CN2562184Y - 垂直板琼脂凝胶及其制备装置 - Google Patents

Abstract

本实用新型是一种用于生化分离技术—凝胶电泳的凝胶板，其特点是用普通琼脂或低熔点琼脂以垂直灌胶板槽和点样梳灌注而成，为矩形平板，板厚小于2cm，板面直立，其上沿面上有多个深度为5－10mm的点样孔。该垂直板琼脂凝胶克服了现有水平板琼脂凝脉的缺陷，具有用胶量少，点样孔加样量大，电泳速度快，电泳后凝胶染色和脱色时间缩短，凝脂转膜印迹过程时间短，目标条带切割、洗脱容易等优点，不失为一种优良的电泳凝胶板。

Description

垂直板琼脂凝胶及其制备装置

技术领域

本实用新型涉及生物化学分离技术，即核酸分析技术凝胶电泳中使用的凝胶板及其制备装置。

背景技术

凝胶电泳是核酸分析的最基本方法之一，其中，使用最普遍的凝胶为聚丙烯酰胺凝胶和琼脂凝胶。聚丙烯酰胺凝胶电泳适用于分离50-1000硷基的小分子量核酸。而琼酯凝胶分离范围较广，为0.2～50kb的DNA，通常更适用于分离500-10000硷基的大分子量核酸。上述二种凝胶电泳技术发明以来，聚丙烯酰胺凝胶均采用垂直灌胶，以垂直板凝胶用于垂直式电泳槽进行电泳；而琼脂凝胶均采用水平铺胶，以水平板凝胶用于水平式电泳槽进行电泳。现有的水平板琼脂凝胶，其点样孔设置于水平板平面上，为了灌胶后从铺胶板上取胶方便，和点样时不会点穿胶层，其厚度一般不小于5-7毫米，因而用胶量较多。由于普通琼脂在接近100℃才融化，而此温度下核酸会受到破坏，因此，现有水平琼胶凝脂电泳后要将核酸条带切割下来，使之在较低温度下融化，这就需要用比较昂贵的低熔点琼脂来铺胶。为了节约低熔点琼脂的用量，通常用挖块法切割核酸条带，这不仅需要掌握挖孔和补孔的技术，并且需要预先走一次普通琼脂胶来了解目标条带的移动距离，既麻烦又花费时间。此外，水平电泳时电泳缓冲液需加至将整个凝胶浸没，大部分的电流浪费在凝胶上面的电泳液中。为避免电泳液温度升高影响电泳，电泳的最大允许电压亦只能较低，而致使流经凝胶内的电流较低，导至电泳效率较低。总之，现有水平板琼脂凝胶的琼脂用量大，成本高，而点样孔的最大加样量受膜板厚度及点样孔深度所限却相对较小；电泳速度较低；电泳后染色剂的渗透过程慢；电泳后完成转膜所需时间较长；核酸条带较难切割；洗脱所需时间也长。因此，有必要改进设计出新型的凝胶板。

发明内容

为克服现有电泳使用水平板琼酯凝胶的缺陷，减少琼脂用量，增大点样量，提高电泳速度和质量，本实用新型提供了一种垂直板琼脂凝胶。本实用新型垂直板琼脂凝胶的板厚小于2mm，只有水平板琼脂凝胶的几分之一，板面直立，其上沿面上有多个深度为5-10毫米的点样孔。该垂直板琼脂凝胶的制备设备为灌胶板槽和点样梳，灌胶板槽为立式，由两块平行的玻璃板或塑料板及夹置于两块玻璃板或塑料板两侧边及底边之间的垫条组成，垫条厚度与垂直板琼脂凝胶厚度相等，点样梳的梳齿的截面形状和数量和垂直板琼脂凝胶上的点样孔相同，梳体厚度大于梳齿。这种垂直板琼脂凝胶用垂直电泳槽进行电泳。与水平琼脂凝胶电泳方法相比，其核酸分离范围、核酸分辩率、检测灵敏度二者相同，但制胶所需要的琼脂量大大减少，电泳速度加快，电泳后凝胶染色和脱色时间缩短，凝胶转膜印迹过程所需时间短，目标核酸条带切割、洗脱容易。不失为一种优良的电泳凝胶板。

