CN1897980A - 改进的胃泌素释放肽化合物 - Google Patents
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Abstract
具有式M－N－O－P－G的用于诊断成像或治疗的新的和改进的化合物，其中M为光标记或金属螯合剂(与金属放射性核素络合或不络合的形式)，N－O－P为连接基，G为GRP受体靶向肽。还提供用本发明的化合物对患者成像和/或对患者提供放射治疗或光治疗的方法。还提供由所述化合物制备诊断显像剂的方法和试剂盒。还提供用于制备放射治疗剂的方法和试剂盒。
Description
相关申请的交叉参考
本申请要求2004年4月20日提交的美国申请10/828,925的权益，其是2003年12月24日提交的国际申请PCT/US03/041328的部分继续申请，后者要求2003年1月13日提交的美国申请10/341,577的优先权。所有这些申请的内容在此均被全文引入作为参考。
发明领域
本发明涉及用作诊断显像剂或放射治疗剂的新胃泌素释放肽(GRP)化合物。这些GRP化合物用放射性核素或可通过体内光成像来检测的标记物进行标记，并包括使用在标记和靶向肽之间的新连接基提供改进的药代动力学。
发明背景
已知放射性药物(例如诊断显像剂、放射治疗剂)用于检测和治疗癌症的应用。近年来，已发现许多用于癌症检测和/或治疗的部位定向放射性药物，并这些发现随着药学专业更好地评价这些化合物的特异性、效力和效用而继续增加。
这些较新的放射性药剂通常由与金属螯合剂连接的靶向剂组成，它们可以与诊断性金属放射性核素如锝或铟，或者治疗性金属放射性核素如镥、钇或铼螯合(例如络合)。金属螯合剂的作用是当放射性药剂递送至目标部位时保留(即螯合)金属放射性核素。不与金属放射性核素强结合的金属螯合剂将使放射性药剂对其目标应用无效，因为金属放射性核素因此而不能到达它的目标部位。因此，进一步的研发导致发现金属螯合剂，例如Pollak等人的美国专利5,662,885报道(该文献被引用作为参考)，所述螯合剂表现出对金属放射性核素的强结合亲和力和与靶向剂缀合的能力。因此，使用“间隔基”以在金属螯合剂和靶向剂之间建立物理分隔的概念被进一步引入，例如在Pollak等人的美国专利5,976,495中，所述文献在此被引入作为参考。
靶向剂由于其对某些结合部位的亲和力而起到的作用在于将诊断剂，例如包含金属放射性核素的放射性药剂导向至检测或治疗的目标部位。典型地，靶向剂可以包括表现出对给定受体具有特异性亲和力的蛋白、肽或其它大分子。其它已知的靶向剂包括单克隆抗体(MAbs)、抗体片段(Fab′s和(Fab)2′s)和受体-亲和肽。Donald J.Buchsbaum，″Cancer Therapy with Radiolabeled Antibodies；Pharmacokineticsof Antibodies and Their Radiolabels；ExperimentalRadioimmunotherapy and Methods to Increase Therapeutic Efficacy，″CRC Press，Boca Raton，Chapter 10，pp.115-140，(1995)；Fischman等人，″A Ticket to Ride：Peptide Radiopharmaceuticals，″The Journal of Nuclear Medicine，vol.34，No.12，(Dec.1993)。这些文献的内容在此被全文引入作为参考。
近几年来，已认识到某些癌细胞包含胃泌素释放肽(GRP)受体(GRP-R)，其具有多种亚型。具体而言，已表明某些类型的癌细胞具有超表达或独特表达的GRP受体。由于这个原因，已完成许多有关与GRP受体家族结合的GRP和GRP类似物的调查和研究。一种这样的类似物是蛙皮素(BBN)，一种从蛙皮肤分离的14个氨基酸的肽(即十四肽)，它类似于人GRP，并以高度特异性与GRP受体结合，并具有类似于GRP的亲和力。
蛙皮素和GRP类似物可以是激动剂或拮抗剂的形式。GRP或BBN激动剂与GRP受体的结合增加这些癌细胞的细胞分裂速率，且这些激动剂被细胞内化，而GRP或BBN拮抗剂的结合通常不导致细胞内化或增加细胞分裂速率。这些拮抗剂被设计用于竞争性抑制与GRP受体的内源性GRP结合，并减小癌细胞增殖的速率。例如参见Hoffken，K.；Peptides in Oncology II，Somatostatin Analogues and BombesinAntagonists(1993)，pp.87-112。为此原因，大量工作已经并正在进行，意在研发作为拮抗剂的BBN或GRP类似物。例如Davis等人，Metabolic Stability and Tumor Inhibition of Bombesin/GRPReceptor Antagonists，Peptides，vol.13，pp.401-407，1992。
在设计用作癌症的诊断或治疗剂的有效化合物中，药物具有合适的体内靶向和药代动力学性能是重要的。例如，优选放射性药物、放射性标记肽被癌细胞高度特异性地摄取(例如通过GRP受体)。此外，还优选一旦放射性核素定位在癌部位，则其在那儿保留需要量的时间以将高度局部化的放射剂量递送至该部位。
而且，研发从正常组织有效清除的放射性标记肽对于放射性药剂来说也是一个重要的因素。如果给动物例如人施用用金属放射性核素标记(通过螯合物缀合)的生物分子(例如MAb、Fab或肽)，则大量的金属放射性核素(某些化学形式)可能“截留”在肾或肝实质中(即没有排泄进入尿或胆汁)。Duncan等人，Indium-111-Diethylenetriaminepentaacetic Acid-Octreotide Is Delivered in Vivo toPancreatic，Tumor Cell，Renal and Hepatocyte Lysosomes，CancerResearch 57，pp.659-671，(Feb.15，1997)。对于较小的放射性标记的生物分子(即肽或Fab)，主要的活性清除途径是通过肾，而肾也可能保留高水平的放射性金属(即通常＞10-15％的注射剂量)。在肾或肝中保留金属放射性核素显然是不期望的。相反，如果需要较长的诊断成像或放射治疗高肿瘤摄入，则通过肾过快地从血流中清除放射性药物也是不期望的。
随后的工作，例如Hoffinan等人的美国专利6,200,546和US2002/0054855的工作(所述文献的内容在此被全文引用作为参考)已尝试通过形成具有通式X-Y-B的化合物来克服这个问题，其中X为能够络合金属的基团，Y为间隔基上的共价键，而B为蛙皮素激动剂结合部分。据报道这些化合物对GRP受体具有高结合亲和力，且其放射性在细胞内长时间地保持。此外，正常小鼠的体内研究已表明肾中保留的放射性金属低于本领域现有技术中已知的水平，大部分的放射性排泄进入尿。
现已发现，具有改进的药代动力学和改进的肾排泄(即放射性金属在肾中较少保留)的新的和改进的放射性药物和其它诊断化合物用于诊断成像和治疗应用。为进行诊断成像，快速肾排泄和低放射性保留水平对于改进成像是关键。为进行放射治疗应用，减缓血液清除率以允许较高的肿瘤摄入和较好的肿瘤靶向以及低肾保留是关键。
发明概述
在本发明的一个实施方案中，提供用于诊断成像或放射治疗的新的和改进的化合物。所述化合物包括通过连接基或间隔基与GRP受体靶向肽连接的能够络合药用金属离子或放射性核素的化学部分(金属螯合剂)。在另一个实施方案中，这些化合物包括通过连接基或间隔基连接到GRP受体靶向肽上的光标记(optical label)(例如光标记(photolabel)或可通过光成像、光声成像或光致发光检测的其它标记)。
总体而言，本发明的化合物可以具有下式：
M-N-O-P-G
其中M为金属螯合剂(与金属放射性核素络合或不络合的形式)或光标记，N-O-P为连接基，而G为GRP受体靶向肽。
金属螯合剂M可以是本领域中已知用于与药用金属离子或放射性核素络合的任何金属螯合剂。优选的螯合剂包括DTPA、DOTA、DO3A、HP-DO3A、EDTA、TETA、EHPG、HBED、NOTA、DOTMA、TETMA、PDTA、TTHA、LICAM、MECAM或肽螯合剂，例如本文讨论的螯合剂。所述金属螯合剂可以与金属放射性核素络合或不络合，并可以包括任选存在的间隔基如单一氨基酸。用于闪烁扫描术或放射治疗的优选的金属放射性核素包括99mTc、51Cr、67Ga、68Ga、47Sc、51Cr、167Tm、141Ce、111In、168Yb、175Yb、140La、90Y、88Y、153Sm、166Ho、165Dy、166Dy、62Cu、64Cu、67Cu、97Ru、103Ru、186Re、188Re、203Pb、211Bi、212Bi、213Bi、214Bi、225Ac、105Rh、109Pd、117mSn、149Pm、161Tb、177Lu、198Au和199Au。金属的选择根据目标治疗或诊断应用来确定。例如，为诊断目的，优选的放射性核素包括64Cu、67Ga、68Ga、99mTc和111In，特别优选99mTc和111In。为治疗目的，优选的放射性核素包括64Cu、90Y、105Rh、111In、117mSn、149Pm、153Sm、161Tb、166Dy、166Ho、175Yb、177Lu、186/188Re和199Au，特别优选177Lu和90Y。用于本发明化合物的最优选的螯合剂为1-取代的4，7，10-三羧甲基1，4，7，10-四氮杂环十二烷三乙酸(DO3A)。
光标记M可以是本领域中已知的多种不同光标记中的任何一种。优选的标记包括但不限于光学染料，包括有机发色团或荧光团，例如花青染料，光吸收化合物、光反射和散射化合物以及生物发光分子。
在一个实施方案中，连接基N-O-P包含至少一个非α-氨基酸。
在另一个实施方案中，连接基N-O-P包含至少一个取代的胆汁酸。
在另一种实施方案中，连接基N-O-P包含至少一个具有环状基团的非α-氨基酸
所述GRP受体靶向肽可以是GRP、蛙皮素或其任何衍生物或类似物。在一个优选的实施方案中，GRP受体靶向肽为用作激动剂的GRP或蛙皮素类似物。在一个特别优选的实施方案中，GRP受体靶向肽为在美国专利6,200,546和US 2002/0054855中公开的蛙皮素激动剂结合部分，所述文献在此被引入作为参考。
还提供一种使用本发明的化合物的新成像方法。
在本发明的一个例示性实施方案中，提供一种包含制备本发明的诊断或治疗剂所需的所有组分的单瓶或多瓶试剂盒。
还提供一种用于制备诊断显像剂的新方法，所述方法包括步骤：往可注射成像介质加入包含本发明化合物的物质。
还提供一种使用本发明的化合物进行放射治疗的新方法，以及一种用于制备放射治疗剂的新方法，所述方法包括步骤：往可注射治疗介质加入包含本发明化合物的物质。
附图的简要说明
图1A是实施例I所述的由A(甲基-(3β，5β)-3-氨基胆烷-24-酸酯)和B((3β，5β)-3-氨基胆烷-24-酸)合成中间产物C((3β，5β)-3-(9H-芴-9-基甲氧基)氨基胆烷-24-酸)的一系列化学反应的图示。
图1B是实施例I所述的合成N-[(3β，5β)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L62)的连续反应的图示。
图2A是实施例II所述的合成N-[4-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L70)的连续反应的图示。
图2B是实施例II所述的合成N-[4-[2-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙氧基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L73)、N-[3-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L115)和N-[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]苯基乙酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L116)的连续反应的总图示。
图2C是在实施例II所述的合成N-[4-[2-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙氧基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L73)的图2B的合成反应中所用的连接基的化学结构。
图2D是在实施例II所述的合成N-[3-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L115)的图2B的合成反应中所用的连接基的化学结构。
图2E是在实施例II所述的合成N-[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]苯基乙酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L116)的图2B的合成反应中所用的连接基的化学结构。
图2F是实施例II所述的合成N-[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]甘氨酰基-4-哌啶羰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L74)的连续反应的图示。
图3A是实施例III所述的合成中间产物(3β，5β)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-12-氧代胆烷-24-酸(C)的一系列化学反应的图示。
图3B是实施例III所述的合成N-[(3β，5β)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-12，24-二氧代胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L67)的连续反应的图示。
图3C是实施例III所述的(3β，5β)-3-氨基-12-氧代胆烷-24-酸(B)的化学结构。
图3D是实施例III所述的(3β，5β)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-12-氧代胆烷-24-酸(C)的化学结构。
图3E是实施例III所述的N-[(3β，5β)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-12，24-二氧代胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L67)的化学结构。
图4A是实施例IV所述的获得中间产物(3β，5β，12α)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-12-羟基胆烷-24-酸(3a)和(3β，5β，7α，12α)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸(3b)的反应流程的图示。
图4B是实施例IV所述的合成N-[(3β，5β，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-12-羟基-24-氧代胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L63)的连续反应的图示。
图4C是实施例IV所述的合成N-[(3β，5β，7α，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-7，12-二羟基-24-氧代胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L64)的连续反应的图示。
图4D是实施例IV所述的(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸(2b)的化学结构。
图4E是实施例IV所述的(3β，5β，12α)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-12-羟基胆烷-24-酸(3a)的化学结构；
图4F是实施例IV所述的(3β，5β，7α，12α)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸(3b)的化学结构。
图4G是实施例IV所述的N-[(3β，5β，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-12-羟基-24-氧代胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L63)的化学结构。
图4H是实施例IV所述的N-[(3β，5β，7α，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-7，12-二羟基-24-氧代胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L64)的化学结构。
图5A是实施例V所述的合成4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L71)和反式-4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]环己基羰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L72)的连续反应的一般图示，其中连接基分别来自图5B和5C。
图5B是用于图5A所示和实施例V所述的化合物L71的连接基的化学结构。
图5C是用于如图5A所示和实施例V所述的化合物L72的连接基的化学结构。
图5D是实施例V所述的用蛙皮素[7-14](B)官能化的Rink酰胺树脂的化学结构。
图5E是实施例V所述的反式-4-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]甲基]环己烷甲酸(D)的化学结构。
图6A是实施例VI所述的合成中间产物连接基2-[[[9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]甲基]苯甲酸(E)的反应流程的图示。
图6B是如实施例VI所述的合成中间产物连接基4-[[[9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]甲基]-3-硝基苯甲酸(H)的反应流程的图示。
图6C是实施例VI所述的合成N-[2-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L75)的图示。
图6D是实施例VI所述的合成N-[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]-3-硝基苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L76)的图示。
图7A是实施例VII所述的合成中间产物连接基N-[4-[[[9H-芴-9-基甲氧基]羰基]氨基]甲基]苯氧基]乙酸(E)的反应流程的图示。
图7B是实施例VII所述的合成N-[[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]苯氧基]乙酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L124)的图示。
图7C是实施例VII所述的N-[[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]苯氧基]乙酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L124)的化学结构。
图8A是实施例VIII所述的合成中间产物4-[[[9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]甲基]-3-甲氧基苯甲酸(E)的反应流程的图示。
图8B是实施例VIII所述的合成N-[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]-3-甲氧基苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L125)的图示。
图8C是实施例VIII所述的[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]-3-甲氧基苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L125)的化学结构。
图9A是实施例IX所述的合成3-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基苯甲酸(B)的反应的图示。
图9B是实施例IX所述的合成6-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基萘甲酸(C)的反应的图示。
图9C是实施例IX所述的合成4-[[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]甲基氨基]苯甲酸(D)的反应的图示。
图9D是实施例IX所述的合成N-[4-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯基乙酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L146)、N-[3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L233)、N-[6-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]萘甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L234)和N-[4-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]甲基氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L235)的反应的图示。
图10A是实施例X所述的合成7-[[双(1，1-二甲基乙氧基)氧膦基]甲基]-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，10-三乙酸4，10-双(1，1-二甲基乙基)酯H的反应的图示。
图10B是实施例X所述的合成N-[4-[[[[[4，10-双(羧甲基)-7-(二羟基氧膦基)甲基-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L237)的反应的图示。
图11A是实施例XI所述的合成N，N-二甲基甘氨酰基-L-丝氨酰基-[S-[(乙酰基氨基)甲基]]-L-半胱氨酰基-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L238)的反应的图示。
图11B是实施例XI所述的合成N，N-二甲基甘氨酰基-L-丝氨酰基-[S-[(乙酰基氨基)甲基]]-L-半胱氨酰基-甘氨酰基-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基-24-氧代胆烷-24-基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L239)的反应的图示。
图12A是实施例XII所述的合成4-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基-3-甲氧基苯甲酸(A)的反应的图示。
图12B是实施例XII所述的合成4-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基-3-氯苯甲酸(D)的反应的图示。
图12C是实施例XII所述的合成4-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基-3-甲基苯甲酸(E)的反应的图示。
图12D是实施例XII所述的N-[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]甘氨酰基]氨基]-3-甲氧基苯甲酰基]]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L240)的化学结构。
图12E是实施例XII所述的化合物N-[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]甘氨酰基]氨基]3-氯苯甲酰基]L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L241)的化学结构。
图12F是实施例XII所述的N-[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]甘氨酰基]氨基]3-甲基苯甲酰基]L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L242)的化学结构。
图13A是实施例XIII所述的合成4-[N，N′-双[2-[(9-H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基乙基]氨基]-4-氧代丁酸(D)的反应的图示。
图13B是实施例XIII所述的合成N-[4-[[4-[双[2-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙基]氨基-1，4-二氧代丁基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺，(L244)的反应的图示。
图13C是实施例XIII所述的化合物L244的化学结构。
图14A和图14B是实施例XLIII所述的结合和竞争曲线的图示。
图15A是实施例LV所述的放射治疗实验结果的图示。
图15B是实施例LV所述的其它放射治疗实验结果的图示。
图16是N-[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]甘氨酰基]氨基]-L-赖氨酰基-(3，6，9)-三氧杂十一烷-1，11-二甲酸-3，7-二脱氧-3-氨基胆酸]-L-精氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L65)的化学结构。
图17是N-[2-S-[[[[[12α-羟基-17α-(1-甲基-3-羧基丙基)本胆烷-3β-氨基甲酰基甲氧基乙氧基乙氧基乙酰基]-氨基-6-[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]己酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L66)的化学结构。
图18A是N-[4-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L70)的化学结构。
图18B是N-[4-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]-3-羧基丙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L114)的化学结构。
图18C是N-[4-[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]-2-羟基-3-丙氧基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L144)的化学结构。
图18D是N-[(3β，5β，7α，12α)-3-[[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙氧基乙氧基]乙酰基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L69)的化学结构。
图18E是N-[4-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯基乙酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L146)的化学结构。
图19公开可以用于制备如实施例LVI所述的化合物L64和L70的中间产物的化学结构。
图20是实施例LVI所述的利用分段偶联制备L64的图示。
图21是制备(1R(双{2-[双(羧甲基)氨基]乙基}氨基)丙烷-3-甲酸-1-羧基-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L201)的图示。
图22A是用于制备L202的化学中间产物的化学结构的图示。
图22B是制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-4-肼基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L202)的图示。
图23A是用于制备L203的化学中间产物的化学结构的图示。
图23B是制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L203)的图示。
图24是制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-4-氨基苯甲酰基-甘氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L204)的图示。
图25是制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-4-氨基苯甲酰基-甘氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L205)的图示。
图26A是用于制备L206的化学中间产物的化学结构的图示。
图26B是制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-[4′-氨基-2′-甲基联苯-4-羧基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L206)的图示。
图27A是用于制备L207的化学中间产物的化学结构的图示。
图27B是制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-[3′-氨基-联苯-3-羧基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L207)的图示。
图28是制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-[1，2-二氨基乙基-对苯二酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L208)的图示。
图29A是用于制备L209的化学中间产物的化学结构的图示。
图29B是制备L209的图示。
图30A是用于制备L210的化学中间产物的化学结构的图示。
图30B是L210的化学结构。
图31是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺L211的化学结构。
图32是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺L212的化学结构。
图33是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-1-甲硫氨酸羧酸酯L213的化学结构。
图34是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-D-苯丙氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺L214的化学结构。
图35是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-精氨酰基-L-亮氨酰基-甘氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺L215的化学结构。
