CN204495841U - 一种检测肺癌的sall4免疫组织化学染色试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本实用新型公开了一种检测肺癌的SALL4免疫组织化学染色试剂盒，其包括盒体和设置在所述盒体开口处的盒盖，所述盒体为长方体硬纸盒，所述盒体内设置有用于装载试剂瓶的泡沫垫和1份使用说明书，所述泡沫垫上设有12瓶试剂和2个对照标准品，2个对照标准品分别为阳性标准品和阴性标准品，12瓶试剂分别为一抗、二抗、DAB稀释液、DAB底物储存液、稳定的过氧化物酶、DAB增色液、抗原修复粉剂、通透剂浓缩液、过氧化物酶失活剂浓缩液、非特异性蛋白阻断剂原液、染色剂和PBS片剂。本试剂盒具有操作方便、易于携带、特异性高、灵敏度高、稳定性好等优点，可用于肺癌检测和癌症分型，且能够提高肺癌检出效率。
Description
技术领域
本实用新型涉及一种免疫组织化学染色试剂盒，尤其涉及一种能够检测肺癌的SALL4免疫组织化学染色试剂盒，属于医学和生物学检测领域。
背景技术
肺癌是当今全球最常见的恶性肿瘤之一，危害严重并呈上升趋势，是全球发病率和死亡率增加最快的疾病。肺癌的高病死率主要是由于无法做到早期诊断，因此，利用肺癌标志物进行肺癌早期诊断是及时规范治疗并改善其预后的最有效措施。目前用于肿瘤早期诊断的肿瘤标志物，大多由于缺乏灵敏度和特异性而不能在实际检测中广泛应用。而针对高发病率和死亡率的肺癌，寻找高敏感性和特异性的标志物，对肺癌的诊断和治疗肺癌具有重大意义，已成为肺癌防治的当务之急。
SALL4蛋白由人源基因SALL4编码翻译，其全称为Sal样蛋白4(Sal-like protein 4)，别名锌指蛋白797(Zinc finger protein 797)和锌指蛋白SALL4(Zinc finger protein SALL4)。SALL4属于Sal C2H2类锌指蛋白家族，包含有C2H2类锌指结构。SALL4蛋白有两个亚型，即SALL4A和SALL4B，其分子量大小分别为112.2KD和65.7KD。SALL4蛋白主要分布在细胞质和细胞核中。
目前，在临床上,免疫组织化学染色已经在肿瘤病理诊断中得到了广泛应用,涉及领域包括肿瘤组织起源的鉴别、未分化恶性肿瘤性质的判定、各种形态系统肿瘤鉴别、确定肿瘤原发部位等。其原理是用标记的抗体对细胞或组织内的相应的抗原进行定性、定位或定量检测，经过组织化学的呈色反 应而呈现醒目的阳性色彩，再用光学显微镜、荧光显微镜或电子显微镜观察。但迄今为止，市面上尚未有检测肺癌的SALL4免疫组织化学染色试剂盒。
发明内容
本实用新型的目的，是提供一种用于肺癌检测的免疫组织化学试剂盒。该试剂盒利用肺癌标志物SALL4进行肺癌早期诊断，具有特异性高、敏感性高、差异性表达等优点，且本试剂盒的结构设计合理、操作简单、省时省力。
本实用新型解决上述技术问题的技术方案如下：一种检测肺癌的SALL4免疫组织化学染色试剂盒，包括盒体和设置在所述盒体开口处的盒盖，所述盒体为长方体硬纸盒，所述盒体内设置有用于装载试剂瓶的泡沫垫和1份使用说明书，所述泡沫垫上设有12瓶试剂和2个对照标准品，2个对照标准品分别为阳性标准品和阴性标准品，12瓶试剂分别为一抗、二抗、DAB稀释液、DAB底物储存液、稳定的过氧化物酶、DAB增色液、抗原修复粉剂、通透剂浓缩液、过氧化物酶失活剂浓缩液、非特异性蛋白阻断剂原液、染色剂和PBS片剂。
所述阳性标准品为精原细胞瘤组织蜡块，所述阴性标准品为肺鳞癌组织蜡块。
所述一抗为小鼠来源的抗人SALL4单克隆抗体，所述二抗为生物素标记的山羊抗小鼠IgG，所述抗原修复粉剂为Tris/EDTA，所述通透剂浓缩液为Triton X-100，所述过氧化物酶失活剂浓缩液为30％v/v的过氧化氢，所述非特异性蛋白阻断剂原液为羊血清，所述染色剂为苏木精。
