CN205650214U - 一种d-二聚体定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片 - Google Patents
一种d-二聚体定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片 Download PDFInfo
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Abstract
本实用新型提供一种D‑二聚体定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片，其结构主要包括盖片(1)和底片(11)；其中盖片(1)上的加样口(2)，样本液流通道(6)，第一生物标记物存储池(4)，微混合器(7)，过渡区(10)依次连接；底片(11)上的过滤器(12)，反应池(13)，清洗池(14)，检测池(15)，溶液释放通道(18)依次连接，底片(11)上的检测池(15)通过溶液释放通道(18)与清洗液存储池(16)和发光液存储池(17)连接，所述微流控芯片的过滤器(12)由一个具有固定形状的腔体和滤血膜组成，所述盖片(1)和底片(11)用胶带(20和22)密封组装；本实用新型提供的芯片检测结果灵敏度高，准确可靠，重复性好。
Description
技术领域
本发明涉及免疫体外诊断领域，具体涉及一种D-二聚体定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片，能够在短时间内实现对生物样品中D-二聚体的定量检测，具有操作简单，灵敏度高，低成本等特点。
背景技术
纤维蛋白溶解系统(fibrinolysis system)是人体最重要的抗凝系统，由4种主要部分组成：纤溶酶原(plasmingen)、纤溶酶原激活剂(plasmingen activator，如t-PA，u-PA)、纤溶酶(plasmin)、纤溶酶抑制物(plasmin activator inhibitor，PAI-1，antiplasmin)。当纤维蛋白凝结块(fibrin clot)形成时，在tPA的存在下，纤溶酶原激活转化为纤溶酶，纤维蛋白溶解过程开始，纤溶酶降解纤维蛋白凝结块形成各种可溶片段，形成纤维蛋白产物(FDP)，FDP由下列物质：X-寡聚体(X-oligomer)、D-二聚体(D-Dimer)、中间片段(Intermediate fragments)、片段E(Fragment E)组成。其中，X-寡聚体和D-聚体均含D-二聚体单位。
纤溶蛋白降解产物中，唯D-二聚体交联碎片可反映血栓形成后的溶栓活性。只要机体血管内有活化的血栓形成及纤维溶解活动，D-二聚体就会升高。在生理状态下，人体正常D-二聚体的水平一般在200μg/L以下，机体保持着凝血与纤溶动态平衡，以保证纤维蛋白及时形成和及时清除。心肌梗死、脑梗死、肺栓塞、静脉血栓形成、手术、肿瘤、弥漫性血管内凝血、感染及组织坏死等均可导致D-二聚体升高。因此，理论上，D-二聚体的定量检测可反映药物的溶栓效果、也可用于诊断、筛选新形成的血栓。
目前，用于D-二聚体的定量检测方法中应用较多的主要为：酶联免疫吸附法(ELISA)、乳胶颗粒凝集法(LATEX)、免疫过滤胶体金染色法、双抗体RBC凝集法和放免法等。临床最常用是：ELISA、LATEX和免疫过滤胶体金染色法，其中LATEX法测定速度快，但敏感度不如ELISA法；ELISA法敏感度高，但检测时耗时较长。中国专利(201110051367.2)公开了一种D-二聚体时间分辨荧光免疫分析试剂盒及其制备方法，该试剂盒由下述成分组成：1)D-二聚体校准品；2)D-二聚体单克隆抗体包被的微孔板；3)铕元素标记的另一株D-二聚体单克隆抗体；4)洗涤液；5)增强液；6)分析缓冲液。该试剂盒采用铕元素标记抗体，铕元素属于镧系稀土金属元素，价格比较昂贵，且铕荧光寿命1ms，在水中不稳定，需要额外添加增强剂 才能获得稳定的荧光。