图36是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-精氨酰基-L-酪氨酰基-甘氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺L216的化学结构。
图37是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-赖氨酰基-L-酪氨酰基-甘氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺L217的化学结构。
图38是L218的化学结构。
图39是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-D-苯丙氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-氨基戊基L219的化学结构。
图40是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丝氨酰基-L-缬氨酰基-D-丙氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺L220的化学结构。
图41是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-D-苯丙氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-亮氨酸酰胺L221的化学结构。
图42是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-D-酪氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-β丙氨酰基-L-组氨酰基-L-苯丙氨酰基-L-正亮氨酸酰胺L222的化学结构。。
图43是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-苯丙氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-β丙氨酰基-L-组氨酰基-L-苯丙氨酰基-L-正亮氨酸酰胺L223的化学结构。
图44是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-苯丙氨酰基-L-亮氨酸酰胺L224的化学结构。
图45是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-亮氨酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-丝氨酰基-L-苯丙氨酰基-L-蛋氨酸酰胺L225的化学结构。
图46是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-组氨酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺L226的化学结构。
图47是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-亮氨酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-丝氨酰基-L-苯丙氨酰基-L-蛋氨酸酰胺L227的化学结构。
图48是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-苯丙氨酰基-L-蛋氨酸酰胺L228的化学结构。
图49A是如实施例LVII所述合成(3β，5β，7α，12α)-3-(9H-芴-9-基甲氧基)氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸(B)的反应的图示。
图49B是如实施例LVII所述合成N-[3β，5β，7α，12α]-3-[[[2-[2-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-7，12-二羟基-24-氧代胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L69)的反应的图示。
图50是如实施例LVIII所述合成N-[4-[2-羟基-3-[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]丙氧基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L144)的反应的图示。
图51是L300的化学结构。
图52是25℃下，在DMSO-d6中，Lu-L70的TOCSY光谱。
图53是25℃下，在DMSO-d6中，Lu-L70的COSY光谱。
图54是25℃下，在DMSO-d6中，Lu-L70的NOESY光谱。
图55是25℃下，在DMSO-d6中，Lu-L70的gHSQC光谱。
图56是25℃下，在DMSO-d6中，Lu-L70的gHMBC光谱。
图57是25℃下，在DMSO-d6中，Lu-L70的gHSQCTOCSY光谱。
图58是15℃下，在DMSO-d6中，Lu-L70的普通1H-NMR(下图)和在3.5ppm的水峰的选择性均-去偶合。
图59是25℃下，在DMSO-d6中，175Lu-DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH2的TOCSY光谱。
图60是L70的化学结构。
图61是175Lu-DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH2的化学结构。
图62是含有结合水分子的175Lu-L70的化学结构。
图63是L301的化学结构。
申请中使用的缩写词
| Aoc- | 8-氨基辛酸 |
| Apa3- | 3-氨基丙酸 |
| Abu4- | 4-氨基丁酸 |
| Adca3- | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸或3-氨基-3-脱氧胆酸 |
| Ah12ca- | (3β，5β，12α)-3-氨基-12-羟基胆烷-24-酸 |
| Akca- | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-12-氧杂胆烷-24-酸 |
| Cha- | L-环己基丙氨酸 |
| Nall- | L-1-萘基丙氨酸 |
| Bip- | 1-联苯基丙氨酸 |
| Mo3abz4- | 3-甲氧基-4-氨基苯甲酸或4-氨甲基-3-甲氧基苯甲酸 |
| Bpa4- | 4-苯甲酰基苯丙氨酸 |
| C13abz4- | 3-氯-4-氨基苯甲酸 |
| M3abz4- | 3-甲基-4-氨基苯甲酸 |
| Ho3abz4- | 3-羟基-4-氨基苯甲酸 |
| Hybz4- | 4-肼基苯甲酸 |
| Nmabz4- | 4-甲氨基苯甲酸 |
| Mo3amb4- | 3-甲氧基-4-氨基苯甲酸 |
| Amb4- | 4-氨甲基苯甲酸 |
| Aeb4- | 4-(2-氨基乙氧基)苯甲酸 |
| Dae- | 1，2-二氨基乙基 |
| Tpa- | 对苯二甲酸 |
| A4m2biphc4- | 4’-氨基-2’-甲基联苯基-4-羧酸 |
| A3biphc3- | 3-氨基-3’-联苯基羧酸 |
| Amc4- | 反式-4-氨甲基环己烷羧酸 |
| Aepa4- | N-4-氨乙基-N-1-哌嗪-乙酸 |
| Inp- | 六氢异烟酸 |
| Pial- | N-1-哌嗪乙酸 |
| Ckbp- | 4-(3-羧甲基-2-酮-1-苯并咪唑基)-哌啶 |
| Abz3 | 3-氨基苯甲酸 |
| Abz4 | 4-氨基苯甲酸 |
| J | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 |
| Ava5 | 5-氨基戊酸 |
| f | (D)-Phe |
| y | (D)-Tyr |
| Ala2(也为Bala) | β-丙氨酸 |
发明详述
在以下说明书中，将进一步详细描述本发明的各方面。为了进行解释，给出了特定的结构构型和细节以使本发明被全面理解。但是，本领域技术人员还可以明显看出可以在不采用特定细节的情况下实施本发明。而且，可以省略或简化已知的特征，其目的在于不使本发明模糊。
在本发明的一个实施方案中，提供用于诊断成像或放射治疗的新的和改进的化合物。所述化合物包括通过连接基或间隔基连接到GRP受体靶向肽上的光标记或能够络合药用金属离子或放射性核素的化学部分(金属螯合剂)。
一般地，本发明的化合物可具有下式：
M-N-O-P-G
其中M为金属螯合剂(与金属放射性核素络合或不络合的形式)或光标记，N-O-P为连接基，而G为GRP受体靶向肽。在以下讨论中描述各金属螯合剂、光标记、连接基和GRP受体靶向肽。
在本发明的另一实施方案中，提供一种能够将光标记或金属螯合剂连接到GRP受体靶向肽上的新的和改进的连接基或间隔基。一般地，本发明的连接基可以具有以下式：
N-O-P
其中N、O和P中的每一个在整个说明书中定义。
发现符合这里定义的标准的化合物与本领域中已知的其它GRP受体靶向肽缀合物相比具有改进的药代动力学性能。例如，包含本发明的连接基的化合物在血流中保留更长时间，并因此具有比先前已知的化合物更长的半衰期。较长的半衰期在医药上是有益的，因为它允许更好的肿瘤靶向，从而用于诊断成像，特别是用于治疗应用，其中癌细胞和肿瘤接收更大量的放射性标记的肽。此外，本发明化合物具有比现有技术的化合物改进的组织受体特异性。
1A.金属螯合剂
术语“金属螯合剂”指与金属原子形成络合物的分子，其中该络合物在生理条件下是稳定的。也就是说，该金属将在体内与螯合剂骨架保持络合。更具体地，金属螯合剂是与放射性核素金属络合形成在生理条件下稳定的金属络合物的分子，并且其还具有至少一个用于与连接基N-O-P缀合的反应官能团。该金属螯合剂M可以是本领域中已知用于络合药用金属离子或放射性核素的任何金属螯合剂。该金属螯合剂可以与金属放射性核素络合或不络合。而且，该金属螯合剂可以包括任选的间隔基，例如单一的氨基酸(例如Gly)，其不与金属络合，但在金属螯合剂和连接基之间制造物理分隔。
本发明的金属螯合剂可以包括，例如，线性、大环三联吡啶和N3S、N2S2或N4螯合剂(还参见U.S.5,367,080、U.S.5,364,613、U.S.5,021,556、U.S.5,075,099、U.S.5,886,142，所述文献的内容在此被全文引入作为参考)和本领域中已知的其它螯合剂，包括但不限于HYNIC、DTPA、EDTA、DOTA、TETA和双氨基双硫醇(BAT)螯合剂(还参见U.S.5,720,934).例如在美国专利6,143,274、6,093,382、5,608,110、5,665,329、5,656,254和5,688,487中描述了N4螯合剂，所述文献的内容在此被全文引入作为参考。在PCT/CA94/00395，PCT/CA94/00479、PCT/CA95/00249和美国专利5,662,885、5,976,495和5,780,006中描述了某些N3S螯合剂，所述文献的内容在此被全文引入作为参考。该螯合剂还可以包括螯合配体巯基-乙酰基-甘氨酰基-甘氨酰基-甘氨酸(MAG3)的衍生物，它包含N3S，以及N2S2系统，例如MAMA(一酰胺单胺二硫醇)、DADS(N2S二胺二硫醇)、CODADS等。这些配体系统和多种其它配体在Liu和Edwards，Chem Rev.1999，99，2235-2268及其参考资料中作了描述，所述文献的内容在此被全文引入作为参考。
该金属螯合剂还可以包括含有不以四配位基排列供给金属的配体原子的络合物。这些金属螯合剂包括锝和铼二肟的硼酸加合物，例如在美国专利5,183,653、5,387,409和5,118,797中所述的那些，所述文献的内容在此被全文引入作为参考。
优选的螯合剂的实例包括但不限于二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、1，4，7，10-四氮杂环十四烷-1，4，7，10-四乙酸(DOTA)、1-取代的1，4，7-三羧甲基1，4，7，10-四氮杂环十二烷三乙酸(DO3A)、乙二胺四乙酸(EDTA)、4-羰基甲基-10-膦酰基甲基-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，7-二乙酸(Cm4pm10d2a)；和1，4，8，11-四氮杂环十四烷-1，4，8，11-四乙酸(TETA)。其它螯合配体为亚乙基双-(2-羟基-苯基甘氨酸)(EHPG)及其衍生物，包括5-Cl-EHPG、5-Br-EHPG、5-Me-EHPG、5-t-Bu-EHPG和5-sec-Bu-EHPG；苯并二亚乙基三胺五乙酸(苯并-DTPA)及其衍生物，包括二苯并-DTPA、苯基-DTPA、二苯基-DTPA、苄基-DTPA和二苄基-DTPA；双-2(羟基苄基)-亚乙基-二胺二乙酸(HBED)及其衍生物；包含至少3个碳原子，更优选至少6个碳原子和至少2个杂原子(O和/或N)的大环化合物类，所述大环化合物可以由1个环，或者在杂环元素处结合在一起的2或3个环组成，例如苯并-DOTA、二苯并-DOTA和苯并-NOTA，其中NOTA为1，4，7-三氮杂环壬烷N，N′，N″-三乙酸，苯并-TETA、苯并-DOTMA，其中DOTMA为1，4，7，10-四氮杂环十四烷-1，4，7，10-四(甲基四乙酸)，和苯并-TETMA，其中TETMA为1，4，8，11-四氮杂环十四烷-1，4，8，11-(甲基四乙酸)；1，3-丙二胺四乙酸(PDTA)和三亚乙基四胺六乙酸(TTHA)的衍生物；1，5，10-N，N′，N″-三(2，3-二羟基苯甲酰基)-三儿茶酸酯(catecholate)(LICAM)和1，3，5-N，N′，N″-三(2，3-二羟基苯甲酰基)氨基甲基苯(MECAM)的衍生物。本发明考虑的代表性螯合剂和螯合基的实例公开在以下文献中：WO 98/18496、WO 86/06605、WO 91/03200、WO 95/28179、WO 96/23526、WO 97/36619、PCT/US 98/01473、PCT/US98/20182和U.S.4,899,755、U.S.5,474,756、U.S.5,846,519和U.S.6,143,274，所述各文献在此被全文引入作为参考。
特别优选的金属螯合剂包括以下所述的式1、2和3的金属螯合剂(用于111In和放射性镧系，例如177Lu、90Y、153Sm和166Ho)和式4、5和6的金属螯合剂(用于放射性99mTc、186Re和188Re)。这些和其它金属螯合基在美国专利6,093,382和5,608,110中作了描述，所述文献在此被全文引入作为参考。此外，式3的螯合基例如在美国专利6,143,274中作了描述；式5的螯合基例如在美国专利5,627,286和6,093,382中作了描述，而式6的螯合基例如在美国专利5,662,885、5,780,006和5,976,495中作了描述，所有这些文献被引入作为参考。特定的式6的金属螯合剂包括N，N-二甲基Gly-Ser-Cys、N，N-二甲基Gly-Thr-Cys、N，N-二乙基Gly-Ser-Cys、N，N-二苄基Gly-Ser-Cys；及其其它变体。例如，实际上不与金属放射性核素络合的间隔基，例如额外的单一氨基酸Gly，可以连接到这些金属螯合剂(例如N，N-二甲基Gly-Ser-Cys-Gly、N，N-二甲基Gly-Thr-Cys-Gly、N，N-二乙基Gly-Ser-Cys-Gly、N，N-二苄基Gly-Ser-Cys-Gly)。其它有用的金属螯合剂，例如所有在美国专利6,334,996中公开的金属螯合剂(也在此被引入作为参考)(例如二甲基gly-L-叔丁基gly-L-Cys-Gly、二甲基gly-D-叔丁基gly-L-Cys-Gly、二甲基gly-L-叔丁基gly-L-Cys等)。
而且，硫保护基如Acm(乙酰氨基甲基)、三苯甲基或其它已知的烷基、芳基、酰基、烷酰基、芳酰基、巯基酰基和有机硫醇基可以连接到这些金属螯合剂的半胱氨酸氨基酸上。
此外，其它有用的金属螯合剂包括：
在以上式1和2中，R为烷基，优选甲基。在以上式5a和5b中，X为CH2或O；Y为C1-C10支链或非支链烷基、芳基、芳氧基、芳基氨基、芳基氨基酰基、芳基烷基-其中连接到芳基上的烷基为C1-C10支链或非支链烷基、C1-C10支链或非支链羟基或多羟基烷基或多烷氧基烷基或多羟基多烷氧基烷基；J是任选的，但如果存在的话是C(＝O)-、OC(＝O)-、SO2-、NC(＝O)-、NC(＝S)-、N(Y)、NC(＝NCH3)-、NC(＝NH)-、N＝N-、高聚酰胺或杂聚胺，源自合成或天然存在的氨基酸；所有情况下其中n为1-100。这些结构的其它变体例如在美国专利6,093,382中作了描述。在式6中，基团S-NHCOCH3可以被SH或S-Z替换，其中Z为任何已知的硫保护基，如上述的硫保护基。式7例示了用作金属螯合剂的叔丁基化合物的一个实施方案。各前述专利、申请和参考资料的内容在此被全文引入作为参考。
在一个优选的实施方案中，金属螯合剂包括环状或非环状多氨基羧酸，例如DOTA(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸)，DTPA(二亚乙基三胺五乙酸)，DTPA-双甲基酰胺，DTPA-双吗啉酰胺，Cm4pml0d2a(1，4-羰基甲基-10-膦酰基甲基-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，7-二乙酸)，DO3A N-[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基、HP-DO3A、DO3A-一酰胺及其衍生物。
用于闪烁扫描术或放射治疗优选的金属放射性核素包括99mTc、51Cr、67Ga、68Ga、47Sc、51Cr、167Tm、141Ce、111In、168Yb、175Yb、140La、90Y、88Y、153Sm、166Ho、165Dy、166Dy、62Cu、64Cu、67Cu、97Ru、103Ru、186Re、188Re、203Pb、211Bi、212Bi、213Bi、214Bi、105Rh、109Pd、117mSn、149Pm、161Tb、177Lu、198Au和199Au和它们的氧化物或氮化物。金属的选择将基于所需的治疗或诊断应用而确定。例如，为诊断目的(例如为了诊断和监测原发性肿瘤和转移瘤的治疗进展)，优选的放射性核素包括64Cu、67Ga、68Ga、99mTc和111In，特别优选99mTc和111In。为治疗目的(例如为了提供对与前列腺、乳腺、肺等的癌症有关的原发性肿瘤和转移瘤的放射治疗)，优选的放射性核素包括64Cu、90Y、105Rh、111In、117mSn、149Pm、153Sm、161Tb、166Dy、166Ho、175Yb、177Lu、186/188Re和199Au，特别优选177Lu和90Y。99mTc是特别有用的，并因为它的低成本、可获得性、成像性能和高特异性活性而优选用于诊断性放射性核素。99mTc的核和放射性性能使这种同位素成为理想的闪烁扫描显像剂。这种同位素的单光子能量为140keV，而放射性半衰期为大约6小时，并容易从99Mo-99mTc发生器获得。例如，99mTc标记的肽可以用于诊断和监测原发性肿瘤和转移瘤的治疗进展。用117Lu、90Y或其它治疗性放射性核素标记的肽可以用于提供对与前列腺、乳腺、肺等的癌症有关的原发性肿瘤和转移瘤的放射治疗。
1B.光标记
在一个例举性实施方案中，本发明的化合物可以与光标记物缀合，例如光染料，包括有机发色团或荧光团，其具有广泛的离域环系统并且在400-1500nm的范围内具有最大吸收和发射。本发明的化合物可以选择性地用生物发光分子衍生。光标记物的最大吸收的优选范围为600-1000nm以使对来自血红蛋白的信号的干扰最小化。优选光吸收标记具有大摩尔吸光系数，例如＞105cm-1M-1，而荧光光染料具有高量子产额。光染料的实例包括但不限于在WO 98/18497、WO 98/18496、WO98/18495、WO98/18498、WO98/53857、WO96/17628、WO97/18841、WO 96/23524、WO 98/47538及其中引述的参考资料中描述的那些。例如，光标记物可以直接共价连接到本发明的化合物，例如包含本发明的GRP受体靶向肽和连接基的化合物。几种吸收并发射光在电磁光谱的可见和近红外区的染料由于它们的生物相容性、高摩尔吸光系数和/或高荧光量子产额而目前被用于许多生物医学应用。与作为对比剂的染料结合的光形态的高度敏感性与核医学的相似，并允许在没有不期望的电离辐射作用的情况下使器官和组织显像。在近红外(NIR)区具有强烈吸收和发射的花青染料是特别有用的，因为在此区域生物组织是光学透明的。例如，在NIR区吸收和发射的吲哚花青绿已用于监测心输出量、肝功能和肝血流，且它的官能化衍生物已用于缀合生物分子以用于诊断目的(R.B.Mujumdar，L.A.Ernst，S.R.Mujumdar等人，Cyanine dye labeling reagents：SulfoindocyanineSuccinimidyl esters.Bioconjugate Chemistry，1993，4(2)，105-111；Linda G.Lee和Sam L.Woo.″N-Heteroaromatic ion andiminium ion substituted cyanine dyes for use as fluorescentlabels″，U.S.Pat.No.5,453,505；EricHohenschuh等人″Lightimaging contrast agents″，WO98/48846；Jonathan Turner等人″Optical diagnostic agents for the diagnosis ofneurodegenerative diseases by means of near infra-redradiation″，WO 98/22146；Kai Licha等人″In-vivo diagnosticprocess by near infrared radiation″，WO96/17628；Robert A.Snow等人，化合物，WO 98/48838。在以下文献中描述了多种成像技术和试剂：美国专利6,663,847、6,656,451、6,641,798、6,485,704、6,423,547、6,395,257、6,280,703、6,277,841、6,264,920、6,264,919、6,228,344、6,217,848、6,190,641、6,183,726、6,180,087、6,180,086、6,180,085、6,013,243和公开的美国专利申请2003185756、20031656432、2003158127、2003152577、2003143159、2003105300、2003105299、2003072763、2003036538、2003031627、2003017164、2002169107、2002164287和2002156117。上述所有文献的内容在此被全文引入作为参考。
2A.包含至少一个非α-氨基酸的连接基
在本发明的一个实施方案中，连接基N-O-P包含至少一个非α-氨基酸。因此，在连接基N-O-P的这个实施方案中，
N为0(其中0意指它不存在)、α或非α-氨基酸或其它连接基；
O为α或非α-氨基酸；和
P为0、α或非α-氨基酸或其它连接基，
其中N、O或P中至少一个为非α-氨基酸。
因此，在一个实例中，N＝Gly，O＝非α-氨基酸，而P＝0。
α-氨基酸在本领域中是已知的，并包括天然存在和合成的氨基酸。
非α-氨基酸在本领域中也是已知的，并包括天然存在或合成的氨基酸。优选的非α-氨基酸包括：
8-氨基-3，6-二氧杂辛酸；
N-4-氨基乙基-N-1-乙酸；和
具有式NH2-(CH2CH2O)n-CH2CO2H或NH2-(CH2CH2O)n-CH2CH2CO2H的聚乙二醇衍生物，其中n＝2-100。
包含具有至少一个非α-氨基酸的连接基的具有式M-N-O-P-G的化合物的实例列于表1。这些化合物可以用本文，特别是实施例中公开的方法，以及本领域技术人员已知的类似方法制备。
表1
| 表1-包含具有至少一个非α-氨基酸的连接基的化合物 | |||||||||
| 化合物 | HPLC方法1 | HPLCRT2 | MS3 | IC505 | M | N | O | P | G* |
| L1 | 10-40％B | 5.43 | 1616.6 | 5 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | Lys | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L2 | 10-40％B | 5.47 | 1644.7 | 3 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | Arg | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L3 | 10-40％B | 5.97 | 1604.6 | ＞50 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | Asp | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L4 | 10-40％B | 5.92 | 1575.5 | 4 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | Ser | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L5 | 10-40％B | 5.94 | 1545.5 | 9 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | Gly | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L6 | 10-30％B | 7.82 | 1639(M+Na) | ＞50 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | Glu | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L7 | 10-30％B | 8.47 | 1581(M+Na) | 7 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | Dala | 8-氨基-3，6-二氧杂 | 无 | BBN(7-14) |
| 辛酸 | |||||||||
| L8 | 10-30％B | 6.72 | 1639(M+Na) | 4 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | Lys | 无 | BBN(7-14) |
| L9 | 10-30％B | 7.28 | 823.3(M+2/2) | 6 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | Arg | 无 | BBN(7-14) |
| L10 | 10-30％B | 7.94 | 1625.6(M+Na) | ＞50 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | Asp | 无 | BBN(7-14) |
| L11 | 10-30％B | 7.59 | 1575.6 | 36 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | Ser | 无 | BBN(7-14) |
| L12 | 10-30％B | 7.65 | 1567.5(M+Na) | ＞50 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | Gly | 无 | BBN(7-14) |
| L13 | 10-30％B | 7.86 | 1617.7 | ＞50 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | Glu | 无 | BBN(7-14) |
| L14 | 10-30％B | 7.9 | 1581.7(M+Na) | 11 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | Dala | 无 | BBN(7-14) |
| L15 | 10-30％B | 7.84 | 1656.8(M+Na) | 11.5 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L16 | 10-30％B | 6.65 | 1597.4(M+Na) | 17 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 2，3-二氨基丙酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L17 | 10-30％B | 7.6 | 1488.6 | 8 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | 无 | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L18 | 10-30％B | 7.03 | 1574.6 | 7.8 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | 2，3-二氨基丙酸 | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L19 | 10-35％B | 5.13 | 1603.6 | ＞50 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | Asp | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | Gly | BBN(7-14) |
| L20 | 10-35％B | 5.19 | 1603.6 | 37 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | Asp | Gly | BBN(7-14) |
| L21 | 10-35％B | 5.04 | 1575.7 | 46 | N，N-二甲基甘氨酸 | 8-氨基 | Ser | Gly | BBN(7- |
| -Ser-Cys(Acm)-Gly | -3，6-二氧杂辛酸 | 14) | |||||||
| L22 | 10-35％B | 4.37 | 1644.7 | 36 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | Arg | Gly | BBN(7-14) |
| L23 | 10-35％B | 5.32 | 1633.7 | ＞50 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | Gly | BBN(7-14) |
| L24 | 10-35％B | 4.18 | 1574.6 | 38 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 2，3-二氨基丙酸 | Gly | BBN(7-14) |
| L25 | 10-35％B | 4.24 | 1616.6 | 26 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | Lys | Gly | BBN(7-14) |
| L26 | 10-35％B | 4.45 | 1574.6 | 30 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | 2，3-二氨基丙酸 | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | Gly | BBN(7-14) |
