CN205327800U - 慢病毒试剂盒的盒子 - Google Patents

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Abstract

本实用新型公开了一种慢病毒试剂盒的盒子，包括：本体、衬板、隔热层、反应块以及用于承装反应液的试剂管；本体包括底板和以及与底板相连的盖板，衬板、隔热层和反应块均设置在所述底板上，并且衬板和反应块被隔热层隔开；衬板上设有与试剂管相匹配的通孔，试剂管通过通孔设置在衬板上；反应块上设有反应孔，反应块包括设置在反应孔下方的温控装置，温控装置用于控制反应孔的温度为16℃或37℃。这种慢病毒试剂盒的盒子的反应块上设有反应孔以及设在反应孔下方的温控装置，可以控制反应孔的温度为16℃或37℃，这种慢病毒试剂盒的盒子自带温控装置，使用起来更方便。

Description

慢病毒试剂盒的盒子
技术领域
本实用新型涉及生物技术领域，特别是涉及一种慢病毒试剂盒的盒子。
背景技术
基因表达是细胞在生命过程中，把储存在DNA序列中的遗传信息经过转录和翻译，转变成具有生物活性的蛋白质分子的过程。通过基因工程可以实现外源基因在生物细胞甚至生物体内的表达，从而达到人为调控细胞或实物体性状的目的。
真核细胞，尤其是哺乳动物细胞的外源基因的导入，主要通过物理方法、化学方法或生物学方法完成。物理方法主要包括DNA显微注射法、电穿孔法和金属颗粒轰击法等方法；化学方法主要包括脂质体介导和受体介导等方法；生物学方法主要是通过各种病毒实现，如腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒、慢病毒等。物理方法和化学方法可以负载大量外源基因片段，并且有部分方法可以实现将外源基因插入到细胞或生物体的基因组中，但总体来说，通过这两类方法实现外源基因表达的效率不高，而且大多数时候无法很好地实现外源基因插入细胞或生物体基因组，进而无法实现外源基因的稳定永久表达。生物学方法中的腺相关病毒、慢病毒等方法则可以很好地实现这一目标，它们可以将外源基因整合到细胞或生物体的基因组中，从而实现外源基因的稳定永久表达。其中，慢病毒以其具有可以感染非分裂期细胞、容纳外源性基因片段更大等优点受到科学界的青睐。
目前，不管是在实验室还是在产业界，慢病毒的应用都非常广泛。随着应用领域的不断扩大，对慢病毒的要求也在不断提高。当前，在科研和实际运用中，通过慢病毒一次导入两个基因并实现其高效表达的需求也越来越大，例如2013年《Science》杂志评选出的十大科学突破之首—癌症免疫疗法，包括TCR-T等技术。由于TCR-T技术能够表达特异性受体靶向识别特异性的细胞如肿瘤细胞，受到广泛的关注和研究，并从初期的基础免疫研究转变为现在的临床应用。由于TCR-T技术需要将T细胞受体(TCR)两个亚基对应的DNA序列同时导入到T细胞中，因此其对能实现双基因快速导入技术的需求非常迫切，而现有的慢病毒载体尚不能很好地满足这一需求。
当前的慢病毒技术主要通过两种方式实现双基因的导入：在慢病毒载体的基因表达区构建双启动子或一个启动子+一个内部核糖体进入位点序列(IRES)，通过两个启动元件在转录水平实现两个外源基因的表达。这两种方式均可以实现双基因的表达，但存在以下两个主要的缺点：1、位于载体上游和下游基因的表达水平不一致。由于不同启动元件效率的不同以及两者之间可能存在的相互作用，从而导致上下游基因的表达水平差异很大(如10倍的差异)，甚至出现其中一个基因不表达的情况；2、慢病毒对外源基因的负载容量一般在8000-10000bp左右，而启动元件的大小一般在500-700bp左右。可以看到，单个启动元件占慢病毒负载容量的比例接近10％，因此多引入一个启动元件就意味着通过慢病毒导入的外源基因序列，就意味着可用于导入外源基因容量的减少。因此使用这两种方式实现的慢病毒双基因表达均不是特别理想。现有技术中尚无可解决以上问题的慢病毒载体。
现有的慢病毒试剂盒的盒子本身主要起作用的仅限于存放试剂，在加样完成后仍需使用其他温度控制装置完成所需的实验步骤，现有技术中尚无带有温控装置的慢病毒试剂盒的盒子，使用起来相对不方便。
实用新型内容
基于此，有必要提供一种使用起来更方便的慢病毒试剂盒的盒子。
一种慢病毒试剂盒的盒子，包括：本体、衬板、隔热层、反应块以及用于承装反应液的试剂管；
所述本体包括底板和以及与所述底板相连的盖板，所述衬板、所述隔热层和所述反应块均设置在所述底板上，并且所述衬板和所述反应块被所述隔热层隔开；
所述衬板上设有与所述试剂管相匹配的通孔，所述试剂管通过所述通孔设置在所述衬板上；
所述反应块上设有反应孔，所述反应块包括设置在所述反应孔下方的温控装置，所述温控装置用于控制所述反应孔的温度为16℃或37℃。
在一个实施例中，所述隔热层为海绵隔热层。
在一个实施例中，所述试剂管为6个。
在一个实施例中，6个所述试剂管分别用于承装慢病毒转移载体、慢病毒包装辅助载体、第一上游引物、第一下游引物、第二上游引物和第二下游引物；
所述第一上游引物和所述第一下游引物用于第一基因的插入，所述第二上游引物和所述第二下游引物用于第二基因的插入。
