CN201284339Y - 一种生物材料玻璃化冷冻载体 - Google Patents

一种生物材料玻璃化冷冻载体 Download PDF

Info

Publication number
CN201284339Y
CN201284339Y CN 200820123203 CN200820123203U CN201284339Y CN 201284339 Y CN201284339 Y CN 201284339Y CN 200820123203 CN200820123203 CN 200820123203 CN 200820123203 U CN200820123203 U CN 200820123203U CN 201284339 Y CN201284339 Y CN 201284339Y
Authority
CN
China
Prior art keywords
oatmeal
freezing
straw
syringe needle
freezing carrier
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN 200820123203
Other languages
English (en)
Inventor
乔杰
严杰
闫丽盈
廉颖
刘平
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Peking University Third Hospital
Original Assignee
Peking University Third Hospital
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Peking University Third Hospital filed Critical Peking University Third Hospital
Priority to CN 200820123203 priority Critical patent/CN201284339Y/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN201284339Y publication Critical patent/CN201284339Y/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M45/00—Means for pre-treatment of biological substances
    • C12M45/22—Means for packing or storing viable microorganisms

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本实用新型公开了一种生物材料玻璃化冷冻载体。本实用新型提供的生物材料玻璃化冷冻载体包括注射针头(1)和麦片(2)；所述注射针头(1)由针头(1－1)和针头座(1－2)组成；所述麦片(2)为开放型拉细麦管，其一端(2－1)套设于所述针头(1－1)的内腔中；另一游离端(2－2)的麦管壁部分缺失，余留麦管壁的横截面为圆周的1/5－1/3。本实用新型将处理后的开放型拉细麦管与注射针头组装，用于生物材料的玻璃化冷冻，具有操作简便，成本低等优点，适用于各医院生殖中心实验室及各研究单位使用，对于推动医学领域玻璃化冷冻技术的发展以及卵、胚胎、卵巢组织等的冷冻保存研究有着重要的意义。

