylo zjištěno, že určitá zahušťovací činidla jsou schopná vázat vodné roztoky při zachování své sypkosti a že je možno komponenty z ' této směsi překvapivě, a s malým množstvím rozpouštědla, kvantitativně získat zpět. Tato metoda je velmi šetrná, takže se ani vodná tekutina, ani komponenty v ní obsažené nemění tímto· zpracováním. Adsorpce vodných roztoků probíhá kvantitativně, když množství pomocného· ' zahušťovacího činidla je zvoleno tak, že se dosáhne nejvýše maximální kapacity vázání vody. Následující desorpce komponent ze sypkého naplněného zahušťovacího pomocného činidla lipofilními rozpouštědly probíhá bez obtíží a kvantitativně.
Pdstata způsobu izolace vodných roztoků, například tělních tekutin, adsorpcí vodných roztoků na pomocná zahušťovací činidla na bázi křemeliny a/nebo silikagelu a následující extrakcí komponent lipofilními rozpouštědly, podle uvedeného vynálezu spočívá v tom, že se komponenty vodných roztoků adsorbují na sypký silikagel a/nebo křemelinu se střední velikostí částeček 0,5 až 1,0 mm, střední objem pórů 0,2 až 3 ml/g a se speci fickým povrchem 0,2 až 50 m2/g. S výhodou se jako pomocné zahušťovací činidlo použije silikagel se střední velikostí částeček 0,15 až 0,4 mm, středním objemem pórů 0,5 až 1,7 ml/g a středním specifickým povrchem 0,3 až 20 m2/g, nebo křemelina se střední velikostí částeček 0,15 až 0,4 mm, středním objemem pórů 0,5 až 1,7 ml/g a se středním specifickým povrchem 0,5 až 5 m2/g.
Nedalo se předpokládat, že by přímo silikagel a křemelina s výše definovanou charakteristikou tak podstatně předčily dosud používané pomocné zahušťovací látky. To se dalo tím méně předpokládat, když už byl také silikagel běžného' druhu již pro· tento účel použit, bez · žádného, nebo s nedostatečným výsledkem. Silikagely nebo křemeliny s jinou velikostí částeček, menším objemem · pórů nebo s podstatně menším specifickým povrchem nejsou pro postup podle vynálezu vhodné. S pocnými zahušťovacími činidly použitými podle vynálezu se naproti tomu dosáhne s menším množstvím rozpouštědla kvantitativní desorpce komponent, takže se takto získá k dispozici vynikající · a téměř universálně použitelná analytická metoda s vysokou spolehlivostí. Použitím ve vodě a v rozpouštědlech nerozpustných a nebotnajících zahušťovacích pomocných činidel, která jsou neionogenní, sypké a schopné perkolace, se může extrakce přeměnit téměř ideálním způsobem na eluci pevná látka—kapalina. Použitá zahušťovací činidla podle předloženého vynálezu se vyznačují tím, že to jsou výtečná činidla rozdělující fáze a umožňující kvantitativní extrakci bez mechanického mísícího postupu při adsorpci. Uchovávají si svojí zrnitost během celého postupu a mohou se obdivuhodně zatížit vodnou fází až ke hranici své kapacity příjmu vody, bez toho, že by voda byla při eluci lipofilními rozpouštědly vytěsňována. Také může být změněna hodnota pH vodné fáze, která je vázána na pomocné zahušťovací činidlo, přídavkem kyselých, alkalických nebo ústojných roztoků, nebo také kyselin nebo zásad ve formě plynu, takže se může provádět cílená a diferencovaná eluce s rozličnými rozpouštědly v závislosti na vlastnostech rozpuštěné extrahované látky. Dále se může vytěsnit vodný roztok, vázaný na pomocné zahušťovací činidlo, jiným roztokem, a. 'tímto způsobem dostupně · provádět další pokusy.
Použitá pomocná zahušťovací činidla jsou porézní adsorbenty na bázi kyseliny křemičité v zrnité podobě (granuláty nebo aglomeráty ve formě kuliček). Jsou vyrobeny podle speciálních metod z přírorních nebo syntetických modifikací kysličníku křemičitého. Jsou zčásti dostupné na trhu nebo se upraví na požadované parametry podle postupů uvedených v literatuře.
Podstatné je · udržení velikosti částeček, udaného objemu pórů a nepatrný specifický povrch. Souhrnem těchto charakteristik se dosáhne neočekávatelným způsobem výsledků dosud nedosažených. Silikagel a křemelina se mohou -přidávat stejným způsobem a také jednotlivě nebo ve směsi. Velikost částeček [průřez částeček) těchto pomocných. zahušťovacích činidel leží mezi 0,05 a 1 mm, výhodně mezi 0,15 až 0,4 mm. Je obzvláště výhodné, ale nikoliv nutné, zvolit pokud možno úzké rozmezí velikosti částeček, u kterého má například 60 % částic velikost částeček uvnitř udaného rozmezí. Udaná velikost částeček je rozhodujícím faktorem pro hustotu náplně, stabilitu a rychlost protékání připravené náplně sloupce. Z hustoty náplně naproti tomu vyplývá kapacita pohlcování vody.
Pomocná zahušťovací činidla použitá k provádění způsobu podle předloženého vynálezu mají mít velikost pórů větší než 0,2 ml/g. Čím je větší velikost pórů, tím vhodnější je činidlo k provádění tohoto způsobu. Všeobecně se osvědčilo rozmezí velikosti pórů mezi 0,2 až 3 ml/g. Se zřetelem na objem a na mechanickou stabilitu granulovaného materiálu leží výhodné hodnoty objemu pórů v rozmezí 0,5 až 1,7 ml/g.
Objem pórů má vliv na schopnost pomocných zahušťovacích činidel pohlcovat vodu, což je důležitý faktor pro způsobilost použitého pomocného zahušťovacího činidla. Pro objemovou jednotku sypaného materiálu s uvedenou zrnitostí vyplývá pro kapacitu příjmu vody hodnota mezi 0,2 a 1 ml vody/cm3 pomocného zahušťovacího činidla, výhodně 0,3 až 0,8 ml/cm3.
