CN210893865U

CN210893865U - 一种免疫组化检测用载玻片

Info

Publication number: CN210893865U
Application number: CN202020607818.0U
Authority: CN
Inventors: 季天海; 任林琇; 林清源
Original assignee: Shanghai Yizhiben Technology Co ltd; Xiamen Medical Association Pathological Diagnosis Center Co ltd; Ninth Peoples Hospital Shanghai Jiaotong University School of Medicine
Current assignee: Ninth Peoples Hospital Shanghai Jiaotong University School of Medicine
Priority date: 2020-04-21
Filing date: 2020-04-21
Publication date: 2020-06-30
Anticipated expiration: 2030-04-21

Abstract

本实用新型提供一种免疫组化检测用载玻片，所述载玻片至少包括：载玻片基底，所述载玻片基底至少部分覆盖有粘附层；所述载玻片设有检测区、对照区和标签区，所述对照区设有阳性组织芯片，所述阳性组织芯片包括若干种阳性对照组织，所述检测区和对照区覆盖有粘附层，所述阳性组织芯片位于粘附层的上方。所述阳性组织芯片中可包含新型冠状病毒抗原阳性的COVID‑19组织。本申请能够保证每张切片都有对应的阳性对照组织，制片流程符合15189的质量管理体系，同时缩短时间、简化流程，提高效率，统一标准。防脱片，保证了前期阳性对照组织的粘附力强，保证在后期染色过程中不掉片，同时保证阳性对照的抗原存留时间，保证抗原时效性，防止阳性对照芯片降解。

Description

一种免疫组化检测用载玻片

技术领域

本实用新型涉及医疗检测领域，具体涉及是一种免疫组化检测用载玻片。

背景技术

2019年底疫情爆发，临床对新冠病毒检测提出了很高要求。目前通行做法是采集患者血液，采用PCR、酶标ELASA法和分子探针这三种方法进行检测。每种方法都有它的优点和缺陷，PCR法使用较多，但该方法需要进行数十次指数级的循环扩增，时间较长且容易产生假阳性；酶标ELASA法测定的是抗体，但样本经提取后导致检测灵敏度偏低，容易产生假阴性；分子探针法则需要大量的时间来纯化样品，过程繁琐。因此临床检测要真正做到灵敏度高，特异性强、检测时间短应是很难，究其原因除了实验本身特点外，就是上述三种方法都需要关键的一步，即把病毒的DNA/RNA或抗体从血液样品中分离出来，但正因为这“分离”的步骤势必会导致血液中原本效价就很低的病毒，部分或大部分在过程中丢失，而且病毒提取量还取决于试剂盒的优劣与方法科学与否。

那么最好的样本采集部位是哪里呢？毫无疑问是肺部，包括肺泡灌洗液，咽拭子，痰涂片等；那么最合适的样本处理方法又是什么呢？不经过提取，在原位检测。因此我们拟用咽拭子采集的细胞制作成组织蜡块，不经过提取方法最大限度避免抗原丢失，通过免疫组化方法在原位检测新冠病毒抗体。

为了尽可能避免免疫组化假阴性与假阳性的结果产生，中华医学会质量控制管理体系要求以及《三级医院评审标准(2011年版)实施细则》中明确规定：免疫组化染色必须设立阳性对照，以确保染色结果稳定、可靠。而我们目前免疫组化阳性对照的通用方法是，找到已知含有IgG/IGM抗体(新冠病毒相关)的生物组织作为阳性对照，将5um厚度的该阳性对照组织以及待检测组织切片同时捞取在同一张载玻片上，并通过烤片等一系列步骤，以防止组织脱落或酶降解，再将载有该阳性对照组织与待检测组织的载玻片置于同一条件下进行免疫组织化学反应，最后进行比对和判读。这种做法既繁琐又耗时还无统一质控标准，而且目前很多医院特别是三甲医院工作量很大，很难保证将每张切片都做到阳性对照，这样就不可避免的产生不确定结果。

实用新型内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本实用新型的目的在于提供一种免疫组化检测用载玻片。该载玻片为自带有阳性对照组织的芯片载玻片，可以确保同时涵盖人类各种疾病所需要的阳性对照组织，以解决上述临床工作中遇到的实际问题。