所述泡沫垫包括位于盒体内部靠上的第一泡沫垫和位于盒体内部靠下的第二泡沫垫，且所述第一泡沫垫和第二泡沫垫上下平行设置，所述第一泡沫垫上开有2个分别放置阳性标准品和阴性标准品的方形的凹槽和6个分别放置一抗、二抗、DAB稀释液、DAB底物储存液、稳定的过氧化物酶和DAB增色液试剂瓶的圆形的凹槽，在所述第一泡沫垫上还设有两个圆形的通孔， 所述两个圆形的通孔可以伸进手指，用于取出第一泡沫垫，所述第二泡沫垫上开有6个分别放置抗原修复粉剂、通透剂浓缩液、过氧化物酶失活剂浓缩液、非特异性蛋白阻断剂原液、染色剂和PBS片剂试剂瓶的圆形的凹槽。
所述阳性标准品为白色自封袋包裹的立方体蜡块，所述阴性标准品为白色自封袋包裹的立方体蜡块，所述一抗为白色帽的白色PE塑料管，所述二抗为棕褐色帽的棕褐色PE塑料管，所述DAB稀释液为黑色帽的白色PE塑料瓶，所述DAB底物储存液为黑色帽的白色PE塑料管，所述稳定的过氧化物酶为白色帽的白色PE塑料管，所述DAB增色液为黑色帽的黑色PE塑料管，所述抗原修复粉剂为白色帽的白色PE塑料瓶，所述通透剂浓缩液为黄色帽的白色PE塑料瓶，所述过氧化物酶失活剂浓缩液为蓝色帽的白色PE塑料瓶，所述非特异性蛋白阻断剂原液为红色帽的白色PE塑料瓶，所述染色剂为绿色帽的白色PE塑料瓶，所述PBS片剂为白色帽的白色PE塑料瓶。
所述阳性标准品为1块、体积2cm×2cm×2cm，所述阴性标准品为1块、体积2cm×2cm×2cm，所述一抗为1管、1ml，所述二抗为1管、1ml，所述DAB稀释液为1瓶、20ml，所述DAB底物储存液为1管、1ml，所述稳定的过氧化物酶为1管、1ml，所述DAB增色液为1管、1ml，所述抗原修复粉剂为1瓶、5g，所述通透剂浓缩液为1瓶、5ml，所述过氧化物酶失活剂浓缩液为1瓶、20ml，所述非特异性蛋白阻断剂原液为1瓶、20ml，所述染色剂为1瓶、20ml，所述PBS片剂为1瓶、20片。
在肺癌检测的免疫组化实验前，将所需的片剂、粉剂，浓缩液按说明书配成所需试剂，即可使用。一个试剂盒中的试剂足够150张切片的使用。
本实用新型的有益效果为：
1.本实用新型的试剂盒具有操作方便、易于携带、检测所用试剂全面等优点。
2.本实用新型的试剂盒可用于肺癌检测，具有特异性高、灵敏度高、 稳定性好等特点，可用于肺癌检测和癌症分型。
3.本实用新型的试剂盒可最大程度地将肺癌的检出时间提前，并提高了肺癌检出的准确性，解决了很多现有检测手段准确性差的问题，具有较高的临床应用价值和社会效益。
附图说明
图1为本实用新型打开盒盖后的结构示意图。
图中，1、盒体，2、盒盖，3a、第一泡沫垫，3b、第二泡沫垫，4、阳性标准品，5、阴性标准品，6、一抗，7、二抗，8、DAB稀释液，9、DAB底物储存液，10、稳定的过氧化物酶、11、DAB增色液，12、抗原修复粉剂，13、通透剂浓缩液，14、过氧化物酶失活剂浓缩液，15、非特异性蛋白阻断剂原液，16、染色剂，17、PBS片剂，18、通孔。
具体实施方式
以下结合附图对本实用新型的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本实用新型，并非用于限定本实用新型的范围。
如图1所示，一种检测肺癌的SALL4免疫组织化学染色试剂盒，包括盒体(1)和设置在所述盒体(1)开口处的盒盖(2)，所述盒体(1)为长方体硬纸盒，所述盒体(1)内设置有用于装载试剂瓶的泡沫垫和1份使用说明书，所述泡沫垫上设有12瓶试剂和2个对照标准品，2个对照标准品分别为阳性标准品(4)和阴性标准品(5)，12瓶试剂分别为一抗(6)、二抗(7)、DAB稀释液(8)、DAB底物储存液(9)、稳定的过氧化物酶(10)、DAB增色液(11)、抗原修复粉剂(12)、通透剂浓缩液(13)、过氧化物酶失活剂浓缩液(14)、非特异性蛋白阻断剂原液(15)、染色剂(16)和PBS片剂(17)。
所述阳性标准品(4)为精原细胞瘤组织蜡块，所述阴性标准品(5)为肺鳞癌组织蜡块。