| L27 | 10-35％B | 4.38 | 1627.3 | ＞50 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | N-4-氨基乙基-N-1-哌嗪乙酸 | Asp | 无 | BBN(7-14) |
| L28 | 10-35％B | 4.1 | 1600.3 | 25 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | N-4-氨基乙基-N-1-哌嗪乙酸 | Ser | 无 | BBN(7-14) |
| L29 | 10-35％B | 3.71 | 1669.4 | 36 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | N-4-氨基乙基-N-1-哌嗪乙酸 | Arg | 无 | BBN(7-14) |
| L30 | 10-35％B | 4.57 | 1657.2 | 36 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | N-4-氨基乙基-N-1-哌嗪乙酸 | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L31 | 10-35％B | 3.69 | 1598.3 | ＞50 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | N-4-氨基乙基-N-1-哌嗪乙酸 | 2，3-二氨基丙酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L32 | 10-35％B | 3.51 | 1640.3 | 34 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | N-4-氨基乙基-N-1-哌嗪乙酸 | Lys | 无 | BBN(7-14) |
| L33 | 10-35％B | 4.29 | 1584.5 | ＞50 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | N-1-哌嗪乙酸 | Asp | 无 | BBN(7-14) |
| L34 | 10-35％B | 4.07 | 1578.7(M+Na) | 38 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | N-1-哌嗪乙酸 | Ser | 无 | BBN(7-14) |
| L35 | 10-35％B | 3.65 | 1625.6 | 26 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | N-1-哌嗪乙酸 | Arg | 无 | BBN(7-14) |
| L36 | 10-35％B | 4.43 | 1636.6 | 7 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | N-1-哌嗪乙酸 | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L37 | 10-35％B | 3.66 | 1555.7 | 23 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | N-1-哌嗪乙酸 | 2，3-二氨基丙酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L38 | 10-35％B | 3.44 | 1619.6 | 7 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | N-1-哌嗪乙酸 | Lys | 无 | BBN(7-14) |
| L42 | 30-50％B | 5.65 | 1601.6 | 25 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | 4-羟基脯氨酸 | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L48 | 30-50％B | 4.47 | 1600.5 | 40 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | 4-氨基脯氨酸 | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L51 | 15-35％B | 5.14 | 1673.7 | 49 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | Lys | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | Gly | BBN(7-14) |
| L52 | 15-35％B | 6.08 | 1701.6 | 14 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | Arg | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | Gly | BBN(7-14) |
| L53 | 15-35％B | 4.16 | 1632.6 | 10 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | Ser | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | Gly | BBN(7-14) |
| L54 | 15-35％B | 4.88 | 1661.6 | ＞50 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | Asp | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | Gly | BBN(7-14) |
| L55 | 15-35％B | 4.83 | 1683.4(M+Na) | 43 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | Asp | Gly | BBN(7-14) |
| L56 | 15-35％B | 4.65 | 1655.7(M+Na) | 4 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | Ser | Gly | BBN(7-14) |
| L57 | 15-35％B | 4.9 | 1701.8 | 50 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | 8-氨基-3，6-二 | Arg | Gly | BBN(7-14) |
| 氧杂辛酸 | |||||||||
| L58 | 15-35％B | 4.22 | 846.4(M+H/2) | ＞50 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | Gly | BBN(7-14) |
| L59 | 15-35％B | 4.03 | 1635.5 | 42 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 2，3-二氨基丙酸 | Gly | BBN(7-14) |
| L60 | 15-35％B | 4.11 | 1696.6(M+Na) | 20 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | Lys | Gly | BBN(7-14) |
| L61 | 15-35％B | 4.32 | 1631.4 | 43 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | 2，3-二氨基丙酸 | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | Gly | BBN(7-14) |
| L78 | 20-40％B | 6.13 | 1691.4(M+Na) | 35 | DO3A-一酰胺 | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 二氨基丙酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L79 | 20-40％B | 7.72 | 1716.8(M+Na) | 42 | DO3A-一酰胺 | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 联苯丙氨酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L80 | 20-40％B | 7.78 | 1695.9 | ＞50 | DO3A-一酰胺 | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 二苯丙氨酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L81 | 20-40％B | 7.57 | 1513.6 | 37.5 | DO3A-一酰胺 | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 4-苯甲酰基苯丙氨酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L92 | 15-30％B | 5.63 | 1571.6 | 5 | DO3A-一酰胺 | 5-氨基戊酸 | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L94 | 20-36％B | 4.19 | 1640.8(M+Na) | 6.2 | DO3A-一酰胺 | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | D-苯丙氨酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L110 | 15-45％B | 5.06 | 1612.7 | 36 | DO3A-一酰胺 | 8-氨基辛酸 | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L209 | 20-40％B，经过6分钟 | 4.62 | 3072.54 | 37 | DO3A-一酰胺 | E(G8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 8-氨基辛酸 | 8-氨基辛酸 | BBN(7-14) |
| QWAVGHLM-NH2) | |||||||||
| L210 | 20-50％B，经过10分钟 | 6.18 | 3056.76 | 11 | DO3A-一酰胺 | E(G-Aoa-Aoa-QWAVGHLM-NH2) | 8-氨基辛酸 | 8-氨基辛酸 | BBN(7-14) |
*BBN(7-14)为[SEQ ID NO：1]
1HPLC方法指HPLC梯度的10分钟时间。
2HPLC RT指HPLC中化合物的保留时间。
3MS指质谱，其中分子量由质量/单位电荷(m/e)计算。
4IC50指抑制碘化蛙皮素与细胞上GRP受体的50％结合的化合物浓度。
2B.包含至少一个取代的胆汁酸的连接基
在本发明的另一实施方案中，连接基N-O-P包含至少一个取代的胆汁酸。因此，在连接基N-O-P的这个实施方案中，
N为0(其中0意指它不存在)、α-氨基酸、取代的胆汁酸或其它连接基；
O为α-氨基酸或取代的胆汁酸；和
P为0、α-氨基酸，取代的胆汁酸或其它连接基，
其中N、O或P中至少一个为取代的酸。
胆汁酸见于胆汁(肝的分泌物)，它是具有羟基和终止于羧基的5个碳原子侧链的甾类化合物。在取代的胆汁酸中，胆汁酸的至少一个原子如氢原子被另一原子、分子或化学基团取代。例如，取代的胆汁酸包括具有3-氨基、24-羧基官能团、任选在7和12位被氢、羟基或酮官能团取代的那些。
本发明中其它有用的取代的胆汁酸包括取代的胆酸及其衍生物。特定的取代的胆酸衍生物包括：
(3β，5β)-3-氨基胆烷-24-酸；
(3β，5β，12α)-3-氨基-12-羟基胆烷-24-酸；
(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸；
Lys-(3，6，9)-三氧杂十一烷-1，11-二羰基-3，7-二脱氧-3-氨基胆酸)；
(3β，5β，7α)-3-氨基-7-羟基-12-氧代胆烷-24-酸；和
(3β，5β，7α)-3-氨基-7-羟基胆烷-24-酸。
包含具有至少一个取代的胆汁酸的连接基的具有式M-N-O-P-G的化合物的实例列于表2。这些化合物可以使用本文公开的方法，特别是实施例公开的方法，以及本领域技术人员已知的类似方法来制备。
表2
| 表2-包含具有至少一个取代的胆汁酸的连接基的化合物 | |||||||||
| 化合物 | HPLC方法1 | HPLCRT2 | MS3 | IC505 | M | N | O | P | G* |
| L62 | 20-80％B | 3.79 | 1741.2 | ＞50 | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β)-3-氨基胆烷-24-酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L63 | 20-80％B | 3.47 | 1757.0 | 23 | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，12α)-3-氨基-12-羟基胆烷-24-酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L64 | 20-50％B | 5.31 | 1773.7 | 8.5 | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L65 | 20-80％B | 3.57 | 2246.2 | ＞50 | DO3A-一酰胺 | Gly | Lys-(3，6，9-三氧杂十一烷-1，11-二羰基-3，7-二脱氧-3-氨基胆酸) | Arg | BBN(7-14) |
| L66 | 20-80％ | 3.79 | 2245.8 | ＞50 | DO3A-一酰胺 | Gly | Lys-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-3，6，9-三氧杂十一烷-1，11-二羰基 | Arg | BBN(7-14) |
| L67 | 20-80％ | 3.25 | 1756.9 | 4.5 | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-12-氧杂胆烷-24-酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L69 | 20-80％ | 3.25 | 1861.27 | 8 | DO3A-一酰胺 | 1-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L280 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | 无 | Q-W-A-V-a-H-L-M-NH2 |
| L281 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | f | Q-W-A-V-G-H-L-M-NH2 |
| L282 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | f | Q-W-A-V-G-H-L-L-NH2 |
| L283 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | f | Q-W-A-V-G-H-L-NH-戊基 |
| L284 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | y | QWAV-Bala-H-F-Nle-NH2 |
| L285 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | f | Q-W-A-V-Bala-H-F-Nle-NH2 |
| L286 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | 无 | Q-W-A-V-G-H-F-L-NH2 |
| L287 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | 无 | Q-W-A-V-G-NMeHis-L-M-NH2 |
| L288 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | 无 | L-W-A-V-G-S-F-M-NH2 |
| L289 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | 无 | H-W-A-V-G-H-L-M-NH2 |
| L290 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | 无 | L-W-A-T-G-H-F-M-NH2 |
| L291 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基 | 无 | Q-W-A-V-G-H-F-M-NH |
| -7，12-二羟基胆烷-24-酸 | ||||||||||
| L292 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | QRLGN | Q-W-A-V-G-H-L-M-NH2 | |
| L293 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | QRYGN | Q-W-A-V-G-H-L-M-NH2 | |
| L294 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | QKYGN | Q-W-A-V-G-H-L-M-NH2 | |
| L295 | - | - | - | - | Pglu-Q-Lys(DO3A-一酰胺) | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | LG-N | Q-W-A-V-G-H-L-M-NH2 | |
| L303 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | 3-氨基-3-脱氧胆酸 | 无 | QRLGNQWAVGHLM-NH2 | |
| L304 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | 3-氨基-3-脱氧胆酸 | 无 | QRYGNQWAVGHLM-NH2 | |
| L305 | - | - | - | - | DO3A--酰胺 | Gly | 3-氨基-3-脱氧胆酸 | 无 | QKYGNQWAVGHLM-NH2 | |
| L306 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | 3-氨基-3-脱氧胆酸 | 无 | 见图38靶向肽的结构 | |
*BBN(7-14)为[SEQ ID NO：1]
1HPLC方法指HPLC梯度的10分钟时间。
2HPLC RT指HPLC中化合物的保留时间。
3MS指质谱，其中分子量由质量/单位电荷(m/e)计算。
4IC50指抑制碘化蛙皮素与细胞上GRP受体的50％结合的化合物浓度。
2C.包含至少一个具有环状基团的非α-氨基酸的连接基
在本发明的又一实施方案中，连接基N-O-P包含至少一个具有环状基团的非α-氨基酸。因此，在连接基N-O-P的这个实施方案中，
N为0(其中0意指它不存在)、α-氨基酸、具有环状基团的非α-氨基酸或其它连接基；
O为α-氨基酸或具有环状基团的非α-氨基酸；和
P为0、α-氨基酸、具有环状基团的非α-氨基酸或其它连接基，
其中N、O或P中至少一个为具有环状基团的非α-氨基酸。
具有环状基团的非α-氨基酸包括取代的苯基、联苯、环己基或其它含胺和羧基的环状脂族或杂环部分。这些实例包括：
4-氨基苯甲酸(此后在说明书中称作“Abz4”)
3-氨基苯甲酸
4-氨基甲基苯甲酸
8-氨基辛酸
反式-4-氨基甲基环己烷甲酸
4-(2-氨基乙氧基)苯甲酸
六氢异烟酸
2-氨基甲基苯甲酸
4-氨基-3-硝基苯甲酸
4-(3-羧甲基-2-酮-1-苯并咪唑基-哌啶
6-(哌嗪-1-基)-4-(3H)-喹唑啉酮-3-乙酸
(2S，5S)-5-氨基-1，2，4，5，6，7-六氢-吖庚因并[3，21-hi]吲哚-4-酮-2-甲酸
(4S，7R)-4-氨基-6-氮杂-5-氧代-9-硫杂二环[4.3.0]壬烷-7-甲酸
3-羧甲基-1-苯基-1，3，8-三氮杂螺[4.5]癸烷-4-酮
N1-哌嗪乙酸
N-4-氨基乙基-N-1-哌嗪乙酸
(3S)-3-氨基-1-羧甲基己内酰胺
(2S，6S，9)-6-氨基-2-羧甲基-3，8-二氮杂二环-[4，3，0]-壬烷-1，4-二酮
3-氨基-3-脱氧胆酸
4-羟基苯甲酸
4-氨基苯基乙酸
3-羟基-4-氨基苯甲酸
3-甲基-4-氨基苯甲酸
3-氯-4-氨基苯甲酸
3-甲氧基-4-氨基苯甲酸
6-氨基萘甲酸
N，N′-双(2-氨基乙基)-琥珀酰胺酸
包含具有至少一个含环状基团的非α-氨基酸的连接基的具有式M-N-O-P-G的化合物的实例列于表3。这些化合物可以用本文公开的方法，特别是实施例公开的方法，以及本领域技术人员已知的类似方法制备。
表3
| 表3-包含与氨基-(苯基、联苯、环烷基或杂环)羧酸有关的连接基的化合物 | |||||||||
| 化合物 | HPLC方法1 | HPLCRT2 | MS3 | IC505 | M | N | O | P | G* |
| L70 | 10-40％B | 6.15 | 1502.6 | 5 | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L71 | 20-50％经过30分钟 | 14.14 | 59.68(M+Na) | 7 | DO3A-一酰胺 | 无 | 4-氨基甲基苯甲酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L72 | 20-50％经过30分钟 | 13.64 | 65.73(M+K) | 8 | DO3A-一酰胺 | 无 | 反式-4-氨基甲基环己基甲酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L73 | 5-35％ | 7.01 | 1489.8 | 5 | DO3A-一酰胺 | 无 | 4-(2-氨基乙氧基)苯甲酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L74 | 5-35％ | 6.49 | 1494.8 | 7 | DO3A-一酰胺 | Gly | 六氢异烟酸 | 无 | BBN(7-14) | ||
| L75 | 5-35％ | 6.96 | 1458.0 | 23 | DO3A-一酰胺 | 无 | 2-氨基甲基苯甲酸 | 无 | BBN(7-14) | ||
| L76 | 5-35％ | 7.20] | 1502.7 | 4 | DO3A-一酰胺 | 无 | 4-氨基甲基-3-硝基苯甲酸 | 无 | BBN(7-14) | ||
| L77 | 20-40％B | 6.17 | 1691.8(M+Na) | 17.5 | DO3A-一酰胺 | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 1-萘基丙氨酸 | 无 | BBN(7-14) | ||
| L82 | 20-40％B | 6.18 | 1584.6 | 8 | DO3A-一酰胺 | 无 | 4-(3-羧甲基-2-酮-1-苯并咪唑基-哌啶 | 无 | BBN(7-14) | ||
| L83 | 20-40％B | 5.66 | 1597.5 | ＞50 | DO3A-一酰胺 | 无 | 6-(哌嗪-1-基)-4-(3H)-喹唑啉酮-3-乙酸 | 无 | BBN(7-14) | ||
| L84 | 20-40％B | 6.31 | 1555.5 | ＞50 | DO3A-一酰胺 | 无 | (2S，5S)-5-氨基-1，2，4，5，6，7-六氢-吖庚因并[3，21-hi]吲哚-4-酮-2-甲酸 | 无 | BBN(7-14) | ||
| L85 | 20-40％B | 5.92 | 1525.5 | ＞50 | DO3A-一酰胺 | 无 | (4S，7R)-4-氨基-6-氮杂-5-氧代-9-硫杂二环[4.3.0]壬烷-7-甲酸 | 无 | BBN(7-14) | ||
| L86 | 20-40％B | 6.46 | 1598.6 | ＞50 | DO3A-一酰胺 | 无 | N，N-二甲基甘氨酸 | 无 | BBN(7-14) | ||
| L87 | 20-40％B | 5.47 | 1593.8(M+Na) | ＞50 | DO3A-一酰胺 | 无 | 3-羧甲基-1-苯基-1，3，8-三氮杂螺[4.5]癸烷-4-酮 | 无 | BBN(7-14) | ||
| L88 | 20-40％B | 3.84 | 1452.7 | ＞50 | DO3A-一酰胺 | 无 | N1-哌嗪乙酸 | 无 | BBN(7-14) | ||
| L89 | 20-40％B | 5.68 | 1518.5 | 23 | DO3A-一酰胺 | 无 | N-4-氨基 | 无 | BBN(7- | ||
| (M+Na) | 乙基-N-1-哌嗪-乙酸 | 14) | |||||||||||||
| L90 | 20-40％B | 7.95 | 1495.4 | 50 | DO3A-一酰胺 | 无 | (3S)-3-氨基-1-羧甲基己内酰胺 | 无 | BBN(7-14) | ||||||
| L91 | 20-40％B | 3.97 | 1535.7 | ＞50 | DO3A-一酰胺 | 无 | (2S，6S，9)-6-氨基-2-羧甲基-3，8-二氮杂二环-[4，3，0]-壬烷-1，4-二酮 | 无 | BBN(7-14) | ||||||
| L93 | 15-30％B | 7.57 | 1564.7 | 5.8 | DO3A-一酰胺 | 5-氨基戊酸 | 反式-4-氨基甲基环己烷-1-甲酸 | 无 | BBN(7-14) | ||||||
| L95 | 15-35％B | 5.41 | 1604.6 | 14 | DO3A-一酰胺 | 反式-4-氨基甲基环己烷-1-甲酸 | D-苯丙氨酸 | 无 | BBN(7-14) | ||||||
| L96 | 20-36％B | 4.75 | 1612.7 | 35 | DO3A-一酰胺 | 4-氨基甲基苯甲酸 | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 无 | BBN(7-14) | ||||||
| L97 | 15-35％B | 5.86 | 1598.8 | 4.5 | DO3A-一酰胺 | 4-苯甲酰基-(L)-苯丙氨酸 | 反式-4-氨基甲基环己烷-1-甲酸 | 无 | BBN(7-14) | ||||||
| L98 | 15-35％B | 4.26 | 1622.7 | 16 | DO3A-一酰胺 | 反式-4-氨基甲基环己烷-1-甲酸 | Arg | 无 | BBN(7-14) | ||||||
| L99 | 15-35％B | 4.1 | 1594.7 | 22 | DO3A-一酰胺 | 反式-4-氨基甲基环己烷-1-甲酸 | Lys | 无 | BBN(7-14) | ||||||
| L100 | 15-35％B | 4.18 | 1613.6 | 10 | DO3A-一酰胺 | 反式-4-氨基甲基环己烷-1-甲酸 | 二苯丙氨酸 | 无 | BBN(7-14) | ||||||
| L101 | 15-35％B | 5.25 | 1536.7 | 25 | DO3A-一酰胺 | 反式-4-氨基甲基环己烷-1-甲酸 | 1-萘基丙氨酸 | 无 | BBN(7-14) | ||||||
| L102 | 15-35％B | 5.28 | 1610.8 | 9.5 | DO3A-一酰胺 | 反式-4-氨基甲基环己烷-1-甲酸 | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L103 | 15-35％B | 4.75 | 1552.7 | 24 | DO3A-一酰胺 | 反式-4-氨基甲基环己烷-1-甲酸 | Ser | 无 | BBN(7-14) |
| L104 | 15-35％B | 3.91 | 1551.7 | 32 | DO3A-一酰胺 | 反式-4-氨基甲基环己烷-1-甲酸 | 2，3-二氨基丙酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L105 | 20-45％B | 7.68 | 1689.7 | 3.5 | DO3A-一酰胺 | 反式-4-氨基甲基环己烷-1-甲酸 | 联苯丙氨酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L106 | 20-45％B | 6.97 | 1662.7 | 3.8 | DO3A-一酰胺 | 反式-4-氨基甲基环己烷-1-甲酸 | (2S，5S)-5-氨基-1，2，4，5，6，7-六氢-吖庚因并[3，21-hi]吲哚-4-酮-2-甲酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L107 | 15-35％B | 5.79 | 1604.7 | 5 | DO3A-一酰胺 | 反式-4-氨基甲基环己烷-1-甲酸 | 反式-4-氨基甲基环己烷-1-甲酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L108 | 15-45％B | 6.38 | 1618.7 | 10 | DO3A-一酰胺 | 8-氨基-3，6-二氧杂辛酸 | 苯丙氨酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L109 | 15-45％B | 6.85 | 1612.7 | 6 | DO3A-一酰胺 | 反式-4-氨基甲基环己烷-1-甲酸 | 苯丙氨酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L111 | 20-45％B | 3.75 | 1628.6 | 8 | DO3A-一酰胺 | 8-氨基辛酸 | 反式-4-氨基甲基环己烷-1-甲酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L112 | 20-47％B，9分钟内 | 3.6 | 1536.5 | 4.5 | DO3A-一酰胺 | 无 | 4′-氨基甲基-联苯-1-甲酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L113 | 20-47％B，9分钟内 | 3.88 | 1558.6(M+Na) | 5 | DO3A-一酰胺 | 无 | 3′-氨基甲基-联苯-3-甲酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L114 | 10-40％B | 5.47 | 1582.8 | 4.5 | CMDOTA | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | BBN(7-14) | ||||||||
| L124 | 5-35％B | 7.04 | 1489.9 | 8.0 | DO3A-一酰胺 | 无 | 4-氨基甲基苯氧基乙酸 | 无 | BBN(7-14) | ||||||||