近年来，生物分析技术领域得到了快速的发展，出现了很多重要的研究方向。微流控芯片分析技术是其中最活跃的一支，在科研和实际应用领域都获得了广泛的重视。微流控芯片作为一种新型的分析检测平台，具有高通量、集成化、便携式、易操作、低成本等优点，已经在众多领域中得到了广泛的应用，尤其是在免疫分析领域已崭露头角。
表面功能化的磁性微球作为固相载体，可以用来有效地捕获核酸、蛋白分子、病毒颗粒甚至细胞，已经被广泛地应用于各种生化指标的临床诊断等领域。而微流控芯片系统具有快速、高效、集成化等特点，两者相结合，将成为一种新型的高性能检测方法，以解决当前检测方法中存在的灵敏度低，检测过程复杂，难以实现微量样本检测的问题，有望进一步推动临床检测仪器向便携化和微型化发展。
免疫磁珠的生物微流控芯片是将磁颗粒技术，免疫分析集成到微流控芯片上的一种分析检测方法，目前这种综合性的检测方法的主要难点表现为：1)液体在芯片内部微流动的智能控制，目前常采用的方法是在芯片内部设置多个微泵和微阀，使得微流控体系变得更加复杂化；2)反应体系的混合不充分，导致反应不充分；3)集成化程度不高，导致非特异性背景高。
发明内容
为弥补现有技术的不足，本发明旨在提出一种D-二聚体定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片，检验人员只需经过简单操作，即可在15分钟内实现样品中D-二聚体浓度的定量检测。检测结果灵敏度高，准确可靠，重复性好。
本发明所述一种D-二聚体定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片，所述微流控芯片结构主要包括盖片(1)和底片(11)；其中盖片(1)上的加样口(2)，样本液流通道(6)，第一生物标记物存储池(4)，微混合器(7)，过渡区(10)依次连接；底片(11)上的过滤器(12)，反应池(13)，清洗池(14)，检测池(15)，溶液释放通道(18)依次连接，底片(11)上的检测池(15)通过溶液释放通道(18)与清洗液存储池(16)和发光液存储池(17)连接；
所述第一生物标记物存储池(4)中存储酶或发光剂标记的抗D-二聚体抗体溶液；所述清洗液存储池(16)，发光液存储池(17)中存储清洗液、发光基底液；所述反应池(13)中包被磁颗粒标记的抗D-二聚体抗体；所述盖片(1)和底片(11)用胶带(20和22)密封组装；所述第一生物标记物存储池(4)、清洗液存储池(16)、发光基底液存储池(17)和检测池(15)中存储预封装试剂；
所述第一生物标记物存储池(4)、清洗液存储池(16)、发光基底液存储池(17)为液体密封池，可通过外力挤压而局部破裂，释放液体；所述微流控芯片的过滤器(12)由一个具有固定形状的腔体和滤血膜组成；所述过滤器滤血膜材料为玻璃纤维膜，聚酯纤维膜或CytoSep膜等。
具体地，所述微流控芯片的第一生物标记物存储池(4)、清洗液存储池(16)和发光液存储池(17)的体积为10～500μl，为液囊或腔体。
优选地，微流控芯片的第一生物标记物存储池(4)、清洗液存储池(16)和发光液存储池(17)的体积为10～300μl。
具体地，所述微流控芯片的微混合器(7)是宽度为20～300μm，深度为10～100μm的蛇形，折线形或方波形结构。
优选地，所述微混合器为宽150μm，深度为50μm的方形结构，在外部压力作用下，可使样本和试剂充分混合，提高反应效率。
具体地，所述微流控芯片的反应池(13)为管状通道或矩形的毛细管微通道，允许微液体流进或通过。