Další důležitou charakteristikou pomocných zahušťovacích činidel podle vynálezu je jejich aktivita, popřípadě inaktivita. Tato se dá definovat pomocí specifického povrchu. Bylo zjištěno, že jiné silikagely nebo křemeliny, obzvláště křemeliny nebo silikagely o vysokém stupni aktivity neposkytnuly prakticky žádné uspokojivé výsledky. Specifický povrch částeček má tedy ležet mezi 0,2 a 50 m2/g. Přitom je pro silikagel výhodné rozmezí asi 0,3 až 20 m2/g, pro křemelinu rozmezí 0,5 až 5 m2/g. Tyto relativně malé specifické povrchy se dosáhnou u silikagelu se středním průřezem pórů asi 50 nm až 4 μΐη, u křemeliny leží naproti tomu průřez pórů normálně z 65 % přes 4 μΐη. Jen tyto relativně inaktivní materiály, se zřetelem na normální adsorpční činidla, umožňují podle vynálezu dosažení kvantitativní extrakce.
Pomocná zahušťovací '(činidla podle předloženého vynálezu se z části připravují z přírodních produktů a mohou podle původu obsahovat rušivé nečistoty, například kovové soli nebo organické sloučeniny. Čistota se zpravidla zjišťuje chromatografií na tenké vrstvě nebo UV-spektroskopicky. Pokud je potřebné čištění, provádí se nejsnadněji známým způsobem promýváním kyselinou chlorovodíkovou, metanolem a/nebo vodou.
Pomocná zahušťovací činidla použitá podle předloženého vynálezu mohou vzhledem ke své vysoké retenční kapacitě pohlcovat kapaliny. Promísení nastává neočekávaně bez mechanického působení, takže odpadá míchání nebo přelévání. Adsorpce může probíhat až -k maximální vodné retenční kapacitě pomocných zahušťovacích činidel. V závislosti na sypné váze pomocného zahušťovacího činidla se všeobecně dosáhne hranice kapacity, když se vodný roztok smísí s pomocným -zahušťovacím činidlem asi při váhovém poměru voda:křemelina mezi 1:0,4 a 1:1,25, popřípadě voda:silikagel mezi 1,09 a 1:1,7. Když při eluování zůstanou vázané zbytky lipofilního rozpouštědla — což vede ke ztrátám — doporučuje se použití menšího množství pomocného zahušťovacího prostředku.
S pomocí těchto sypkých, adsorpčních pomocných zahušťovacích činidel se může nyní provést extrakce žádoucích komponent zpracováním s lipofilními rozpouštědly. Tato extrakce se může provádět všemi známými metodami extrakce pevná látka — kapalina, například vsázkovým způsobem nebo kontinuálně, například na sloupci. Získané extrakty jsou čiré roztoky a zcela prosté emulze. Komponenty přidaného vodného roztoku rozpuštěné v lipofilním rozpouštědle zůstávají kvantitativně v tomto extraktu.
Jako- lipofilní rozpouštědla se mohou použít všechna rozpouštědla, která rozpouštějí extrahované komponenty. Pod pojmem lipofilní rozpouštědla se zde rozumí všechna organická rozpouštědla, která dobře rozpouštějí tuky, oleje nebo substance - podobné tukům. Takovými rozpouštědly jsou například étery, jako je dletyléter nebo diispropyléter, estery, jako je metylacetát, nebo etylacetát, alkoholy, jako je metanol, etanol, propanol, isporopanol, butanol a vyšší homology, halogenované uhlovodíky, jako je dichlormetan, chloroform, tetrachlormetan, 1,2-dichloretan a 1,.1,2-Srichloretan, nebo aromatické nebo alifatické uhlovodíky, například benzen, toluen, pentan, hexan, heptan, petroleter nebo cyklohexan. Všechna tato rozpouštědla se mohou používat buď samotná, nebo ve směsi. Zásadně se mohou použít všechna organická rozpouštědla, která jsou vhodná pro- dosud známé způsoby k extrakci komponent. Zcela obzvláštní výhoda pomocných zahušťovacích činidel podle vynálezu spočívá v možnosti používat k extrakci také nižší alifatické alkoholy, tedy -s vodou mísitelná rozpouštědla. Tím se . v mnoha případech sníží množství potřebných rozpouštědel. Může se dosáhnout kvantitativní extrakce například s množstvím rozpouštědla, které podle objemu odpovídá objemu vodného extrahovaného roztoku. Toto dosud nebylo možná. Při použití směsí rozpouštědel mísitelných s vodou a rozpouštědel nemísitelných s vodou [například chloroform—metanol 80/20) probíhá extrakce bezvadně při nevysokém podílu rozpouštědla -s vodou [méně než 30 % objemových), přičemž voda zůstává překvapivě vázána na pomocné zahušťovací činidlo. Dále se dá provádět podle obzvláštní formy pro197244 vedení způsobu podle vynálezu, pokud je to zapotřebí, extrakce například nižším alifatickým alkoholem samotným, nebo ve směsi s nepatrným podílem lipofilního rozpouštědla mísitelného s vodou. Tyto nižší alifatické alkoholy mohou například štěpit komponenty séra, vázané na pomocné zahušťovací činidlo, například na bílkoviny vázané triglyceridy. Tím se stávají triglyceridy extrahovatelné. Nepatrná množství vody, která se přitcmto postupu spoluextrahují, nejsou při následující analýze závažná.
Způsob podle vynálezu má obzvláštní význam pro zkoušení tělních tekutin. Pod pojmem tělní tekutiny se zde rozumí obzvláště moč, krev, plasma nebo sérum, ale v úvahu přichází také žaludeční šťáva, lymfatická šťáva, mozková tekutina, míšní tekutina. Dále mají význam vodné tekutiny, které se získávají z tkáňového materiálu nebo z částí orgánů. Vedle toho se ale mohou extrahovat také libovolné jiné roztoky, například výtažky z rostlin a drog (například opiová tinktura, výtažek z hašiše a tabáku], jakož i promývací kapaliny a odpadní vody. Ze všech těchto tekutin se mohou komponenty, rozpustné v lipofilních rozpouštědlech . rychle, nezávadně a kvantitativně extrahovat.
Obzvláštní význam má způsob podle vynálezu v diagnostice nebo při zkoušení tělních tekutin na jejich obsah léčiv, drog, jedovatých látek nebo metabolitů z léčiv. Tak byly například za použití pomocných zahušťovacích činidel podle předloženého vynálezu dokázány a určeny analgetika, sedativa, hypnotika, antiepileptika, psychofarmaka, symphaticomimetika, antihistaminika, narkotika, -alkaloidy a antibiotika, popřípadě jejich metabolity. Vedle toho byly také extrahovány -a určeny metabolity tělu vlastní, například lipidy, triglyceridy, mastné kyseliny, steroidy a poryfyriny.
