CN207079232U - 一种单个核细胞分离管 - Google Patents
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Abstract
本实用新型公开了单个核细胞分离管，包括离心管，离心管的管口处设有偏侧漏斗隔板，离心管内下半部横截面处设有锥窝孔板；偏侧漏斗隔板与离心管的半侧管壁形成偏侧漏斗结构，锥窝孔板上均匀间隔分布有若干正锥窝孔和倒锥窝孔。本实用新型可直接经偏侧漏斗倒入抗凝血，保证抗凝血沿离心管壁下流；采用锥窝孔板结构，允许快速将血液样本加到密度梯度离心液的液面上，并能防止血液层与离心液的混合，节约时间，分离简单，由于锥窝孔板的分隔缓冲作用，下方的红细胞不会随之倒出；将倒出的混合物再次常规离心获取的细胞沉淀即是PBMC；只需较短的时间即可轻松完成PBMC的分离，且整个过程一致性好，省时省力，使PBMC分离简便，快捷，一致。
Description
技术领域
本实用新型涉及细胞分离技术领域，具体涉及一种单个核细胞分离管。
背景技术
肿瘤的细胞过继免疫治疗是继手术、化疗和放疗之后的第四种肿瘤治疗方法。体外培养自体免疫细胞时，需要预先采集患者50～100ml外周血，并分离外周血中具有的单个核细胞，即外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell，PBMC)，包括淋巴细胞和单核细胞。目前主要的分离方法是应用样本密度分离液进行密度梯度离心，因为血液中各有形成分的比重存在差异，因此得以分离。红细胞和粒细胞密度大于分离液沉积于管底。血小板则因密度小而悬浮于血浆中，唯有与分离液密度相当的单个核细胞密集在血浆层和分离液的界面中，呈白膜状，吸取该层细胞经过洗涤离心重悬，即可用于治疗用途的免疫细胞体外扩增培养。
目前，在应用样本密度分离液进行PBMC分离时，采用的离心管最大规格多为15ml或50ml，每次每管分离的外周血样本量为10～15ml，加样时操作要求高，一不小心即会导致抗凝血与样本密度分离液相混，影响单个核细胞的分离效果。市场上有一种Greiner bio-one的淋巴/单核细胞分离管，包含一个高质量聚乙烯的多孔筛板，该版稳固地嵌入聚丙烯材质的离心管中，通过严格控制筛板的孔径大小来分离细胞，大大缩短了样本的处理时间。该种分离管主要有两种规格：12ml和50ml，其50ml分离管每次处理样本量为15～30ml血样，较传统方法使用的普通离心管增加了样本处理量，缩短了处理时间，减小了操作难度，提高了工作效率，但该产品使用成本较高，有必要进一步开发出价廉物美的外周血单个核细胞的分离耗材。
实用新型内容
本实用新型的目的提供一种细胞分离管及其使用方法，解决上述现有技术问题中的一个或者多个。
根据本实用新型的一种单个核细胞分离管，包括离心管，所述离心管的管口处设有偏侧漏斗隔板，所述离心管内下半部横截面处设有锥窝孔板；所述偏侧漏斗隔板与所述离心管的半侧管壁形成一偏侧漏斗结构，所述锥窝孔板上均匀间隔分布有若干正锥窝孔和倒锥窝孔。
在一些实施方式中，所述偏侧漏斗隔板包括隔板部和连接于所述隔板部下方的偏侧漏斗部，所述隔板部竖直分布于所述离心管内，所述隔板部两侧缘与所述离心管内壁相贴合，所述隔板部将离心管管口分为偏侧漏斗半圆口和离心管半圆口两部分，所述偏侧漏斗部向一侧管壁收拢，与该侧离心管管壁共同形成偏侧漏斗，所述偏侧漏斗部的底端设有紧贴管壁的半环形开口，所述开口宽度为0.1mm～3mm。
在一些实施方式中，所述锥窝孔板为与所述离心管横截面相适应的圆形板，所述正锥窝孔和倒锥窝孔均匀间隔分布，所述正锥窝孔上孔口小，下孔口大，所述倒锥窝孔上孔口大，下孔口小，所述正锥窝孔和所述倒锥窝孔为圆锥形、正六边锥形、方锥形、菱形锥形、矩形锥形、三角锥形、正弦曲线锥形中的一种或多种的组合，所述锥窝孔板周缘与所述离心管内壁相贴合。
