CN1957686B - 一种利用6-二甲氨基嘌呤诱导三倍体三角帆蚌培育珍珠的方法 - Google Patents
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Abstract
一种利用6-二甲基氨基嘌呤诱导三倍体三角帆蚌的培育方法，包括获取二倍体三角帆蚌产生的卵子并使之与二倍体产生的精子受精，然后采用抑制剂抑制第一极体或第二极体，其特征是所述的抑制剂为6-二甲基氨基嘌呤；6-Dimethye amino purine简称6-DMAP，及利用本三倍体三角帆蚌进行育珠的方法。本发明采用的诱导剂具有价格便宜、低毒等特点，克服了以往所用细胞松弛素B价格昂贵、毒副作用大、易对工作人员身体和环境造成危害等缺陷。用此蚌生产淡水珍珠，具有珠质分泌速度快、产珠量高等的特点。适合大水域养殖珍珠。
Description
【技术领域】
本发明涉及一种人工培育珍珠的方法，具体说是一种利用6一二甲氨基嘌吟诱导三倍体三角帆蚌育珠的方法。
【背景技术】
随着社会的发展，人民生活水平的提高，高科技农业越来越为人们重视，养殖业的科学化越来越显得重要。特别由于高额利润的驱使，三角帆蚌作为淡水育珠的主要蚌种，近亲繁殖造成种质退化严重，生长速度减慢，病害严重发生，更新蚌种，势在必行。三倍体蚌具有生长迅速，珠质分泌快，抗病强的特性。因此，有广泛的应用前景。用6-DMAP人工诱导三倍体三角帆蚌并进一步育珍珠的方法还未见有文献报道。
【发明内容】
本发明的目的是提供一种利用6-二甲基氨基嘌呤诱导三倍体三角帆蚌培育珍珠的方法。
为解决其技术问题，本发明所采用的技术方案是：
第一步利用6-DMAP人工培育出三倍体三角帆蚌，其方法包括下步骤：
①亲贝培育：
挑选贝体完整，壳鼓体肥，壳面光洁，生长正常，体长14～18cm，蚌龄3～7龄的三角帆蚌原种，强化培育后或直接用作亲本和后备亲本，雌雄比(1-6)∶1，于18℃-30℃温度下蓄养20～30天，每天换水和投喂适量而充足的饵料，促进性腺发育成熟；
②精卵收集与受精：
挑选性腺成熟饱满的个体，人工剖取三倍体三角帆蚌的卵子和二倍体三角帆蚌的精子分别存于盛有过滤水的容器中，经筛绢过滤，除去杂质及组织碎片；迅速将卵加入盛有0.001-0.01％氨水的容器中，停留5～30分钟。调节卵的数量为0.1-10万粒/ml，水温18-30℃，然后加入适量的精子，并混匀让其受精；
③诱导处理：
当有10％-90％的受精卵出现第一极体时，即加浓度为50ppm-200ppm的6-DMAP进行诱导处理20～60分钟；然后用水洗卵数次，除去残留药物及精子。
④受精卵收集及培育：
把受精卵置于大容器中，加满水让其发育；待孵出的钩介幼虫并大量上浮后，将上浮的钩介幼虫收集到已放好寄生鱼、注入有一定量水的容器中，让其寄生到寄生鱼上。为保证寄生好，控制水体中钩介幼虫的密度3-20个/ml；并搅动。把已寄生好的寄生鱼放入水泥池或网箱的水体中养殖，每天加注新水和投喂饵料。维持良好的生态条件和保证饵料的充分。
⑤稚蚌采集与培育：
通过5-10天的培育，即可捞取寄生鱼放入容器中或培育池中进行脱苗。培育池中放有一定的营养土，脱苗的数量一般1-15万只/m2，稚蚌入池后，应调节好水的流量，保证饵料与氧气的供应。一般需40天的培育，稚蚌达0.8-1cm，即可出池稀养。
⑥幼蚌的培育：
把0.8-1cm长的稚蚌取出，可用多种养殖场地：如水泥池、土池、网箱、稻田、沟渠、人工养殖架等，经85～100天的养殖，使蚌体达到6～12长时成为可作育珠的三倍体育珠蚌幼蚌。
第二步：用上述人工培育出的三倍体三角帆蚌培育珍珠，其方法包括如下步骤：
①蚌的术前处理：术前把育珠幼蚌洗净，清水净养24小时，减少污物对手术质量的影响；
②制作小片和细胞移植：选用6～8cm长生长良好的小蚌作小片蚌和手术细胞移植的受体蚌，取一蚌左右外套膜去色线的边缘膜的外膜，制成长方形的小片，然后移植到另一蚌的外套膜中，每只蚌移植28～35片，成为育珠蚌。