本实用新型提供一种免疫组化检测用载玻片，所述载玻片至少包括：载玻片基底，所述载玻片基底至少部分覆盖有粘附层；所述载玻片设有检测区、对照区和标签区，所述对照区设有阳性组织芯片，所述阳性组织芯片包括若干种阳性对照组织，所述检测区和对照区覆盖有粘附层，所述阳性组织芯片位于粘附层的上方。

如上所述，本实用新型的免疫组化检测用载玻片，具有以下有益效果：

能够保证每张切面都有对应的阳性对照组织，制片流程不但符合15189的质量管理体系，同时也极大缩短了时间、简化了流程，提高了效率，统一了标准。防脱片，保证了前期阳性对照组织的粘附力强，保证在后期染色过程中不掉片，同时保证阳性对照的抗原存留时间，保证抗原时效性，防止阳性对照芯片降解。

附图说明

图1本实用新型一实施例的免疫组化检测用载玻片的结构示意图。

图2本实用新型一实施例的免疫组化检测用载玻片的侧视图。

图3本实用新型一实施例的免疫组化检测用载玻片常温保存半年后检测图。

元件标号说明

1 载玻片基底

2 粘附层

3 检测区

4 对照区

41 阳性组织芯片

42 防降解层

5 标签区

51 抗化学腐蚀涂层

具体实施方式

以下由特定的具体实施例说明本实用新型的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本实用新型的其他优点及功效。

请参阅图1至图3。须知，本说明书所附图式所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本实用新型可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本实用新型所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本实用新型所揭示的技术内容得能涵盖的范围内。同时，本说明书中所引用的如“上”、“下”、“左”、“右”、“中间”及“一”等的用语，亦仅为便于叙述的明了，而非用以限定本实用新型可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容下，当亦视为本实用新型可实施的范畴。

需要说明的是，为了便于观察，附图2中各个部件的厚度要大于其实际厚度，图2的主要作用是说明各个部件之间的关系。

如图1和图2所示，本实用新型一实施例提供了一种免疫组化检测用载玻片，所述载玻片至少包括：载玻片基底1，如图2所示，所述载玻片基底1至少部分覆盖有粘附层2；所述载玻片设有检测区3、对照区4和标签区5，所述对照区4设有阳性组织芯片41，所述阳性组织芯片41包括若干种阳性对照组织，所述检测区3和对照区4覆盖有粘附层2，所述阳性组织芯片41位于粘附层的上方。

可选的，所述检测区3、对照区4和标签区5依载玻片的长度方向设置。

所述检测区用于粘附待测目标。

所述载玻片基底的主要成分是氧化硅和氧化铝，二氧化硅含量越高，化学稳定性越好；同时所含杂质也越少，材料密度和结构稳定性越高。

进一步的，所述粘附层2由粘附物质组成，所述粘附物质选自3-氨丙基-3-乙氧基甲硅烷(3-Aminopropyl-Triethoxysilane，APES)、多聚-L-赖氨酸(Poly-L-Lysine)或明胶。可将组织、细胞吸附于玻片。

优选的，为多聚-L-赖氨酸(Poly-L-Lysine)。效果更好。

在一种优选的实施方式中，所述阳性组织芯片41上方覆盖有防降解层42。

可选的，所述防降解层42由防降解物质组成，所述防降解物质选自石蜡。

在进行免疫组化实验时，需要对载玻片进行烤片，防降解物质会脱落或融化，不会影响使用。

所述阳性组织芯片41中，阳性对照组织的种类为4-100种。可以为4-10种，10-20种，20-30种，30-40种，40-50种，50-60种，60-70种，70-80种，80-90种，90-100种。

进一步的，所述阳性对照组织芯片41中，所述阳性对照组织为人体组织。与待检测组织同源，内源性相似，准确性高。

例如可以为感染病毒的肺组织、脑组织、扁桃体组织、甲状腺组织、胸腺瘤组织、肺组织、HER2(3+)乳腺癌组织、肝组织、子宫肌层组织、结肠组织、前列腺组织、脑组织、胃组织、卵巢组织、淋巴结组织等。