所述一抗(6)为小鼠来源的抗人SALL4单克隆抗体，所述二抗(7)为生物素标记的山羊抗小鼠IgG，所述抗原修复粉剂(12)为Tris/EDTA，所述通透剂浓缩液(13)为Triton X-100，所述过氧化物酶失活剂浓缩液(14)为30％v/v的过氧化氢，所述非特异性蛋白阻断剂原液(15)为羊血清，所述染色剂(16)为苏木精。
所述泡沫垫包括位于盒体(1)内部靠上的第一泡沫垫(3a)和位于盒体(1)内部靠下的第二泡沫垫(3b)，且所述第一泡沫垫(3a)和第二泡沫垫(3b)上下平行设置，所述第一泡沫垫(3a)上开有2个分别放置阳性标准品(4)和阴性标准品(5)的方形的凹槽和6个分别放置一抗(6)、二抗(7)、DAB稀释液(8)、DAB底物储存液(9)、稳定的过氧化物酶(10)和DAB增色液(11)试剂瓶的圆形的凹槽，在所述第一泡沫垫(3a)上还设有两个圆形的通孔(18)，所述两个圆形的通孔(18)可以伸进手指，用于取出第一泡沫垫(3a)，所述第二泡沫垫(3b)上开有6个分别放置抗原修复粉剂(12)、通透剂浓缩液(13)、过氧化物酶失活剂浓缩液(14)、非特异性蛋白阻断剂原液(15)、染色剂(16)和PBS片剂(17)试剂瓶的圆形的凹槽。
所述阳性标准品(4)为白色自封袋包裹的立方体蜡块，所述阴性标准品(5)为白色自封袋包裹的立方体蜡块，所述一抗(6)为白色帽的白色PE塑料管，所述二抗(7)为棕褐色帽的棕褐色PE塑料管，所述DAB稀释液(8)为黑色帽的白色PE塑料瓶，所述DAB底物储存液(9)为黑色帽的白色PE塑料管，所述稳定的过氧化物酶(10)为白色帽的白色PE塑料管，所述DAB增色液(11)为黑色帽的黑色PE塑料管，所述抗原修复粉剂(12)为白色帽的白色PE塑料瓶，所述通透剂浓缩液(13)为黄色帽的白色PE塑料瓶，所述过氧化物酶失活剂浓缩液(14)为蓝色帽的白色PE塑料瓶，所述非特异性蛋白阻断剂原液(15)为红色帽的白色PE塑料瓶，所述染色剂(16) 为绿色帽的白色PE塑料瓶，所述PBS片剂(17)为白色帽的白色PE塑料瓶。
所述阳性标准品(4)为1块、体积2cm×2cm×2cm，所述阴性标准品(5)为1块、体积2cm×2cm×2cm，所述一抗(6)为1管、1ml，所述二抗(7)为1管、1ml，所述DAB稀释液(8)为1瓶、20ml，所述DAB底物储存液(9)为1管、1ml，所述稳定的过氧化物酶(10)为1管、1ml，所述DAB增色液(11)为1管、1ml，所述抗原修复粉剂(12)为1瓶、5g，所述通透剂浓缩液(13)为1瓶、5ml，所述过氧化物酶失活剂浓缩液(14)为1瓶、20ml，所述非特异性蛋白阻断剂原液(15)为1瓶、20ml，所述染色剂(16)为1瓶、20ml，所述PBS片剂(17)为1瓶、20片。
采用本实用新型的试剂盒检测肺癌的操作步骤为：
(1)工作液配制：片剂、粉剂溶解，浓缩液稀释如下：
a.PBS片剂(17)溶解：将1片PBS片剂溶于100ml超纯水中，得到1×PBS溶液,将1片PBS片剂溶于100ml超纯水中，加50μlTween-20，得到1×PBST溶液；
b.抗原修复粉剂(12)溶解：取1.58g Tris/EDTA溶于1000ml超纯水中，加0.5ml Tween-20，调pH至8.0，得到抗原修复剂工作液；
c.通透剂浓缩液(13)稀释：取0.3ml Triton X-100稀释于99.7ml步骤(1)a所述1×PBS溶液中，得到0.3％v/v的Triton X-100通透剂工作液；
d.过氧化物酶失活剂浓缩液(14)稀释：取30％v/v的过氧化氢，加超纯水稀释10倍，得到3％v/v的过氧化物酶失活剂工作液；
e.非特异性蛋白阻断剂原液(15)稀释：取0.5ml羊血清，加0.3ml Triton X-100稀释于99.2ml步骤(1)a所述1×PBS溶液中，得到0.5％v/v的非特异性蛋白阻断剂工作液；
