CN203866319U - 一种单核细胞增生性李斯特菌免疫pcr检测试剂盒 - Google Patents

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刘箐
宋春美
吴嫚
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Abstract

本实用新型涉及一种单核细胞增生性李斯特菌的免疫PCR基因检测试剂盒，它包括盒体(1)、衬垫(2)，所述衬垫(2)上设有数个容器孔，所述容器孔内设有10×PCR Buffer(3)、dNTP(4)、TaqDNA聚合酶(5)、ddH2O双蒸水(6)、正向引物(7)、反向引物(8)、阳性对照溶液(9)、阴性对照溶液(10)和自封袋(11)，所述自封袋(11)内设有包被了抗单核细胞增生性李斯特菌单克隆抗体的免疫PCR管。本实用新型的检测试剂盒结合了免疫和分子技术原理，能快速、准确、灵敏地从食品中直接检测到病原菌。

Description

一种单核细胞增生性李斯特菌免疫PCR检测试剂盒
技术领域
本实用新型属于生物技术和免疫学领域，具体涉及一种检测单核细胞增生性李斯特菌的免疫PCR检测试剂盒。
背景技术
单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)是一种短小的革兰氏阳性无芽胞兼性厌氧杆菌，是李斯特菌属中致病力最强的细菌，也是唯一对人致病的、典型的胞内寄生菌，可以导致严重的人畜共患传染病，如脑膜炎、败血症、流产和单核细胞增多等症状。1988年，世界卫生组织(World Health Organization，WHO)发表“食源性李斯特菌病劝告书”，指导全世界各国如何预防李斯特菌污染和中毒。自此，LM成为新的重要的食源性疾病病原菌，WHO将其与E.coli O157、沙门氏菌以及金黄色葡萄球菌并列为20世纪90年代四大食源性致病菌。该菌主要污染牛奶及乳制品、乳酪制品、肉制品香肠、加工禽类、生肉、鱼、虾、烟熏鱼、生蔬菜。目前单核细胞增生李斯特菌的检测主要依赖于国标所规定的生化鉴定，其缺点是操作繁琐、检测周期较长，无法适应大量的样品筛查。
免疫学检测是近年来出现的最快速、准确、稳定的快速检测手段，但是检测产品全部依赖进口，我国目前尚无拥有完全自主知识产权，且可运用于检测实践的快速检测产品，该专利以单核细胞增生李斯特菌为检测靶标，所要求保护的技术涉及单核细胞增生性李斯特菌快速检测产品。
实用新型内容
本实用新型的目的在于提供一种快速，准确地可快捷检测单核细胞增生性李斯特菌的检测试剂盒。本实用新型将致病菌免疫富集方法和基因水平检测方法有效结合，先用特异性抗体将样品中的病原菌特异性免疫富集，然后PCR扩增，这不仅很大程度提高了检测灵敏度，而且也提高了检测的特异性，大大提高了病原菌检测的效率。
具体而言，本实用新型提供了一种单核细胞增生性李斯特菌免疫PCR检测试剂盒，它包括盒体(1)，所述盒体(1)内设有衬垫(2)，所述衬垫上设有数个容器孔，所述容器孔内分别设有10×PCR Buffer(3)、dNTP(4)、TaqDNA聚合酶(5)、ddH2O双蒸水(6)、正向引物(7)、反向引物(8)、阳性对照溶液(9)、阴性对照溶液(10)和自封袋(11)，所述自封袋(11)内设有包被了抗单核细胞增生性李斯特菌单克隆抗体的免疫PCR管。
在一优选例中，所述的抗单核细胞增生性李斯特菌单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系6D4H7C8B6，CGMCC No.8002或1B4E7A6C9，CGMCC No.8765产生。
本实用新型的有益效果如下：
本实用新型的单核细胞增生性李斯特菌免疫PCR检测试剂盒集病原菌浓缩、特异性抗体识别以及PCR扩增为一体，具有检测结果准确性高、特异性强、灵敏度高以及检测快速、使用方便等优点，弥补了现有食源性致病菌检测技术费时耗力、灵敏度低的不足。
本实用新型的单核细胞增生性李斯特菌免疫PCR检测试剂盒适用于菌株快速鉴定、食品中毒源检测等诸多领域，尤其适用于样品中微量病原体的快速检测。可供质监部门、进出口检疫部门等用于检测食样中的单核细胞增生性李斯特菌。
本实用新型各个方面的细节将在随后的章节中得以详尽描述。通过下文以及权利要求的描述，本实用新型的特点、目的和优势将更为明显。
附图说明
图1是本实用新型的检测试剂盒的结构示意图；
图2是本实用新型的检测试剂盒的使用流程和原理图。