可选的，阳性对照组织包括新型冠状病毒抗原阳性的COVID-19组织。可用于待测目标物中的新冠病毒COVID-19比对。

所述阳性组织芯片41中，每种阳性对照组织包含的细胞种类为10-100种。可以为10-20种，20-30种，30-40种，40-50种，50-60种，60-70种，70-80种，80-90种，90-100种。

本实用新型所述的阳性组织芯片，涵盖了人体所有的常见组织与细胞。

所述阳性对照组织可以根据需要进行灵活选择，符合各类检测需求。

在一种实施方式中，所述标签区5的载玻片基底1覆盖有抗化学腐蚀涂层51。

可选的，所述抗化学腐蚀涂层51由抗化学腐蚀材料组成。所述抗化学腐蚀材料为现有技术。例如可以为CN101824266B所述的涂层，也可以采用其他现有技术所用的涂层。

所述标签区可以为白色，便于书写。

所述标签区可以用于粘贴二维码。

所述标签区的载玻片基底可以为磨砂载玻片基底，便于书写粘贴。

可选的，所述标签区5的面积占所述载玻片面积的25％-32％。具体如，25％-28％，28％-30％，30％-32％。便于书写或粘贴，同时不过多占用载玻片面积。

可选的，所述对照区4的面积占所述载玻片面积的18％-25％。具体如，18％-21％，21％-23％，23％-25％。保证有足够空间放置阳性组织芯片。

可选的，所述对照区4中，所述阳性组织芯片41的长度占所述载玻片长度的16％-17％。

所述阳性组织芯片41的长度和宽度相等。便于制作。

例如，所述载玻片长*宽＝75mm*25mm，标签区长*宽＝23mm*25mm，对照区长*宽＝18*25mm，阳性组织芯片长*宽＝为12mm*12mm，检测区长*宽＝34mm*25mm。

前述的免疫组化检测用载玻片可用于在免疫组化检测。包括病理、免疫、分子生物技术领域应用。

前述的免疫组化检测用载玻片的制备方法，至少包括如下步骤：

1)在载玻片基底表面至少部分覆盖粘附物质；

2)将阳性组织芯片平铺于对照区；

3)在阳性组织芯片表面覆盖防降解物质。

可以通过涂抹或浸泡的方式将粘附物质覆盖到载玻片基底表面。

可以通过涂抹或浸泡的方式将防降解物质覆盖到阳性组织芯片表面。所述方法还包括如下步骤：

在标签区的载玻片基底表面涂抹抗化学腐蚀涂层。

所述阳性组织芯片可采用组织芯片制作方法制作，例如：

将阳性对照组织制备成组织蜡块，通过组织芯片制作机细针打孔的方法，从众多的组织蜡块(称为供体蜡块，donor)中采集到数十至上百的圆柱形小组织(组织芯，tissuecore)，并将其整齐排列至另一空白蜡块(称为受体蜡块，recipient)中，然后通过显微切片技术，对组织芯片蜡块进行切片(厚度5um)获得了阳性组织芯片。

使用本实用新型所述载玻片进行免疫组化实验时，可依照常规免疫组化实验方法进行。例如，采用以下步骤的方法也可采用实验仪器进行。例如仪器化的莱卡烤片机(LEICAHI1220)，莱卡脱蜡一体机(LEICAST5020)，以及Dako染色机(Autostainer Link 48)操作：1、脱蜡至水

①将组织切片置于65℃的烤片机中，烤片时间大约一个小时。②将拷完切片迅速置入二甲苯中，浸泡10min；取出，置入第二缸二甲苯中，浸泡10min；

③从二甲苯中取出切片置入无水乙醇中，浸泡3～5min；取出，置入第二缸无水乙醇中，浸泡3～5min；再依次置入90％、80％、70％酒精中梯度水化，各浸泡3～5min。

2、抗原修复(CBS PH 6.0)