具体地，所述微流控芯片的反应池(13)为管状通道，直径为0.5～10mm。
优选地，所述微流控芯片的反应池(13)为管状通道，直径为5mm，进一步优选2mm或1mm。
具体地，所述微流控芯片的反应池(13)为矩形通道，宽为0.1～5mm，深度为0.01～2mm，长为5～40mm。
优选地，所述微流控芯片的反应池(13)为矩形通道，宽为0.3～2mm，深度为0.2～1mm，长为5～20mm。
具体地，所述磁颗粒为核壳型的超顺磁性颗粒，磁核为Fe3O4或γ-Fe2O3化合物，外壳为聚苯乙烯，磁颗粒粒径为0.1～10μm。
优选地，磁核为Fe3O4化合物，且磁颗粒粒径为1～3μm，更优选粒径为2.0μm的磁颗粒。
具体地，所述加样口(2)的加样体积为5～200μl，优选100μl，进一步优选50μl，再进一步优选10μl。
具体地，所述盖片(1)上还有空气泵(3)和气流微通道(5)，按压空气泵(3)使气流通过气流微通道(5)驱动样本通过样本液流通道(6)。
具体地，本发明所述微流控芯片的过滤器主要包括腔体和滤血膜，所述腔体体积为样本体积的3～10倍，优选腔体体积为样本体积的4～6倍。
具体地，本发明所述微流控芯片底片中过滤器内的滤血膜材料可以为玻璃纤维膜，聚酯 纤维膜或CytoSep膜等，作为优选以玻璃纤维膜作为滤血膜。
本发明所述微流控芯片的制备方法如下：
步骤1)酶或发光剂标记抗D-二聚体抗体，磁颗粒标记抗D-二聚体抗体，这两种抗体可同一种抗体或不同种类抗体；
步骤2)将酶或发光剂标记抗体溶液放入盖片的第一生物标记物存储池中，密封，将磁颗粒标记抗体溶液放入底片的反应池，干燥，将清洗液和发光基底液分别注入清洗液存储池和发光液存储池中，密封，用胶带(20和22)密封盖片和底片，并组装形成一完整的微流控芯片。
本发明所述微流控芯片，各功能区之间通过微通道和微结构进行衔接，内部形成一个完整的液流和气流系统。
本发明所述微流控芯片盖片和底片内的微通道和微结构的加工工艺包括模塑法、热压法、激光刻蚀法和软光刻法等，本发明的实施例中优选模塑法来制作微流控芯片，可有效降低检测成本。
本发明所述微流控芯片盖片和底片内除上述主要微通道和微结构外还有许多透气孔，用于排除液体流动过程中产生的气泡，同时还有用于组装固定的让位孔和立柱。
本发明所述微流控芯片盖片上的空气泵(3)主要是通过气流通道(5)传递压力，主要作用是用于样本和第一生物标记物的混合，提高一级孵育效果。
本发明所述微流控芯片的气流通道尺寸为0.1～100μm，进一步优选2～50μm。
本发明所述微流控芯片盖片的过渡区是盖片和底片连接的枢纽，一级反应混合物经过渡区流入过滤器，实现了液体在微流控芯片的上下片层间的流动。
本发明所述微流控芯片的过滤器具有滤除样本杂质的功能外，还可以将液体引导进入下一级微结构和微通道。
本发明所述微流控芯片的反应池内部需进行一定的表面改性处理，所述表面改性处理方法可为化学反应，表面涂层，等离子处理等，从而获得良好的亲水性，促使液体样本在毛细管作用力下流动，快速填充微通道。
本发明所述微流控芯片的发光液存储池的个数，根据所选发光试剂的种类可为一个，两个或三个，优选为一个或两个。
本发明中所述酶，包含但不限定于过氧化氢酶(HRP)和碱性磷酸酶(ALP)。发光基底液为酶对应的发光底物(如鲁米诺或金刚烷)和发光增强液(如苯衍生物等增强剂)，其中 发光底物和发光增强液可合并，如图2所示混合均匀后注入一个发光基底液存储池(17)；但当混合液保质期少于1年时应分开，如图4所示分别注入发光基底液存储池(17)和发光基底液存储池(24)，通过预混合通道(23)混合均匀。
本发明所述微流控芯片的组装，盖片和底片通过密封胶带进行黏合，密封胶带可为普通双面胶，热敏胶和压敏胶等，作为优选密封胶带为热敏胶或压敏胶。