在一些实施方式中，所述锥窝孔板的厚度为2mm～8mm，所述正锥窝孔和所述倒锥窝孔之间的锥窝壁的壁厚度为0.1mm～3mm，所述锥窝壁与正锥窝孔和倒锥窝孔中轴线的夹角为20°～80°。
本实用新型中所提供的一种细胞分离管，管口设有偏侧漏斗隔板，与一侧离心管壁共同形成偏侧漏斗结构，在保持分离管直立的情况下，直接经偏侧漏斗结构倒入抗凝血，可以保证抗凝血沿离心管壁下流；采用锥窝孔板结构，允许快速将血液样本加到密度梯度离心液的液面上，并能防止血液层与离心液的混合，离心结束时，减速无需过于平缓漫长。离心后，既可用吸管吸取PBMC细胞层，也可直接将锥窝孔板上方的血浆层、PBMC细胞层和部分样本密度分离液轻松快速倒入新的常规离心管中，由于锥窝孔板的分隔缓冲作用，其下方的红细胞不会随之倒出；将倒出的混合物再次常规离心获取的细胞沉淀即是PBMC；只需较短的时间即可轻松完成PBMC的分离，且整个过程一致性好，省时省力，使PBMC分离简便，快捷，一致。
附图说明
图1为本实用新型的一种实施方式的一种单个核细胞分离管的结构示意图；
图2为本实用新型的一种实施方式的一种单个核细胞分离管去除管盖的结构示意图；
图3为本实用新型的一种实施方式的一种单个核细胞分离管的锥窝孔板的俯视结构示意图；
图4为本实用新型的一种实施方式的一种单个核细胞分离管的锥窝孔板的侧视结构示意图。
具体实施方式
下面结合说明书附图，对本实用新型进行进一步详细的说明。
如图1或图2中所示，一种细胞分离管，包括离心管1，离心管1的管口处设置有偏侧漏斗隔板2，偏侧漏斗隔板2将离心管1管口分为两部分，偏侧漏斗隔板2的作用在于倒入抗凝血样品，抗凝血从偏侧漏斗底部2半环形开口23流出，沿离心管1管壁下流至锥窝孔板3上方，离心管1内部下半部横截面处设有锥窝孔板3，锥窝孔板3整体呈圆板形状；偏侧漏斗隔板2与半侧离心管1管壁形成一偏侧漏斗状，偏侧漏斗隔板2包括隔板部21和一体成型或焊接方式固定连接于隔板部21下部的偏侧漏斗部22，隔板部21竖直分布于离心管1内，隔板部21两侧缘与离心管1内壁相贴合，且隔板部21将离心管1管口分为偏侧漏斗半圆口11和离心管半圆口12两部分，本实施例中，隔板部21将分离管1的管口分为偏侧漏斗半圆口11和离心管半圆口12，偏侧漏斗半圆口11和离心管半圆口12均呈半圆状，隔板部21竖直向下沿分离管1管壁延伸并与偏侧漏斗部22相连接，偏侧漏斗部22边缘与离心管1相贴合并使偏侧漏斗部22边缘向一侧收拢，偏侧漏斗部22与分离管1之间形成一偏侧漏斗状，偏侧漏斗部22底端设有紧贴管壁的半环形开口23，半环形开口23宽度为0.1mm～3mm，可根据实际使用需求而限定开口宽度大小。
如图3或图4中所示，锥窝孔板3上均匀间隔分布有若干正锥窝孔31和若干倒锥窝孔32，锥窝孔板3整体为圆形板状，设置于分离管1管内下部的横截面，正锥窝孔31上孔口小，下孔口大，倒锥窝孔32上孔口大，下孔口小，因而在锥窝孔板3上，正锥窝孔31和倒锥窝孔32均匀间隔分布于锥窝孔板3上，正锥窝孔31和倒锥窝孔32为圆锥形、正六边锥形、方锥形、菱形锥形、矩形锥形、三角锥形、正弦曲线锥锥形中的一种或多种的组合，本实施例中，采用圆锥形，因而，正锥窝孔31和倒锥窝孔32的圆心在锥窝孔板3上呈矩阵排列，此举可最大范围的利用锥窝孔板3。
锥窝孔板3的厚度为2mm～8mm，可根据实际使用需求而选定锥窝孔板的厚度，正锥窝孔31和倒锥窝孔32之间的锥窝壁的壁厚度为0.1mm～3mm，锥窝壁与正锥窝孔31和倒锥窝孔32中轴线的夹角为20°～80°，本实施例中为45°。
一种如权利要求1所述的单个核细胞分离管进行细胞分离的使用方法，包括步骤：
1)吸取与分离管的锥窝孔板下方容积相等的样本密度分离液经离心管半圆口到分离管内；
2)使用离心机在1000g的离心力下对分离管离心25-35秒，使样本密度分离液进入并充满锥窝孔板下方空间；
3)保持分离管直立，在分离管的偏侧漏斗半圆口中倒入抗凝血样品，抗凝血从偏侧漏斗底部半环形开口流出，沿离心管壁下流至锥窝孔板上方；