V mnoha případech je účelné, převést komponenty přítomné v tělních tekutinách změnou hodnoty pH na nedisociované, a tím na formu lépe rozpustnou v lipofilních rozpouštědlech. Také se může provádět enzymatické štěpení (například konjugovaných metabolitů, jako jsou glukuronidy -a -sulfáty] ve zkoumaném vodném roztoku, a sice taká ještě po smísení s pomocnými zahušťovacími činidly. Když jsou pomocná zahušťovací činidla podle vynálezu neutrální -a necitlivá vůči změnám hodnoty pH, může se zde použít libovolný vodný roztok. V získaném extraktu se mohou komponenty původního vodného roztoku dokázat a určit podle známých a v literatuře jednotlivě popsaných metod. V mnoha případech je obvzláště výhodné připravit s pomocí lipofilních rozpouštědel roztok, jehož objem odpovídá původnímu objemu vzorku, takže získané hodnoty pro komponenty potom jsou identické s původním vodným roztokem. Na druhé -straně je samozřejmě možné připravit způsobem podle předloženého vynálezu roztoky s podstatně vyššími koncentracemi zkoumaných komponent, čímž se může důkaz, popřípadě stanovení těchto látek podstatně ulehčit. K tomuto účelu se může například zahustit a spojit více extraktů.
Získaný extrakt je -obzvláště vhodný k důkazu komponent chromatografií na tenké vrstvě, nebo k důkazu plynovou chromatografií. Mohou se však použít také všechny ostatní důkazy a metody stanovení, například fotometrické, kolorimetrické, fluorimet:rické, imunologické a radioimunologické.
V mnoha případech se dá -s pomocí postupu podle předloženého vynálezu a zde definovaných pomocných zahušťovacích činidel zjistit standardní způsob stanovení určitých komponent vodných -roztoků. Tímto standardisováním se k ulehčení a také k využití v hromadných testech nabízejí pomocná zahušťovací činidla účelně v určitých hotových baleních. Hotová balení obsahují pomocná zahušťovací činidla v množstvích asi 0,5 až 50 g, přičemž je určité množství na potřebný účel použití. Balení může sice být v libovolné formě, například balíčky ve formě polštářků nebo koulí, výhodná jsou však balení - ve formě -sloupců, například -skleněných nebo z umělé hmoty, o délce asi 5 -až 20 cm -a půřezu 1 až 3 cm. Vhodné jsou například na trhu získatelné injekční stříkačky na jedno použití, pokud je však materiál odolný vůči použitým lipofilním rozpouštědlům. Vodné roztoky je potom potřeba pouze nanést, popřípadě natáhnout do takového sloupce, přičemž nastane promísení s pomocným zahušťovacím činidlem. V této formě je vzorek také schopný transportu. Extrakce komponent může potom probíhat centrálně na jiném místě. Transport takových zkoumaných kapalných vzorků je tímto způsobem podstatně zjednodušen. Ulehčuje například hromadné zkoušky ke zjišťování zneužití léčiv nebo drog.
Příklad 1
Dva -skleněné sloupce o průměru 1 cm (na vyústění uzavřené vatou] se naplní stejnoměrně vždy 5 g granulované křemeliny o zrnitosti asi -0,125 až 0,4 mm. Specifický povrch křemeliny leží okolo asi 1 m2/g, objem pórů okolo· asi 0,3 ml/g. Při použití ve sloupci činí pohlcování vody asi 1 ml/g.
Na každý sloupec se nanese - vždy 5 ml moči, která -obsahuje kodein, -difenhydramin, amfetamin a morfin v koncentracích vždy 20 ,ug/ml a která je upravena pomocí pufru NH4CI/NH3 na pH 9. Tekutina - se rychle nasaje do křemeliny.
Jeden -sloupec se eluuje chloroformem, druhý se eluuje směsí složenou ze stejných dílů chloroformu a etylacetátu. Eluát je v obou případech zcela čirý, voda zůstává ve sloupci. Oba eluáty se -rozdělí na frakce vždy po 10 ml a zahustí. Zbytky se zkoumají chromatografií na tenké vrstvě. Při eluování čistým chloroformem se úplně získá kodein, difen197244 hydramin a amfetamín v první frakci, morfin pouze ze 70 °/o, zbytek přejde ve druhé frakci. Třetí a následující frakce zůstávají prázdné.
Při eluci směsí chloroform—etylacetát se eluují všechny substance, včetně morfinu, v první frakci.
Příklad 2
Kvantitativní srovnání mezi eluci ze sloupce a třístupňovou extrakcí kapalina—kapalina.
Pro pokus se použije roztok 1 mg barbitalu sodného ve 1000 ml 1 M pufru (chlorid amonný/kyselina vinná) o pH 2. Jako pomocné zahušťovací činidlo se použije aglomerovaná křemelina s velikostí částeček 0,15 až 0,4 mm, se specifickým povrchem asi 1 m2/g, s vhodným středním průměrem pórů (více, než 80 °/o) větším než 4 μιη a s objemem pórů l,lm 1/mg. Jako sloupec slouží 50ml injekční stříkačka pro jedno použití z polypropylenu s vyústěním ve formě nálevky a s připevnitelnou dutou jehlou. Vyústění stříkačky je uzavřeno knotem z bavlny.
gramů pomocného zahušťovacího činidla se naplní do sloupců a protřepe. Sloupce mají průměr 27 mm a jsou naplněny do výše mm. S pomocí jemného síta z polypropylenu, drženého prstencem z polypropylenu se lůžko sloupce ze shora uzavře. Na každý sloupec se nanese 20 ml pufrového roztoku obsahujícího barbital, který se ihned pohltí. Vždy 2 sloupce se eluují diethyletherem, 2 druhé se eluují chloroformem. S pomocí nasunovatelné duté jehly na vyústění sloupce se reguluje průtok tak, že sloupcem projde 20 ml eluačního činidla za 10 min. Eluáty se rozdělí na frakce po 20 ml. Asi 15 ml eluačního činidla zůstane s vodnou fází na pomocném zahušťovacím činidle. Jak éterové eluáty, tak chloroformové eluáty zůstávají čiré. Všechny frakce eluátu se na vodní lázni pod dusíkem odpaří к suchu.
Pro srovnání se rovněž extrahuje vždy 20 mililitrů roztoku barbitalu, třikrát po 40' ml dietyléteru popřípadě chloroformu v dělicí nálevce. Extrakty se přefiltrují a pod dusíkem odpaří.