Description

一种生物材料玻璃化冷冻载体
技术领域
本实用新型属于生物医学领域，涉及一种生物材料玻璃化冷冻载体。
背景技术
目前，低温冷冻技术在辅助生殖领域应用广泛。玻璃化冷冻技术是利用体积微小的冷冻承载工具，在极快速降温(>2000℃/min)过程中，使高浓度的冷冻保护液由液态转变为黏度很高的类似玻璃样的固态，避免细胞内冰晶的形成，达到冷冻保护的作用，从而显著提高细胞/组织冷冻后的存活力和发育能力。玻璃化冷冻技术具有简单、高效、省时、安全、费用少等优点。近年来，玻璃化冷冻技术在人卵与胚胎的冷冻保存中的应用逐渐增多，利用该技术对人未成熟卵母细胞、成熟卵母细胞、胚胎及囊胚进行冷冻均已有成功报道。
冷冻载体是冷冻保存时承载细胞/组织的物体，玻璃化冷冻成功的关键因素之一就是选择适当的冷冻载体。目前使用的玻璃化冷冻载体主要包括：开放式拉细麦管、封闭式拉细麦管、电子显微镜铜网、Cryoloop、Cryotop和Cryoleaf等。冷冻载体的功能在于：承载标本的同时尽量减少负载的冷冻液，达到以下两个目的：冷冻过程中使标本直接接触液氮，快速降温达到玻璃化状态；解冻过程中使冻存标本充分接触解冻液，及时脱离高浓度冷冻保护剂环境。
目前已有的玻璃化冷冻载体在制作、使用中存在着各种问题，影响了冻存效率和玻璃化冷冻技术的开展。开放式拉细麦管或封闭式拉细麦管存在如下问题：制作过程中加热装置(酒精灯或热板)的温度不易控制，温度稍低不能将麦管拉长，温度稍高麦管易断；存储过程中易受到外力破坏而断损，致冻存标本丢失。电子显微镜铜网、Cryoloop、Cryotop在冷冻过程及储存过程容易丢失标本。所以上述冷冻载体在临床应用推广中可行性差，不被广泛接受。Cryoleaf是目前临床上应用最广泛的冷冻载体，但费用昂贵(每支约需200元人民币)，在科学研究中难以广泛采用。
实用新型内容
本实用新型的目的是提供一种生物材料玻璃化冷冻载体。
本实用新型提供的生物材料玻璃化冷冻载体，其特征在于：它包括注射针头1和麦片2；
所述注射针头1由针头1-1和针头座1-2组成；
所述麦片2为开放型拉细麦管，其一端2-1套设于所述针头1-1的内腔中；另一游离端2-2的麦管壁部分缺失，余留麦管壁的横截面为圆周的1/5-1/3。
所述针头1-1的内腔与所述开放型拉细麦管的口径最好匹配。
所述冷冻载体还可包括防护套3，所述针头1-1和所述麦片2套设于防护套3内。
为了组装方便，所述麦片2套设于所述针头中的一端2-1的端缘为尖端；所述针头1-1的端缘为平端。
所述麦片2游离端2-2余留麦管壁的横截面具体可为圆周的1/3。
所述麦片2的厚度最好控制在80-100um之间，外径、内径及长度可根据所选用的注射针头而定。
所述麦片2的外径具体可为0.8-1.2mm，优选1mm；所述麦片2的内径具体可为0.6-1.04mm，优选0.8mm；所述麦片2的长度具体可为2.5-3.5cm，优选3cm。
所述注射针头可为任何市售注射针头，所述麦片可由任何市售麦管制作而成。
所述针头1-1可采用金属材质，所述针头座1-2可采用塑料材质，所述麦片2的可采用聚乙烯材质，所述防护套3具体可为注射器针头套。
所述生物材料玻璃化冷冻载体可按照如下步骤制备：
本发明提供的制备方法，包括如下步骤：是将开放型拉细麦管的一端2-1套设入注射针头1的针头1-1的内腔中；另一端2-2沿纵向切去部分麦管壁，余留麦管壁的横截面为圆周的1/5-1/3；得到生物材料玻璃化冷冻载体。
所述开放型拉细麦管可将麦管在沸水浴中拉长得到。
实际操作时，可将保护套3套设于所述针头1-1和麦片2外，对其进行保护。
为了组装方便，制备本实用新型的冷冻载体时，可先将麦片2的一端2-1的端缘加工为尖端，将针头1-1的端缘加工为平端。
得到的生物材料玻璃化冷冻载体可以消毒后售出，也可直接售出，使用前进行消毒即可。常规消毒方法均可采用，如环氧乙烷熏蒸法。
本实用新型提供的生物材料玻璃化冷冻载体，具有如下优点：
1)材料主要是一次性注射针头和麦管，来源丰富、成本低(注射器针头每支1.0元，麦管每支0.4元)。
2)冷冻载体上有多处用于标记的部位，使用很方便。
3)冷冻载体占用储存容器空间小，易于储存、运输。
4)具有防护套，可以防止外界的机械碰触而导致的冻存标本丢失，冻存标本放心、可靠。