| L143 | 5-35％B | 6.85 | 1516.8 | 11 | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯基乙酸 | 无 | BBN(7-14) | ||||||||
| L144 | 5-35％B | 6.85 | 1462.7 | 9 | HPDO3A | 无 | 4-苯氧基 | 无 | BBN(7-14) | ||||||||
| L145 | 20-80％B | 1.58 | 1459.8 | 5 | DO3A-一酰胺 | 无 | 3-氨基甲基苯甲酸 | 无 | BBN(7-14) | ||||||||
| L146 | 20-80％B | 1.53 | 1473.7 | 9 | DO3A-一酰胺 | 无 | 4-氨基甲基苯基乙酸 | 无 | BBN(7-14) | ||||||||
| L147 | 20-80％B | 1.68 | 1489.7 | 3.5 | DO3A-一酰胺 | 无 | 4-氨基甲基-3-甲氧基苯甲酸 | 无 | BBN(7-14) | ||||||||
| L201 | 10-46％B，经过12分钟 | 5.77 | 1563.7 | 36 | Boa… | 无 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | BBN(7-14) | ||||||||
| L202 | 10-46％B，经过12分钟 | 5.68 | 1517.74 | 13 | DO3A-一酰胺 | 无 | Gly | 4-肼基苯甲酰基 | BBN(7-14) | ||||||||
| L2O 3 | 10-46％B，经过12分钟 | 5.98 | 1444.69 | 9 | D03A-一酰胺 | 无 | 无 | 4-氨基苯甲酸 | BBN(7-14) | ||||||||
| L204 | 10-46％B，经过12分钟 | 5.82 | 1502.73 | 50 | DO3A-一酰胺 | 无 | 4-氨基苯甲酸 | Gly | BBN(7-14) | ||||||||
| L205 | 10-46％B，经过12分钟 | 5.36 | 1503.72 | 45 | DO3A-一酰胺 | Gly | 6-氨基烟酸 | 无 | BBN(7-14) | ||||||||
| L206 | 10-46％B，经过12分钟 | 7.08 | 1592.85 | 4.5 | DO3A-一酰胺 | Gly | 4′-氨基-2′-甲基联苯-4-甲 | 无 | BBN(7-14) | ||||||||
| 酸 | |||||||||
| L207 | 10-46％B，经过12分钟 | 7.59 | 1578.83 | 2.5 | DO3A-一酰胺 | Gly | 3′-氨基联苯基-3-甲酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L208 | 10-46％B，经过12分钟 | 5.9 | 1516.75 | 7.5 | DO3A-一酰胺 | Gly | 1，2-二氨基乙基 | 对苯二酸 | BBN(7-14) |
| L211 | 10-46％B，经过12分钟 | 5.76 | 1560.77 | 4 | DO3A-一酰胺 | Gly | Gly | 4-氨基苯甲酸 | BBN(7-14) |
| L212 | 10-46％B，经过12分钟 | 6.05 | 1503.71 | NT** | DO3A-一酰胺 | 无 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | EWAVGHLM-NH2 |
| L213 | 10-46％B，经过12分钟 | 5.93 | 1503.71 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | QWAVGHLM-OH |
| L214 | 10-46％B，经过12分钟 | 7.36 | 1649.91 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | (D)-Phe | BBN(7-14) |
| L215 | 10-46％B，经过12分钟 | 5.08 | 2071.37 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | QRLGNQWAVGHLM-NH2 |
| L216 | 10-46％B，经过12分钟 | 4.94 | 2121.38 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | QRYGNQWAVGHLM-NH2 |
| L217 | 10-46％B，经过12分钟 | 4.38 | 2093.37 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | QKYGNQWAVGHLM-NH2 |
| L218 | 10-46％B，经过12分钟 | 6.13 | 2154.45 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | 靶向肽的结构见图38 |
| L219 | 10-46％B，经过12分钟 | 8.61 | 1588.84 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | (D)-Phe | QWAVGHL-NH-戊基 |
| L220 | 10-46％B，经过12分钟 | 5.96 | 1516.75 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | QWSVaHLM-NH2 |
| L221 | 10-46％B | 7.96 | 1631.87 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯 | (D) | QWAVGH |
| ，经过12分钟 | 甲酸 | -Phe | LL-NH2 | ||||||
| L222 | 10-46％B，经过12分钟 | 6.61 | 1695.91 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | (D)-Tyr | QWAV-Bala-HF-Nle-NH2 |
| L223 | 10-46％B，经过12分钟 | 7.48 | 1679.91 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | Phe | QWAV-Bala-HF-Nle-NH2 |
| L224 | 10-46％B，经过12分钟 | 5.40 | 1419.57 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | QWAGHFL-NH2 |
| L225 | 10-46％B，经过12分钟 | 8.27 | 1471.71 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | LWAVGSFM-NH2 |
| L226 | 10-46％B，经过12分钟 | 5.12 | 1523.75 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | HWAVGHLM-NH2 |
| L227 | 10-46％B，经过12分钟 | 6.61 | 1523.75 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | LWAVGSFM-NH2 |
| L228 | 10-46％B，经过12分钟 | 5.77 | 1511 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | QWAVGHFM-NH2 |
| L233 | 5-35％B，经过10分钟 | 7.04 | 1502.71 | 4.8 | DO3A-一酰胺 | Gly | 3-氨基苯甲酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L234 | 20-80％，经过10分钟 | 1.95 | 1552.76 | 3 | DO3A-一酰胺 | Gly | 6-氨基萘甲酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L235 | 20-80％，经过10分钟 | 1.95 | 1515.72 | 7 | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-甲基氨基苯甲酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L237 | 20-80％，经过10分钟 | 1.52 | 1538.68 | 5 | Cm4pm10d2a | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L238 | 5-35％B，经过10分钟 | 7.17 | 1462.70 | 1.5 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L239 | 20-80％，经过10分钟 | 3.36 | 1733.16 | 4.5 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly | Gly | 3-氨基-3-脱氧胆酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L240 | 20-80％，经过10分钟 | 1.55 | 1532.73 | 4 | DO3A-一酰胺 | Gly | 3-甲氧基-4-氨基苯甲酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L241 | 20-80％，经过10分钟 | 1.63 | 1535.68 | 4 | DO3A-一酰胺 | Gly | 3-氯-4-氨基苯甲酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L242 | 20-80％，经过10分钟 | 1.55 | 1516.75 | 5 | DO3A-一酰胺 | Gly | 3-甲基-4-氨基苯甲酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L243 | 20-80％，经过10分钟 | 1.57 | 1518.70 | 14 | DO3A-一酰胺 | Gly | 3-羟基-4-氨基苯甲酸 | 无 | BBN(7-14) |
| L244 | 5-50％，经过10分钟 | 4.61 | 1898.16 | ＞50 | (DO3A-一酰胺)2 | N，N′-双(2-氨基乙基)-琥珀酰胺酸 | 无 | 无 | BBN(7-14) |
| L300 | 10-46％，经过10分钟 | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | QWAVGHFL-NH2 |
| L301 | 20-45％经过15分钟 | 7.18 | - | - | DO3A-一酰胺 | 无 | 4-氨甲基苯甲酸 | L-1-萘基丙氨酸 | BBN(7-14) |
| L302 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | QWAVGNMeHis-L-M-NH2 |
*BBN(7-14)为[SEQ ID NO：1]
**NT定义为“未测试”
***BOA定义为(1R)-1-(双{2-[双(羧甲基)氨基]乙基}氨基)丙烷-1，3-二甲酸。
1HPLC方法指HPLC梯度的10分钟时间。
2HPLC RT指HPLC中化合物的保留时间。
3MS指质谱，其中分子量由质量/单位电荷(m/e)计算。
4IC50指抑制碘化蛙皮素与细胞上GRP受体的50％结合的化合物浓度。
一小组合有优选连接基和多种GRP受体靶向肽的化合物如表4所述。这些化合物可以用本文公开的方法，特别是实施例公开的方法，以及本领域技术人员已知的类似方法制备。
表4
| 表4-含本发明连接基的带有各种GRP-R靶向部分的化合物 | |||||||||
| 化合物 | HPLC方法1 | HPLCRT2 | MS3 | IC505 | M | N | O | P | G* |
| L214 | 10-46％B，经过12分钟 | 7.36 | 1649.91 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | (D)-Phe | BBN(7-14) |
| L215 | 10-46％B，经过12分钟 | 5.08 | 2071.37 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | QRLGNQWAVGHLM-NH2 |
| L216 | 10-46％B，经过12分钟 | 4.94 | 2121.38 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | QRYGNQWAVGHLM-NH2 |
| L217 | 10-46％B，经过12分钟 | 4.38 | 2093.37 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | QKYGNQWAVGHLM-NH2 |
| L218 | 10-46％B，经过12分钟 | 6.13 | 2154.45 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | 参见图38靶向肽的结构 |
| L219 | 10-46％B，经过12分钟 | 8.61 | 1588.84 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | (D)-Phe | QWAVGHL-NH-戊基 |
| L220 | 10-46％B，经过12分钟 | 5.96 | 1516.75 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | QWAVaHLM-NH2 |
| L221 | 10-46％B，经过12分钟 | 7.96 | 1631.87 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | (D)-Phe | QWAVGHLL-NH2 |
| L222 | 10-46％B，经过12分钟 | 6.61 | 1695.91 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | (D)-Tyr | QWAV-Bala-HF-Nle-NH2 |
| L223 | 10-46％B，经过12分钟 | 7.48 | 1679.91 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | Phe | QWAV-Bala- |
| HF-Nle-NH2 | |||||||||
| L224 | 10-46％B，经过12分钟 | 5.40 | 1419.57 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | QWAGHFL-NH2 |
| L225 | 10-46％B，经过12分钟 | 8.27 | 1471.71 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | LWAVGSFM-NH2 |
| L226 | 10-46％B，经过12分钟 | 5.12 | 1523.75 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | HWAVGHLM-NH2 |
| L227 | 10-46％B，经过12分钟 | 6.61 | 1523.75 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | LWATGHFM-NH2 |
| L228 | 10-46％B，经过12分钟 | 5.77 | 1511 | NT** | DO3A-一酰胺 | Gly | 4-氨基苯甲酸 | 无 | QWAYGHFM-NH2 |
| L280 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | 无 | Q-W-A-V-a-H-L-M-NH2 |
| L281 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | f | Q-W-A-V-G-H-L-M-NH2 |
| L282 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | f | Q-W-A-V-G-H-L-L-NH2 |
| L283 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | f | Q-W-A-V-G-H-L-NH-戊基 |
| L284 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | y | Q-W-A-V-Bala-H-F-Nle-NH2 |
| L285 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | f | Q-W-A-V-Bala-H-F-Nle-NH2 | ||
| L286 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | 无 | Q-W-A-V-G-H-F-L-NH2 | ||
| L287 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | 无 | Q-W-A-V-G-NMeHis-L-M-NH2 | ||
| L288 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | 无 | L-W-A-V-G-S-F-M-NH2 | ||
| L289 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | 无 | H-W-A-V-G-H-L-M-NH2 | ||
| L290 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | 无 | L-W-A-T-G-H-F-M-NH2 | ||
| L291 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | 无 | Q-W-A-V-G-H-F-M-NH2 | ||
| L292 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | QRLGN | Q-W-A-V-G-H-L-M-NH2 | ||
| L293 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基 | QRYGN | Q-W-A-V-G-H-L-M-NH2 | ||
| -7，12-二羟基胆烷-24-酸 | |||||||||
| L294 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | (3β，5β，7α1，2α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | QKYGN | Q-W-A-V-G-H-L-M-NH2 |
| L295 | - | - | - | - | Pglu-Q-Lys(DO3A-一酰胺) | Gly | (3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸 | LG-N | Q-W-A-V-G-H-L-M-NH2 |
| L304 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | 3-氨基-3-脱氧胆酸 | 无 | QRYGNQWAVGHLM-NH2 |
| L305 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | 3-氨基-3-脱氧胆酸 | 无 | QKYGNQWAVGHLM-NH2 |
| L306 | - | - | - | - | DO3A-一酰胺 | Gly | 3-氨基-3-脱氧胆酸 | 无 | 见图38靶向肽的结构 |
2D.其它连接基
可以在连接基N-O-P内使用的其它连接基包括用于将GRP受体靶向肽偶联至金属螯合剂或光标记上同时不会不利地影响GRP受体靶向肽的靶向功能或金属螯合剂的金属络合功能或光标记的检测能力的化学基团。适宜的其它连接基包括单独的肽(即连接在一起的氨基酸)、非肽基团(例如烃链)或氨基酸序列和非肽间隔基的组合。
在一个实施方案中，在连接基N-O-P内使用的其它连接基包括L-谷氨酰胺和烃链或它们的组合。
在另一个实施方案中，在连接基N-O-P内使用的其它连接基包括由一系列氨基酸(例如二甘氨酸、三甘氨酸、gly-gly-glu、gly-ser-gly等)组成的纯肽连接基团，其中聚合链中GRP受体靶向肽的N-末端残基与金属螯合剂或光标记之间的原子总数为≤12个原子。
在另一个实施方案中，在连接基N-O-P内使用的其它连接基还可以包括烃链[即R1-(CH2)n-R2]，其中n为0-10，优选n＝3-9，R1为可以用作共价连接配体骨架或预先形成的金属螯合剂或金属络合骨架或光标记的位点的基团(例如H2N-、HS-、-COOH)；而R2为用于共价偶联至GRP受体靶向肽的N-末端NH2-基团的基团(例如R2为活化的COOH基团)。多种用于将配体(即螯合剂)或优选的金属螯合物偶联至生物分子上的化学方法已在文献中作了描述[Wilbur，1992；Parker，1990；Hermanson，1996；Frizberg等人，1995]。一种或多种这些方法可以用于将未络合的配体(螯合剂)或放射金属螯合物或光标记连接到连接基或者将连接基连接到GRP受体靶向肽上。这些方法包括形成酸酐、醛、芳基异硫氰酸酯、活化的酯或N-羟基琥珀酰亚胺[Wilbur，1992；Parker，1990；Hermanson，1996；Frizberg等人，1995]。
在一个优选的实施方案中，在连接基N-O-P内使用的其它连接基可以由下述的具有亲电体或亲核体的连接基前体形成：
LP1：在连接基至少2个位置上具有相同的亲电体E1或相同的亲核体Nu1的连接基前体；
LP2：具有亲电体E1和在连接基的另一位置的不同亲电体E2的连接基前体；
LP3：具有亲核体Nu1和在连接基的另一位置的不同亲核体Nu2的连接基前体；或者
LP4：一个末端以亲电体E1官能化和另一末端以亲核体Nu1官能化的连接基前体。
优选的亲核体Nu1/Nu2包括-OH、-NH、-NR、-SH、-HN-NH2、-RN-NH2和-RN-NHR′，其中R′和R独立地选自上述关于R的定义，除了R′不为H。
优选的亲电体E1/E2包括-COOH、-CH＝O(醛)、-CR＝OR′(酮)、-RN-C＝S、-RN-C＝O、-S-S-2-吡啶基、-SO2-Y、-CH2C(＝O)Y和
其中Y可以选自以下基团：
3.GRP受体靶向肽
GRP受体靶向肽(即式M-N-O-P-G中的G)为任何肽、其等同物、衍生物或类似物，它对GRP受体家族具有结合亲和力。
GRP受体靶向肽可以是激动剂或拮抗剂的形式。已知GRP受体靶向肽激动剂在以高度亲和力结合之后“激活”细胞，并可以被细胞内化。相反，已知GRP受体靶向肽拮抗剂仅与细胞上的GRP受体结合而不被细胞内化，且不“激活”细胞。在一个优选的实施方案中，GRP受体靶向肽为激动剂。
在本发明的一个更优选的实施方案中，GRP激动剂为蛙皮素(BBN)类似物和/或其衍生物。BBN衍生物或其类似物优选包含BBN结合区的相同一级结构(即BBN(7-14)[SEQ ID NO：1])或类似的一级结构，具有以比单独的BBN更好或类似的结合亲和力与GRP受体发生特异性结合的特定氨基酸置换(即Kd＜25nM)。适宜的化合物包括肽、肽模拟物及其类似物和衍生物。BBN-14位L-蛋氨酸(Met)的存在一般将赋予激动剂特性，而BBN-14位该残基的缺乏一般将赋予拮抗剂特性[Hoffken，1994]。某些有用的蛙皮素类似物公开在美国专利公开2003/0224998中，所述文献在此被全文引用。
现有技术已记载在BBN(8-14)结合区存在一些和选择数目的特异性氨基酸置换(例如D-Ala11置换L-Gly11或D-Trp8置换L-Trp8)，所述置换可以在不减小结合亲和力的情况下完成[Leban等人，1994；Qin等人，1994；Jensen等人，1993]。此外，某些氨基酸链或其它基团与BBN-8位(即Trp8残基)的N-末端胺基的连接可以大幅减小BBN类似物与GRP受体的结合亲和力[Davis等人，1992；Hoffken，1994；Moody等人，1996；Coy等人，1988；Cai等人，1994]。在少数情况下，可以附加额外的氨基酸或化学部分而不减小结合亲和力。
BBN受体靶向肽的类似物包括以比BBN更大或相同的亲和力靶向GRP受体的分子以及GRP或BBN的突变蛋白质、逆肽(retro-peptide)和逆-反向-肽(retro-inverso-peptide)。本领域技术人员将认识到这些类似物还可以包含修饰，所述修饰包括置换和/或缺失和/或添加一个或多个氨基酸，条件是这些修修饰没有不利地改变本文所述的肽的生物活性。这些置换可以通过用它们的同义氨基酸置换一个或多个氨基酸来完成。一组内的同义氨基酸定义为具有充足的物理化学性能以允许组内成员之间进行置换而保持分子的生物功能的氨基酸。
氨基酸的缺失或插入也可以引入所定义的序列，条件是它们不改变该序列的生物功能。优选这些插入或缺失应该限于1、2、3、4或5个氨基酸，且不应除去或者物理破坏或替换对功能构象来说重要的氨基酸。本文所述的GRP受体靶向肽的突变蛋白质具有与本发明说明书公开的序列同源的序列，其中在一个或多个氨基酸位置存在氨基酸置换、缺失或插入。突变蛋白质的生物活性至少为本文所述肽的40％，优选至少50％，更优选60-70％，最优选80-90％。但是，它们还可以具有大于特别例举的肽的生物活性，并因此不必一定要与所例举的肽的生物功能完全相同。GRP受体靶向肽的类似物还包括将改变引入肽骨架的酰胺键，包括硫代酰胺、亚甲基胺和E-烯烃的肽模拟物或假肽。而且基于GRP、BBN的结构的肽或氨基酸被N-取代的肼羰基化合物替换的其肽类似物(还已知为氮杂氨基酸)也包括在这里所用的术语类似物中。
取决于所选择的螯合剂，所述GRP受体靶向肽可以通过多种不同方法来制备。通常所述肽可以最方便地通过肽合成技术中已建立和已知的技术来制备，所述技术例如固相肽合成(SPPS)方法。固相肽合成(SPPS)包括往与不溶性载体或基质如聚苯乙烯连接的生长的肽链上分步加入氨基酸残基。肽的C末端残基首先固定于可商购得到的载体上，其氨基用N-保护试剂如叔丁氧羰基(Boc)或芴基甲氧基羰基(Fmoc)保护。用适宜的脱保护剂除去氨基保护基，例如对于Boc用TFA，对于Fmoc用哌啶，加入下一个氨基酸残基(N-保护形式)和偶联剂如N，N′-二环己基碳二亚胺(DCC)或N，N′-二异丙基碳二亚胺(DIC)或2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)。在肽键形成后，从载体上洗去试剂。在加入最后的残基之后，用适宜的试剂如三氟乙酸(TFA)或氟化氢(HF)从载体上裂解肽。
然后可以通过使GRP受体靶向肽的Trp8残基的游离氨基与适宜的连接基官能团反应而偶联连接基以形成缀合物。以上讨论的螯合剂、连接基和靶向部分的完整构建体还可以在树脂上装配，然后通过适宜的试剂如三氟乙酸或HF裂解。
蛙皮素(7-14)经过体外和体内蛋白酶切割而缩短了肽的半衰期。多肽主链的酰胺键可被取代并保留活性，同时抵抗蛋白酶切割，这在文献中是熟知的。例如，为了减少或消除不需要的蛋白水解作用，或使血清稳定性减小导致生物活性降低或消失的其它降解途径，或为了限制或增加构象柔性，常常使用模拟现存构象或以所需方式改变构象的官能团取代肽主链内的酰胺键。这种修饰可增加结合亲和性或改善药动学行为。应了解肽合成领域的技术人员可对连接两个氨基酸的任何酰胺键(例如，靶向部分、连接基、螯合剂等中的酰胺键)进行下列酰胺键改变，预期所得肽可具有相同或更高的活性：插入α-N-甲基酰胺或主链硫代酰胺，除去羰基以产生关联仲胺，将一个氨基酸替换为氮杂-氨基酸以产生缩氨基脲衍生物，使用E-烯烃和取代E-烯烃作为酰胺键代用品。还可通过插入不稳定酰胺键的其中一种氨基酸的D-氨基酸，或通过α-甲基氨基酸衍生物来防止水解。还可用杂环如唑、吡咯烷酮、咪唑以及酮亚甲基(ketomethylene)和氟烯烃替代主链酰胺键。
在表4a中列出了一些具体的化合物，包括这种酰胺键修饰。表4a中所用各种酰胺键修饰的缩写词在下面说明：
表4A
| 表4A-优选的酰胺键修饰的类似物 | |||||||||
| 化合物 | M-N-O-P | BBN类似物 | |||||||
| L401 | DO3A-一酰胺-G-Abz4 | Nme-Q | W | A | V | G | H | L | M-NH2 |
| L402 | DO3A-一酰胺-G-Abz4 | Q-Ψ[CSNH] | W | A | V | G | H | L | M-NH2 |
| L403 | DO3A-一酰胺-G-Abz4 | Q-Ψ[CH2NH] | W | A | V | G | H | L | M-NH2 |
| L404 | DO3A-一酰胺-G-Abz4 | Q-Ψ[CH＝CH] | W | A | V | G | H | L | M-NH2 |
| L405 | DO3A-一酰胺-G-Abz4 | α-MeQ | W | A | V | G | H | L | M-NH2 |
| L406 | DO3A-一酰胺-G-Abz4 | Q | Nme-W | A | V | G | H | L | M-NH2 |
| L407 | DO3A-一酰胺-G-Abz4 | Q | W-Ψ[CSNH] | A | V | G | H | L | M-NH2 |
| L408 | DO3A-一酰胺-G-Abz4 | Q | W-Ψ[CH2NH] | A | V | G | H | L | M-NH2 |
| L409 | DO3A-一酰胺-G-Abz4 | Q | W-Ψ[CH＝CH] | A | V | G | H | L | M-NH2 |
| L410 | DO3A-一酰胺-G-Abz4 | Q | α-MeW | A | V | G | H | L | M-NH2 |
| L411 | DO3A-一酰胺-G-Abz4 | Q | W | Nme-A | V | G | H | L | M-NH2 |
| L412 | DO3A-一酰胺-G-Abz4 | Q | W | A-Ψ[CSNH] | V | G | H | L | M-NH2 |
| L413 | DO3A-一酰胺-G-Abz4 | Q | W | A-Ψ[CH2NH] | V | G | H | L | M-NH2 |
| L414 | DO3A-一酰胺-G-Abz4 | Q | W | Aib | V | G | H | L | M-NH2 |
| L415 | DO3A-一酰胺-G-Abz4 | Q | W | A | V | Sar | H | L | M-NH2 |
| L416 | DO3A-一酰胺-G-Abz4 | Q | W | A | V | G-Ψ[CSNH] | H | L | M-NH2 |
| L417 | DO3A-一酰胺-G-Abz4 | Q | W | A | V | G-Ψ[CH＝CH] | H | L | M-NH2 |
| L418 | DO3A-一酰胺-G-Abz4 | Q | W | A | V | Dala | H | L | M-NH2 |
| L419 | DO3A-一酰胺-G-Abz4 | Q | W | A | V | G | Nme-His | L | M-NH2 |
| L420 | DO3A-一酰胺-G-Abz4 | Q | W | A | V | G | H-Ψ[CSNH] | L | M-NH2 |