Zbytky po extrakci kapalina—kapalina i po eluci s pomocí zahušťovacích pomocných činidel se kvantitativně určí podle běžné metody pro stanovení barbiturátů, pomocí UV-spektrofotometrie při 255 nm v kyselém a alkalickém roztoku. V následující tabulce jsou zaznamenány výtěžky extrakce popřípadě eluce pro obě rozpouštědla.
1. Frakce 2. 3. celk. Spotřeba rozpouštědla
eluce (pomocná zahušťovací činidla) 99 % '— — 99 % 35 ml éteru
extrakce (kapalina—kapalina) 85 °/o 13 °/o — 98 o/o 80 ml éteru
eluce (pomocná zahušťovací činidla) 81 % 16 o/o — 97 o/o 55 ml chloroformu
extrakce 69 % 20 % 5% 94 0/0 120 ml chloroformu
(kapalina—kapalina)
Při kontinuální extrakci s pomocí zahušťovacích pomocných činidel se ušetří, při navzájem odpovídajících výtěžcích, proti extrakci kapalin—kapalina, tedy více než polovina množství rozpouštědla. Extrakce barbitalu za použití éteru je už v první frakci prakticky kvantitativní.
Příklad 3
Kvantitativní srovnání dvou pomocných zahušťovacích činidel při extrakci polárních a nepolárních alkaloidů.
Používají se sloupce, které byly použity u příkladu 2. Jako extrahovaný roztok se použije moč, upravená pufrem chlorid amonný/amoniak na pH 9,3, který obsahuje vždy 20 ^g morfinu a kodeinu ve 20 ml. Jako eluční činidlo se použije směs dichlormetanu a isopropanolu (85/15). Eluáty se dělí na frakce po 20 ml. Velmi lehké zakalení ve druhé frakci zmizí při zahušťování roztoku.
Pro srovnání se extrahuje 20 ml moči v dělicí nálevce 40 ml rozpouštědla (extrakce kapalina—kapalina). Eluáty a extrakty se po odpaření rozpouštědla podrobí analýze na obsah morfinu a kodeinu na plynovém chromatografu.
Jako pomocná zahušťovací činidla se použijí:
a) g granulované křemeliny popsané v příkladě 2.
b) g porézního granulovaného siiikagelu, který má stejný objem jako křemelina použitá v případě a). Jedná se o sillkagel s kulovitými částečkami o zrnění mezi 0,15 a.
0,30 mm. Specifický povrch činí 0,8 m2/g, střední průměr pórů je 4 ^m a objem pórů činí 0,7 ml/g.
Rozdělení morfinu a kodeinu na první a druhou frakci vždy po 20 ml ukazuje následující tabulka. Výtěžky dvoustupňové extrak ce kapalina—kapalina vždy po 40 ml rozpouštědla jsou brány jako 100 %.
pomocné zahušťovací činidlo
1.
MORFIN frakce
2.
celkem
KODEIN frakce 1. 2.
celkem
15,9 (Mg 4,8 <ug 20,7 μ§ 17 pg 0,8 μξ 17,8 ,ug
é76 % a23 % é99 % -95 % ^4,5 % ^99,5 %
19,9 (Mg 1,3 (Mg 21,2 /zg 17,6 (Ug 0,1 ^g 17,7 μξ
a96 % ^6 % él02 % й98,3 % ^0,6 % δ 99 %
extrakce 2 X 40 ml
20,8 ^100 %
17,9 μ&
^100 %
Spotřeba rozpouštědla u první frakce 35 militrů a u druhé frakce 20 ml. Naproti tomu byla u extrakce kapalina—kapalina spotřeba 80 ml rozpouštědla.
Příklad 4
Podobně jako v příkladech 2 a 3 se zkoušela extrahovatelnost toxikologicky významných léčiv a drog při pH 2 a pH 9 za pomoci nových pomocných zahušťovacích prostředků podle vynálezu.
Při pH 2 jsou extrahovatelné:
hexobarbital thiopental amobarbital fenobarbital cykiobarbital hydroxyfenobarbital secobarbital pentobarbital heptabarbital brallobarbital metylfenolbarbital barbital karbomal bromural acekarbomal ethinamat metihaqualon glutethimid difenylhydantoin meprobamat oxazepam medazepam chlordiazepoxid diazepam nitrazepam nitrazepam fenacetin paracetamol kyselina salicylová
Při pH 9 jsou extrahovatelné:
thioridazin promethazin levomepromazin amitryptilin 4-aminofenazon 4-dimetylaminofenazon pentazocin methadon tilidin propxyfen meperidin oxycodon morfin hydromorfon chinin ethylmorfin kokain kódem nikotin p-apaverin mescalin difenylíhydramin norefedrin fenmetrazin efedrin amfetamin methamfetamin chlorfeniramin mefentermin metylfenidat
Jako lipofilní rozpouštědlo se používá vždy směs dichlormetan — isopropanol (85/15). Stanovení se provádí částečně semikvantitativně s použitím chřomatografie na tenké vrstvě, částečně UV-spektroskopicky.
Při množství 20 ml moči se bázické substance extrahovaly při pH 9 35 ml rozpouštědla s výtěžkem 90 až 100 %; Efedrin, amfetamin a morfin se extrahovaly ze 70 až 90 procent. Odpovídající extrakční skupiny dávaly 80 až 100% extrakci při pH 2, například barbituráty a ostatní uspávači prostředky.
Ve všech případech se elucí dalšími 20 ml rozpouštědly dosáhlo 100% extrakce.
Příklad 5
Zkouška moči pacientů, kteří měli předávkované léčivo, které obsahovalo methaqualon, se provede tak, že se moč zahřívá 15 mi197244 nut s koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou. Získá se vločkovitý roztok, který se upraví hydroxidem sodným na pH 9,5. 20 ml tohoto vzorku, bez odfiltrované sraženiny se natáhne do — v příkladě 2 popsané stříkačky na jedno· použití, naplněné 16 g křemeliny (velikost částeček 0,15 až 0,40 mm, specifický povrch 1 m2/g, objem pórů 0,64 ml/ /g) — a eluuje se 35 ml směsi dichlormetan-isopropanol (80/20). Čirý eluát (20 ml) se pod dusíkem zahustí. Zbytek se chromatografuje na silikagelové destičce s pohyblivou fází chloroform-aceton (80/20). Byl zjištěn zřetelný vzorek metabolitu metaqualonu.