在一个实施例中，所述慢病毒转移载体为pRRLSIN.cPPT.MSCV-Dual.WPRE载体。
在一个实施例中，所述慢病毒包装辅助载体包括pMDLg/pRRE载体、pRSV-Rev载体和pMD-G载体。
在一个实施例中，所述反应块上设有3个所述反应孔。
在一个实施例中，所述反应孔与200μL反应管相匹配。
在一个实施例中，所述反应孔的孔壁为金属孔壁，所述温控装置的一个表面为金属表面，所述温控装置的金属表面与所述反应孔的金属孔壁直接接触。
在一个实施例中，所述反应块还包括温控探头和显示屏，所述温控探头用于测量所述反应孔的温度，所述显示屏用于显示所述温控探头测量得到的所述反应孔的温度。
这种慢病毒试剂盒的盒子的反应块上设有反应孔以及设在反应孔下方的温控装置，可以控制反应孔的温度为16℃或37℃，这种慢病毒试剂盒的盒子自带温控装置，使用起来更方便。
附图说明
图1为一实施方式的慢病毒试剂盒的盒子的结构示意图。
具体实施方式
下面主要结合附图及具体实施例对慢病毒试剂盒的盒子及其制备方法作进一步详细的说明。
如图1所示的慢病毒试剂盒的盒子，包括：本体、衬板20、隔热层30、反应块40以及装有反应液的试剂管50。
本体包括底板12和以及与底板12相连的盖板14。
衬板20、隔热层30和反应块40均设置在底板14上，并且衬板20和反应块40被隔热层30隔开。
本实施方式中，隔热层30为海绵隔热层。
衬板20上设有与试剂管50相匹配的通孔22。
反应块40上设有反应孔42、调控开关44和显示屏46，反应块40还包括设置在反应孔42下方的温控装置(图中未显示)，温控装置用于控制反应孔42的温度为16℃或37℃。
本实施方式中，反应块40上设有3个反应孔42，反应孔42与200μL反应管相匹配。
反应孔42的孔壁为金属孔壁，温控装置的一个表面为金属表面，温控装置的金属表面与反应孔42的金属孔壁直接接触。
调控开关44用于设置反应孔42的温度。本实施方式中，调控开关44可以设置反应孔42的温度为16℃或37℃。
反应块40还包括温控探头(图中未显示)，温控探头用于测量反应孔42的温度，显示屏46用于显示温控探头测量得到的反应孔42的温度。
试剂管50通过通孔22设置在衬板20上。
本实施方式中，试剂管50为6个。
6个试剂管50分别用于承装慢病毒转移载体、慢病毒包装辅助载体、第一上游引物、第一下游引物、第二上游引物和第二下游引物。
本实施方式中，慢病毒转移载体为pRRLSIN.cPPT.MSCV-Dual.WPRE载体。
pRRLSIN.cPPT.MSCV-Dual.WPRE载体改造自pRRLSIN.cPPT.MSCV/GFP.WPRE载体，将pRRLSIN.cPPT.MSCV/GFP.WPRE载体中编码GFP的序列替换为双基因表达盒Dual(Dual-geneexpressioncassette)。
pRRLSIN.cPPT.MSCV/GFP.WPRE载体由购自addgene的商业化的质粒pRRLSIN.cPPT.PGK/GFP.WPRE改造而来，将质粒pRRLSIN.cPPT.PGK/GFP.WPRE改造而来的PGK启动子换成了MSCV启动子即可。
本实施方式中，慢病毒包装辅助载体包括pMDLg/pRRE载体、pRSV-Rev载体和pMD-G载体。pMDLg/pRRE载体、pRSV-Rev载体和pMD-G载体均为商业购买的慢病毒包装辅助载体。
其中，pRRLSIN.cPPT.MSCV-Dual.WPRE载体包含双基因表达盒子Dual。该双基因表达盒子Dual包括从5’到3’端依次排列的如下结构：第一多克隆位点-弗林蛋白酶切割位点-V5标签-Spacer-T2A-第二多克隆位点，其中，“-”代表连接。
第一多克隆位点包括从5’到3’端依次排列的如下结构：AscI酶切位点、BstBI酶切位点、BamHI酶切位点和AgeI酶切位点。
第二多克隆位点包括从5’到3’端依次排列的如下结构：XhoI酶切位点、SpeI酶切位点、XmaI酶切位点和SalI酶切位点。
在第一多克隆位点中插入的外源基因，需去除其终止密码子序列。
第一上游引物和第一下游引物用于第一基因的插入，第二上游引物和第二下游引物用于第二基因的插入。
这种慢病毒试剂盒的盒子可以承装慢病毒转化试剂，通过反应块40上设有反应孔42以及设在反应孔42下方的温控装置，可以控制反应孔42的温度为16℃或37℃，这种慢病毒试剂盒的盒子自带温控装置，使用起来更方便。
以上所述实施例仅表达了本实用新型的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本实用新型专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本实用新型构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本实用新型的保护范围。因此，本实用新型专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (8)