| L421 | DO3A-一酰胺-G-Abz4 | Q | W | A | V | G | H-Ψ[CH2NH] | L | M-NH2 |
| L422 | DO3A-一酰胺-G-Abz4 | Q | W | A | V | G | H-Ψ[CH＝CH] | L | M-NH2 |
| L423 | DO3A-一酰胺-G-Abz4 | Q | W | A | V | G | α-MeH | L | M-NH2 |
| L424 | DO3A-一酰胺-G-Abz4 | Q | W | A | V | G | H | Nme-L | M-NH2 |
| L425 | DO3A-一酰胺-G-Abz4 | Q | W | A | V | G | H | α-MeL | M-NH2 |
| L300 | DO3A-一酰胺-G-ABz4 | Q | W | A | V | G | H | F-L | NH2 |
4.标记和施用放射性药物化合物
可以通过配位化学技术中公知的多种方法在放射性药物缀合物中引入金属。如果金属为99mTc-一种优选的用于诊断成像的放射性核素，则可以使用以下一般方法形成锝络合物。通过以下方法形成肽-螯合剂缀合物溶液：首先将缀合物溶于水、稀酸或醇如乙醇的水溶液。然后任选将溶液脱气以除去溶解的氧。如果在肽中存在-SH基团，则可以任选使用巯基保护基如Acm(乙酰氨基甲基)、三苯甲基或其它巯基保护基保护巯基免于氧化。用适宜的试剂例如氢氧化钠除去巯基保护基，然后用有机酸如乙酸(pH 6.0-6.5)中和。作为可替代的选择，可以在锝螯合期间原位除去巯基保护基。在标记步骤中，将得自钼发生器的高锝酸钠与足量还原剂如氯化亚锡加到缀合物的溶液以还原锝，并使其在室温下静置或加热。可以例如用C-18 Sep Pak柱[MilliporeCorporation，Waters Chromatography Division，34 Maple Street，Milord，Massachusetts 01757]进行色谱处理或使用本领域技术人员已知的方法进行HPLC而将标记的缀合物与污染物99mTcO4 -和胶体99mTcO2分离。
在一个可替代选择的方法中，可以通过转螯合(transchelation)反应来完成标记。在此方法中，锝源是锝溶液，它在与所选择的螯合剂反应之前被还原或与不稳定的配体络合，从而有利于与所选择的螯合剂进行配体交换。用于转螯合的适宜配体的实例包括酒石酸盐、柠檬酸盐、葡萄糖酸盐和庚葡糖酸盐。可以认识到所述的缀合物可以用上述的技术标记，或者作为可替代的选择，螯合剂本身可以标记，然后与肽偶联形成缀合物：一种称为“预标记螯合物”方法的工艺。Re和Tc均在元素周期表的VIIB行，且它们是化学同族元素。因此在极大程度上，这两种金属与在体外和体内表现高稳定性的配体骨架的络合化学是相同的[Eckelman，1995]，且可以将类似的螯合剂和方法用于进行Re标记。许多用于与肽和蛋白形成稳定的放射金属络合物的99mTc或186/188Re络合物螯合+5氧化态的这些金属[Lister-James等人，1997]。这种氧化态可以将99mTc-或186/188Re选择地置于已与生物分子缀合的配体骨架中，这种骨架是由多种不同的99mTc(V)和/或186/188Re(V)弱螯合物构建的(例如99mTc-葡庚糖酸盐、柠檬酸盐、葡萄糖酸盐等)[Eckelman，1995；Lister-James等人，1997；Pollak等人，1996]。这些文献的内容在此均被全文引入作为参考。
5.诊断和治疗应用
如果用诊断和/或治疗上有用的金属或光标记进行标记，则本发明的化合物可以用于通过放射诊断、放射治疗和光成像技术中已建立的方法治疗和/或检测任何涉及GRP受体(或NMB受体)超表达的病理。[例如参见Bu shbaum，1995；Fischman等人，1993；Schubiger等人，1996；Lowbertz等人，1994；Krenning等人，1994；光染料的实例包括但不限于以下文献公开的光染料：WO 98/18497、WO 98/18496、WO98/18495、WO 98/18498、WO 98/53857、WO 96/17628、WO 97/18841、WO 96/23524、WO 98/47538及其引述的参考资料，其内容在此均被全文引入作为参考。
GRP-R表达在许多人肿瘤中高度上调。例如参见WO99/62563。因此，本发明的化合物可以广泛地用于治疗和诊断癌症，包括前列腺癌(原发性和转移性)、乳腺癌(原发性和转移性)、结肠癌、胃癌、胰腺癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、胃泌素瘤、黑素瘤、恶性胶质瘤、成神经细胞瘤、子宫平滑肌肉瘤、前列腺上皮内瘤[PIN]和卵巢癌。此外，本发明的化合物可以用于区分其中GRP受体上调和没有上调的病症(例如分别为慢性胰腺炎和胰腺导管癌)。
在实施例中更为详细说明的本发明的化合物在体内比不具有本文公开的新连接基的化合物表现出更大的特异性和更高的肿瘤摄取，对表达GRP受体的肿瘤表现出改进的靶向能力，并因此用于对这些组织成像或递送放射治疗。实际上，如实施例所示，使用本发明的化合物进行的放射治疗更为有效(且存活时间增加)。
这些化合物的诊断应用可以是作为利用闪烁、光学、声致发光或光声成像进行的肿瘤细胞存在的一线诊断筛选，或者作为在放射免疫指导的外科手术(RIGS)领域利用手持放射检测仪器靶向肿瘤组织的活性剂，作为一种在施用配对的放射治疗化合物之前获得放射量测定数据的手段，以及作为评价GRP受体群体作为治疗对时间的函数的方法。
这些化合物的治疗应用可以定义为一种用作癌症治疗中的一线治疗的药剂，作为可以将这些药剂与辅助化学治疗联合使用的联合治疗，和/或作为配对的治疗剂。配对的概念指可以根据已选择用于与适宜的螯合物结合的放射金属而定既可充当诊断剂又可充当治疗剂的单一的未金属化化合物。如果该螯合剂不能适应需要的金属，则可以进行适宜的取代以适应不同的金属，同时保持药理学，使得诊断化合物的体内表现可以用于预测放射治疗化合物的表现。如果与辅助化学治疗联合使用，则可以使用任何适宜的化学治疗剂，例如包括抗肿瘤药如铂化合物(例如螺铂、顺铂和卡波铂)、氨甲蝶呤、阿霉素、丝裂霉素、柄型菌素、博来霉素、胞嘧啶、阿糖胞苷、阿糖腺苷、巯基聚赖氨酸、长春新碱、白消安、苯丁酸氮芥、美法仑(例如PAM、a、L-PAM或苯丙氨酸氮芥)、巯基嘌呤、米托坦、盐酸丙卡巴肼、放线菌素(放线菌素D)、盐酸柔红霉素、盐酸阿霉素、紫杉酚、丝裂霉素、普卡霉素(光辉霉素)、氨基格鲁米特、雌莫司汀磷酸钠、氟他米特、乙酸亮丙瑞林、乙酸甲地孕酮、柠檬酸它莫西芬、睾内酯、曲洛司坦、安吖啶(m-AMSA)、天冬酰胺酶(L-天冬酰胺酶)、Erwina天冬酰胺酶、依托泊苷-(VP-16)、干扰素α-2a、干扰素α-2b、替尼泊苷(VM-26)、硫酸长春碱(VLB)和阿拉伯糖基。在某些实施方案中，治疗剂可以是单克隆抗体，例如能够与黑素瘤抗原结合的单克隆抗体。
可以通过在可药用的载体和/或溶液，例如盐溶液如等渗盐水中进行例如静脉内、皮下或腹膜内注射而将用放射性核素金属，例如99mTc标记的缀合物施用于哺乳动物，包括人患者或受试者。本发明提供的放射性标记的闪烁显像剂具有适宜的放射性量。在形成99mTc放射性络合物过程中，一般优选形成包含放射性浓度为大约0.01毫居里(mCi)-100mCi/mL的放射性络合物溶液。一般地，待施用的单位剂量的放射性为大约0.01mCi至大约100mCi，优选1mCi至30mCi。以单位剂量待注射的溶液为大约0.01mL到大约10mL。适于施用的标记的缀合物的数量取决于选择的缀合物的分布曲线，其含义是快速清除的缀合物可能需要以比清除较慢的缀合物更高的剂量施用。可以通过标准闪烁技术在施用后的适宜时间追踪体内分布和定位；所述时间取决于在靶部位的蓄积速率相对于在非靶组织的清除率，一般为30分钟至180分钟。例如，在给患者注射诊断性放射性核素标记的本发明的化合物之后，可以将针对在显像剂中引入的核素的γ-射线能量进行校准的γ-照相机用于对药剂摄入区域进行成像，并对该部位存在的放射性量进行定量。体内部位成像可以在数分钟内发生。但是，如果需要的话，成像可以在放射性标记的肽注入患者之后数小时或甚至更长时间发生。在大部分的情况下，足量的施用剂量将在大约0.1小时内在待成像的区域蓄积以允许拍摄闪烁照相图。
可以将本发明的化合物单独或作为包含其它组分如赋形剂、稀释剂、自由基清除剂、稳定剂和载体的组合物的一部分施用于患者，所有上述的组分在本领域中是已知的。可以将该化合物经静脉内或腹膜内施用于患者。
本发明具有许多优点。根据本发明制备的化合物形成稳定、清楚限定的99mTc或186/188Re标记的化合物。类似的本发明的化合物也可以通过使用对各种放射性金属的适宜螯合剂骨架来制备，以形成稳定、清楚限定的153Sm、90Y、166Ho、105Rh、199Au、149Pm、177Lu、111In或其它放射性金属标记的产物。放射性标记的GRP受体靶向肽与表达GRP受体的肿瘤细胞选择性结合，并且如果使用激动剂的话，被内化并在肿瘤细胞内长期保留。未到达(即不结合)癌细胞的放射性物质优选有效地排泄进入尿液，放射金属在肾脏中保留极少。
6.光成像、声致发光、光声成像和光治疗
根据本发明，可以将许多光学参数用于在给患者注射光标记的本发明化合物之后用体内光成像来确定靶体的位置。在图像制备中待检测的光参数可以包括传送的辐射、吸收、荧光或磷光发射、光反射、吸收幅度或最大值的改变和弹性散射辐射。例如，生物组织对波长范围为650-1000nm的近红外(NIR)光相对透光。NIR照射可以穿透组织达数厘米，允许使用本发明化合物对含靶体的组织进行体内成像。可见和近红外(NIR)光在临床实践中的使用迅速增长。在电磁波谱的可见、NIR或长波长(UV-A，＞350nm)区吸收或发射的化合物可能用于光学断层照相成像、内窥镜可视化和光治疗。
生物医学光学的一个主要优点是它的治疗潜能。已证明光治疗是一种用于治疗多种表面损伤(外伤和内伤)的安全和有效的方法。染料对于增强信号检测和/或使组织在光成像和光治疗中具有感光性是重要的。先前的研究已表明，某些染料可以定位在肿瘤，并用作检测和治疗小癌的强有力探针(D.A.Bellnier等人，Murinepharmacokinetics and antitumor efficacy of the photodynamicsensitizer 2-[1-hexyloxyethyl]-2-devinyl pyropheophorbide-a，J.Photochem.Photobiol.，1993，20，pp.55-61；G.A.Wagnieres等人，In vivo fluorescence spectroscopy and imaging foroncological applications，Photochem.Photobiol.，1998，68，pp.603-632；J.S.Reynolds等人，Imaging of spontaneous caninemammary tumors using fluorescent contrast agents，Photochem.Photobiol.，1999，70，pp.87-94)。所有这些所列文献的内容在此均被全文引入作为参考。但是，这些染料不优先定位在恶性组织中。
在一个例举性实施方案中，本发明的化合物可以与光标记物缀合，所述光标记物例如光染料，包括有机发色团或荧光团，具有广泛的离域环系统且吸收或发射最大值范围为400-1500nm。本发明的化合物可选择性地用生物发光分子衍生。对光标记物的优选的最大吸收范围为600-1000nm以使对来自血红蛋白的信号的干扰最小。优选光吸收标记具有大摩尔吸光系数，例如＞105cm-1M-1，而荧光性光染料具有高量子产额。光染料的实例包括但不限于在US 6,641,798，WO 98/18497、WO 98/18496、WO 98/18495、WO 98/18498、WO 98/53857、WO 96/17628、WO 97/18841、WO 96/23524、WO 98/47538及其引述的参考资料所述的光染料，这些文献的内容在此均被全文引入作为参考。例如，光标记物可以直接共价连接到本发明的化合物，例如包含GRP受体靶向肽和本发明的连接基的化合物。许多在电磁光谱的可见和近红外区吸收和发射光的染料由于它们的生物相容性、高摩尔吸光系数和/或高荧光量子产额目前正被用于多种生物医学应用。与作为对比剂的染料结合的光形态的高度敏感性与核医学的类似，并允许在无不期望的电离辐射作用的情况下使器官和组织可见。在近红外(NIR)区具有强烈吸收和发射的花青染料是特别有用的，因为生物组织在该区透光(B.C.Wilson，Optical properties of tissues.Encyclopedia of HumanBiology，1991，5，587-597)。例如，在NIR区吸收和发射的吲哚花青绿已用于监测心输出量、肝功能和肝血流(Y-L.He，H.Tanigami，H.Ueyama，T.Mashimo，andI.Yoshiya，Measurement of blood volumeusing indocyanine green measured with pulse-spectrometry：Itsreproducibility and reliability.Critical Care Medicine，1998，26(8)，1446-1451；J.Caesar，S.Shaldon，L.Chiandussi，etal.，The use of Indocyanine green in the measurement of hepaticblood flow and as a test of hepatic function.Clin.Sci.1961，21，43-57)，且它的官能化衍生物已用于缀合生物分子以用于诊断目的(R.B.Mujumdar，L.A.Ernst，S.R.Mujumdar等人，Cyanine dyelabeling reagents：Sulfoindocyanine Succinimidyl esters.Bioconjugate Chemistry，1993，4(2)，105-111；Linda G.Lee and SamL.Woo.″N-Heteroaromaticion and iminium ion substituted cyaninedyes for use as fluorescent labels″，U.S.Pat.No.5,453,505；Eric Hohenschuh等人″Light imaging contrast agents″，WO98/48846；Jonathan Turner等人″Optical diagnostic agents for thediagnosis of neurodegenerative diseases by means of nearinfra-red radiation″，WO98/22146；Kai Licha等人″In-vivodiagnostic process by near infrared radiation″，WO96/17628；Robert A.Snow等人，Compounds，WO 98/48838，US 6,641,798。所有这些所列文献的内容在此均被全文引入作为参考。
在注射光标记化合物之后，用适于在药剂中所用的光标记的波长范围的一个或多个光源(例如激光)扫描患者。所用的光可以是单色或多色的和连续或脉冲的。通过调至一个或多个波长的光检测器检测透射、散射或反射的光以确定对象中含靶的组织(例如含GRP的组织)的位置。可以随时间监测光参数的改变以检测靶部位(例如肿瘤或其它具有GRP受体的部位)光标记的试剂的蓄积。可以将标准图像加工和检测设备与本发明的光成像试剂联合使用。
上述的光成像试剂还可以用于采用光标记的显像剂进行的声-光或声致发光成像(参见U.S.5,171,298、WO 98/57666及其参考资料)。在声-光成像中，将超声照射应用于受试者，并影响透射、发射或反射光的光参数。在声致发光成像中，所用的超声实际上产生被检测的光。使用这些技术的适宜的成像方法在WO 98/57666中作了描述。
在以下文献中描述了各种成像技术和试剂：美国专利6,663,847、6,656,451、6,641,798、6,485,704、6,423,547、6,395,257、6,280,703、6,277,841、6,264,920、6,264,919、6,228,344、6,217,848、6,190,641、6,183,726、6,180,087、6,180,086、6,180,085、6,013,243和公开的美国专利申请2003185756、20031656432、2003158127、2003152577、2003143159、2003105300、2003105299、2003072763、2003036538、2003031627、2003017164、2002169107、2002164287和2002156117，所有这些文献在此均被引入作为参考。
7.放射治疗
放射性同位素治疗包括施用足量的放射性标记的化合物以损伤或破坏靶向的组织。在施用化合物(例如通过静脉内、皮下或腹膜内注射)之后，放射性标记的药物优先定位在病患部位(在此情况下为表达GRP受体的肿瘤组织或其它组织)。一旦定位，该放射性标记的化合物就以在所施用的同位素的放射性衰减期间释放的能量损坏或破坏病患组织。如本文讨论，本发明还包括联合使用放射治疗和辅助化学治疗(或者与任何其它适宜的治疗剂联用)。
成功的放射治疗的设计涉及若干关键因素：
1.选择适宜的靶向基团以递送放射性至病患部位；
2.选择释放足够能量以破坏病患部位的适宜的放射性核素，并基本上不破坏相邻的正常组织；和
3.选择适宜的靶向基团与放射性核素的组合，不会不利地影响这种缀合物在病患部位定位的能力。对于放射性金属而言，这通常涉及这样的螯合基团：这种基团与放射性核素紧密地配位，结合将该螯合物偶联至靶向基团的连接基，且这种基团影响化合物的总生物分布以使靶组织的摄入最大化，并使正常、非靶器官的摄入最小化。
本发明通过适宜地选择靶向基团、放射性核素、金属螯合物和连接基而提供满足以上全部三个标准的放射治疗剂。
放射治疗剂可以包含来自已知为镧系元素类(原子序数57-71的元素)的螯合的3+金属离子和它们的类似物(即M3+金属如钇和铟)。在此种类中典型的放射性金属包括同位素90-钇、111-铟、149-钷、153-钐、166-镝、166-钬、175-镱和177-镥。所有这些金属(和镧系中的其它金属)具有非常类似的化学，它们保持+3氧化态，并优选与含有硬(氧/氮)供体原子的配体螯合，典型的为已知螯合物DTPA(二亚乙基三胺五乙酸)的衍生物和多氮杂-多羧酸大环如DOTA(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-N，N′，N″，N-四乙酸及其相近的类似物。这些完全去质子化形式的螯合配体的结构如以下所示。
这些螯合配体通过多个氮和氧原子与放射金属结合而将其包封，从而防止游离(未结合)的放射金属释放进入体内。这是重要的，因为3+放射金属由其螯合物的体内解离可以导致在肝、骨和脾中放射金属的摄取[Brechbiel MW，Gansow OA，″Backbone-substituted DTPAligands for 90Y radioimmunotherapy″，Bioconj.Chem.1991；2：187-194；Li，WP，Ma DS，Higginbotham C，Hoffman T，Ketring AR，Cutler CS，Jurisson，SS，″Development of an in vitro model forassessing the in vivo stabilityof lanthanide chelates.″Nucl.Med.Biol.2001；28(2)：145-154；Kasokat T，Urich K，Arzneim.-Forsch，″Quantification of dechelation ofgadopentetate dimeglumine in rats″，1992；42(6)：869-76]。除非配体特异性地靶向于这些器官，这些非特异性摄取是非常不期望的，因为它导致非靶组织的非特异性照射，从而可能导致诸如由于骨髓照射造成的造血抑制的问题。
关于放射治疗应用，可以使用本文公开的任何治疗性放射性核素的螯合剂。但是，DOTA螯合物形式[Tweedle MF，Gaughan GT，HaganJT，″1-Substituted-1，4，7-triscarboxymethyl-1，4，7，10-teraazacyclodecane and analogs.″美国专利4,885,363，Dec.5，1989]是特别优选的，因为DOTA螯合物预期在体内比DTPA或其它线性螯合物较少去螯合。化合物L64和L70(当用适宜的治疗性放射性核素标记时)特别优选用于放射治疗。
通过连接基将DOTA型大环偶联至靶向基团的方法(例如通过活化DOTA的羧酸之一以形成活性酯，然后使其与连接基上的氨基反应以形成稳定的酰胺键)对本领域技术人员来说是已知的(例如参见Tweedle等人，美国专利4,885,363)。还可以对在多氮杂环骨架上修饰的DOTA型大环进行偶联。
用于特定的放射治疗应用的适当核素的选择取决于多种因素，包括
a.物理半衰期-它应该足够长以允许从放射金属和缀合物合成并纯化放射治疗构建体，并将该构建体递送至注射部位，并在注射前无明显的放射性衰减。优选放射性核素应该具有大约0.5-8天的物理半衰期。
b.放射性核素发射的能量-作为粒子发射体(例如α-发射体、β-发射体和Auger电子发射体)的放射性核素是特别有用的，因为它们发射在短距离内蓄积其能量从而产生高度局部化的破坏的高能粒子。β-发射放射性核素是特别优选的，因为来自这些同位素的β-粒子发射的能量在5至大约150个细胞直径内蓄积。由这些核素制备的放射治疗剂能够杀死与它们的定位部位相对接近的病患细胞，但不能长距离行进以破坏相邻正常组织如骨髓。
c.比活性(即放射性/放射性核素质量)-具有高比活性的放射性核素(例如发生器产生的90-Y、111-In、177-Lu)是特别优选的。放射性核素的比活性由它的生产方法、用于生产它的特定靶体和所讨论的同位素的特性来决定。
许多镧系元素包括具有使它们适于用作放射治疗剂的核特性的放射性同位素，因为它们发射β-粒子。这些当中的一些列于下表。
| 同位素 | 半衰期(天) | 最大b-能量(MeV) | γ能量(keV) | b-粒子的大致范围(细胞直径) |
| 149-Pm | 2.21 | 1.1 | 286 | 60 |
| 153-Sm | 1.93 | 0.69 | 103 | 30 |
| 166-Dy | 3.40 | 0.40 | 82.5 | 15 |
| 166-Ho | 1.12 | 1.8 | 80.6 | 117 |
| 175-Yb | 4.19 | 0.47 | 396 | 17 |
| 177-Lu | 6.71 | 0.50 | 208 | 20 |
| 90-Y | 2.67 | 2.28 | - | 150 |
| 111-In | 2.810 | Auger电子发射体 | 173，247 | ＜5μm |
Pm：钷，Sm：钐，Dy：镝，Ho：钬，Yb：镱，Lu：镥，Y：钇，In：铟
放射金属如β-发射镧系放射性同位素的制备方法在本领域中是已知的，并已在其它地方公开[例如Cutler CS，Smith CJ，Ehrhardt GJ.；Tyler TT，Jurisson SS，Deutsch E.″Current and potentialtherapeutic uses of lanthanide radioisotopes.″Cancer Biother.Radiopharm.2000；15(6)：531-545]。许多这些同位素可以高产率和较低成本地产生，且许多(例如90-Y、149-Pm、177-Lu)可以以接近无载体的比活性产生(即大部分的原子是放射性的)。由于非放射性原子可以与它们的放射性类似物竞争与靶组织上的受体结合，因此使用具有高比活性的放射性同位素是重要的，以允许递送尽可能高剂量的放射性至靶组织。
含有β-发射同位素铼(186-Re和188-Re)的本发明的放射治疗衍生物也是特别优选的。
8.剂量和添加剂
本发明化合物的适宜剂量方案对于本领域技术人员来说是已知的。该化合物可以用许多方法施用，所述方法包括但不限于单一或多次IV或IP注射。对于放射性药物，施用的放射性的量足以允许成像或在放射治疗的情况下导致破坏或除去含靶向的GRP-R的组织，但不至于造成非靶体(正常部位)发生实质性损伤。闪烁成像所需的量和剂量在上文作了讨论。放射治疗所需的量和剂量对于不同的构建体也是不同的，它取决于所用的同位素的能量和半衰期、体内试剂的摄取和清除程度以及肿瘤的质量。一般地，剂量范围可以从大约30-50mCi的单一剂量至高达大约3居里的累积剂量。
对于光成像化合物而言，足以获得所需像增强的剂量是本领域技术人员已知的且可根据所用染料或其它化合物、待成像的器官或组织、所用成像设备等而广泛变化。
本发明的组合物可以包括生理学上可接受的缓冲剂，并可能需要照射稳定剂以防止在注射前化合物发生辐射分解破坏。放射稳定剂对本领域技术人员来说是已知的，并可以包括例如对氨基苯甲酸、抗坏血酸、龙胆酸等。
包含制备本发明的诊断或治疗剂所需的所有组分的单瓶或多瓶试剂盒是本发明的一个组成部分。在放射性药物的情况下，这些试剂盒通常包括除了放射性核素之外的所有必需的成分。
例如，用于制备本发明的放射性药物的单瓶试剂盒优选包含式M-N-O-P-G的螯合剂/连接基/靶向肽缀合物，一种亚锡盐来源(如果需要还原，例如在使用锝的时候)或其它可药用的还原剂，并用可药用的酸或碱适宜地缓冲以调节pH至大约3至大约9的值。所用的还原剂的数量和类型将高度取决于待形成的交换络合物的性质。适宜的条件对本领域技术人员来说是已知的。优选试剂盒内容物为冻干形式。这种单瓶试剂盒可以任选包含不稳定或交换配体，例如葡糖庚酸盐、葡萄糖酸盐、甘露醇、苹果酸盐、柠檬酸或酒石酸，并还可以包含反应修饰剂如二亚乙基三胺-五乙酸(DPTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)，或者α、β或γ-环糊精，用于改善最终产物的放射化学纯度和稳定性。该试剂盒还可以包含稳定剂、膨胀剂如甘露醇，它们设计用于辅助冻干工艺，和本领域技术人员已知的其它添加剂。
多瓶试剂盒优选包含相同的常规组分，但使用多于一个的小瓶以重组放射性药物。例如，一个小瓶可以包含所有在加入高锝酸盐时形成不稳定的Tc(V)络合物所需的成分(例如亚锡源或其它还原剂)。将高锝酸盐加到此小瓶，并在等待适宜的时间之后将此小瓶的内容物加到包含螯合剂和靶向肽以及适于将pH调节至其最佳值的缓冲剂的第二小瓶。在大约5至60分钟的反应时间之后，形成本发明的络合物。有利的是此多瓶试剂盒的两个小瓶的内容物均被冻干。如上所述，反应修饰剂、交换配体、稳定剂、膨胀剂等可以存在于任一个或两个小瓶中。
化合物的一般制备
取决于所选择的螯合剂，本发明的化合物可以通过多种方法制备。化合物的肽部分可以最为便利地由肽合成技术中已建立和已知的技术，例如固相肽合成(SPPS)方法来制备。因为要进行固相合成，因此使用交替FMOC保护和脱保护是优选的制备短肽的方法。重组DNA技术优选用于生产蛋白和它的长片段。
固相肽合成(SPPS)包括往与不溶性载体或基质如聚苯乙烯连接的生长的肽链上分步加入氨基酸残基。所述肽的C末端残基首先固定于可商购得到的载体上，其氨基用N-保护剂如叔丁氧羰基(Boc)或芴基甲氧基羰基(Fmoc)保护。用适宜的脱保护剂除去氨基保护基，对于Boc为TFA，或对于Fmoc为哌啶，并加入下一个氨基酸残基(N-保护形式)和偶联剂如二异丙基碳二亚胺(DIC)。在肽键形成后，从载体上洗去试剂。在加入最后的残基之后，用适宜的试剂如三氟乙酸(TFA)或氟化氢(HF)从载体上裂解肽。
通过分段偶联可替代选择地制备化合物
本发明的化合物还可以通过本领域中称为分段偶联(segmentcoupling)或片段缩合的方法来制备(Barlos，K.和Gatos，D.；2002″Convergent Peptide Synthesis″in Fmoc Solid Phase Synthesis-APractical Approach；Eds.Chan，W.C.和White，P.D.；OxfordUniversity Press，New York；Chap.9，pp 215-228)。在此方法中，通过液相合成或固相合成或这两种方法的组合分别制备通常为侧链保护形式的肽的片段。片段的选择是关键的，且用可以提供易处理数目的片段的分割策略来进行选择，所述片段的C-末端残基和N-末端残基设计用于提供肽合成中最干净利落的偶联。最好片段的C-末端残基缺少手性α碳(甘氨酸或其它部分，在偶联步骤中在待活化的羧基的碳∝处为非手性)，或者包含在活化和偶联期间的外消旋化倾向是可能选择中最低的氨基酸。各片段的N-末端氨基酸的选择基于将活化的酰基中间产物偶联至氨基的容易程度。一旦选择分割策略，则根据所需的中间产物的合成可达性和所得产物的处理和纯化(如果需要的话)的相对容易性来选择各片段的偶联方法。然后将片段偶联在一起，所述片段都在溶液中，或者一个在固体相而另一个在溶液中，从而制备完全或部分保护形式的最终结构。
然后除去受保护的目标化合物的保护基，纯化，并分离得到最终期望的产物。分段偶联方法的优点是各个片段可以分别纯化，允许除去副产物，如由不完全偶联得到的删除序列，或者衍生自反应如偶联步骤中侧链酰胺脱水，或在Fmoc基团脱保护期间将侧链(如Gln的侧链)内环化至α-氨基。这些副产物都会存在于常规的基于树脂的“直通”肽链装配的最终产物中，如果需要的话可以在分段偶联策略的许多阶段除去这些物质。分段偶联策略的另一个重要的优点是可以应用不同的溶剂、试剂和条件以将各片段的合成最优化至高纯度和产率，导致最终产物的纯度和产率得到提高。其它意识到的优点是试剂消耗减少和成本降低。
实施例
提供以下实施例作为可以用于制备本发明多种化合物的不同方法的实例。在各个实施例中，存在用单一黑体大写字母(例如A、B、C)标识的化合物，其与在图中相同标记的对应化合物相关。
一般实验
A.所用其它缩写词的定义
在整个说明书中使用以下常用缩写：
1，1-二甲基乙氧基羰基(Boc或Boc)；
9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)；
烯丙氧基羰基(Aloc)；
1-羟基苯并三唑(HOBt或HOBT)；
N，N′-二异丙基碳二亚胺(DIC)；
N-甲基吡咯烷酮(NMP)；
乙酸酐(Ac2O)；
(4，4-二甲基-2，6-二氧代亚环己-1-基)-3-甲基丁基(iv-Dde)；
三氟乙酸(TFA)；
试剂B(TFA∶H2O∶苯酚∶三异丙基硅烷，88∶5∶5∶2)；
二异丙基乙胺(DIEA)；
O-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)；
O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)；
N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)；
固相肽合成(SPPS)；
二甲亚砜(DMSO)；
二氯甲烷(DCM)；
二甲基甲酰胺(DMF)；
二甲基乙酰胺(DMA)；
1，4，7，10-四氮杂环十四烷-1，4，7，10-四乙酸(DOTA)；
三异丙基硅烷(TIPS)；
1，4，7，10-四氮杂环十四烷-1，4，7，10-四乙酸(DOTA)
(1R)-1-[1，4，7，10-四氮杂-4，7，10-三(羧甲基)环十二烷基]乙烷-1，2-二甲酸(CMDOTA)；
胎牛血清(FBS)；
人血清白蛋白(HSA)；
人前列腺癌细胞系(PC3)；
氯甲酸异丁酯(IBCF)；
三丁基胺(TBA)；
放射化学纯度(RCP)；和
高效液相色谱(HPLC)。
B.材料
所用的Fmoc-保护的氨基酸购自Nova-Biochem(San Diego，CA，USA)，Advanced Chem Tech(Louisville，KY.，USA)、Chem-ImpexInternational(Wood Dale Ill.，USA)和Multiple PeptideSystems(San Diego，CA.，USA)。合成中所需的其它化学物质、试剂和吸附剂购自Aldrich Chemical Co.(Milwaukee，WI，USA)和VWRScientific Products(Bridgeport，NJ.，USA)。用于肽合成的溶剂购自Pharmco Co.(Brookfield CT.，USA)。用于HPLC分析和纯化的柱购自Waters Co.(Milford，MA.，USA)。以下给出非商购的物质的实验细节。
C.肽合成的仪器
