CS196473B1

CS196473B1 - Cultivating medium for demonstration and determination of lactic acid bacteria in beer and beer production intermediates

Info

Publication number: CS196473B1
Application number: CS30778A
Authority: CS
Inventors: Olga Bendova; Vera Kurzova; Jan Savel; Marie Prokopova
Original assignee: Olga Bendova; Vera Kurzova; Jan Savel; Marie Prokopova
Priority date: 1978-01-17
Filing date: 1978-01-17
Publication date: 1980-03-31

Description

Vynález umožňuje prokázat přítomnost bakterií a stanovit jejich množství v plvá a meziproduktech výroby piva.The invention makes it possible to detect the presence of bacteria and to determine their amount in the bottoms and intermediates of beer production.

Bakteriální kontaminace piva se skládá z aerobních a anaerobních baktérií. Mezi aerobní druhy patří předeváím koliformní bakterie, octová bakterie a bakterie rodu Obesumbaoterium. Anaerobní bakterie jsou zastoupeny rody Lactobacillus a Pediococcue.Bacterial contamination of beer consists of aerobic and anaerobic bacteria. Aerobic species include, in particular, coliform bacteria, acetic bacteria and bacteria of the genus Obesumbaoterium. Anaerobic bacteria are represented by the genera Lactobacillus and Pediococcue.

Podle podmínek v různých místech pivovarské výroby se mohou zmíněné bakterie pomnožovat v pivě nebo pivovarských meziproduktech. Tím mohou již v průběhu výroby ochuzovat mladinu a pivo o důležité růstové faktory a vylučovanými metabolity ovlivňovat organoleptické vlastnosti piva. Některé z těchto bakterií ee mohou rozmnožovat 1 v hotovém pivu a způsobovat jeho zkázu jak tvorbou sedliny nebo zákalu, tak nepříznivým ovlivněním organoleptických vlastností výrobku.Depending on the conditions at the various brewing sites, the bacteria may be propagated in beer or brewing intermediates. As a result, wort and beer may be deprived of important growth factors during the production process and the organoleptic properties of beer excreted by the excreted metabolites. Some of these ee bacteria can reproduce 1 in the finished beer and cause its destruction both by the formation of a sediment or haze and by adversely affecting the organoleptic properties of the product.

V současné době se přítomnost bakterií v pivě a pivovarských meziproduktech prokazuje na víoe nebo méně selektivních, živných půdách nebo mikroskopickou kontrolou zkoušeného vzorku.At present, the presence of bacteria in beer and brewing intermediates is demonstrated on vortex or less selective, nutrient media or by microscopic examination of the test sample.

Některé půdy pro průkaz a stanovení různých druhů mléčných bakterií se vyrábějí v zahraničí průmyslově a do CSSR se dovážejí za devizy.Some soils for the detection and determination of different types of lactic bacteria are produced abroad industrially and imported into the CSSR for foreign exchange.

196 473196 473

Ιββ 473Ιββ 473

Κ průkazu a stanovení různých bakteriálních druhů je zapotřebí více druhů živných půd, která se liší složením a tím 1 dostupností. V poslední době byla vyvinuta univerzál ní půda, která svým složením umožňuje prokázat a přesná stanovit běžné bakteriální kontaminanty piva (Ss. autorské osvědčení č. 163597)· Vhodnou úpravnu táto základní půdy spolu β různým způsobem kultivace lze rozlišit bakteriální kontaminanty na aerobní a anaerobní druhy. Jedinou její nevýhodou je poměrně dlouhé doba přípravy (5 až 6 dnů).Více Detection and identification of different bacterial species requires more types of nutrient media, which differ in composition and thus 1 availability. Recently, a universal soil has been developed, which by its composition allows to prove and accurately determine common bacterial contaminants of beer (Ss. Author's certificate No. 163597). . The only disadvantage is the relatively long preparation time (5 to 6 days).

K zkrácení doby přípravy byla navržena nová půda. Její nevýhodou je však obtížná dostupnost některých surovin v ČSSR v požadované čistotě.New soil has been proposed to reduce preparation time. Its disadvantage, however, is the difficult availability of some raw materials in Czechoslovakia in the required purity.

Všechny uvedené nedostatky odstraňuje návrh nové půdy, jejíž složení bylo sestaveno na základě zkušeností s oběma výše uvedenými půdami v praxi.All these shortcomings are eliminated by the design of a new soil, whose composition has been compiled on the basis of experience with both of the above soils in practice.