1.一种慢病毒试剂盒的盒子，其特征在于，包括：本体、衬板、隔热层、反应块以及用于承装反应液的试剂管；
所述本体包括底板和以及与所述底板相连的盖板，所述衬板、所述隔热层和所述反应块均设置在所述底板上，并且所述衬板和所述反应块被所述隔热层隔开；
所述衬板上设有与所述试剂管相匹配的通孔，所述试剂管通过所述通孔设置在所述衬板上；
所述反应块上设有反应孔，所述反应块包括设置在所述反应孔下方的温控装置，所述温控装置用于控制所述反应孔的温度为16℃或37℃。
2.根据权利要求1所述的慢病毒试剂盒的盒子，其特征在于，所述隔热层为海绵隔热层。
3.根据权利要求1所述的慢病毒试剂盒的盒子，其特征在于，所述试剂管为6个。
4.根据权利要求3所述的慢病毒试剂盒的盒子，其特征在于，6个所述试剂管分别用于承装慢病毒转移载体、慢病毒包装辅助载体、第一上游引物、第一下游引物、第二上游引物和第二下游引物；
所述第一上游引物和所述第一下游引物用于第一基因的插入，所述第二上游引物和所述第二下游引物用于第二基因的插入。
5.根据权利要求1所述的慢病毒试剂盒的盒子，其特征在于，所述反应块上设有3个所述反应孔。
6.根据权利要求1所述的慢病毒试剂盒的盒子，其特征在于，所述反应孔与200μL反应管相匹配。
7.根据权利要求1所述的慢病毒试剂盒的盒子，其特征在于，所述反应孔的孔壁为金属孔壁，所述温控装置的一个表面为金属表面，所述温控装置的金属表面与所述反应孔的金属孔壁直接接触。
8.根据权利要求7所述的慢病毒试剂盒的盒子，其特征在于，所述反应块还包括温控探头和显示屏，所述温控探头用于测量所述反应孔的温度，所述显示屏用于显示所述温控探头测量得到的所述反应孔的温度。
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