(2)石蜡切片脱蜡：将切片依次放在新鲜的二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中， 各浸泡5分钟，得到脱蜡后切片；
(3)复水：将步骤(2)所得脱蜡后的切片，依次在无水乙醇、90％v/v的乙醇、80％v/v的乙醇、70％v/v的乙醇中各浸泡2分钟,然后用单蒸水冲洗2分钟，得到复水后的切片；
(4)通透：将步骤(3)所得复水后的切片，加入步骤(1)c所述通透剂工作液，对组织进行通透，室温放置3分钟，移去通透剂工作液，加步骤(1)a所述1×PBS溶液，冲洗5分钟，得到通透后的切片；
(5)内源性过氧化物酶失活：将步骤(4)所得通透后的切片，浸泡在步骤(1)d所述过氧化物酶失活剂工作液中10分钟，进行内源性过氧化物酶活性封闭，再用步骤(1)a所述1×PBS溶液冲洗5分钟，得到内源性过氧化酶失活切片；
(6)抗原修复：将步骤(1)b所述抗原修复剂工作液置于耐高温容器中，再将步骤(5)所得内源性过氧化酶失活切片置于其中，沸水煮3分钟，然后放置室温冷却，用步骤(1)a所述1×PBS溶液冲洗5分钟，得到抗原修复切片；
(7)封闭：将步骤(6)所得抗原修复切片，滴加步骤(1)e所述非特异性蛋白阻断剂工作液，常温湿盒封闭1小时，得到非特异性抗体封闭切片；
(8)一抗孵育：将步骤(7)所得非特异性抗体封闭切片，除阴性对照标准品外，其余切片均甩去步骤(1)e所述非特异性蛋白阻断剂工作液，滴加稀释于步骤(1)e所述非特异性蛋白阻断剂工作液中的10μg/ml的一抗，室温湿盒孵育2小时或者4℃孵育过夜，然后用步骤(1)a所述1×PBS溶液和1×PBST溶液冲洗，各冲洗3次，每次5分钟，得到一抗后的切片；
(9)二抗孵育：将步骤(8)所得一抗后的切片，甩去多余液体，滴加200倍稀释于步骤(1)e所述非特异性蛋白阻断剂工作液的二抗，室温湿盒避光孵育1小时，然后甩去二抗，然后分别用步骤(1)a所述1×PBS溶液 和1×PBST溶液冲洗，各冲洗3次，每次5分钟，得到二抗后的切片；
(10)显色：
a.配置DAB显色液(11)：按照DAB稀释液:DAB底物储存液:稳定的过氧化物酶:DAB增色液＝17:1:1:1的比例,得到新鲜的DAB显色液；
b.滴加步骤(10)a所得新鲜的DAB显色液，至刚好浸没步骤(9)所得二抗后的切片，室温孵育5分钟，甩去显色液，用步骤(1)a所述1×PBS溶液冲洗3遍，每遍5分钟，得到染色后的切片；
(11)复染：将步骤(10)所得染色后的切片，甩去多余液体，滴加染色剂(16)，复染3分钟，用步骤(1)a所述1×PBS溶液冲洗5分钟，然后在自来水中浸泡5分钟，得到复染切片；
(12)脱水：将步骤(11)所得复染切片依次在70％v/v的乙醇、80％v/v的乙醇、90％v/v的乙醇和无水乙醇中各浸泡2分钟，然后在新鲜的二甲苯中浸泡两次，每次5分钟，得到脱水后的切片；
(13)封片：将步骤(12)所得脱水后的切片，用中性树胶封片，在显微镜下观察染色结果。
以上所述仅为本实用新型的较佳实施例，并不用以限制本实用新型，凡在实用新型的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种检测肺癌的SALL4免疫组织化学染色试剂盒，其特征在于，包括盒体(1)和设置在所述盒体(1)开口处的盒盖(2)，所述盒体(1)为长方体硬纸盒，所述盒体(1)内设置有用于装载试剂瓶的泡沫垫和1份使用说明书，所述泡沫垫上设有12瓶试剂和2个对照标准品，2个对照标准品分别为阳性标准品(4)和阴性标准品(5)，12瓶试剂分别为一抗(6)、二抗(7)、DAB稀释液(8)、DAB底物储存液(9)、稳定的过氧化物酶(10)、DAB增色液(11)、抗原修复粉剂(12)、通透剂浓缩液(13)、过氧化物酶失活剂浓缩液(14)、非特异性蛋白阻断剂原液(15)、染色剂(16)和PBS片剂(17)。