使用Advanced ChemTech 496Ω MOS合成仪，Advanced ChemTech357FBS合成仪和/或通过人工肽合成来制备肽。但是，所用的反复脱保护和链延伸的方案对于所有方法来说是相同的。
D.采用Symphony仪器(Rainin制造)的自动合成
用Protein Technologies Inc.提供的Symphony(Version 3)进行合成。使用置换率为0.25mmol/g的Novagel TGR树脂，各孔包含0.2g树脂(50μmol)。将氨基酸溶于NMP，其浓度为0.25M。制备0.25M在DMF中的HBTU和N-甲基吗啉的溶液，并将其用于偶联。所有的偶联进行2.0小时。裂解在机器外通过将树脂转移至另一反应容器并使用如在人工合成中使用的试剂B完成。
E.用于分析和纯化的仪器
使用Shimadzu-LC-10A双泵梯度分析LC系统，采用用于系统控制、数据获取和运行后处理的Shimadzu-ClassVP软件4.1版完成分析HPLC。在Hewlett-Packard Series 1100 MSD质谱仪上获得质谱，其接口为Hewlett-Packard Series 1100双泵梯度HPLC系统，配备Agilent Technologies 1100 series自动取样器，适于直接流式注射或注射至Waters Associates XTerra MS C18柱(4.6mm×50mm，5μ颗粒，120孔)上。此仪器通过HP Kayak工作站，使用用于样品提交的′MSD Anyone′软件和用于仪器控制和数据获取的HP Chemstation软件来驱动。在大部分的情况下，通过使用注射5μL浓度为1mg/mL的样品溶液进行直接注射来引入样品，并使用阳离子电喷雾进行分析以得到用于确证结构的m/e和m/z(带多个电荷)离子。在VarianInnova波谱仪上于500MHz获得1H-NMR光谱。在相同的仪器上，于125.73MHz获得13C-NMR光谱。通常将残余的1H吸收，或者在13C-NMR的情况下所用溶剂的13C吸收用作内标；在其它情况下采用四甲基硅烷(δ＝0.00ppm)。以δ单位给出共振值。从Quantitative TechnologiesInc.Whitehouse NJ获得Micro分析数据。用Shimadzu-LC-8A双泵梯度制备HPLC系统，使用用于系统控制、数据获取、级分收集和运行后处理的Shimadzu-ClassVP软件4.3版完成制备HPLC。
F.用于肽合成的一般方法
将Rink酰胺-Novagel HL树脂(0.6mmol/g)用作固体载体。
G.偶联操作
在典型实验中，将第一氨基酸装载至0.1g树脂(0.06mmol)。将在NMP中的适宜的Fmoc-氨基酸(0.25M溶液；0.960mL)加到树脂，然后加入N-羟基苯并三唑(0.5M，在NMP中；0.48mL)，并将反应区(block)(在自动肽合成的情况下)或各反应容器(在人工肽合成的情况下)振荡大约2分钟。往以上混合物加入二异丙基碳二亚胺(0.5M，在NMP中；0.48mL)，并将反应混合物在室温下振荡4小时。然后通过应用干氮气正压力来清洗反应区或单独的反应容器内的反应物。
H.清洗操作
给反应区的每孔装填1.2mL NMP，并将该区振荡5分钟。在氮正压下排出溶液。重复此操作三次。在使用单独的容器进行人工合成的情况下使用相同的方法和适宜体积的NMP。
I.除去Fmoc保护基团
用1.5mL在DMF中的20％哌啶(v/v)处理带有Fmoc-保护的氨基酸的树脂，并将该反应区或单独的人工合成容器振荡15分钟。从树脂中排出溶液。重复此过程一次，并用上述的清洗方法洗树脂。
J.配体(DOTA和CMDOTA)的最终偶联
将树脂结合的肽连接基构建体的N-末端氨基去封闭，并洗涤树脂。制备0.25M在NMP中的目标配体和HBTU的溶液，并用两倍当量的DIEA进行处理。将所得的激活配体的溶液加到树脂(1.972mL；0.48mmol)，并将反应混合物在室温下振荡24-30小时。排出溶液并洗涤树脂。用1.5mL二氯甲烷(3X)完成树脂的最终洗涤。
K.最终肽的脱保护和纯化
将试剂B的溶液(2mL；88∶5∶5∶2-TFA∶苯酚∶水∶TIPS)加到树脂，并将反应区或单独的容器于室温下振荡4.5小时。将所得的包含脱保护肽的溶液排出至小瓶中。使用1mL试剂B再重复此过程2次。用Genevac HT-12 series II离心浓缩器减压浓缩合并的滤液。然后将各小瓶中残余物与2mL Et2O一起研磨，并弃去上清液。重复此方法两次以得到肽，为无色固体。将该粗肽溶于水/乙腈，并用WatersXTerra MS C18制备HPLC柱(50mm×19mm，5微米粒径，120孔径)或Waters-YMC C18 ODS柱(250mm×30mm i.d.，10微米粒径.120孔径)纯化。收集含产物的级分，并用HPLC分析。收集＞95％纯度的级分，并通过冻干分离肽。
制备型HPLC的条件(Waters XTerra柱)：
洗脱速率：50mL/分
检测：UV，λ＝220nm
洗脱剂A：0.1％TFA水溶液；洗脱剂B：乙腈(0.1％TFA)。
HPLC分析的条件：
柱：Waters XTerra(Waters Co.；4.6×50mm；MS C18；5微米粒子，120孔)。
洗脱速率：3mL/分；检测：UV，λ＝220nm。
洗脱剂A：0.1％TFA水溶液；洗脱剂B：乙腈(0.1％TFA)。
实施例I-图1A-B
合成L62
概述：如图1A-B所示，用以下步骤制备L62：
用NaOH水解(3β，5β)-3-氨基胆烷-24-酸甲酯A得到对应的酸B，然后与Fmoc-Cl反应得到中间产物C。使用八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2(BBN[7-14][SEQ ID NO：1])官能化的Rink酰胺树脂依次与C、Fmoc-甘氨酸和DOTA三叔丁酯反应。在用试剂B裂解和脱保护之后，用制备HPLC纯化粗品得到L62。总产率：2.5％。以下提供更多的细节：
A.用蛙皮素[7-14]官能化的Rink酰胺树脂，(A)
在固相肽合成容器(见附件No.1)中，将Fmoc-氨基酸(24mmol)、N-羟基苯并三唑(HOBt)(3.67g；24mmol)和N，N′-二异丙基碳二亚胺(DIC)(3.75mL；24mmol)依次加到在DMF(45mL)中的Rink酰胺NovaGelTM树脂(10g；6.0mmol)A的悬浮液。将混合物于室温下使用台式振荡器振荡3小时，然后排空溶液，并用DMF(5×45mL)洗涤树脂。将树脂与在DMF(45mL)中的25％哌啶一起振荡4分钟，倒空溶液，并加入新鲜的在DMF(45mL)中的25％哌啶。将该悬浮液振荡10分钟，然后倒空溶液，并用DMF(5×45mL)洗涤树脂。
将此方法依次用于以下氨基酸：
N-α-Fmoc-L-蛋氨酸、N-α-Fmoc-L-亮氨酸、N-α-Fmoc-Nim-三苯甲基-L-组氨酸、N-α-Fmoc-甘氨酸、N-α-Fmoc-L-缬氨酸、N-α-Fmoc-L-丙氨酸、N-α-Fmoc-Nin-Boc-L-色氨酸。
在最后的偶联反应中，将N-α-Fmoc-N-γ-三苯甲基-L-谷氨酰胺(14.6g；24mmol)、HOBt(3.67g；24mmol)和DIC(3.75mL；24mmol)加到在DMF(45mL)中的树脂。将该混合物于室温下振荡3小时，倒空溶液，并用DMF(5×45mL)、CH2Cl2(5×45mL)洗涤树脂，并进行真空干燥。
B.制备中间产物B和C(图1A)：
1.合成(3β，5β)-3-氨基胆烷-24-酸(B)
45℃下将1M NaOH溶液(16.6mL；16.6mmol)滴加到在MeOH(65mL)中的(3β，5β)-3-氨基胆烷-24-酸甲酯(5.0g；12.8mmol)的溶液。45℃下搅拌3小时后，将混合物浓缩至25mL，并加入H2O(40mL)和1MHCl(22mL)。将沉淀的固体过滤，用H2O(2×50mL)洗涤并真空干燥得到B，为一种白色固体(5.0g；13.3mmol)。产率80％。
2.合成(3β，5β)-3-(9H-芴-9-基甲氧基)氨基胆烷-24-酸(C)
将在1，4-二烷(9mL)中的9-芴基甲氧基羰基氯(0.76g；2.93mmol)的溶液滴加到在0℃下搅拌的在10％Na2CO3水溶液(16mL)和1，4-二烷(9mL)中的(3β，5β)-3-氨基胆烷-24-酸B(1.0g；2.66mmol)的悬浮液。室温下搅拌6小时后，加入H2O(90mL)，用Et2O(2×90mL)洗涤水相，然后加入2M HCl(15mL)(最终pH：1.5)。用EtOAc(2×100mL)萃取水相，用Na2SO4干燥有机相并蒸发。用快速色谱法纯化粗品得到C，为一种白色固体(1.2g；2.0mmol)。产率69％。
C.合成L62(N-[(3β，5β)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺)(图1B)：
将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将该悬浮液振荡20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将(3β，5β)-3-(9H-芴-9-基甲氧基)氨基胆烷-24-酸C(0.72g；1.2mmol)、N-羟基苯并三唑(HOBT)(0.18g；1.2mmol)、N，N′-二异丙基碳二亚胺(DIC)(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物于室温下振荡24小时，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物再振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将N-α-Fmoc-甘氨酸(0.79g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL：1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂。将混合物于室温下振荡3小时，倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，将混合物再振荡20分钟。倒空溶液，用DMA(5×7mL)洗涤树脂，然后将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(0.79g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL：1.2mmol)、DIEA(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加到树脂。将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液，用DMA(5×7mL)和CH2Cl2(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，将其与Et2O(20mL)一起研磨得到一种沉淀。离心收集沉淀，并用Et2O(3×20mL)洗涤，然后用HPLC分析，并用制备HPLC纯化。将含产物的级分冻干得到L62(6.6mg；3.8×10-3mmol)，为一种白色固体。产率4.5％。
实施例II-图2A-F
合成L70、L73、L74、L115和L116
概述：通过以下方法获得产物：将担载在Rink酰胺树脂上的八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2(BBN[7-14][SEQ ID NO：1])(具有适宜的侧链保护)与不同的连接基偶联，然后用DOTA三叔丁酯官能化。在用试剂B裂解和脱保护之后，通过制备HPLC纯化最终产物。总产率3-9％。
A.合成L70(图2A)：
将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将Fmoc-4-氨基苯甲酸(0.43g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物在室温下振荡3小时，倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将Fmoc-甘氨酸(0.36g；1.2mmol)、HATU(0.46g；1.2mmol)和DIEA(0.40mL；2.4mmol)在DMA(7mL)中搅拌15分钟，然后将溶液加到树脂，将混合物于室温下振荡2小时，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(0.79g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL：1.2mmol)、DIEA(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加到树脂。将混合物于室温下振荡24小时。倒空溶液，用DMA(5×7mL)、CH2Cl2(5×7mL)洗涤树脂并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发滤液得到一种油状粗品，将其与Et2O(5mL)一起研磨。离心收集沉淀。并用Et2O(5×5mL)洗涤，然后用HPLC分析并用制备HPLC纯化。将包含产物的级分冻干得到L70，为一种白色绒毛状固体(6.8mg；0.005mmol)。产率3％。
B.合成L73、L115和L116(图2B-2E)：
将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将Fmoc-连接基-OH(1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物于室温下振荡3小时，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(0.79g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL：1.2mmol)、DIEA(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加到树脂。将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液并用DMA(5×7mL)、CH2Cl2(5×7mL)洗涤树脂并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，将其与Et2O(5mL)一起研磨。离心收集沉淀，并用Et2O(5×5mL)洗涤，然后用HPLC分析并用制备HPLC纯化。将包含产物的级分冻干。
C.合成L74(图2F)：
将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将Fmoc-六氢异烟酸(0.42g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物于室温下振荡3小时，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将Fmoc-甘氨酸(0.36g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物于室温下振荡3小时，倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(0.79g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL：1.2mmol)、DIEA(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加到树脂。将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液，用DMA(5×7mL)、CH2Cl2(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，将其与Et2O(5mL)一起研磨。离心收集沉淀并用Et2O(5×5mL)洗涤，然后用HPLC分析，并用HPPLC纯化。将包含产物的级分冻干得到L74，为一种白色绒毛状固体(18.0mg；0.012mmol)。产率8％。
实施例III-图3A-E
合成L67
概述：用NaOH水解(3β，5β)-3-氨基-12-氧代胆烷-24-酸甲酯A得到对应的酸B，然后使其与Fmoc-甘氨酸反应得到中间产物C。使用八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2(BBN[7-14][SEQ ID NO：1])官能化的Rink酰胺树脂依次与C和DOTA三叔丁酯反应。在用试剂B裂解和脱保护之后，用制备HPLC纯化粗品，得到L67。总产率：5.2％。
A.合成(3β，5β)-3-氨基-12-氧代胆烷-24-酸，(B)(图3A)
在45℃下将1M NaOH溶液(6.6mL；6.6mmol)滴加到在MeOH(15mL)中的(3β，5β)-3-氨基-12-氧代胆烷-24-酸甲酯A(2.1g；5.1mmol)的溶液。45℃下搅拌3小时后，将混合物浓缩至25mL，然后加入H2O(25mL)和1M HCl(8mL)。将沉淀的固体过滤，用H2O(2×30mL)洗涤，并真空干燥得到B，为一种白色固体(1.7g；4.4mmol)。产率88％。
B.合成(3β，5β)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-12-氧代胆烷-24-酸(C)(图3A)
将三丁基胺(0.7mL；3.1mmol)滴加到在0℃下搅拌的在THF(25mL)中的N-α-Fmoc-甘氨酸(0.9g；3.1mmol)的溶液。随后加入氯甲酸异丁酯(0.4mL；3.1mmol)，并在10分钟后于1小时内将在DMF(30mL)中的三丁基胺(0.6mL；2.6mmol)和(3β，5β)-3-氨基-12-氧代胆烷-24-酸B(1.0g；2.6mmol)的悬浮液滴加到冷却的溶液。使混合物升温，并在6小时后将溶液浓缩至40mL，然后加入H2O(50mL)和1NHCl(10mL)(最终pH：1.5)。将沉淀的固体过滤，用H2O(2×50mL)洗涤，真空干燥，并用快速色谱法纯化得到C，为一种白色固体(1.1g；1.7mmol)。产率66％。
C.合成L67(N-[(3β，5β)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-12，24-二氧代胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺)(图3B和3E)。
将树脂D(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将(3β，5β)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基]-12-氧代胆烷-24-酸C(0.80g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(0.79g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL：1.2mmol)、DIEA(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加到树脂。将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液，用DMA(5×7mL)、CH2Cl2(5×7mL)洗涤树脂并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，将其与Et2O(20mL)一起研磨。
实施例IV-图4A-H
合成L63和L64
概述：用NaOH水解(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸甲酯1b得到中间产物2b，然后使其与Fmoc-甘氨酸反应得到3b。使用八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2(BBN[7-14][SEQID NO：1])官能化的Rink酰胺树脂与3b反应，然后与DOTA三叔丁酯反应。在用试剂B裂解和脱保护之后，用制备HPLC纯化粗品得到L64。从已经获得的中间产物2a开始重复相同的过程得到L63。总产率分别为9和4％。
A.合成(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸，(2b)(图4A)
将1M NaOH溶液(130mL；0.13mol)滴加到在45℃下加热的在MeOH(300mL)中的(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸甲酯1b(42.1g；0.10mol)的溶液。45℃下搅拌3小时后，将混合物浓缩至150mL，并加入H2O(350mL)。在用CH2Cl2(2×100mL)萃取之后，将水溶液浓缩到200mL并加入1M HCl(150mL)。将沉淀的固体过滤，用H2O(2×100mL)洗涤，并真空干燥得到2b，为一种白色固体(34.8g；0.08mol)。产率80％。
B.合成(3β，5β，12α)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-12-羟基胆烷-24-酸，(3a)(图4A)
将三丁基胺(4.8mL；20.2mmol)滴加到在0℃下搅拌的在THF(120mL)中的N-α-Fmoc-甘氨酸(6.0g；20.2mmol)的溶液。随后加入氯甲酸异丁酯(2.6mL；20.2mmol)，并在10分钟后于1小时内将在DMF(120mL)中的三丁基胺(3.9mL；16.8mmol)和(3β，5β，12α)-3-氨基-12-羟基胆烷-24-酸2a(6.6g；16.8mmol)的悬浮液滴加到冷却的溶液。使混合物升温，并在6小时后将溶液浓缩至150mL，然后加入H2O(250mL)和1N HCl(40mL)(最终pH：1.5)。将沉淀的固体过滤，用H2O(2×100mL)洗涤，真空干燥，并用快速色谱法纯化得到3a，为一种白色固体(3.5g；5.2mmol)。产率31％。
C.合成(3β，5β，7α，12α)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸，(3b)(图4A)
将三丁基胺(3.2mL；13.5mmol)滴加到在0℃下搅拌的在THF(80mL)中的N-α-Fmoc-甘氨酸(4.0g；13.5mmol)的溶液。然后加入氯甲酸异丁酯(1.7mL；13.5mmol)，并在10分钟后于1小时内将在DMF(80mL)中的三丁基胺(2.6mL；11.2mmol)和(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸3a(4.5g；11.2mmol)的悬浮液滴加到冷却的溶液。使混合物升温，并在6小时后将溶液浓缩至120mL，然后加入H2O(180mL)和1N HCl(30mL)(最终pH：1.5)。将沉淀的固体过滤，用H2O(2×100mL)洗涤，真空干燥，并用快速色谱法纯化得到3a，为一种白色固体(1.9g；2.8mmol)。产率25％。
在一个可替代选择的方法中，(3β，5β，7α，12α)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸，(3b)可以如下制备：
将N-羟基琥珀酰亚胺(1.70g，14.77mmol)和DIC(1.87g，14.77mmol)依次加到在二氯甲烷(15mL)中的Fmoc-Gly-OH(4.0g，13.45mmol)的搅拌溶液；将所得的混合物于室温下搅拌4小时。通过过滤除去形成的N，N′-二异丙基脲，并用乙醚(20mL)洗涤固体。除去挥发物，并用乙醚(3×20mL)洗涤形成的固体Fmoc-Gly-琥珀酰亚胺酯。然后将Fmoc-Gly-琥珀酰亚胺酯再溶于无水DMF(15mL)，并将3-氨基脱氧胆酸(5.21g，12.78mmol)加到该澄清的溶液。将反应混合物于室温下搅拌4小时，加入水(200mL)并将沉淀的固体过滤，用水洗涤，干燥并用硅胶色谱法(TLC(二氧化硅)：(Rf：0.50，硅胶，CH2Cl2/CH3OH，9∶1)(洗脱剂：CH2Cl2/CH3OH(9∶1))纯化得到(3β，5β，7α，12α)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸，为一种无色固体。产率：7.46g(85％)。
D.合成L63(N-[(3β，5β，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-12-羟基-24-氧代胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺)(图4B)
将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将(3β，5β，12α)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-12-羟基胆烷-24-酸3a(0.82g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(0.79g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL：1.2mmol)、DIEA(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加到树脂。将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液并用DMA(5×7mL)、CH2Cl2(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，用Et2O(5mL)处理后得到一种沉淀。离心收集沉淀并用Et2O(5×5mL)洗涤，然后用HPLC分析和纯化。将包含产物的级分冻干得到L63，为一种白色绒毛状固体(12.8mg；0.0073mmol)。产率9％。
E.合成L64(N-[(3β，5β，7α，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-7，12-二羟基-24-氧代胆烷-24-基]]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺)(图4C)
将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液搅拌20分钟，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将(3β，5β，7α，12α)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸3b(0.81g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(0.79g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL：1.2mmol)、DIEA(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加到树脂。将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液，用DMA(5×7mL)、CH2Cl2(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥.将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，将其与Et2O(5mL)一起研磨。离心收集沉淀，并用Et2O(5×5mL)洗涤。然后将其溶于H2O(20mL)，并加入Na2CO3(0.10g；0.70mmol)；将所得的混合物在室温下搅拌4小时。用HPLC纯化此溶液，将包含产物的级分冻干得到L64，为一种白色绒毛状固体(3.6mg；0.0021mmol)。产率4％。
实施例V-图5A-E
合成L71和L72
概述：分两步得到产物。第一步是在上文讨论的Rink酰胺树脂上固相合成八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2(BBN[7-14][SEQ ID NO：1])(具有适宜的侧链保护基)。第二步是与不同的连接基偶联，然后用DOTA三叔丁酯官能化。在用试剂B裂解和脱保护之后，通过制备HPLC纯化最终产物。总产率3-9％。
A.蛙皮素[7-14]官能化和裂解方法(图5A和5D)
将树脂B(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂.将Fmoc-连接基-OH(1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂。将混合物在室温下振荡3小时，倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物C(0.79g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL：1.2mmol)、DIEA(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加到树脂。将混合物于室温下振荡24小时。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)、CH2Cl2(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发滤液得到一种油状粗品，将其与乙醚(5mL)一起研磨。离心收集沉淀，并用乙醚(5×5mL)洗涤，然后用分析HPLC分析，并用制备HPLC纯化。将包含产物的级分冻干。
B.产物
1.L71(4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺)
得到产物，为一种白色绒毛状固体(7.3mg；0.005mmol)。产率7.5％。
2.L72(反式-4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]环己基羰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺)
得到产物，为一种白色绒毛状固体(7.0mg；0.005mmol)。产率4.8％。
C.反式-4-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]甲基]环己烷甲酸，(D)(图5E)
将在1，4-二烷(40mL)中的N-(9-芴基甲氧基羰基氧)琥珀酰亚胺(4.4g；14.0mmol)的溶液滴加到冷却至0℃的在10％Na2CO3(30mL)中的反式-4-(氨基甲基)环己烷甲酸(2.0g；12.7mmol)的溶液。然后使混合物温至室温，并在室温下搅拌1小时后用1N HCl(32mL)处理直至最终pH为2。用n-BuOH(100mL)萃取所得的溶液；除去挥发物，并用快速色谱法纯化粗残余物，得到D，为一种白色固体(1.6g；4.2mmol)。产率33％。
实施例VI-图6A-F
合成L75和L76
概述：通过以下方法得到两种产物：将担载在Rink酰胺树脂上的八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2(BBN[7-14][SEQ IDNO：1])(A)与两种连接基E和H偶联，然后用DOTA三叔丁酯官能化。在用试剂B裂解和脱保护之后，通过制备HPLC纯化最终产物。总产率：8.5％(L75)和5.6％(L76)。
A.2-[(1，3-二氢-1，3-二氧代-2H-异吲哚-2-基)甲基]苯甲酸，(C)(图6A)
根据文献报道的方法(Bornstein，J；Drummon，P.E.；Bedell，S.F.Org Synth.Coll.Vol.IV 1963，810-812)合成产物。
B.2-(氨基甲基)苯甲酸，(D)(图6A)
将40％甲基胺溶液(6.14mL；7.1mmol)加到2-[(1，3-二氢-1，3-二氧代-2H-异吲哚-2-基)甲基]苯甲酸C(2g；7.1mmol)，然后加入EtOH(30mL)。室温下搅拌5分钟后在50℃下加热反应混合物。2.5小时后，将混合物冷却，并在减压下蒸发溶剂。将粗产物悬浮在50mL无水乙醇中，并在室温下将悬浮液搅拌1小时。将固体过滤，并用EtOH洗涤得到2-(氨基甲基)苯甲酸D(0.87g；5.8mmol)。产率81％。