附图标记释义：1.盒体；2.衬垫；3.10×PCR Buffer；4.dNTP；5.TaqDNA聚合酶；6.ddH2O双蒸水；7.正向引物；8.反向引物；9.阳性对照溶液；10.阴性对照溶液；11.自封袋。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本实用新型。应理解，这些实施例仅用于说明本实用新型而不用于限制本实用新型的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室指南(New York：Cold Spring Harbor LaboratoryPress，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本实用新型中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
实施例1.本实用新型的检测试剂盒的制备
(一)本实用新型的用于检测单核细胞增生性李斯特菌的免疫PCR管的具体包被方法如下：
1.用包被缓冲液稀释抗单核细胞增生性李斯特菌单克隆抗体6D4H7C8B6，CGMCC No.8002或1B4E7A6C9，CGMCC No.8765至1:300倍，抗体浓度为10μg/mL，将稀释好的单克隆抗体每管50uL加入免疫PCR管中，4℃过夜包被；
2.包被缓冲液(Carbonate Coating buffer(1×))的配方为：无水碳酸钠Na2CO31.59g，碳酸氢钠NaHCO32.93g，叠氮化钠NaN30.2g，溶于1000ml蒸馏水中，调pH至9.6，4℃保存。
(二)制备本实用新型的单核细胞增生性李斯特菌免疫PCR检测试剂盒(如图1)，它包括：
盒体(1)、衬垫(2)，衬垫(2)上设有数个容器孔，容器孔内分别设有EP管装载的10×PCR Buffer(3)一管、dNTP(4)一管、TaqDNA聚合酶(5)一管、ddH2O双蒸水(6)一管、正向引物(7)一管、反向引物(8)一管，试剂瓶装载的阳性对照溶液(9)一瓶、阴性对照溶液(10)一瓶和铝箔自封袋(11)一只，铝箔自封袋(11)内设有包被了抗单核细胞增生性李斯特菌单克隆抗体的免疫PCR管。铝箔自封袋(11)设于衬垫(2)上，衬垫(2)设于盒体(1)内。
其中，10×PCR Buffer装量为300uL；dNTP的浓度为2.5mmol/L，装量为150uL；TaqDNA聚合酶浓度为5U/L，装量为60uL；引物的浓度为10umol/L，装量为150uL。
阳性对照为灭活的单核细胞增生性李斯特菌菌液，阴性对照为灭菌的李氏增菌肉汤。
本实用新型的检测试剂盒的使用流程和原理图参见图2。
在本实用新型提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本实用新型的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本实用新型作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (2)

1.一种单核细胞增生性李斯特菌免疫PCR检测试剂盒，包括盒体(1)，所述盒体(1)内设有衬垫(2)，所述衬垫(2)上设有数个容器孔，其特征在于，所述容器孔内分别设有10×PCR Buffer(3)、dNTP(4)、TaqDNA聚合酶(5)、ddH2O双蒸水(6)、正向引物(7)、反向引物(8)、阳性对照溶液(9)、阴性对照溶液(10)和自封袋(11)，所述自封袋(11)内设有包被了抗单核细胞增生性李斯特菌单克隆抗体的免疫PCR管。
2.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述的抗单核细胞增生性李斯特菌单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系6D4H7C8B6，CGMCC No.8002或1B4E7A6C9，CGMCC No.8765产生。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108531625A (zh) * 2018-04-12 2018-09-14 河北科技师范学院 一种叶类蔬菜中单核细胞增生李斯特氏菌的快速检测方法

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