本发明提供一种使用上述微流控芯片对待测样本进行检测的方法，具体操作步骤包括：
步骤1)从加样口(2)加入样本，盖上血液盖，将微流控芯片放入配套仪器中，从第一生物标记物存储池(4)释放酶或发光剂标记的抗D-二聚体抗体后，样本和酶或发光剂标记的抗D-二聚体抗体进入微混器(7)中混合均匀且发生化学反应，形成一种免疫复合物通过过渡区(10)，然后流入底片过滤器(12)中；
步骤2)样本经过滤器后，到达反应池(13)，复溶包被在该区域的磁颗粒标记的抗D-二聚体抗体，且与之发生反应，配套仪器内磁铁收集磁颗粒，磁颗粒收集完成后，在配套仪器内磁铁作用下转移至清洗池(14)，清洗液存储池(16)释放清洗液通过溶液释放通道(18)进入清洗池(14)，磁颗粒经充分洗涤后，磁颗粒在外部磁铁作用下转移至检测池(15)，发光液存储池(17)释放发光基底液通过溶液释放通道(18)进入检测池(15)；测定相对发光强度(RLU)报告D-二聚体的定量测试结果。
本发明所述配套仪器为一小型便携设备，包含控制装置和检测装置。
本发明所述便携设备的控制装置主要作用为对微流控芯片实施挤压空气泵实现样本和生物标记物的混合，控制磁铁的运动实现磁性微颗粒标记抗体和一级反应物的充分混合以及磁珠的收集，控制磁铁的运动实现反应混合物依次在反应池，清洗池，检测池间的移动，有效降低非特异性干扰。
本发明所述清洗液，用于清洗磁颗粒，去除未参与反应的杂质物质。清洗液主要包含缓冲体系、蛋白质、表面活性剂和防腐剂，其中缓冲体系包含但不限于硼酸盐、磷酸盐、Tris-HCl和醋酸盐等。其中蛋白质包含但不限于牛血清白蛋白、酪蛋白等；其中表面活性剂包含但不限于吐温20、吐温80、曲拉通X-100、聚乙二醇和聚乙烯基吡咯烷酮等。
本发明与现有技术相比，所获得的有益效果为：
1)测试前无需对样本进行复杂的预处理工作；
2)将磁免疫技术集成到微流控芯片上，综合了两种技术的优势，使整个检测过程具有操 作简单，结果准确可靠，灵敏度高的特点。
3)配合小型检测设备和芯片内部的简单处理，无需复杂的泵阀和电场就能够有效地在微流控芯片内部实现液流的智能控制。
4)具有多步混合功能，在一定程度上可提高免疫反应效率。
5)在微流控芯片上的各种反应、清洗和检测过程分区域进行，集成化程度高，可有效降低非特异性干扰，提高检测的灵敏度。
6)采用本发明所涉及微流控芯片进行检测，能够快速报告检测结果，可进一步用于床旁检测和各种便携设备。
本发明的核心技术是将磁微粒技术、化学发光免疫检测技术和微流控芯片技术三者相结合，磁颗粒大小的设定，各通道形状、大小等参数的细微改变都会导致分析结果准确度降低。通过微流控芯片的精细设计和加工，并配合小型便携设备，成功实现了微流体在微流控芯片内部的智能控制，通过磁铁的作用使得磁微粒能够在微流控芯片内部实现可控的运动，混合，收集和清洗，提高反应效率，降低了非特异性干扰，从而增强了检测信号，提高了检测灵敏度。本发明所述技术并非以上三种重要技术的简单叠加，而是充分集成了三者的优势，在现有技术基础上进行了完善和改进的一种新的用于D-二聚体快速测定的方法。
附图说明
图1为微流控芯片的盖片结构示意图，其中2为加样口，3为空气泵，4为第一生物标记物存储池，5为气流通道，6为样本液流通道，7为微混合器，8为储液池让位孔，9为磁铁运动滑槽，10为过渡区。
图2为微流控芯片的底片结构示意图，其中12为过滤器，13为反应池，14为清洗池，15为检测池，16为清洗液存储池，17为发光液存储池，18为清洗液和发光试剂释放通道，19为废液回收池。
图3为微流控芯片的完整结构示意图，其中1为盖片，11为底片，20为顶部胶带，22为底部胶带。
图4为三个液体存储池的底片结构示意图，其中16为清洗液存储池，17和24为发光液存储池，18为清洗液释放通道，23为发光液释放通道。
具体实施方式：