本实用新型可以解决目前存在的自制冷冻载体难度大，而商品化载体价格昂贵的问题，适用于各医院生殖中心实验室及各研究单位使用，对于推动玻璃化冷冻技术的发展以及卵、胚胎、卵巢组织等的冷冻保存研究有着重要的意义。
以下的实施例便于更好地理解本实用新型，但并不限定本实用新型。
附图说明
图1为生物材料玻璃化冷冻载体的结构示意图。
图2为麦片的结构示意图。
图3为图2的俯视图。
图4A、图4B、图4C为应用生物材料玻璃化冷冻载体的操作示意图。
具体实施方式
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
实施例1、生物材料玻璃化冷冻载体的制备
一、材料的准备
市售注射针头(18号)；市售注射器针头套(18号)；
麦管(0.25ml)：法国I.M.V公司。
二、生物材料玻璃化冷冻载体的制备
用钳子将注射针头的针头前二分之一处剪断成平口，得到平口注射针头；
用电炉将双蒸水煮沸；
用血管钳将麦管两端夹住；
手持血管钳，将麦管浸入沸水浴中，向两端平拉至原管长的4倍，得到开放型拉细麦管(外径1.0mm，内径0.8mm)；
将开放型拉细麦管抬离液面，维持原先的拉力数秒，至冷却；
用剪刀将开放型拉细麦管剪成3厘米的管段；
将开放型拉细麦管(3厘米)一端剪成0.5厘米斜口末端；
将管段的斜口末端插入平口注射针头，进深1.3厘米；
用手术刀片从开放型拉细麦管(3厘米)中点开始，沿纵向切去长1.5cm、截面2/3圆周的管壁，剩余管壁修整为长1.3cm、宽0.1cm的薄片；
得到生物材料玻璃化冷冻载体。
如图1所示，生物材料玻璃化冷冻载体由注射针头1、麦片2和防护套3组成；其中，注射针头1由端缘为平端的针头1-1和针头座1-2组成；麦片2的一端2-1的端缘为尖端、套设于针头1-1的内腔中，另一端2-2麦管壁部分缺失，呈薄片状；针头1-1和麦片2套设于防护套3内。由图2和图3可见，麦片2的一端2-1为斜口末端，另一端2-2麦管壁部分缺失，呈薄片状。
针头1-1的作用为把持、固定麦片；针头1-1的孔可作为减压孔，不仅可以在将载体浸入液氮时做为液氮自行注入管内的进口，在从液氮中取出时，还可以释放管内因液氮迅速气化而产生的高压。针头座1-2用于操作时把持和文字标记。麦片2的2-1端与注射针头1的针头1-1连接，起固定作用。麦片2的2-2端：承载要冻存的标本，浸入液氮中使标本与液氮直接接触而急速降温达到玻璃化状态。防护套3保护麦片2及冻存标本免遭外界机械性碰撞，避免存放时标本丢失，还可用于文字标记。所以组装后的注射针头1和麦片2的长度等于或略小于防护套3的长度。
实施例2、生物材料玻璃化冷冻载体的应用
将实施例1制备的冷冻载体用环氧乙烷熏蒸法消毒。用消毒后的冷冻载体玻璃化冷冻53枚小鼠成熟卵母细胞，冷冻1天后，解冻卵母细胞，检测其存活情况。复苏卵母细胞存活标准为：卵母细胞折光性好，透明，没有明显的胞浆皱缩，透明带与细胞膜完整。
平衡液(EM)：10％乙二醇+10％二甲基亚砜+10％胎牛血清+DPBS；
玻璃化冷冻液(VM)：20％乙二醇+20％二甲基亚砜+10％胎牛血清+DPBS；
解冻液(T1溶液)：0.1M蔗糖+10％胎牛血清+DPBS；
解冻液(T2溶液)：0.5M蔗糖+10％胎牛血清+DPBS；
解冻液(T3溶液)：0.25M蔗糖+10％胎牛血清+DPBS；
解冻液(T4溶液)：10％胎牛血清+DPBS；
M16培养基：Sigma公司。
一、玻璃化冷冻
室温下将小鼠成熟卵母细胞在平衡液(EM)中停留5分钟后移入玻璃化冷冻液
(VM)中40秒，移到用冷冻载体的麦片上(见图4A)，立即投入液氮(见图4B)，在液氮中盖好注射器针头帽(见图4C)。
二、快速解冻
将冷冻1天的小鼠成熟卵母细胞进行解冻，并检测解冻后细胞的存活情况，具体操作如下：
从液氮中迅速取出冷冻载体，在室温下把负载小鼠成熟卵母细胞的冷冻载体的麦片(见图4A)迅速放入T1溶液，在体式显微镜下找到卵母细胞，依次移入T2溶液、T3溶液和T4溶液中，各停留3min，最后移入M16培养基于培养箱中(37℃，5％CO2)孵育1小时后观察卵母细胞存活情况。
结果表明，冻存53枚卵母细胞，解冻复苏后获得53枚卵母细胞，存活47枚，无丢失，存活率88.7％。