Při extrakcí takové moči stejnými rozpouštědly v dělicí nálevce se získá hustá emulse, kterou je možno rozrazit pouze centrifugám. Extrakt je močovým pigmentem podstatně silněji zbarven, než extrakt získaný s pomocí zahušovacím pomocným činidlem, takže chromatografický důkaz je značně rušen.
Příklad 6
K důkazu drog a vybraných zneužitelných léčiv nabízejí nová pomocná zahušťovací činidla zcela obzvláštní výhody. Tak se mohou překvapivě získat jak kyselé, tak zásadité látky v množství potřebném k důkazu, jedinou extrakcí moči při pH 8,5 až 9. Elucí 35 mililitrů směsi · dichlormetan-isopropanol (85/15) se dají získat, za použití sloupců a pomocných zahušťovac-ích činidel, popsaných v příkladě 2, při pH 8,5 až 9, kyselé · i basické substance uvedené v tabulce v příkladě 4, ve výtěžcích 80 až 100 %. Výjimku tvoří pouze metabolity · barbiturátů, které · se získají pouze z asi 50 %.
Příklad 7 ml opiové tinktury se extrahuje analogicky jako v příkladě 3 při pH 9. Při následujícím chromatografování získaného eluátu na tenké vrstvě na silikagelové destičce s volnou fází etylacetát-metanol-amoniak (85/ /10/5) se objeví typická skvrna opia.
Příklad 8
K 10 ml séra se napipetuje ·0,1 ml roztoku difenylhydraminu, amfetaminu, morfinu a kodeinu, okyselého kyselinou chlorovodíkovou. Koncentrace těchto látek činí v séru 50, 50, 50, popřípadě 25 /xg/10 ml. Plastikový sloupec s kónickým vyústěním se naplní 4 g granulované křemeliny (délka válce 150 mm, průměr válce 15 mm, velikost částeček křemeliny 0,15 až 0,40 mm, objem pórů 0,9 ml/g, specifická plocha větší než 1 m2/g) a nanese se 5 ml séra. Po 15 minutách se sérum bezezbytku nasaje. Sloupec se během 10 minut eluuje 15 ml dichlormetanu, eluát se odpaří a zbytek se semikvantitativně stanoví chromatografií na tenké vrstvě. Difenylhydramin, kodein a amfetamin jsou úplně eluovány, morfin asi z 90· %.
Příklad 9 ml krve pacienta s otravou barbituráty se smísí v uzavíratelné stříkačce pro· jedno použití s 10 g granulované a promyté křemeliny [zrnění 0,2 až 0,5 mm, objem pórů 0,63 ml/g, specifický povrch 1 m2/g). Směs se protřepe. Vzniklé lůžko sloupce je možno bez překážek perkolovat alkoholu prostým rozpouštědlem. K eluování se použije 40 ml chloroformu. Vytékající eluát je čirý. Po odpaření rozpouštědla se zbytek vyjme do 0,5 N hydroxidu sodného a běžným způsobem se proměří UV-spektroskopicky při 255 nm. Dokázala se koncentrace barbiturátu 1,8 mg/ /100 ml.
Příklad 10 ml injekční stříkačka pro jedno použití se naplní 14 g granulované křemeliny (velikost částeček 0,15 až 0,40 mm, objem pórů
1,1 ml/g, specifický povrch 1 m2/g). 20 · ml moči, která obsahuje barbituráty a morfin se upraví koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou na pH 2 a nanese se na sloupec. Po vsáknutí moči se eluuje 40 ml dichlormetanu. V · eluátu · · se ukazuje slabý zákal, avšak žádné vyloučení vody. Po· ukončení eluce v kyselém prostředí prosaje sloupcem vzduch promísený amoniakem. Nejprve odsátý zbytek dichlormetanu se vyhodí. Po několika minutách vystupuje amoniak na spodním konci sloupce, vodná fáze na pomocném koncentračním činidle se zalkalizovala (pH 10). Nyní se sloupec eluuje 40 ml směsi dichlormetan-isopropanol (85/15). Oba eluáty se odpaří a zkoumají chromatografický na tenké vrstvě. Srovnání s dvoustupňovou extrakcí kapalina-kapalina při pH 2 a 9 ukazuje, že eluce byla selektivní. V kyselém extraktu byl pouze barbiturát, v alkalickém pouze morfin. Výtěžek eluce v kyselém prostředí byl 100 °/o, v alkalickém u morfinu byl větší než 90 %.
Příklad 11
a] Moč, dvakrát extrahovaná podle příkladu 10 má být zkoušena na neextrahovatelné konjugované součásti morfinu. K tomu účelu se musí vodná fáze vytěsnit z pomocného zahušťovacího činidla. K tomuto účelu se po extrakci směsí dichlormetan-isopropanol nanese na sloupec 35 ml nasyceného roztoku chloridu sodného. · Tímto koncentrovaným roztokem chloridu sodného se ze slupce vytěsní zbytek rozpouštědla a roztok moči. Získá se 20 ml žlutě zbarveného vodného roztoku. Tento roztok se smísí s 20 ml 25% kyseliny chlorovodíkové, zahřeje a potom se extrahuje analogicky jako v příkladě 10 s použitím pomocného zahušťovacího činidla. Morfin se určí v eluátu.
1S
1β
b) Analogicky jako v příkladě 11a) se v kyselém prostředí eluovaná moč vytěsní ze sloupce 35 ml nasyceného pufru chlorid amoný-amoniak (pH 9,5). Získá se 20· ml vodného roztoku, který má hodnotu pH 8,8. Tento se nanese opět na suchý sloupec s granulovanou křemelinou, která byla popsána v příkladě 10, a eluuje se směsí dichlormetan-isopropanol (85/15). V eluátu se může dokázat morfin.
Příklad 12
Plastikový válec s kónickým vyústěním (půměr 1 cm, celkový objem 12 ml) se naplní do výšky 4 cm 1,5 g kulovitým porézním silikagelem (zrnění 0,15 až 0,5 mm, specifický povrch 0,3 m2/g, objem pórů 0,7 ml/g). Na něj se naplpetuje 0,5 ml séra a nechá se 10 minut nasáknout. Nyní se během 10 minut eluuje 7 ml směsi éter—etanol (3:1). Z eluátu se zachytí první 4 ml.
Z těchto se alikvótní díl (0,4 ml) odpipetuje a v něm obsažené triglyceridy se známým způsobem rozštěpí pomocí hydroxidu draselného; glycerin se oxiduje na formaldehyd a tento se kvantitativně stanoví kondensací s acetylacetonem. Jako standard slouží triolein, který se zpracovává stejně jako sérum.