③术后休养：术后的育珠蚌吊养于休养场，时间28～32天。
④育成与取珠：休养后的育珠蚌，转入养殖水域进行常规的管养，养殖2-5年后开蚌取珠。
上述人工培育的三倍体三角帆蚌一般作为后续育珠的母蚌进行育珠，也可作为直接的产品。
本发明的优点和效果是：通过科学的培育和养殖，可稳定其诱导效果，胚胎期的三倍体比例通常可达60％以上，钩介幼虫的成活率高。三倍体(3n)组成珠率平均达90％左右，比二倍体(2n)高5个百分点。养殖3年，珠的产量高20％左右。
【具体实施方式】
下面结合实施例对本发明进一步说明，但本实施例对本发明的权利要求不构成限制。
实施例1
1、亲贝培育：挑选贝体完整，壳鼓体肥，壳面光洁，生长正常的三角帆蚌原种，体长16cm，蚌龄5龄，雌雄比1∶1，于18℃-30℃蓄养20天；
2、精卵收集与受精：挑选性腺成熟饱满的个体，剖取精卵分别存于盛有过滤水的容器中，经筛绢过滤，除去杂质及组织碎片；迅速将卵加入盛有0.005％氨水的容器中，停留5分钟。调节卵的数量为0.1万粒/ml，水温18℃-30℃，然后加入适量的精子，并混匀让其受精；
3、诱导处理：当有10％左右的受精卵出现第一极体时，即加浓度为50ppm的6-DMAP抑制剂进行诱导处理60分钟；然后用水洗卵数次，除去残留抑制剂药物及精子。
4、受精卵收集及培育：把受精卵置于较大的容器中，加满水让其发育；待孵出的钩介幼虫并大量上浮后，将上浮的钩介幼虫收集到已放好寄生鱼、注入有一定量水的容器中，让其寄生到寄生鱼上。为保证寄生好，控制水体中钩介幼虫的密度3个/ml；并搅动。把已寄生好的寄生鱼放入水泥池或网箱的水体中养殖，每天加注新水和投喂饵料。维持良好的生态条件和保证饵料的充分。
5、稚蚌采集与培育：通过5天的培育，即可捞取寄生鱼放入容器中或培育池中进行脱苗。培育池中放有一定的营养土，脱苗的数量一般1万只/m2，稚蚌入池后，应调节好水的流量，保证饵料与氧气的供应。一般需40天的培育，稚蚌达0.8-1cm，即可出池稀养。
6、幼蚌的培育：把0.8-1cm左右的稚蚌取出，用水泥池或土池、养殖，经85天的养殖，使蚌体达到6～8cm时即可作为育珠幼蚌。
7、蚌的术前处理：术前把小蚌洗净，清水净养24小时，减少污物对手术质量的影响；
8、制作小片和细胞移植：选用6cm生长良好的小蚌作小片蚌和手术细胞移植的受体蚌，取一蚌左右外套膜去色线的边缘膜的外膜，制成长方形的小片，然后移植到另一蚌的外套膜中，每只蚌移植28片成为育珠蚌。
9、术后休养：术后的育珠蚌吊养于休养场，时间28天。
10、育成与取珠：休养后的育珠蚌，转入养殖水域进行常规的管养，养殖2年后开蚌取珠。每只蚌产珠量15g/只。
实施例2
1、亲贝培育：挑选贝体完整，壳鼓体肥，壳面光洁，生长正常的三角帆蚌原种，体长14cm，蚌龄4龄，雌雄比6∶1，于18℃-30℃蓄养30天；
2、精卵收集与受精：挑选性腺成熟饱满的个体，剖取精卵分别存于盛有过滤水的容器中，经筛绢过滤，除去杂质及组织碎片；迅速将卵加入盛有0.01％氨水的容器中，停留10分钟。调节卵的数量为5万粒/ml，水温18℃-30℃，然后加入适量的精子，并混匀让其受精；
3、诱导处理：当有40％左右的受精卵出现第一极体时，即加浓度为100ppm的6-DMAP进行诱导处理20min；然后用水洗卵数次，除去残留药物及精子。
4、受精卵收集及培育：把受精卵置于较大的容器中，加满水让其发育；待孵出的钩介幼虫并大量上浮后，将上浮的钩介幼虫收集到已放好寄生鱼、注入一定量的水的容器中，让其寄生到寄生鱼上。为保证寄生好，控制水体中钩介幼虫的密度12个/ml；并搅动。把已寄生好的寄生鱼放入网箱水体中养殖，每天加注新水和投喂饵料。维持良好的生态条件和保证饵料的充分。
5、稚蚌采集与培育：通过7天的培育，即可捞取寄生鱼放入容器中或培育池中进行脱苗。培育池中放有一定的营养土，脱苗的数量一般8万只/m2，稚蚌入池后，应调节好水的流量，保证饵料与氧气的供应。一般需40天的培育，稚蚌达0.8-1cm，即可出池稀养。