Claims (10)

1、一种生物材料玻璃化冷冻载体，其特征在于：它包括注射针头(1)和麦片(2)；
所述注射针头(1)由针头(1-1)和针头座(1-2)组成；
所述麦片(2)为开放型拉细麦管，其一端(2-1)套设于所述针头(1-1)的内腔中；另一游离端(2-2)的麦管壁部分缺失，余留麦管壁的横截面为圆周的1/5-1/3。
2、如权利要求1所述的冷冻载体，其特征在于：所述冷冻载体还包括防护套(3)，所述针头(1-1)和所述麦片(2)套设于防护套(3)内。
3、如权利要求2所述的冷冻载体，其特征在于：所述防护套(3)为注射器针头套。
4、如权利要求1至3中任一所述的冷冻载体，其特征在于：所述麦片(2)套设于所述针头中的一端(2-1)的端缘为尖端；所述针头(1-1)的端缘为平端。
5、如权利要求1至3中任一所述的冷冻载体，其特征在于：所述麦片(2)游离端(2-2)余留麦管壁的横截面为圆周的1/3。
6、如权利要求1至3中任一所述的冷冻载体，其特征在于：所述麦片(2)的外径为0.8-1.2mm、内径为0.6-1.04mm，所述麦片(2)的长度为2.5-3.5cm。
7、如权利要求6所述的冷冻载体，其特征在于：所述麦片(2)的外径为1mm、内径为0.8mm，所述麦片(2)的长度为3cm。
8、如权利要求4所述的冷冻载体，其特征在于：所述麦片(2)游离端(2-2)余留麦管壁的横截面为圆周的1/3。
9、如权利要求8所述的冷冻载体，其特征在于：所述麦片(2)的外径为0.8-1.2mm、内径为0.6-1.04mm，所述麦片(2)的长度为2.5-3.5cm。
10、如权利要求9所述的冷冻载体，其特征在于：所述麦片(2)的外径为1mm、内径为0.8mm，所述麦片(2)的长度为3cm。
CN 200820123203 2008-10-21 2008-10-21 一种生物材料玻璃化冷冻载体 Expired - Fee Related CN201284339Y (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 200820123203 CN201284339Y (zh) 2008-10-21 2008-10-21 一种生物材料玻璃化冷冻载体

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 200820123203 CN201284339Y (zh) 2008-10-21 2008-10-21 一种生物材料玻璃化冷冻载体

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN201284339Y true CN201284339Y (zh) 2009-08-05

Family

ID=40949328

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN 200820123203 Expired - Fee Related CN201284339Y (zh) 2008-10-21 2008-10-21 一种生物材料玻璃化冷冻载体

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN201284339Y (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101386814B (zh) * 2008-10-21 2012-04-18 北京大学第三医院 一种生物材料玻璃化冷冻载体及其制备方法
CN105230605A (zh) * 2015-09-21 2016-01-13 南宁市第二人民医院 玻璃化冷冻载体

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101386814B (zh) * 2008-10-21 2012-04-18 北京大学第三医院 一种生物材料玻璃化冷冻载体及其制备方法
CN105230605A (zh) * 2015-09-21 2016-01-13 南宁市第二人民医院 玻璃化冷冻载体
CN105230605B (zh) * 2015-09-21 2017-11-10 南宁市第二人民医院 玻璃化冷冻载体

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101386814B (zh) 一种生物材料玻璃化冷冻载体及其制备方法
Arav et al. New trends in gamete's cryopreservation
Shaw et al. Terminology associated with vitrification and other cryopreservation procedures for oocytes and embryos
Bagchi et al. Cryopreservation and vitrification: recent advances in fertility preservation technologies
Pegg The role of vitrification techniques of cryopreservation in reproductive medicine
JP5278978B2 (ja) 動物の胚または卵子のガラス化保存用細管
Amorim et al. Vitrification of human ovarian tissue: effect of different solutions and procedures
CN101200706B (zh) 生物样品玻璃化冷冻和保存工具
EP2038402B1 (en) Systems and methods for cryopreservation of cells
JP4876922B2 (ja) 生物学的試料保存用デバイス
CN202095441U (zh) 一种生物材料玻璃化冷冻载体
CN101314757B (zh) 针刺式组织片玻璃化冷冻载体与冷冻卵巢组织的方法
EP2353383A2 (en) Closed ultra-rapid cell vitrification device and sealing procedure of the device
JP2012219017A (ja) 生体試料を凍結保存するための凍結保存用具
CN201284339Y (zh) 一种生物材料玻璃化冷冻载体
CN102204527A (zh) 生物材料玻璃化冷冻保存承载工具
CN202514485U (zh) 一种生物材料玻璃化冷冻保存承载工具
JP2007261973A (ja) 胚のガラス化保存用具及びそれを用いた胚のガラス化保存方法
CN201990684U (zh) 生物材料玻璃化冷冻保存承载工具
CN205040512U (zh) 玻璃化冷冻载体
CN105230605B (zh) 玻璃化冷冻载体
JP2006149231A (ja) 生物学的標本の凍結保存用細管、生物学的標本の凍結保存方法および凍結保存後の融解方法
CN203985779U (zh) 细胞组织玻璃化冷冻载体套件
US20220287297A1 (en) Jig for cell or tissue cryopreservation
JP2016059290A (ja) 動物細胞のガラス化凍結保存方法

Legal Events

Date Code Title Description
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C17 Cessation of patent right
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20090805

Termination date: 20111021