Novost půdy spočívá ve velmi jednoduché a rychlá přípravě a vysoké specifitě při průkazu a stanovení pivu škodících mikroorganismů. Dalěí výhodou je velmi dobrá dostupnost složek půdy v ČSSR.The novelty of the soil lies in its very simple and quick preparation and high specificity in the detection and determination of beer harmful to micro-organisms. Another advantage is the very good availability of soil components in Czechoslovakia.

Tato půda obsahuje 10% pivo v koncentraci 30 až 99% /nejlépe 95%/, pepton v koncentraci 0,1 až 10% /nejlépe 1%/, masový výtažek v koncentraci 0,1 až 10% /nejlépe 0,5%/, kvasnlčný autolyzát v koncentraci 0,1 až 10% /nejlépe 0,7%/, glukózu v koncentraci 0,1 až 10% /nejlépe 1%/, síran hořečnatý v koncentraci 0,0001 až 0,1% /nejlépe 0,03% počítáno na heptahydrát/, síran manganatý v koncentraci 0,0001 až 0,1% /nejlépe 0,004% počítáno na tetrahydrát, polyetylenglykolaorbitanmonooleát /Tween 80/ v koncentraci 0,01 až 10% /nejlépe 0,1%/.This soil contains 10% beer in a concentration of 30 to 99% (preferably 95%), peptone in a concentration of 0.1 to 10% (preferably 1%), meat extract in a concentration of 0.1 to 10% (preferably 0.5%) , yeast autolysate at a concentration of 0.1 to 10% (preferably 0.7%), glucose at a concentration of 0.1 to 10% (preferably 1%), magnesium sulfate at a concentration of 0.0001 to 0.1% (preferably 0), 03% calculated on heptahydrate /, manganese sulfate at a concentration of 0.0001 to 0.1% (preferably 0.004% calculated on tetrahydrate, polyethylene glycolorbitan monooleate (Tween 80) at a concentration of 0.01 to 10% (preferably 0.1%)).

K potlačení kvasinkové kontaminace při stanovení bakterií ve směsi s kvasinkami se přidá cykloheximid v koncentraci 0,0001 až 0,01% /nejlépe 0,0025%/, gramnegativní bakterie se mohou inhibovat 0 feny le tandem v koncentraci 0,01 až 1,0% /nejlépe 0,3%/·Cycloheximide at a concentration of 0.0001 to 0.01% (preferably 0.0025%) is added to suppress the yeast contamination in the determination of bacteria in a mixture with yeast, gram-negative bacteria can be inhibited by 0 phenylethans at a concentration of 0.01 to 1.0 % / preferably 0.3% / ·

K snazšímu rozlišení bakteriálních kolonií se může přidat bromkresolová zeleň v množství 0,0001 až 0,1% /nejlépe 0,0022%/. Půda se může používat jako tekuté 1 jako ztužená agarem.Bromocresol green may be added in an amount of 0.0001 to 0.1% (preferably 0.0022%) to facilitate the differentiation of bacterial colonies. The soil can be used as a liquid agar-reinforced.

Pomocí této p&dy lze snadno, rychle a přesně prokázat přítomnost a stanovit množství bakterií v pivovarském provozu. Aerobní kultivací se na půdě prokazují aerobní bakteriální kontaminanty, anaerobní kultivací anaerobní bakteriální kontaminace, zejména bakterie rodů Lactobaclllus a Pediococcus. Půdy je možné použít všude, kde se prokazují a stanovují bakterie kontaminující potraviny a to především v potravinářských laboratoříchWith this medium, the presence and determination of bacteria in the brewery can be easily, quickly and accurately detected. Aerobic cultivation on the soil shows aerobic bacterial contaminants, anaerobic cultivation of anaerobic bacterial contamination, especially bacteria of the genera Lactobacillus and Pediococcus. Soils can be used wherever food contaminating bacteria are detected and determined, especially in food laboratories

Příklad 1Example 1

Stanovení mléčných bakterií v kvasící mladině V 10% pivu se postupně rozpustily tyto složky: 10 g peptonu, 5 g masového výtažku, 7 g kvaeničného autolyzétu, 10 g glukózy, 0,3 g síranu hořečnatého /heptahydrátu/, 0,04 g síranu manganatého /tetrahydrátu/, 1 ml polyetylenglykoleorbltanmonooleátu /Twee 80/.Determination of lactic acid bacteria in fermented wort The following components were gradually dissolved in 10% beer: 10 g peptone, 5 g meat extract, 7 g yeast autolysate, 10 g glucose, 0.3 g magnesium sulfate (heptahydrate), 0.04 g manganese sulfate (tetrahydrate), 1 ml of polyethylene glycol sorbine monooleate (Twee 80).