2.根据权利要求1所述一种检测肺癌的SALL4免疫组织化学染色试剂盒，其特征在于，所述阳性标准品(4)为精原细胞瘤组织蜡块，所述阴性标准品(5)为肺鳞癌组织蜡块。
3.根据权利要求1所述一种检测肺癌的SALL4免疫组织化学染色试剂盒，其特征在于，所述一抗(6)为小鼠来源的抗人SALL4单克隆抗体，所述二抗(7)为生物素标记的山羊抗小鼠IgG，所述抗原修复粉剂(12)为Tris/EDTA，所述通透剂浓缩液(13)为Triton X-100，所述过氧化物酶失活剂浓缩液(14)为30％v/v的过氧化氢，所述非特异性蛋白阻断剂原液(15)为羊血清，所述染色剂(16)为苏木精。
4.根据权利要求1所述一种检测肺癌的SALL4免疫组织化学染色试剂盒，其特征在于，所述泡沫垫包括位于盒体(1)内部靠上的第一泡沫垫(3a)和位于盒体(1)内部靠下的第二泡沫垫(3b)，且所述第一泡沫垫(3a)和第二泡沫垫(3b)上下平行设置，所述第一泡沫垫(3a)上开有2个分别放置阳性标准品(4)和阴性标准品(5)的方形的凹槽和6个分别放置一抗 (6)、二抗(7)、DAB稀释液(8)、DAB底物储存液(9)、稳定的过氧化物酶(10)和DAB增色液(11)试剂瓶的圆形的凹槽，在所述第一泡沫垫(3a)上还设有两个圆形的通孔(18)，所述两个圆形的通孔(18)可以伸进手指，用于取出第一泡沫垫(3a)，所述第二泡沫垫(3b)上开有6个分别放置抗原修复粉剂(12)、通透剂浓缩液(13)、过氧化物酶失活剂浓缩液(14)、非特异性蛋白阻断剂原液(15)、染色剂(16)和PBS片剂(17)试剂瓶的圆形的凹槽。
5.根据权利要求1-4任一项所述一种检测肺癌的SALL4免疫组织化学染色试剂盒，其特征在于，所述阳性标准品(4)为白色自封袋包裹的立方体蜡块，所述阴性标准品(5)为白色自封袋包裹的立方体蜡块，所述一抗(6)为白色帽的白色PE塑料管，所述二抗(7)为棕褐色帽的棕褐色PE塑料管，所述DAB稀释液(8)为黑色帽的白色PE塑料瓶，所述DAB底物储存液(9)为黑色帽的白色PE塑料管，所述稳定的过氧化物酶(10)为白色帽的白色PE塑料管，所述DAB增色液(11)为黑色帽的黑色PE塑料管，所述抗原修复粉剂(12)为白色帽的白色PE塑料瓶，所述通透剂浓缩液(13)为黄色帽的白色PE塑料瓶，所述过氧化物酶失活剂浓缩液(14)为蓝色帽的白色PE塑料瓶，所述非特异性蛋白阻断剂原液(15)为红色帽的白色PE塑料瓶，所述染色剂(16)为绿色帽的白色PE塑料瓶，所述PBS片剂(17)为白色帽的白色PE塑料瓶。
6.根据权利要求1-4任一项所述一种检测肺癌的SALL4免疫组织化学染色试剂盒，其特征在于，所述阳性标准品(4)为1块、体积2cm×2cm×2cm，所述阴性标准品(5)为1块、体积2cm×2cm×2cm，所述一抗(6)为1管、1ml，所述二抗(7)为1管、1ml，所述DAB稀释液(8)为1瓶、20ml，所述DAB底物储存液(9)为1管、1ml，所述稳定的过氧化物酶(10)为1管、1ml，所述DAB增色液(11)为1管、1ml，所述抗原修复粉剂(12)为1瓶、 5g，所述通透剂浓缩液(13)为1瓶、5ml，所述过氧化物酶失活剂浓缩液(14)为1瓶、20ml，所述非特异性蛋白阻断剂原液(15)为1瓶、20ml，所述染色剂(16)为1瓶、20ml，所述PBS片剂(17)为1瓶、20片。
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| GR01 | Patent grant | ||
| C53 | Correction of patent of invention or patent application | ||
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