V 5 vzorcích séra byl zjištěn obsah triglyceridů 160, 155, 145, 145 a 120 mg/100 ml.
Příklad 13 ml moči od osoby používající drogy se upraví 2 ml natriumacetátovéiho pufru o pH 5,5 na pH 5 a smísí se s 5 mg ureasy. 20 ml tohoto roztoku se nanese na sloupec s granulovanou křemelinou, analogickým jako v příkladě 10; sloupec se uzavře a uloží se přes noc. Po této době měla adsorbovaná moč hodnotu pH 9. Dále se eluovalo, analogicky jako v příkladu 10, směsí dichlormetan-isopropanol. V eluátu přítomné basické látky, jako je kokain, benzoylecgonin a morfin se pomocí chromatografie na tenké vrstvě oddělí a stanoví.
Příklad 14
Zkouší se moč po otravě metaqualonem. Metaqualon je vylučovaný močí jako konjugát nerozpustný v organických rozpouštědlech. Zahrátím s kyselinou chlorovodíkovou nebo enzymatickou hydrolysou je však jej možno převést na extrahovatelnou formu.
ml moči se smísí se 1,5 ml 2 M natriumacetátového pufru o pH 5,5 a s 0,1 ml směsi arylsulfatasa-glukuroni.dasa a nanese se na sloupec s 8 g granulované křemeliny (velikost zrn 0,15 až 0,5 mm, objem pórů 1,1 ml/ /g, specifický povrch 1,5 m2/g). Sloupec se uzavře a nechá se 8 dní stát. Po této době se sloupec bez dalšího· zpracování eluuje.
Současně se druhý díl této moči zahřeje s kyselinou chlorovodíkovou, jak je popsáno v příkladě 5 a eluuje se s pomocí pomocného zahušťovacího činidla.
Eluáty získané podle obou metod se srovnávají pomocí chromatografie na tenké vrstvě a UV spektroskopicky při 235 až 275 nm (ve 2 N kyselině chlorovodíkové). Podle výsledků chromatografie na tenké vrstvě dávají obě metody stejné skvrny odpovídající metabolitům ve srovnatelné intenzitě.
Srovnání extinkcí při 235 až 275 nm souhlasně ukazuje, že při enzymatické hydrolyse na pomocném zahušťovacím činidle je propouštěno l,3krát větší množství extrahovatelných metabolitů, než při hydrolýze kyselinou chlorovodíkovou.
Tento druh enzymatické hydrolysy ukazuje elegantní přípravu vzorků k extrakci, neboť mnoho látek v moči se vyskytuje jako konjugáty.
P ř í k 1 a d 1 5
Použije se plastiková kolona podle příkladu 12, která se naplní do výšky 4,7 cm vysokoporésním silikagelem. Na spodní konec kolony se před vyústění vloží destička z filtračního kartónu, která byla napuštěna bikarbonátovým pufrem a potom usušena. Tento sloupec se použije k určení obsahu estrogenů v moči.
K tomu se smísí 2X2 ml moči těhotných pacientek vždy s 0,3 ml 37% kyseliny chlorovodíkové a jednu hodinu se zahřívá na 100 °C. Oba vzorky se smísí s 0,5 ml 25% amoniaku, jeden vzorek dále s 0,2 ml standardního roztoku estriolu (100 ^g/ml), druhý s 0,2 ml etylalkoholu. Vždy 1 ml vzorku se eluuje na uvedeném sloupci 6 ml etylalkoholu. Eluáty se smísí s 0,2 ml 2% roztoku hydrochinonu v etanolu a odpaří. Stanovení se provede o sobě známým způsobem zahrátím s kyselinou sírovou (Mitteilungen · . der Deutschen Gesellschaft fůr Klinische Chemie 3, 1970, strana 9).. Ve čtyřech · zkouškách moči byly zjištěny hodnoty 14,3, 19,4, 10,2 a 21,9 mg estriolu pro 24 . hodin.
Příklad 16
Kombinace většího počtu extrakcí k isolaci a · čištění substancí, například z krve, se dá docílit spojením dvou extrakčních sloupců.
Použije se: jedna 50 ml injekční stříkačka pro jedno použití, která je naplněná 16 g křemeliny popsané v příkladě 2, tato kolona je spojená s 2 ml stříkačkou pro jedno použití, která je naplněná stejným zahušťovacím pomocným činidlem. Malá stříkačka je na horním konci uzavřena lyofilizovanou látkou. Velká stříkačka je na vyústění popatřená trubičkou. Po prostrčení trubičky lyofilizovanou látkou protéká eluát sloupcem· připojené malé stříkačkv.
ml čerstvé · ethylendlamintetraacetátové krve se smísí s· 1 ml 0,025 % roztoku papaverinhydrochloridu a 15 ml 0,025 % roztoku a197244 moniaku a směs se nechá stát 15 minut. Při tom nastane hemolysa.
Takto hemolysovaná krev se nanese na větší sloupec. Menší sloupec se napustí 0,5 mililitrů 0,2 N kyseliny sírové a zhotoví se spojení mezi oběma sloupci. Po 10 minutách se z 90 % zvlhčený horní sloupec eluuje 50 mililitry etylacetátu. Papaverin extrahovaný v horním sloupci se při průtoku druhým sloupcem na fázi kyseliny sírové reextrahuje. Eluát (33 ml po 20 minutách/se vyhodí.
Po rozpojení obou kolon se vodná fáze zachycená na malém sloupci upraví, analogicky jako v příkladě 10, plynným amoniakem na pH 9,5. Potom se eluuje 3,5 ml esteru kyseliny octové. Eluát se vytřepe 4 ml 1 N HCl a horní fáze se odstraní. Roztok kyseliny chlorovodíkové se proměří na spektrofotometru při 309 nm proti extraktu z krve bez přídavku papaverinu. Naměřená koncentrace papaverinu ve vzorku mní 232 μξ, což je 93,1 %.
Příklad 17
Srovnání pomocných zahušťovacích čini del podle vynálezu se známými prostředky.
Na sloupec o objemu 50 ml, který obsahuje vždy 14 g pomocného zahušťovacího činidla se nanese 20 ml vzorku moči, který obsahuje 20 μξ kodeinu, respektive morfinu. Vzorky se ihned vsáknou do pomocného zahušťovacího činidla. Eluce se provádí směsí dichlormethanu a isopropylalkoholu v poměru 85 : 15. Eluát se jímá ve čtyřech frakcích, vždy po 20 ml.