Po doplnění pivem na 1000 ml ae přidalo 25 mg eyklohexamidu a 15 g agaru. pH takto při198 47 pravené půdy bylo 5,8.After making up to 1000 ml with beer, 25 mg of cyclohexamide and 15 g of agar were added. The pH of the treated soil at 5.8 was 5.8.

Po sterilaci v autoklávu ee půda rozlila na misky a po zchladnutí se plotny zaočkovaly vzorky kvaeíoí mladiny. Po anaerobní kultivaci /5 až 6 dnů při 28 °C/ ee odečetl počet mléčných bakterií.After sterilization in an autoclave, the soil was poured into dishes and after cooling, the plates were inoculated with fermented wort samples. After anaerobic cultivation (5-6 days at 28 ° C) ee counted the number of lactic bacteria.

Příklad 2Example 2

Stanovení mléčných bakterií v stočeném pivuDetermination of lactic acid bacteria in bottled beer

Půda se připravila jako v příkladu 1. Pepton a masový výtažek se přidaly ve formě komerčně vyráběné směsi Živný bujón 2 /Imuna n.p., Sarišaké Uichaleny/. Na plotny živné půdy se přiložily membránové filtry, přes které se předtím filtrovalo stočené pivo. Po anaerobní kultivaci 5 až 6 dnů při 28 °C ee stanovil počet mléčných bakterií.The soil was prepared as in Example 1. Pepton and the meat extract were added in the form of a commercially produced mixture of Nutrient Broth 2 (Imuna n.p., Sarakha Uichaleny). Membrane filters were applied to the culture broths through which the bottled beer had previously been filtered. After anaerobic cultivation for 5-6 days at 28 ° C, ee determined the number of lactic bacteria.

Příklad 3Example 3

Stanovení mléčných bakterií ve směsi s gramnegativními bakteriemiDetermination of lactic acid bacteria mixed with gram-negative bacteria

Půda ae připravila jako v příkladu 1, a tím rozdílem, že se před rozléváním na plot ny přidal ^-fenyletanol ve výsledné koncentraci 0,3%. Vzorky mladiny obsahující mléčné bakterie ve směsi s gramnegativními bakteriemi se očkovaly na plotny půd. Zaočkované plotny ae anaerobně kultivovaly 5 až 6 dnů při 28 °C. Po kultivaci se určil počet mléčných bakterii.The soil ae was prepared as in Example 1, except that 4-phenylethanol was added at a final concentration of 0.3% prior to plating. The wort samples containing lactic bacteria mixed with gram-negative bacteria were inoculated onto the soil plates. The inoculated plates and were anaerobically cultured for 5-6 days at 28 ° C. After cultivation, the number of lactic acid bacteria was determined.

Příklad 4Example 4

Stanovení celkové bakteriální kontaminace mladiny.Determination of total bacterial contamination of wort.

Půda se připravila jako v příkladu 1, β tím rozdílem, že k lepšímu rozlišení kolonií se přidalo ještě 0,0022% bromkresolové zeleně. Po aerobní kultivaci při 28 °C po 3 dny se odečetl celkový počet bakterií.The soil was prepared as in Example 1, β except that 0.0022% bromocresol green was added to improve the colonies' resolution. After aerobic cultivation at 28 ° C for 3 days, the total number of bacteria was read.

Claims

1. Nutrient medium for the detection and detection of lactic acid bacteria in beer and intermediate beer products, characterized in that it contains 10% beer in a concentration of 30 to 99%, peptone in a concentration of 0,1 to 10%, meat extract in a concentration of 0,1 up to 10%, yeast autolysate at 0.1 to 10%, glucose at 0.1 to 10%, magnesium sulfate at 0.0001 to 0.1%, manganese sulfate at 0.0001 to 0.1% , polyethylene glycol sorbitan monooleate at a concentration of 0.01 to 10%,

2. The broth according to item 1, further comprising aktldione at a concentration of 0,0001 to 0,1%,

3. The broth as in 1 or 2, further comprising [3-phenylethanol in a concentration of 0.01 to 1.0%];

4. The broth as in item 1 or 2 or 3, further comprising bromocresol green at a concentration of 0,0001 to 0,1%,

5. The broth according to item 1 or 2 or 3 or 4, further comprising agar in a concentration of 0.005 to 5%.