①用蒸馏水润洗切片表面的酒精2～3次，尽量不残留酒精；

②将切片置入已经在电饭煲(沸水浴)中预热充分的CBS缓冲液中，持续水浴煮沸20min，再将电饭煲切换至保温档保温10min；

③取出修复盒，使其自然冷却至室温。

3、滴加过氧化氢

①用PH 7.2～7.4的PBS缓冲液浸泡组织3次，每次3～5min；

②将切片从玻片架上取出，用手甩去玻片上的PBS缓冲液，并用吸水纸吸取组织外围的缓冲液；

③将切片置于湿盒上，滴加1～2滴3％H₂O₂溶液，室温孵育10～15min。

4、滴加一抗

①将切片置于玻片架上，用PH 7.2～7.4的PBS缓冲液浸泡组织3次，每次3～5min；

③将切片置于湿盒上，滴加一抗，37℃孵育60min。

5、滴加二抗

③将切片置于湿盒上，滴加二抗，室温孵育30min。

6、DAB显色

①将切片置于玻片架上，用PH7.2～7.4的PBS缓冲液浸泡组织3次，每次3～5min；

②配制DAB显色液：a液：b液：c液：蒸馏水体积比按照1：1：1：20比例配制；

③将切片从玻片架上取出，用手甩去玻片上的PBS缓冲液，并用吸水纸吸取组织外围的缓冲液；

④将切片置于白纸上，滴加DAB 50～60ul，室温下镜检显色。

7、苏木素复染

①将切片置于玻片架上，用自来水润洗切片表面的DAB溶液2～3次；

②将切片置入苏木素染色缸中浸泡3min，取出，自来水洗去表面残留的苏木素；

③将切片浸入1％盐酸酒精中分化，迅速取出，置入自来水中润洗2～3次，弃去洗液，自来水流水冲洗组织10min(返蓝)。

8、脱水封片

①将切片置入90％酒精中浸泡5min，取出；置入无水乙醇中，浸泡5min，取出；置入第二缸无水乙醇中，浸泡5min，取出；

②用电吹风吹干残留组织表面的酒精，树脂封片。

使用本实用新型所述载玻片进行免疫组化检测245例，245例的阳性组织芯片全部无脱片无掉片，防脱片率达到100％。如图3所示，经检测(常温保存半年的载玻片)抗原保存良好，无降解，在细胞膜/浆/核的定位清晰准确，与新鲜组织抗原相比无差异。

上述实施例仅例示性说明本实用新型的原理及其功效，而非用于限制本实用新型。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本实用新型的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本实用新型所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本实用新型的权利要求所涵盖。

Claims

1.一种免疫组化检测用载玻片，其特征在于，所述载玻片至少包括：载玻片基底(1)，所述载玻片基底(1)至少部分覆盖有粘附层(2)；所述载玻片设有检测区(3)、对照区(4)和标签区(5)，所述对照区(4)设有阳性组织芯片(41)，所述阳性组织芯片(41)包括若干种阳性对照组织，所述检测区(3)和对照区(4)覆盖有粘附层(2)，所述阳性组织芯片(41)位于粘附层的上方。

2.如权利要求1所述的免疫组化检测用载玻片，其特征在于，所述粘附层(2)由粘附物质组成，所述粘附物质选自3-氨丙基-3-乙氧基甲硅烷、多聚-L-赖氨酸或明胶。

3.如权利要求1所述的免疫组化检测用载玻片，其特征在于，所述阳性组织芯片(41)上方覆盖有防降解层(42)。

4.如权利要求3所述的免疫组化检测用载玻片，其特征在于，所述防降解层(42)由防降解物质组成，所述防降解物质选自石蜡。

5.如权利要求1所述的免疫组化检测用载玻片，其特征在于，所述阳性组织芯片(41)中，阳性对照组织的种类为4-100种。

6.如权利要求5所述的免疫组化检测用载玻片，其特征在于，所述阳性组织芯片(41)中，阳性对照组织包括新型冠状病毒抗原阳性的COVID-19组织。

7.如权利要求1所述的免疫组化检测用载玻片，其特征在于，所述标签区(5)的载玻片基底(1)覆盖有抗化学腐蚀涂层。

8.如权利要求1所述的免疫组化检测用载玻片，其特征在于，所述标签区(5)的面积占所述载玻片面积的25％-32％。

9.如权利要求1所述的免疫组化检测用载玻片，其特征在于，所述对照区(4)的面积占所述载玻片面积的18％-25％。

10.如权利要求9所述的免疫组化检测用载玻片，其特征在于，所述对照区(4)中，所述阳性组织芯片(41)的面积占所述载玻片长度的16％-17％。