4)使用离心机在1000g的离心力下对分离管离心8-12分钟，或使用离心机在800g的离心力下对分离管离心13-20分钟；离心后分离管内样品自上而下依次分层如下：血浆-单个核细胞-分离液-锥窝孔板-分离液-红细胞；
5)使用移液管从离心管半圆口吸取单个核细胞，或者直接经离心管半圆口快速倾倒入另一常规离心管中，在新的常规离心管中加入PBS，用移液管重悬清洗细胞，使用离心机在250g的离心力下离心3-7分钟；
6)重复清洗细胞2次，用PBS或细胞培养液重悬获得单个核细胞，直接存放于冻存管或进行下一阶段使用。
在步骤1中，当锥窝孔板下方预装有样本密度分离液时，则不需要步骤1。
在步骤2、4、5中的离心操作均在室温下进行。
步骤3中如需对抗凝血样品进行稀释，可在分离管外稀释，也可直接在分离管中倒入平衡盐溶液进行稀释。
本实用新型中所提供的一种单个核细胞分离管，管口设置有偏侧漏斗隔板，与一侧离心管壁共同形成偏侧漏斗结构，在保持分离管直立的情况下，直接经偏侧漏斗结构倒入抗凝血，可以保证抗凝血沿离心管壁下流；采用锥窝孔板结构，允许快速将血液样本加到密度梯度离心液的液面上，并能防止血液层与离心液的混合，离心结束时，减速无需过于平缓漫长。离心后，既可用吸管吸取PBMC细胞层，也可直接将锥窝孔板上方的血浆层、PBMC细胞层和部分样本密度分离液轻松倒入新的常规离心管中，由于锥窝孔板的分隔缓冲作用，其下方的红细胞不会随之倒出；将倒出的混合物再次常规离心获取的细胞沉淀即是PBMC；只需较短的时间即可轻松完成PBMC的分离，且整个过程一致性好，省时省力，使PBMC分离简便，快捷，一致。
以上所述仅是本实用新型的优选方式，应当指出，对于本领域普通技术人员来说，在不脱离本实用新型创造构思的前提下，还可以做出若干相似的变形和改进，这些也应视为本实用新型的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种单个核细胞分离管，其特征在于，包括离心管(1)，所述离心管(1)的管口处设有偏侧漏斗隔板(2)，所述离心管(1)内下半部横截面处设有锥窝孔板(3)；所述偏侧漏斗隔板(2)与所述离心管(1)的半侧管壁形成一偏侧漏斗结构，所述锥窝孔板(3)上均匀间隔分布有若干正锥窝孔(31)和倒锥窝孔(32)。
2.根据权利要求1所述的一种单个核细胞分离管，其特征在于，所述偏侧漏斗隔板(2)包括隔板部(21)和连接于所述隔板部(21)下方的偏侧漏斗部(22)，所述隔板部(21)竖直分布于所述离心管(1)内，所述隔板部(21)两侧缘与所述离心管(1)内壁相贴合，所述隔板部(21)将离心管(1)管口分为偏侧漏斗半圆口(11)和离心管半圆口(12)两部分，所述偏侧漏斗部(22)向一侧管壁收拢，与该侧离心管(1)管壁共同形成偏侧漏斗，所述偏侧漏斗部(22)的底端设有紧贴管壁的半环形开口(23)，所述开口(23)宽度为0.1mm～3mm。
3.根据权利要求1所述的一种单个核细胞分离管，其特征在于，所述锥窝孔板(3)为与所述离心管(1)横截面相适应的圆形板，所述正锥窝孔(31)和倒锥窝孔(32)均匀间隔分布，所述正锥窝孔(31)上孔口小，下孔口大，所述倒锥窝孔(32)上孔口大，下孔口小，所述正锥窝孔(31)和所述倒锥窝孔(32)为圆锥形、正六边锥形、方锥形、菱形锥形、矩形锥形、三角锥形、正弦曲线锥形中的一种或多种的组合，所述锥窝孔板(3)周缘与所述离心管(1)内壁相贴合。
4.根据权利要求3所述的一种单个核细胞分离管，其特征在于，所述锥窝孔板(3)的厚度为2mm～8mm，所述正锥窝孔(31)和所述倒锥窝孔(32)之间的锥窝壁的壁厚度为0.1mm～3mm，所述锥窝壁与正锥窝孔(31)和倒锥窝孔(32)中轴线的夹角为20°～80°。
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