本发明公开了一种D-二聚体定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本 领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明内。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面对照附图并结合优选具体实施方式对本发明进行详细的阐述。
实施例1：辣根过氧化物酶-鲁米诺(HRP-luminol)系统用于D-二聚体的检测
1.微流控芯片的制作
1)抗体标记：i)酶标抗体：称取HRP 25mg溶于1.25％戊二醛溶液中，于室温静置过夜；反应后的酶溶液经Sephadex G-25层析柱，用生理盐水洗脱，流速控制在1ml/min，收集棕色流出液；将待标记的D-二聚体抗体12.5mg用生理盐水稀释至5ml，搅拌下逐滴加入HRP溶液中；用1M pH9.5碳酸缓冲液0.25ml，继续搅拌3小时；加0.2M赖氨酸0.25ml，混匀后，置室温2小时；在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵，置4℃1小时；3000rpm离心半小时，弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次，最后沉淀物溶于少量0.15M pH7.4的PBS中；将上述溶液装入透析袋中，对0.15M pH7.4的PBS缓冲液透析，去除铵离子后(用萘氏试剂检测)，10000rpm离心30分钟去除沉淀，上清液即为酶结合物，分装后，2-4℃保存。ii)磁标抗体：准确移取30μl浓度为2mg/ml的链霉亲和素标记的磁颗粒，其中该功能化磁颗粒是以Fe3O4为核，聚苯乙烯为壳，粒径为2.0μm，于2ml离心管中，涡旋震荡30分钟。再加入150μl浓度为8mg/ml的生物素标记的D-二聚体单克隆抗体，混合均匀，于37℃在摇床中反应2小时。将反应混合物在磁性分离器进行分离，除去上清液，用0.01M PBS(含0.05％BSA/0.2％吐温-20，pH 7.4)重复清洗3次。最后用0.01M PBS(含0.5％BSA)将免疫化磁珠稀释至100μg/ml。
2)试剂的密封：将15μl浓度为1mg/ml的HRP标记的D-二聚体单克隆抗体，300μl清洗液，200μl发光试剂分别封装在相应的试剂存储池内；采用点样仪或喷点仪将20μl 10μg/ml免疫化磁颗粒喷涂在微流控芯片的反应池，室温干燥30min以上。
3)微流控芯片的组装：用胶带(20和22)密封盖片和底片，并将其他部件同时加以组装形成一张完整的微流控芯片；
4)存储：4℃，湿度为50％条件下保存。
2.D-二聚体的定量检测
1)标准曲线的制作：将D-二聚体标准品用人血清稀释，配成浓度为0ng/ml，5ng/ml，20ng/ml，80ng/ml，200ng/ml，400ng/ml，600ng/ml，1000ng/ml，5000ng/ml的D-二聚体标准品各150μl，取30μl加入本发明实施例中制备的微流控芯片的加样口，盖上血液盖， 将微流控芯片置于配套的分析仪中，放置15分钟，每个样本分别重复测定3次。根据发光强度与D-二聚体浓度间的比例关系，仪器自动显示D-二聚体抗原浓度，取三次测定平均值，绘制标准曲线。
2)取待检样本200μl，置于本发明实施例中所制作的微流控芯片中进行检测，每次取样30μl，重复测定3次，根据1)中绘制的标准曲线获得待检样品中D-二聚体抗原浓度。
3)结果表明：采用本发明所述检测方法，得出的最低检出限为4.5ng/ml，检测范围为1ng/ml-4000ng/ml，批间CV小于8％，批内CV小于3.5％。
实施例2：碱性磷酸酶-金刚烷(ALP-AMPPD)系统用于D-二聚体的检测