Následující tabulka uvádí použitá pomocná zahušťovací činidla, jejich specifické dimense, eluční časy pro každou frakci a zpětné získané množství v procentech. Jak pokusy ukazují, dá se při použití pomocných zahušťovacích činidel podle vynálezu (č. 1 až 5) eluovat ve dvou frakcích nejméně 96 procent látky. Při použití silikagelu podle publikace v Clin. Chem. 1973, str. 593 až 596 se morfin nedá vůbec eluovat a kodein pouze ze 45 % po čtyřech frakcích. Na silikagelu použitém v prvním pokuse se získá již v první frakci po 12 minutách celé množství kodeinu, zatímco na silikagelu podle stavu techniky (pokus č. 6) se může eluovat pouze 45 % kodeinu po 3 hodinách.

Claims (3)

PŘEDMĚT vynalezu
1. Způsob izolace komponent vodných roztoků, například tělních tekutin, adsorpcí vodných roztoků na pomocná zahušťovací činidla na bázi křemeliny a/nebo silikagelu a následující extrakcí komponent lipofilními rozpouštědly, vyznačený tím, že se komponenty vodných roztoků adsorbují na sypký silikagel a/nebo křemelinu se střední velikostí částeček 0,05 až 1,0 mm, středním objemem pórů 0,2 až 3 ml/g a se specifickým povrchem 0,2 až 50 m2/g.
2. Způsob podle bodu 1, vyznačený tím, že uvedený silikagel má střední velikost částeček 0,15 až 0,4 mm, střední objem pórů 0,5 až 1,7 ml/g a střední specifický povrch 0,3 až 20 m2/g.
3. Způsob podle bodu 1, vyznačený tím, že uvedená křemelina má střední velikost částeček 0,15 až 0,4 mm, střední objem pórů 0,5 až 1,7 ml/g a střední specifický povrch 0,5 až 5 m2/g.
CS751052A 1974-03-02 1975-02-18 Method of isolation of the water solutions components CS197244B2 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2410033A DE2410033C2 (de) 1974-03-02 1974-03-02 Isolierung von in lipophilen Lösungsmitteln löslichen Inhaltstoffen wäßriger Lösungen

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS197244B2 true CS197244B2 (en) 1980-04-30

Family

ID=5908902

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS751052A CS197244B2 (en) 1974-03-02 1975-02-18 Method of isolation of the water solutions components

Country Status (14)

Country Link
US (1) US4056468A (cs)
JP (2) JPS5736005B2 (cs)
BE (1) BE826102A (cs)
CH (1) CH591270A5 (cs)
CS (1) CS197244B2 (cs)
DD (1) DD117744A5 (cs)
DE (1) DE2410033C2 (cs)
FR (1) FR2262548B1 (cs)
GB (1) GB1467599A (cs)
IL (1) IL46708A (cs)
IT (1) IT1029907B (cs)
NL (1) NL182622C (cs)
SE (1) SE400834B (cs)
ZA (1) ZA751273B (cs)

Families Citing this family (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4210557A (en) * 1978-12-15 1980-07-01 Beckman Instruments, Inc. Non-high density lipoprotein precipitant
IL56839A0 (en) * 1979-03-11 1979-05-31 Technion Res & Dev Foundation Improvement in specific binding assay technique
US4273867A (en) * 1979-04-05 1981-06-16 Mallinckrodt, Inc. Method and reagent for counteracting lipemic interference
US4279774A (en) * 1979-11-13 1981-07-21 Dynasciences Corporation Method of removing lipid inhibitors from limulus amebocyte lysate
DE3165646D1 (en) 1980-05-08 1984-09-27 Terumo Corp Apparatus for separating blood
DE3107060A1 (de) * 1981-02-25 1982-09-09 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Kontroll- oder eichserum und verfahren zu seiner herstellung
US4465774A (en) * 1981-07-16 1984-08-14 Sherwood Medical Company Standard or control material for glysocylated or total hemoglobin determination
US4608347A (en) * 1982-04-15 1986-08-26 Bernstam Victor A Compositions, uses and methods creating reverse micelles for the clarification of biological fluids to obtain undistorted assay of analytes following clarification
US4631254A (en) * 1982-12-06 1986-12-23 Hoffmann-La Roche Inc. Carcinoembryonic antigen determination
US4748128A (en) * 1984-03-30 1988-05-31 Dianon Systems, Inc. Method for determining lipid bound sialic acid in plasma
US4701418A (en) * 1984-03-30 1987-10-20 Dianon Systems, Inc. Method for determining lipid bound sialic acid in whole blood
US4654311A (en) * 1984-06-15 1987-03-31 Syntex (U.S.A.) Inc. Serum pretreatment for digoxin assay
US4652529A (en) * 1984-10-02 1987-03-24 Syntex (U.S.A.) Inc. Serum pretreatment for tricyclic antidepressant drug assays
US4698315A (en) * 1985-04-22 1987-10-06 Hoffmann-La Roche Inc. Method and kit for determining total digoxin levels involving agent to dissociate digoxin-protein complex
US4775482A (en) * 1985-05-28 1988-10-04 Mederi Medical Systems, Inc. Method for removing fat and for purifying and defoaming liquids
US4752448A (en) * 1985-12-18 1988-06-21 Keystone Diagnostics, Inc. Drug abuse test paper
US4935346A (en) * 1986-08-13 1990-06-19 Lifescan, Inc. Minimum procedure system for the determination of analytes
GB8802237D0 (en) * 1988-02-02 1988-03-02 Shell Int Research Detection of chemicals by immunoassay
DD278482A3 (de) * 1988-06-22 1990-05-09 Univ Berlin Humboldt Vorrichtung und verfahren zur chromatographischen trennung
US5057437A (en) * 1988-07-27 1991-10-15 Bio-Rad Laboratories, Inc. Method for broad spectrum drug detection
US5104622A (en) * 1988-07-27 1992-04-14 Bio-Rad Laboratories, Inc. System for broad spectrum drug detection
US5334528A (en) * 1989-10-30 1994-08-02 The Regents Of The University Of California Monoclonal antibodies to cyclodiene insecticides and method for detecting the same
US5179219A (en) * 1990-11-19 1993-01-12 Uop Process for separating fatty acids and triglycerides
WO1992012427A1 (en) * 1991-01-08 1992-07-23 United States Department Of Energy Monoclonal antibodies to cyclodiene insecticides and method for detecting the same
US5352585A (en) * 1993-06-29 1994-10-04 Bio-Rad Laboratories, Inc. System for benzodiazepine detection