附图说明

图1为本实用新型垂直板琼脂凝胶示意图。

图2为垂直板琼脂凝胶制备装置的灌胶板槽示意图。

图3为垂直板琼脂凝胶制备装置的点样梳示意图。

图中，1板面，2点样孔，3上沿面，4玻璃板或塑料板，5垫条，6夹子，7梳体，8梳齿。

具体实施方式

实施例1，如图2所示，在两块10cm宽，8cm高的玻璃板4的左、右两侧边及下底边之间衬以1.25mm的垫条5，再以夹子6夹紧，制成垂直板琼脂凝胶制备装置的灌胶板槽。用商品电泳级低熔点琼脂与1XTAE缓冲溶液按100∶1的比例混合，用微波炉加热使其融化，趁热将琼脂注入灌胶板槽，并将如图3所示的点样梳插入灌胶板槽，使梳齿8插入琼脂内10mm，半小时后小心地去除点样梳，即制得如图1所示的厚度1.25mm，上沿面3上有10mm深的点样孔2的垂直板琼脂凝胶，供垂直式电泳槽进行电泳。该垂直板琼脂凝胶的厚度为1.25mm，仅为水平板琼脂凝胶通常厚度5-7mm的五分之一左右，其用胶量亦只有水平板琼脂凝胶的五分之一；而垂直板琼脂凝胶上的点样孔2深达为10mm，就同样大小的点样孔2而言，垂直板琼脂凝胶的最大加样量是水平板琼脂胶的3倍以上。经对比测试，本实用新型垂直板琼脂凝胶的室温操作电压范围为30-200V，大于水平板琼脂凝胶的30-105V，电泳时流经凝胶的电流为100％，而水平板琼脂凝胶仅为5％-10％；垂直板琼脂凝胶在电压105V时完成电泳的时间为30分钟，而水平板琼脂凝胶需50-60分钟；垂直板琼脂凝胶在电压105V时桔橙G迁移速度为13cm/H，而水平板琼脂凝胶仅为6.5-7.8cm/H；垂直板琼脂凝胶在电压105V时溴酚兰迁移速度为9.5cm/H；而水平板琼脂凝胶仅4.8cm-5.2cm/H；垂直板琼脂凝胶在电压105V时二甲苯青兰迁移速度为4.3cm/H，而水平板琼脂凝胶仅为2.2-2.4cm/H；垂直板琼脂凝胶在最大允许电压下完成电泳所需时间仅为18分钟，而水平板琼脂凝胶需55-62分钟；垂直板琼脂凝胶溴乙锭染色时间亦仅为较其厚3倍的水平板琼脂凝胶的五分之一左右，同时，脱色时间相应亦短，漂洗后背景强度下降较快；垂直板琼脂凝脂完成电转膜时间为15分钟，而水平板琼脂凝胶转膜需30分钟以上；垂直板琼脂凝胶因板薄而且核酸在整个胶层，很容易在视面上经纵横切割，得到体积小，又包含所有需要核酸的琼脂块。由于切割得到的琼脂块比水平胶小得多，在减少试剂用量，提高提取得率和缩短操作时间方面，明显优于水平板琼脂凝胶；垂直板琼脂凝胶中的核酸经2小时振荡后90％能被洗脱下来，而同样条件下水平板琼脂凝胶需8小时。

实施例2，如实施例1步骤用灌胶槽板和点样梳制备出厚度为0.75mm，上沿面3上有5mm深点样孔2的垂直板琼脂凝胶。

实施例3，按实施例1步骤制备出厚度为2.0mm，上沿面3上有10mm深点样孔2的垂直板琼脂凝胶供电泳。

Claims (2)

1、垂直板琼脂凝胶，其特征在于所说的琼脂凝胶板厚小于2mm，板面(1)直立，其上沿面(3)上有多个深度为5-10mm的点样孔(2)。

2、垂直板琼脂凝胶制备装置，其特征在于制备装置为灌胶板槽和点样梳，所说的灌胶板槽为立式，由两块平行的玻璃或塑料板(4)及夹置于两块玻璃板或塑料板(4)两侧边及底边之间的垫条(5)组成，垫条(5)厚度与垂直板琼脂凝胶相等，所说的点样梳的梳齿(8)截面形状和数量与垂直板琼脂凝胶上的点样孔(2)相同，梳体(7)厚度大于梳齿(8)。

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