C.2-[[[9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]甲基]苯甲酸，(E)(图6A)
根据文献报道的方法(Sun，J-H.；Deneker，W.F.Synth.Commun.1998，28，4525-4530)合成产物。
D.4-(氨基甲基)-3-硝基苯甲酸，(G)(图6B)
将4-(溴甲基)-3-硝基苯甲酸(3.2g；12.3mmol)溶于在EtOH(300mL)中的8％NH3，并将所得的溶液于室温下搅拌。22小时后蒸发溶液，并将残余物悬浮在H2O(70mL)中。将悬浮液搅拌15分钟并过滤。将收集的固体悬浮在H2O(40mL)中，并通过加入数滴25％NH4OH水溶液(pH 12)来溶解，然后通过加入6N HCl调节溶液的pH至6。将沉淀的固体过滤，依次用MeOH(3×5mL)和Et2O(10mL)洗涤，并真空干燥(1.3kPa；P2O5)得到4-(氨基甲基)-3-硝基苯甲酸，为一种灰褐色固体(1.65g；8.4mmol)。产率68％。
E.4-[[[9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]甲基]-3-硝基苯甲酸，(H)(图6B)
将4-(氨基甲基)-3-硝基苯甲酸G(0.8g；4mmol)溶于10％Na2CO3水溶液(25mL)和1，4-二烷(10mL)，并将溶液冷却至0℃。滴加在1，4-二烷(10mL)中的9-芴基甲基氯甲酸酯(Fmoc-Cl)(1.06g；4mmol)的溶液20分钟。在0-5℃下2小时和10℃下1小时后，将反应混合物过滤，并通过加入1N HCl将溶液酸化至pH 5。将沉淀过滤，用H2O(2×2mL)洗涤，真空干燥(1.3kPa；P2O5)得到4-[[[9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]甲基]-3-硝基苯甲酸，为一种白色固体(1.6g；3.7mmol)。产率92％。
F.L75(N-[2-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺)(图6C)
将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，将悬浮液搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将2-[[[9H-芴-9-基甲氧基]羰基]氨基]甲基]苯甲E(0.45g；1.2mmol)、N-羟基苯并三唑(HOBT)(0.18g；1.2mmol)、N，N′-二异丙基碳二亚胺(DIC)(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物于室温下振荡24小时，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(DOTA三叔丁酯)(0.79g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)、DIEA(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加到树脂。将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液，用DMA(5×7mL)、CH2Cl2(5×7mL)洗涤树脂并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发滤液得到一种油状粗品，在用Et2O(20mL)处理后得到一种沉淀。通过离心收集所得的沉淀，并用Et2O(3×20mL)洗涤得到L75(190mg；0.13mmol)，为一种白色固体。产率44％。
G.L76(N-[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]-3-硝基苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-1-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺)(图6D)
将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将4-[[[9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]甲基]-3-硝基苯甲酸H(0.50g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物于室温下振荡24小时，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将DOTA三叔丁酯(0.79g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL：1.2mmol)、DIEA(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加到树脂。将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)、CH2Cl2(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，将其与Et2O(20mL)一起研磨。离心收集沉淀，并用Et2O(3×20mL)洗涤得到一种固体(141mg)，用HPLC对其进行分析。用制备HPLC纯化37mg部分粗品。将包含产物的级分冻干得到L76(10.8mg；7.2×10-3mmol)，为一种白色固体。产率9％。
实施例VII-图7A-C
合成L124
概述：使4-氰基苯酚A与溴乙酸乙酯和K2CO3在丙酮中反应得到中间产物B，用NaOH水解得到对应的酸C。用H2和PtO2，在355kPa下，在EtOH/CHCl3中对C进行连续氢化得到对应的氨基酸D，直接用FmocOSu保护得到E。使用八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2(BBN[7-14][SEQ ID NO：1])官能化的Rink酰胺树脂与E反应，然后与DOTA三叔丁酯反应。在用试剂B裂解和脱保护之后，通过制备HPLC纯化粗品得到L124。总产率：1.3％
A.合成(4-氰基苯氧基)乙酸乙酯，(B)(图7A)
根据文献报道的方法(Archimbault，P.；LeClerc，G.；Strosberg，A.D.；Pietri-Rouxel，F.PCT Int.Appl.WO 980005，1998)合成产物。
B.合成(4-氰基苯氧基)乙酸(C)(图7A)
将1N NaOH溶液(7.6mL；7.6mmol)滴加到在MeOH(15mL)中的(4-氰基苯氧基)乙酸乙酯B(1.55g；7.6mmol)的溶液。1小时后用1N HCl(7.6mL；7.6mmol)酸化溶液并蒸发。将残余物吸收于水(20mL)，并用CHCl3(2×30mL)萃取。蒸发有机相，并用快速色谱法纯化粗品得到(4-氰基苯氧基)乙酸C(0.97g；5.5mmol)，为一种白色固体。产率72％。
C.合成[4-[[[9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]甲基]苯氧基]乙酸，(E)(图7A)
将PtO2(150mg)加到在EtOH(147mL)和CHCl3(3mL)中的(4-氰基苯氧基)乙酸C(1.05g；5.9mmol)的溶液。将悬浮液在氢气氛(355kPa；20℃)下搅拌30小时。用C盐衬垫过滤混合物，并将溶液真空蒸发。用快速色谱法纯化残余物得到酸D(0.7g)，0℃下将其溶于H2O(10mL)、MeCN(2mL)和Et3N(0.6mL)，然后滴加在MeCN(22mL)中的N-(9-芴基甲氧基羰基氧)琥珀酰亚胺(1.3g；3.9mmol)的溶液。室温下搅拌16小时后，将反应混合物过滤，并在真空下除去挥发物。用1N HCl(10mL)处理残余物，将沉淀的固体过滤，并用快速色谱法纯化得到[4-[[[9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]甲基]苯氧基]乙酸E(0.56g；1.4mmol)，为一种白色固体.总产率24％。
D.合成L124(N-[[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]苯氧基]乙酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺)(图7B)
将树脂A(480mg；0.29mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液搅拌20分钟，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将[4-[[[9H-芴-9-基甲氧基]羰基]氨基]甲基]苯氧基]乙酸E(480mg；1.19mmol)、N-羟基苯并三唑(HOBT)(182mg；1.19mmol)、N，N′-二异丙基碳二亚胺(DIC)(185μL；1.19mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(6mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(6mL)中的50％吗啉，并将混合物振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(750mg；1.19mmol)、HOBT(182mg；1.19mmol)、DIEA(404μL；2.36mmol)、DIC(185μL；1.19mmol)和DMA(6mL)加到树脂。将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液，用DMA(2×7mL)、CH2Cl2(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发滤液得到一种油状粗品，将其与Et2O(5mL)一起研磨。离心收集沉淀，并用Et2O(5×5mL)洗涤得到一种固体(148mg)，用HPLC分析。用制备HPLC纯化65mg部分粗品。将包含产物的级分冻干得到L124(图7C)，为一种白色固体(15mg；0.01mmol)。产率7.9％。
实施例VIII-图8A-C
合成L125
概述：使4-(溴甲基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯A与在DMF中的NaN3反应得到中间产物叠氮化物B，然后用Ph3P和H2O还原成胺C。用NaOH水解C得到酸D，直接用FmocOSu保护得到E。使用八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2(BBN[7-14][SEQ ID NO：1])(A)官能化的Rink酰胺树脂与E反应，然后与DOTA三叔丁酯反应。在用试剂B裂解和脱保护之后，通过制备HPLC纯化粗品得到L125。总产率：0.2％。
A.合成4-(叠氮基甲基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯，(B)(图8A)
将在DMF(90mL)中的4-(溴甲基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯(8g；31mmol)和NaN3(2g；31mmol)的溶液于室温下搅拌过夜。在真空下除去挥发物，并将粗产物溶于EtOAc(50mL)。用水(2×50mL)洗涤溶液并干燥。将挥发物蒸发得到4-(叠氮基甲基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯(6.68g；30mmol)。产率97％。
B.4-(氨基甲基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯，(C)(图8A)
将三苯膦(6.06g；23mmol)加到在THF(50mL)中的(4-叠氮基甲基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯B(5g；22mmol)的溶液：观察到产生氢和形成白色固体。将混合物在氮气氛和室温下搅拌。24小时后再加入三苯膦(0.6g；2.3mmol)。24小时后叠氮化物被消耗，并加入H2O(10mL)。4小时后白色固体消失。将混合物于45℃下加热3小时，并在室温下搅拌过夜。将溶液蒸发至干，并用快速色谱法纯化粗品得到4-(氨基甲基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯C(1.2g；6.1mmol)。产率28％。
C.4-[[[9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]甲基]-3-甲氧基苯甲酸，(E)(图8A)
将1N NaOH溶液(6.15mL；6.14mmol)滴加到在40℃下加热的在MeOH(25mL)中的4-(氨基甲基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯C(1.2g；6.14mmol)的溶液。45℃下搅拌8小时后，将溶液于室温下搅拌过夜。加入1N NaOH溶液(0.6mL；0.6mmol)，并将混合物在40℃下加热4小时。浓缩溶液，用1N HCl(8mL；8mmol)酸化，用EtOAc(2×10mL)萃取，然后将水层浓缩至15mL。将此溶液(pH4.5)于0℃下冷却，并加入Et3N(936μL；6.75mmol)(pH 11)。滴加在MeCN(30mL)中的N-(9-芴基甲氧基羰基氧)琥珀酰亚胺(3.04g；9mmol)的溶液(最终pH 9)，沉淀出白色固体。室温下搅拌1小时后将固体过滤，悬浮在1N HCl(15mL)中，并将悬浮液搅拌30分钟。将固体过滤得到4-[[[9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]甲基]-3-甲氧基苯甲酸E，为一种白色固体(275mg；0.7mmol)。将滤液真空蒸发，并将所得的白色残余物悬浮在1N HCl(20mL)中，并搅拌30分钟。将固体过滤，并用快速色谱法纯化得到更多的酸E(198mg；0.5mmol).总产率20％。
D.L125(N-[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]-3-甲氧基苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺)(图8B)
将树脂A(410mg；0.24mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将4-[[[9H-芴-9-基甲氧基]羰基]氨基]甲基]-3-甲氧基苯甲酸E(398mg；0.98mmol)、HOBT(151mg；0.98mmol)、DIC(154μL；0.98mmol)和DMA(6mL)加到树脂；将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将树脂与在DMA(6mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(6mL)中的50％吗啉，将混合物振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(618mg；0.98mmol)、HOBT(151mg；0.98mmol)、DIC(154μL；0.98mmol)、DIEA(333μL；1.96mmol)和DMA(6mL)加到树脂。将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液，用DMA(5×7mL)、CH2Cl2(5×7mL)洗涤树脂并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，将其与Et2O(5mL)一起研磨。用Et2O(5×5mL)洗涤通过离心收集所得的沉淀，用HPLC分析，并用制备HPLC纯化。将包含产物的级分冻干得到L125(图8C)，为一种白色固体(15.8mg；0.011mmol)。产率4.4％。
实施例IX-图9A-9D
合成L146、L233、L234和L235
概述：分几步从担载在Rink酰胺树脂上的八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2(BBN[7-14])(A)开始获得产物。在最后用试剂B裂解和脱保护之后，用制备HPLC纯化粗品得到L146、L233、L234和L235。总产率：分别为10％、11％、4.5％、5.7％。
A.3-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基苯甲酸，B(图9A)
将在THF(20mL)中的3-氨基苯甲酸(0.5g；3.8mmol)和N-乙基二异丙基胺(DIEA)(0.64mL；3.8mmol)的溶液滴加到在THF(10mL)和CH2Cl2(10mL)中的Fmoc-甘氨酸氯化物(1.2g；4.0mmol)(3)的溶液。室温下搅拌24小时后，加入1M HCl(50mL)(最终pH：1.5)。将沉淀过滤，用H2O(2×100mL)洗涤，真空干燥并用CHCl3/CH3OH(1∶1)结晶得到B，为一种白色固体(0.7g；1.6mmol)。产率43％。
B.N-[3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺，L233(图9D)
将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。
将悬浮液再搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将3-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基苯甲酸B(0.50g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物于室温下振荡6小时，倒空，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，将混合物再振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将DOTA三叔丁酯与NaCl2的加合物(0.79g；1.2mmol)(5)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL：1.2mmol)、DIEA(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加到树脂。将混合物在室温下振荡24小时，倒空，用DMA(5×7mL)、CH2Cl2(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将该树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，用Et2O(20mL)进行处理后得到一种沉淀。离心收集沉淀，并用Et2O(3×20mL)洗涤得到一种固体(152mg)，用HPLC分析。用制备HPLC纯化一定量的粗品(50mg)。将包含产物的级分冻干得到L233(17.0mg；11.3×10-3mmol)，为一种白色固体。产率11％。
C.N-[4-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯基乙酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺，L146(图9D)
将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，过滤溶液，并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将该悬浮液再搅拌20分钟，然后过滤溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将Fmoc-4-氨基苯基乙酸(0.45g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物在室温下振荡6小时，过滤并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，将溶液过滤，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物再振荡20分钟。过滤溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将Fmoc-甘氨酸(0.36g；1.2mmol)、HATU(0.46g；1.2mmol)和DIEA(0.40mL；2.4mmol)在DMA(7mL)中搅拌15分钟，然后将溶液加到树脂，将混合物于室温下振荡2小时，过滤并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，将溶液过滤，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物再振荡20分钟。过滤溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将DOTA三叔丁酯与NaCl的加合物(0.79g；1.2mmol)、HOBt(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)、DIEA(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加到树脂。将混合物于室温下振荡24小时，过滤，并用DMA(5×7mL)、CH2Cl2(5×7mL)洗涤树脂并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，用Et2O(20mL)处理后得到一种沉淀。离心收集沉淀，并用Et2O(3×20mL)洗涤得到一种固体(203mg)，对其用HPLC分析。通过制备HPLC纯化一定量的粗品(50mg)。将包含产物的级分冻干得到L146(11.2mg；7.4×10-3mmol)，为一种白色固体。产率10％。
D.6-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基萘甲酸，C(图9B)
将在THF(20mL)中的6-氨基萘甲酸(500mg；2.41mmol)和DIEA(410μL 2.41mmol)的溶液滴加到在CH2Cl2/THF 1∶1(10mL)中的Fmoc-甘氨酸氯化物(760mg；2.41mmol)的溶液，并在室温下搅拌。24小时后，将溶剂真空蒸发。用0.5N HCl(50mL)吸收残余物，并搅拌1小时。将沉淀的白色固体过滤并干燥。将白色固体悬浮在甲醇(30mL)，并煮沸5分钟，然后过滤得到产物C(690mg；1.48mmol)。产率62％。
E.N-[6-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]萘甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺，L234
将树脂A(500mg；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液再搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将6-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基萘甲酸C(560mg；1.2mmol)、HOBT(184mg；1.2mmol)、DIC(187μL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物在室温下振荡6小时，倒空并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(6L)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，将混合物再振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将DOTA三叔丁酯与NaCl的加合物(757mg；1.2mmol)、HOBT(184mg；1.2mmol)、DIC(187uL；1.2mmol)和DIEA(537uL；2.4mmol)和DMA(7mL)加到树脂。将混合物在烧瓶中振荡，倒空，用DMA(2×7mL)、CH2Cl2(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油粗品，将其用Et2O(20mL)处理之后得到一种沉淀。离心收集沉淀，并用Et2O(3×20mL)洗涤得到一种固体(144mg)，对其用HPLC进行分析。通过制备HPLC纯化一定量的粗品(54mg)。将包含产物的级分冻干得到L234(8mg；5.1×10-3mmol)，为一种白色固体。产率4.5％。
F.4-[[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]甲基氨基]苯甲酸，D(图9C)
将在THF(20mL)中的4-N-甲基氨基萘甲酸(500mg；3.3mmol)和DIEA(562uL 3.3mmol)的溶液加到在CH2Cl2/THF 1∶1(10mL)中的Fmoc-甘氨酸氯化物(1.04g；3.3mmol)的溶液，并在室温下搅拌。24小时后，在真空下蒸发溶剂。用0.5N HCl(30mL)吸收残余物，并在0℃下搅拌3小时。将沉淀的白色固体过滤并干燥。用快速色谱法纯化粗品得到化合物D(350mg；0.81mmol)。产率25％。
G.N-[4-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]甲基氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺，L235(图9D)
将树脂A(500mg；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液再搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将4-[[[[9H-芴-9-基甲氧基]羰基]氨基]乙酰基]-N-甲基]氨基-苯甲酸D(510mg；1.2mmol)、HOBT(184mg；1.2mmol)、DIC(187μL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物在室温下振荡6小时，倒空，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物再振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将DOTA三叔丁酯与NaCl的加合物(757mg；1.2mmol)、HOBT(184mg；1.2mmol)、DIC(187μL；1.2mmol)和DIEA(537μL，2.4mmol)和DMA(7mL)加到树脂.将混合物在烧瓶中振荡，倒空，用DMA(2×7mL)、CH2Cl2(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥.将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油粗品，对其用Et2O(20mL)处理后得到一种沉淀。通过离心收集沉淀，并用Et2O(3×20mL)洗涤得到一种固体(126mg)，用HPLC对其进行分析。用制备HPLC纯化一定量的粗品(53mg)。将包含产物的级分冻干得到L235(11mg；7.2×10-3mmol)，为一种白色固体。产率5.7％。
实施例X-图10A-B
合成L237
概述：在pH 3下用氯甲酸苄酯选择性保护1-甲酰基-1，4，7，10-四氮杂环十二烷(A)以得到B，用溴乙酸叔丁酯将其烷基化，并用羟胺盐酸盐将其去甲酰基化得到D。与P(OtBu)3和低聚甲醛反应得到E，通过氢化去保护和用溴乙酸苄酯进行烷基化以得到G，最终将其氢化成H。使用八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2(BBN[7-14])官能化的Rink酰胺树脂(A)依次与Fmoc-4-氨基苯甲酸、Fmoc-甘氨酸和H反应。在用试剂B裂解和脱保护之后，用制备HPLC纯化粗品得到L237。总产率0.21％。
A.7-甲酰基-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-甲酸苯基甲酯二盐酸盐，B(图10A)
将1-甲酰基-1，4，7，10-四氮杂环十二烷A(14g；69.9mmol)溶于H2O(100mL)，并加入12N HCl(11mL)直至pH 3，然后加入1，4-二烷(220mL)。在3.5小时内缓慢滴加在1，4-二烷(15mL)中的氯甲酸苄酯(13.8g；77mmol)的溶液，通过用pH恒稳仪器连续加入2NNaOH(68.4mL)来恒定保持反应混合物于pH 3。在加入结束时，将反应物搅拌1小时，然后用正己烷(4×100mL)和iPr2O(4×100mL)洗涤。通过加入10N NaOH(6.1mL)使水相为pH 13，并用CHCl3(4×100mL)萃取。用盐水(100mL)洗涤有机相，干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发。将油状残余物溶于丙酮(200mL)，并加入6N HCl(26mL)。将沉淀的固体过滤，用丙酮(2×50mL)洗涤，并真空干燥得到化合物B(23.6g；58mmol)，为一种白色结晶固体。产率83％。
B.4-(苯基甲氧基)羰基-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，7-二乙酸双(1，1-二甲基乙基)酯D(图10A)
将在H2O(450mL)和1N NaOH(74mL；74mmol)中的B(14.4g；35.3mmol)的溶液搅拌20分钟，然后用CHCl3(4×200mL)萃取。蒸发有机层得到一种油状残余物(12.3g)，将其溶于CH3CN(180mL)和N-乙基二异丙基胺(DIEA)(15mL；88.25mmol)。在2.5小时内将在CH3CN(15mL)中的溴乙酸叔丁酯(16.8g；86.1mmol)的溶液滴加到前面的溶液。室温下20小时后，蒸发溶剂，将油状残余物溶于CHCl3(150mL)，并用H2O(5×100mL)洗涤。将有机层干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发至干得到C，为一种黄色油。将粗品C(22g)溶于EtOH(250mL)，加入NH2OH·HCl(2.93g；42.2mmol)，并将溶液加热回流。48小时后蒸发溶液，并将残余物溶于CH2Cl2(250mL)，用H2O(3×250mL)洗涤，然后用盐水(3×250mL)洗涤。将有机层干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发。用快速色谱法纯化油状残余物(18.85g)。收集合产物的级分，并蒸发得到一种玻璃状白色固体(17.62g)，将其溶于H2O(600mL)和1N NaOH(90mL；90mmol)，并用CHCl3(3×250ml)萃取。将有机层干燥(Na2SO4)，并蒸发至干得到D(16.6g；31mmol)，为一种油。产率88％。
C.4-(苯基甲氧基)羰基-10-[[双(1，1-二甲基乙氧基)氧膦基]甲基]-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，7-二乙酸双(1，1-二甲基乙基)酯，E(图10A)
将化合物D(13.87g；26mmol)、P(OtBu)3(7.6g；28.6mmol)(10)和低聚甲醛(0.9g；30mmol)的混合物在60℃下加热。16小时后，再加入P(OtBu)3(1g；3.76mmol)和低聚甲醛(0.1g；3.33mmol)。将反应物于60℃下再加热20小时，然后在80℃和真空下加热8小时以除去挥发性杂质。用快速色谱法纯化粗品得到E(9.33g；8mmol)，为一种油。产率31％。