1.微流控芯片的制作
1)抗体标记：i)酶标抗体：2.5mg ALP(50IU/mg)，加入200μl含1.25％戊二醛的100mM的PB(pH6.8)，混匀，室温反应过夜；4℃条件下，电磁搅动，透析至50mM PBS(pH7.2)，12小时，换液4次；1.5mg D-二聚体抗体溶于100μl 1M的碳酸盐溶液(pH9.0)；将活化的AP加入配好的蛋白质液体中，混匀，4℃条件下反应24小时，加入10μl 200mM的赖氨酸溶液，混匀，22℃条件下反应2小时；4℃条件下透析至50mM PBS(pH7.2)，12小时，换液4次；离心，取上清，用50mM TB7.4+0.6％BSA+0.05％NaN3稀释10倍，-20℃保存。ii)磁标抗体：准确移取30μl浓度为2mg/ml的链霉亲和素标记的磁颗粒，其中该功能化磁颗粒是以Fe3O4为核，聚苯乙烯为壳，粒径为2.0μm，于2ml离心管中，涡旋震荡30min。再加入150μl浓度为8mg/ml的生物素标记的D-二聚体单克隆抗体，混合均匀，于37℃在摇床中反应2小时。将反应混合物在磁性分离器进行分离，除去上清液，用0.01M PBS(含0.05％BSA/0.2％吐温-20，pH 7.4)重复清洗3次。最后用0.01M PBS(含0.5％BSA)将免疫化磁珠稀释至100μg/ml。
2)试剂的密封：将15μl浓度为0.5mg/ml的ALP标记的D-二聚体单克隆抗体，300μl清洗液，200μl发光试剂分别封装在相应的试剂存储池内；采用点样仪或喷点仪将20μl 10μg/ml免疫化磁颗粒喷涂在微流控芯片的反应池内，室温干燥30分钟以上。
3)微流控芯片的组装：用胶带(20和22)密封盖片和底片，并将其他部件同时加以组装形成一张完整的微流控芯片；
4)存储：4℃，湿度为50％条件下保存。
2.D-二聚体的定量检测
1)标准曲线的制作：将D-二聚体标准品用人血清稀释，配成浓度为0ng/ml，5ng/ml，20ng/ml，80ng/ml，200ng/ml，400ng/ml，600ng/ml，1000ng/ml，5000ng/ml的D-二 聚体标准品各150μl，取30μl加入本发明实施例中制备的微流控芯片的加样口，盖上血液盖，将微流控芯片置于配套的分析仪中，放置15分钟，每个样本分别重复测定3次。根据发光强度与D-二聚体浓度间的比例关系，仪器自动显示D-二聚体抗原浓度，取三次测定平均值，绘制标准曲线。
2)取待检样本200μl，置于本发明实施例中所制作的微流控芯片中进行检测，每次取样30μl，重复测定3次，根据1)中绘制的标准曲线获得待检样品中D-二聚体抗原浓度。
3)结果表明：采用本发明所述检测方法，检测灵敏度为0.5ng/ml，检测范围为0.1ng/ml-5000ng/ml，批间CV小于5％，批内CV/小于2％。
实施例3：磁颗粒尺寸的筛选
磁性微球的粒径小，比表面积大，表面含有活性基团，故偶联容量大，但磁颗粒尺寸过小不利于磁铁收集，故进行磁微粒尺寸筛选。
其他的实验条件参见实施例2，磁微粒颗粒的尺寸按照以下方案进行。
选择颗粒尺寸分别为0.1μm、0.5μm、1.6μm、2μm、3μm、10μm磁颗粒标记抗C反应蛋白抗体。检测时采用磁性大小经过优选的永磁铁，固定磁铁高度。
实验结果如下：
磁微粒粒径尺寸从0.1μm、0.5μm、1.6μm、2μm、3μm依次增强，3μm干扰加大，10μm开始减小，信号值最低，综合各因素1.6μm信号最强，干扰最小。