US5547702A (en) * 1994-07-08 1996-08-20 Polymer Technology International Corporation Method for continuous manufacture of diagnostic test strips
US6458326B1 (en) 1999-11-24 2002-10-01 Home Diagnostics, Inc. Protective test strip platform
GB0029729D0 (en) * 2000-12-06 2001-01-17 Ids Ltd Method for detection of vitamin D metabolites
US6541266B2 (en) 2001-02-28 2003-04-01 Home Diagnostics, Inc. Method for determining concentration of an analyte in a test strip
US6562625B2 (en) 2001-02-28 2003-05-13 Home Diagnostics, Inc. Distinguishing test types through spectral analysis
US6525330B2 (en) 2001-02-28 2003-02-25 Home Diagnostics, Inc. Method of strip insertion detection
US7919325B2 (en) 2004-05-24 2011-04-05 Authentix, Inc. Method and apparatus for monitoring liquid for the presence of an additive
EP1824811B1 (en) * 2004-11-22 2009-07-01 Mallinckrodt, Inc. Process for the purification of benzphetamine hydrochloride
EP2032979B1 (en) * 2006-06-06 2018-07-18 Roche Diagnostics GmbH Differential hemolysis of a whole blood sample
CN101680885B (zh) * 2007-06-06 2017-03-15 霍夫曼-拉罗奇有限公司 已溶血的全血样品中待分析物的检测
DE102013000527A1 (de) * 2013-01-15 2014-07-17 Hans-Peter Noack Verfahren zur Abdeckung einer Metallschmelze und Abdeckmaterial
US10287570B2 (en) * 2014-11-21 2019-05-14 Occam Biolabs, Inc. System and method for collecting a sample of nucleic acid
CN112326399B (zh) * 2020-10-21 2022-09-09 江苏金信检测技术服务有限公司 一种快速萃取池除水方法
CN114674970A (zh) * 2022-05-26 2022-06-28 江西省药品检验检测研究院 一种人参归脾丸一板多信息快速薄层色谱鉴别、检查方法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR1353861A (fr) * 1963-04-12 1964-02-28 Merck Ag E Agent d'adsorption pour chromatographie sur plaques
FR1528785A (fr) * 1967-04-26 1968-06-14 Pechiney Saint Gobain Corps poreux de silice
US3761227A (en) * 1972-04-24 1973-09-25 Conrad Labor Inc Method for detection of opium derivatives in urine
US3888972A (en) * 1972-05-11 1975-06-10 Andrei Vladimirovich Kiselev Process for preparation of wide-pore adsorbent for use in chromatography
JPS5245239B2 (cs) * 1972-06-15 1977-11-14
JPS5013679B2 (cs) * 1972-07-10 1975-05-21

Also Published As

Publication number Publication date
NL182622B (nl) 1987-11-16
NL7502400A (nl) 1975-09-04
JPS57119831A (en) 1982-07-26
ZA751273B (en) 1976-01-28
DD117744A5 (cs) 1976-01-20
JPS50124883A (cs) 1975-10-01
FR2262548A1 (cs) 1975-09-26
JPS5736005B2 (cs) 1982-08-02
BE826102A (nl) 1975-08-27
US4056468A (en) 1977-11-01
NL182622C (nl) 1988-04-18
CH591270A5 (cs) 1977-09-15
IT1029907B (it) 1979-03-20
FR2262548B1 (cs) 1978-10-06
IL46708A0 (en) 1975-04-25
DE2410033B1 (de) 1975-01-30
IL46708A (en) 1977-05-31
SE400834B (sv) 1978-04-10
JPS6147132B2 (cs) 1986-10-17
SE7502218L (cs) 1975-09-03
GB1467599A (en) 1977-03-16
DE2410033C2 (de) 1975-09-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CS197244B2 (en) Method of isolation of the water solutions components
Proelss et al. High-performance liquid-chromatographic simultaneous determination of commonly used tricyclic antidepressants.
Breiter et al. Evaluation of column extraction: a new procedure for the analysis of drugs in body fluids
US3625652A (en) Analysis of narcotics and amphetamines
Long et al. Method for the isolation and liquid chromatographic determination of chloramphenicol in milk
Berrueta et al. Biopharmacological data and high-performance liquid chromatographic analysis of 1, 4-benzodiazepines in biological fluids: a review
Ibrahim et al. Application of Amberlite XAD-2 resin for general toxicological analysis
Wheals et al. Analysis of drugs and their metabolites by high-performance liquid chromatography. A review
Banes A new partition chromatographic procedure for the assay of pharmaceuticals
Clitheroe et al. The separation of the smooth-muscle stimulants in menstrual fluid
Parks Evidence for transformation of sulfamethazine to its N 4-glucopyranosyl derivative in swine liver during frozen storage
Ninci et al. Isothermal gas chromatographic determination of nanogram amounts of chlorimipramine, chlorpromazine and their N-desmethyl metabolites in plasma using nitrogen-selective detection
EP0102564A2 (de) Verfahren zur Entfernung von protein- oder lipidgebundenen Toxinen aus Blut oder Blutfraktionen und die Verwendung bestimmter Verbindungen als Entkopplersubstanzen
Lloyd et al. Detection and determination of common benzodiazepines and their metabolites in blood samples of forensic science interest: Microcolumn cleanup and high-performance liquid chromatography with reductive electrochemical detection at a pendent mercury drop electrode
Logan et al. Liquid/solid extraction on diatomaceous earth for drug analysis in postmortem blood
Lensmeyer et al. Application of a Novel Form of Solid-Phase Sorbent (Empore® Membrane) to the Isolation of Tricyclic Antidepressant Drugs from Blood
Rosenfeld et al. Solid-supported reagents in the determination of cannabinoids in plasma
Stewart et al. A comparison of solid-phase extraction techniques for assay of drugs in aqueous and human plasma samples
Stolman et al. XAD-2 resin drug extraction methods for biologic samples
Tsuei et al. Sorption of chlormethiazole by intravenous infusion giving sets
Wallace et al. Analysis for diazepam and nordiazepam by electron-capture gas chromatography and by liquid chromatography.
Levine Column partition chromatography in pharmaceutical analysis
Conway Determination of sulphadimidine in animal feeds by high-performance liquid chromatography
Yang et al. Highly sensitive and simple method for determination of free 3-methoxy-4-hydroxyphenylglycol in plasma by high-performance liquid chromatography using a Sep-Pak alumina B cartridge
Cordonnier et al. Disposition of tilidine in a fatal poisoning in man