6、蚌的培育：把0.8-1cm左右的稚蚌取出，在网箱或稻田养殖，经90天的养殖，使蚌体达到6～10cm时成为小蚌，作为育珠蚌用。
7、蚌的术前处理：术前把小蚌洗净，清水净养24小时，减少污物对手术质量的影响；
8、制作小片和细胞移植：选用7cm生长良好的小蚌作小片蚌和手术细胞移植的受体蚌，取一蚌左右外套膜去色线的边缘膜的外膜，制成长方形的小片，然后移植到另一蚌的外套膜中，每只蚌移植30片成为育珠蚌。
9、术后休养：术后的育珠蚌吊养于休养场，时间30天。
10、育成与取珠：休养后的育珠蚌，转入养殖域进行常规的管养，养殖4年后开蚌取珠。每只蚌产珠量25g/只。
实施例3
1、亲贝培育：挑选贝体完整，壳鼓体肥，壳面光洁，生长正常的三角帆蚌原种，体长18cm，蚌龄3龄，雌雄比3∶1，于18℃-30℃蓄养28天；
2、精卵收集与受精：挑选性腺成熟饱满的个体，剖取精卵分别存于盛有过滤水的容器中，经筛绢过滤，除去杂质及组织碎片；迅速将卵加入盛有0.001％氨水的容器中，停留30分钟。调节卵的数量为10万粒/ml，水温18℃-30℃，然后加入适量的精子，并混匀让其受精；
3、诱导处理：当有90％左右的受精卵出现第一极体时，即加浓度为200ppm的6-DMAP进行诱导处理40min；然后用水洗卵数次，除去残留药物及精子。
4、精卵收集及培育：把受精卵置于较大的容器中，加满水让其发育；待孵出的钩介幼虫并大量上浮后，将上浮的钩介幼虫收集到已放好寄生鱼、注入一定量的水的容器中，让其寄生到寄生鱼上。为保证寄生好，控制水体中钩介幼虫的密度20个/ml；并搅动。把已寄生好的寄生鱼放入水泥池水体中养殖，每天加注新水和投喂饵料。维持良好的生态条件和保证饵料的充分。
5、稚蚌采集与培育：通过10天的培育，即可捞取寄主鱼放入容器中或培育池中进行脱苗。培育池中放有一定的营养土，脱苗的数量一般15万只/m2，稚蚌入池后，应调节好水的流量，保证饵料与氧气的供应。一般需40天的培育，稚蚌达0.8-1cm，即可出池稀养。
6、蚌的培育：把0.8-1cm左右的稚蚌取出，用沟渠或人工养殖架养殖，经100天的养殖达到6～12cm时成为小蚌，作为育珠蚌用。
7、蚌的术前处理：术前把小蚌洗净，清水净养24小时，减少污物对手术质量的影响；
8、制作小片和细胞移植：选用8cm生长良好的小蚌作小片蚌和手术细胞移植的受体蚌，取一蚌左右外套膜去色线的边缘膜的外膜，制成长方形的小片，然后移植到另一蚌的外套膜中，每只蚌移植32片成为育珠蚌。
9、术后休养：术后的育珠蚌吊养于休养场，时间32天。
10、育成与取珠：休养后的育珠蚌，转入养殖域进行常规的管养，养殖5年后开蚌取珠。每只蚌产珠量35g/只。
Claims (2)
1.一种利用6-二甲氨基嘌呤诱导三倍体三角帆蚌培育珍珠的方法，包括亲贝培育、精卵收集与受精、诱导处理、受精卵收集及培育、稚蚌采集与培育、幼蚌的培育、育成与取珠，其特征是：所用三角帆蚌原种的亲本，其雌雄比例为(1～6)∶1，培育时先在18～30℃温度下蓄养20～30天，每天换水和投喂适当的饵料，促进性腺成熟；然后取二倍体三角帆蚌产生的卵子和二倍体三角帆蚌的精子分别存于盛有过滤水的容器中，经筛绢过滤后迅速盛入有0.001～0.01％氨水的溶器中，停留5～30分钟，调节卵的数量为0.1～10万粒/ml，水温18～30℃条件下，加入适量精子，混匀让其受精，当有10～90％的受精卵出现时，加入6-DMAP，诱导20～60分钟，然后多次用水洗卵并除去残留的6-DMAP药液及精子。
2.根据权利要求1所述利用6-二甲氨基嘌呤诱导三倍体三角帆蚌培育珍珠的方法，其特征是：所述三角帆蚌的幼蚌培育是当受精卵孵出的稚蚌长至0.8～1cm长时取出，在水泥池或网箱水体中养殖85～100天，使蚌体长达6～12cm长时，即成为可作育珠的三倍体育珠蚌幼蚌。
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