结果分析：磁微粒尺寸较小时，比表面积较大，表面所负载的生物分子量大，同时能够很好地分散在溶液中，但要保证磁性微球充分被收集所需的磁场强度大。在本实施例中由于磁珠所受的磁场力不能保证其充分被收集，导致部分有效磁珠在清洗过程中流失，从而导致最终检测信号值不高。当磁颗粒粒径较大时，比表面积小，表面生物分子的标记率相对较低，相同条件下，磁性粒子所受磁场力大，分散的磁珠能够得到充分的收集，但其由于极易发生沉降，导致生物分子间反应不充分，从而减弱发光信号。综合考虑，粒径为1～3μm磁性微球效果较好，因此本发明的实施例中1.6μm的磁性微球效果最好。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种D-二聚体定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片结构主要包括盖片(1)和底片(11)；其中盖片(1)上的加样口(2)，样本液流通道(6)，第一生物标记物存储池(4)，微混合器(7)，过渡区(10)依次连接；底片(11)上的过滤器(12)，反应池(13)，清洗池(14)，检测池(15)，溶液释放通道(18)依次连接，底片(11)上的检测池(15)通过溶液释放通道(18)与清洗液存储池(16)和发光液存储池(17)连接；
所述第一生物标记物存储池(4)中存储酶或发光剂标记的抗D-二聚体抗体溶液；所述清洗液存储池(16)，发光液存储池(17)中存储清洗液、发光基底液；所述反应池(13)中包被磁颗粒标记的抗D-二聚体抗体；所述盖片(1)和底片(11)用胶带(20和22)密封组装；所述第一生物标记物存储池(4)、清洗液存储池(16)、发光基底液存储池(17)和检测池(15)中存储预封装试剂；
所述第一生物标记物存储池(4)、清洗液存储池(16)、发光基底液存储池(17)为液体密封池，可通过外力挤压而局部破裂，释放液体；所述微流控芯片的过滤器(12)由一个具有固定形状的腔体和滤血膜组成；所述过滤器滤血膜材料为玻璃纤维膜，聚酯纤维膜或CytoSep膜。
2.如权利要求1所述微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片的第一生物标记物存储池(4)、清洗液存储池(16)和发光液存储池(17)的体积为10～500μl，为液囊或腔体。
3.如权利要求1所述微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片的微混合器(7)是宽度为20～300μm，深度为10～100μm的折线形或方波形结构。
4.如权利要求1所述微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片的反应池(13)为管状通道或矩形的毛细管微通道。
5.如权利要求4所述微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片的反应池(13)为管状通道，直径为0.5～10mm。
6.如权利要求4所述微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片的反应池(13)为矩形的毛细管微通道，宽为0.1～5mm，深度为0.01～2mm，长为5～40mm。
7.如权利要求1所述微流控芯片，其特征在于，所述磁颗粒为核壳型的超顺磁性颗粒，磁核为Fe3O4或γ-Fe2O3化合物，外壳为聚苯乙烯，磁颗粒粒径为0.1～10μm。
8.如权利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述加样口(2)的加样体积为5～200μl。
9.如权利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述盖片(1)上还有空气泵(3)和气流微通道(5)，按压空气泵(3)使气流通过气流微通道(5)驱动样本通过样本液流通道(6)。
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