D.7-[[双(1，1-二甲基乙氧基)氧膦基]甲基]-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，10-三乙酸1-苯基甲基4，10-双(1，1-二甲基乙基)酯，G(图10A)
往在CH3OH(160mL)中的E(6.5g；5.53mmol)的溶液加入5％Pd/C(1g；0.52mmol)，并将该混合物在氢气氛和室温下搅拌。4小时后(消耗H2 165mL；6.7mmol)用Millipore滤器(FT 0.45μm)过滤混合物，并减压蒸发溶液。用快速色谱法纯化粗品(5.9g)得到F(4.2g)，为一种油。在1小时内将溶于CH3CN(8mL)的溴乙酸苄酯(1.9g；8.3mmol)滴加到在CH3CN(40mL)和DIEA(1.5mL；8.72mmol)中的F(4.2g)的溶液。室温下36小时后，蒸发溶剂，并将残余物(5.76g)溶于CHCl3(100mL)，用H2O(2×100mL)洗涤，然后用盐水(2×70mL)洗涤。干燥有机层(Na2SO4)，过滤并蒸发。用快速色谱法纯化粗品(5.5g)两次，收集级分并蒸发至干得到G(1.12g；1.48mmol)，为一种油。产率27％。
E.7-[[双(1，1-二甲基乙氧基)氧膦基]甲基]-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，10-三乙酸4，10-双(1，1-二甲基乙基)酯，H(图10A)
将5％Pd/C(0.2g；0.087mmol)加到在CH3OH(27mL)中的G(1.12g；1.48mmol)的溶液，并将混合物于氢气氛和室温下搅拌。2小时后(消耗H2 35mL；1.43mmol)，用Millipore滤器(FT 0.45μm)过滤混合物，并将溶液蒸发至干，得到H(0.94g；1.41mmol)，为一种灰黄色油。产率97％。
F.N-[4-[[[[[4，10-双(羧甲基)-7-(二羟基氧膦基)甲基-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺，L237(图10B)
将树脂A(330mg；0.20mmol)(17)在固相肽合成容器中与在DMA(5mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，并加入新鲜的在DMA(5mL)中的50％吗啉。将悬浮液再搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×5mL)洗涤树脂。将Fmoc-4-氨基苯甲酸(290mg，0.80mmol)、HOBT(120mg；0.80mmol)、DIC(130μL；0.80mmol)和DMA(5mL)加到树脂，将混合物在室温下振荡3小时，倒空，并用DMA(5×5mL)洗涤树脂。将树脂与在DMA(5mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(5mL)中的50％吗啉，并将混合物再振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×5mL)洗涤树脂。将Fmoc-甘氨酸(240mg；0.8mmol)、HATU(310mg；0.8mmol)和DIEA(260μL；1.6mmol)在DMA(5mL)中搅拌15分钟，然后将溶液加到树脂，将混合物于室温下振荡2小时，倒空，并用DMA(5×5mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(5mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(5mL)中的50％吗啉，并将混合物再振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×5mL)洗涤树脂。将H(532mg；0.80mmol)、HOBT(120mg；0.80mmol)、DIC(130μL；0.80mmol)和DIEA(260μL；1.6mmol)和DMA(5mL)加到树脂。将混合物在烧瓶中于室温下振荡40小时，倒空，用DMA(5×5mL)、CH2Cl2(5×5mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，用Et2O(20mL)对其处理后得到一种沉淀。离心收集沉淀，并用Et2O(3×20mL)洗涤得到一种固体(90mg)，用HPLC对其进行分析。用制备HPLC纯化一定量的粗品(50mg)。将包含产物的级分冻干得到L237(6mg；3.9×10-3mmol)，为一种白色固体。产率3.5％。
实施例XI-图11A-B
合成L238和L239
概述：从担载在Rink酰胺树脂上的八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2(BBN[7-14])(A)开始分几步获得产物。在用试剂B裂解和脱保护之后，用制备HPLC纯化粗品得到L238和L239。总产率：分别为14和9％。
A.N，N-二甲基甘氨酰基-L-丝氨酰基-[S-[(乙酰基氨基)甲基]]-L-半胱氨酰基-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺，L238(图11A)
将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液再搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将Fmoc-4-氨基苯甲酸(0.43g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物在室温下振荡3小时，倒空，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉和将混合物再振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将Fmoc-甘氨酸(0.36g；1.2mmol)、HATU(0.46g；1.2mmol)和N-乙基二异丙基胺(0.40mL；2.4mmol)在DMA(7mL)中搅拌15分钟，然后将溶液加到树脂，将混合物于室温下振荡2小时，然后将溶液加到树脂，将混合物于室温下振荡2小时，倒空，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉和将混合物再振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将N-α-Fmoc-S-乙酰氨基甲基-L-半胱氨酸(0.50g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物在室温下振荡3小时，倒空并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉和将混合物再振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将N-α-Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸(0.46g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL：1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物于室温下振荡3小时，倒空和用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物再振荡20分钟。
倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将N，N-二甲基甘氨酸(0.12g；1.2mmol)、HATU(0.46g；1.2mmol)和N-乙基二异丙基胺(0.40mL；2.4mmol)在DMA(7mL)中搅拌15分钟，然后将溶液加到树脂。将混合物于室温下振荡2小时，倒空，用DMA(5×7mL)、CH2Cl2(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，用Et2O(20mL)处理之后得到一种沉淀。离心收集沉淀，并用Et2O(3×20mL)洗涤得到一种固体(169mg)，用HPLC对其进行分析。用制备HPLC纯化一定量的粗品(60mg)。将包含产物的级分冻干得到L238(22.0mg；0.015mmol)，为一种白色固体。产率14％。
B.N，N-二甲基甘氨酰基-L-丝氨酰基-[S-[(乙酰基氨基)甲基]]-L-半胱氨酰基-甘氨酰基-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基-24-氧代胆烷-24-基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺，L239(图11B)
将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液再搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将(3β，5β，7α，12α)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸B(0.82g；1.2mmol)(7)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物于室温下振荡24小时，倒空，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉和将混合物再振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将N-α-Fmoc-S-乙酰氨基甲基-L-半胱氨酸(0.50g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物于室温下振荡3小时，倒空，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物再振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将N-α-Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸(0.46g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物于室温下振荡3小时，倒空并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物再振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将N，N-二甲基甘氨酸(0.12g；1.2mmol)、HATU(0.46g；1.2mmol)和N-乙基二异丙基胺(0.40mL；2.4mmol)在DMA(7mL)中搅拌15分钟，然后将溶液加到树脂。
将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液再搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将(3β，5β，7α，12α)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸B(0.82g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物于室温下振荡24小时，倒空，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物再振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将N-a-Fmoc-S-乙酰氨基甲基-L-半胱氨酸(0.50g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物于室温下振荡3小时，倒空并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉和将混合物再振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将N-α-Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸(0.46g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL：1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物于室温下振荡3小时，倒空并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉和将混合物再振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将N，N-二甲基甘氨酸(0.12g；1.2mmol)、HATU(0.46g；1.2mmol)和N-乙基二异丙基胺(0.40mL；2.4mmol)在DMA(7mL)中搅拌15分钟，然后将溶液加到树脂。
实施例XII-图12A-F
合成L240、L241、L242
概述：从担载在Rink酰胺树脂上的八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2(BBN[7-14])(A)开始分几步获得产物。在用试剂B裂解并脱保护之后，用制备HPLC纯化粗品得到L240、L241和L242。总产率：分别为7.4、3.2、1.3％。
A.4-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基-3-甲氧基苯甲酸A(图12A)
将在THF(20mL)中的4-氨基-3-甲氧基苯甲酸(1.0g；5.9mmol)和N-乙基二异丙基胺(1.02mL 5.9mmol)的溶液滴加到在CH2Cl2/THF1∶1(20mL)中的Fmoc-甘氨酰氯(1.88g；5.9mmol)的溶液，并在室温和N2下搅拌。3小时后，真空蒸发溶剂。用0.5N HCl(50mL)吸收残余物，在0℃下搅拌1小时，然后过滤并干燥。将白色固体悬浮在MeOH(30mL)中，并搅拌1小时，然后过滤，并悬浮在CHCl3/己烷1∶4(75mL)的溶液中。将悬浮液过滤得到化合物A，为一种白色固体(1.02g；2.28mmol)。产率39％。
B.N-[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]甘氨酰基]氨基]-3-甲氧基苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺L240
将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液再搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将4-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基-3-甲氧基苯甲酸A(0.50g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物于室温下振荡5小时，倒空，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉和将混合物再振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(0.79g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL：1.2mmol)，N-乙基二异丙基胺(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加到树脂。将混合物在室温下振荡24小时，倒空，用DMA(5×7mL)、CH2Cl2(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到油残余物，用Et2O(20mL)对其进行处理之后得到一种沉淀。离心收集沉淀，并用Et2O(5×20mL)洗涤得到一种固体(152mg)，用HPLC对其进行分析。用制备HPLC纯化一定量的粗品(52mg)。将包含产物的级分冻干得到L240(12.0mg；7.8×10-3mmol)，为一种白色固体。产率7.4％。
C.4-氨基-3-氯苯甲酸C(图12B)
45℃下将1N NaOH(11mL；11mmol)加到在MeOH(20mL)中的4-氨基-3-氯苯甲酸甲酯(2g；10.8mmol)的溶液。将反应混合物于45℃下搅拌5小时，并在室温下搅拌过夜。再次加入1N NaOH(5mL；5mmol)，并将反应物于45℃下搅拌2小时。浓缩溶剂后加入1NHCl(10mL)。过滤固体沉淀，并干燥得到4-氨基-3-氯苯甲酸，C，为一种白色固体(1,75g；10.2mmol)。产率94.6％。
D.4-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基-3-氯苯甲酸，D(图12B)
将在THF(50mL)中的4-氨基-3-氯苯甲酸(1.5g；8.75mmol)和N-乙基二异丙基胺(1.46mL 8.75mmol)的溶液滴加到在CH2Cl2/THF 1∶1(30mL)中的Fmoc-甘氨酰氯(2.76g；8.75mmol)的溶液，并在室温和N2气氛下搅拌。3小时后，真空蒸发溶剂。用0.5N HCl(50mL)吸收残余物，过滤并干燥。将白色固体悬浮在MeOH(30mL)中，并搅拌1小时，然后过滤，并干燥得到4-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基-3-氯苯甲酸(2.95g；6.5mmol)。产率75％。
E.N-[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]甘氨酰基]氨基]3-氯苯甲酰基]L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺L241(图12E)
将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液再搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将4-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基-3-氯苯甲酸，D(0.54g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物于室温下振荡5小时，倒空，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。
然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉和将混合物再振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(0.79g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL.1.2mmol)，N-乙基二异丙基胺(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加到树脂。将混合物于室温下振荡40小时，倒空，用DMA(5×7mL)、CH2Cl2(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油粗品，在用Et2O(20mL)处理后得到一种沉淀。离心收集沉淀，并用Et2O(5×20mL)洗涤得到一种固体(151mg)，用HPLC对其进行分析。用制备HPLC纯化一定量的粗品(56mg)。将包含产物的级分冻干得到L241(5.6mg；3.6×10-3mmol)，为一种白色固体。产率3.2％。
F.4-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基-3-甲基苯甲酸，E(图12C)
将在THF(30mL)中的4-氨基-3-甲基苯甲酸(0.81g；5.35mmol)和N-乙基二异丙基胺(0.9mL 5.35mmol)的溶液滴加到在CH2Cl2/THF 1∶1(20mL)中的Fmoc-甘氨酰氯(1.69g；5.35mmol)的溶液，并在室温和N2气氛下搅拌。3小时后在真空下蒸发溶剂。用HCl 0.5N(50mL)吸收残余物，并在0℃下搅拌3小时。然后过滤并干燥。将白色固体悬浮在MeOH(50mL)中，并搅拌1小时，然后过滤并干燥得到化合物E(1.69g；3.9mmol)。产率73％。
G.N-[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]甘氨酰基]氨基]3-甲基苯甲酰基]L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺L242(图12F)
将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液再搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将4-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-3-甲基苯甲酸E(0.52g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物于室温下振荡5小时，倒空，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉和将混合物再振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(0.76g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)、N-乙基二异丙基胺(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加到树脂。
将混合物于室温下振荡40小时，倒空，用DMA(5×7mL)、CH2Cl2(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油粗品，用Et2O(20mL)对其进行处理之后得到一种沉淀。离心收集沉淀，并用Et2O(5×20mL)洗涤得到一种固体(134mg)，用HPLC对其进行分析。用制备HPLC纯化一定量的粗品(103mg)。将包含产物的级分冻干得到L242(4.5mg；2.9×10-3mmol)，为一种白色固体。产率1.3％。
实施例XIII-图13A-C
合成L244
概述：从担载在Rink酰胺树脂上的八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2(BBN[7-14])(A)开始分几步得到产物。在对连接基-蛙皮素[7-14]用试剂B裂解和脱保护之后在液相完成与DOTA三叔丁酯的最后偶联步骤。用制备HPLC纯化粗品得到L244。总产率：0.4％。
A.N，N′-(亚氨基二-2，1-乙烷二基)双[2，2，2-三氟乙酰胺]，A(图13A)
0℃下在1小时内将三氟乙酸乙基酯(50g；0.35mol)滴入在THF(180mL)中的二亚乙基三胺(18g；0.175mol)的溶液。室温下20小时后，将混合物蒸发至一种油状残余物(54g)。用Et2O(50mL)结晶该油，过滤，用冷Et2O(2×30mL)洗涤，并干燥得到A，为一种白色固体(46g；0.156mol)。产率：89％。
B.4-[N，N′-双[2-(三氟乙酰基)氨基乙基]氨基]-4-氧代丁酸，B(图13A)
室温下将琥珀酸酐(0.34g；3.4mmol)加入在THF(5mL)中的A(1g；3.4mmol)的溶液。28小时后将粗品浓缩得到残余物(1.59g)，用EtOAc(2×10mL)和1N HCl(2×15mL)洗涤。用Na2SO4干燥有机层，过滤并蒸发得到一种油状残余物(1.3g)，用快速色谱法(5)将其纯化得到B，为一种油(0.85g；2.15mmol)。产率63％。
C.4-[N，N′-双[2-[(9-H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基乙基]氨基]-4-氧代丁酸，D(图13A)
室温下将琥珀酸酐(2g；20mmol)加入在THF(25mL)中的A(5g；16.94mmol)的溶液。28小时后将粗品浓缩至残余物(7g)，在乙酸乙酯(100mL)和1N HCl(2×50mL)中洗涤。用Na2SO4干燥有机层，过滤并蒸发得到粗品B，为一种油状残余物(6.53g)。将2N NaOH(25mL)加到在EtOH(35mL)中的粗品B(5g)的悬浮液，并在室温下1小时后得到一种完全溶液。20小时后将溶剂蒸发得到C，为一种油(8.48g)。0℃下1小时内将在1，4-二烷(30mL)中的9-芴基甲基氯甲酸酯(6.54g，25.3mmol)的溶液滴入在10％Na2CO3水溶液(30mL)中的C的溶液。室温下20小时后得到一种胶状悬浮液，过滤得到一种白色固体(3.5g)和一种黄色溶液。蒸发溶液，用H2O(150mL)稀释剩余的水溶液，并用EtOAc(70mL)萃取。将新鲜的EtOAc(200mL)加到水相，得到一种悬浮液，将其冷却至0℃，并用浓HCl酸化至pH 2。用H2O(5×200mL)洗涤有机层至中性pH，然后干燥得到一种玻璃状固体(6.16g)。将该化合物悬浮在沸腾的正己烷(60mL)中持续1小时，过滤得到D，为一种白色固体(5.53g，8.54mmol)。总产率50％。
D.N-[4-[[4-[双[2-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙基]氨基-1，4-二氧代丁基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺，L244(图13B)
将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液再搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将4-[N，N′-双[2-[(9-H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基乙基]氨基]-4-氧代丁酸(777.3mg；1.2mmol)、HOBT(184mg；1.2mmol)、DIC(187μL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物于室温下振荡40小时，倒空和用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物振荡20分钟。倒空溶液，用DMA(2×7mL)洗涤树脂，并用CH2Cl2(5×7mL)洗涤树脂，然后将其在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，用Et2O(20mL)对其进行处理后得到一种沉淀。离心收集沉淀，并用Et2O(5×20mL)洗涤，得到F，为一种白色固体(140mg)。将DOTA三叔丁酯(112mg；0.178mmol)、HATU(70mg；0.178mmol)和DIEA(60μL；0.356mmol)加到在DMA(3mL)和CH2Cl2(2mL)中的F(50mg；0.0445mmol)的溶液，并在室温下搅拌24小时。将粗品蒸发至减小的体积(1mL)，并与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。蒸发溶剂后，用Et2O(20mL)处理残余物得到一种沉淀。离心收集沉淀，并用Et2O(5×20mL)洗涤得到一种淡棕色固体(132mg)，用HPLC对其进行分析。用制备HPLC纯化一定量的粗品(100mg)。将包含产物的级分冻干得到L244(图13C)(3.5mg；1.84×10-3mmol)，为一种白色固体。产率0.8％。
实施例XIV-实施例XLII的总体实验
L201-L228
A.人工偶联
用各6.0当量的HOBT和DIC处理6.0当量的适宜保护的氨基酸，并在反应容器之外活化。然后将在NMP中的活化的羧酸转移至含胺的树脂，使反应进行4-6小时，然后排干树脂并洗涤。
B.Fmoc-Gly-OH与4-氨基苯甲酸和氨基联苯羧酸酰胺的特殊偶联：
用在NMP(10mL NMP用于1克氨基酸，按重量计)中的HATU(10.0当量)和DIEA(20.0当量)处理Fmoc-Gly-OH(10.0当量)，并将溶液于RT下搅拌10-15分钟，然后转移至含有载胺树脂的容器。使对于每克树脂的溶液体积为15.0ml。在RT下继续偶联20小时，并从树脂上排出所有的反应物。再重复此过程一次，然后用NMP洗涤，随后继续下一步骤。
C.制备DO3A一酰胺：将8.0当量DOTA一酸溶于NMP，并用8.0当量的HBTU和16.0当量的DIEA处理。将此溶液于RT下搅拌15分钟，然后转至担载在树脂上的胺，并在RT下继续偶联24小时。然后排干树脂，洗涤，随后将肽裂解并纯化。
D.从树脂上裂解粗肽并纯化：将树脂悬浮在试剂B(15.0ml/g)中并在RT下振荡4小时。然后排干树脂，再次用2×5mL试剂B洗涤，并与前面的滤液合并。然后在RT下将滤液减压浓缩成糊/液体，并与25.0mL无水乙醚一起研磨(对于每克所用的树脂)。然后将悬浮液离心，并倾析醚层。再重复此过程两次，用制备HPLC纯化乙醚洗涤后的无色沉淀。
实施例XIV-图21
合成L201
使用0.5g Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-M-树脂(0.4mmol/g，0.5g，0.2mmol)(树脂A)。如在一般方法所述加入其余的氨基酸单元以制备(1R)-1-(双{2-[双(羧甲基)氨基]乙基}氨基)丙烷-3-甲酸-1-羧基-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L201)，产率：17.0mg(5.4％)。
实施例XV-图22A和22B
合成L202
A.4-Fmoc-肼基苯甲酸(图22A)：
用碳酸铯(21.5g，66.0mmol)处理在水(100ml)中的4-肼基苯甲酸(5.0g，32.9mmol)的悬浮液。在1小时内将在THF(25mL)中的Fmoc-Cl(9.1g，35.0mmol)滴加到以上溶液，同时搅拌。加入后将溶液再搅拌4小时，将反应混合物浓缩至大约75mL，并用乙醚(2×100mL)萃取。弃去醚层，并用2N HCl酸化水层。将分离的固体过滤，用水(5×100mL)洗涤，然后用乙腈重结晶得到产物(化合物B)，为一种无色固体。产率：11.0g(89％)。1H NMR(DMSO-d6)：d 4.5(m，1H，Ar-CH2-CH)，4.45(m，2H，Ar-CH2)6.6(bs，1H，Ar-
H)，7.4-7.9(m，9，Ar-H和Ar-CH2)，8.3(s，2H，Ar-
H)，9.6(s，2H，Ar-
H).M.S.-m/z373.2[M-H]
使用0.5g Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-M-树脂(0.4mmol/g，0.5g，0.2mmol)(树脂A)。如一般方法所述加入氨基酸单元，包括化合物B，以制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-4-肼基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L202)(图22B)，产率：25.0mg(8.3％)
实施例XVI-图23A和图23B
合成L203
A.制备4-Boc-氨基苄基苯甲酸酯化合物B(图23A)：
用粉末碳酸铯(1.3g，4.0mmol)处理在无水乙腈(10.0mL)中的4-boc-氨基苯甲酸(0.95g，4.0mmol)的悬浮液，并在氮气氛下剧烈搅拌。加入苄基溴(0.75g，4.4mmol)，并在氮气氛下将反应混合物回流20小时。然后将反应混合物倾入冰冷的水(200mL)，过滤分离的固体，并用水(5×50mL)洗涤。然后用甲醇水溶液重结晶粗物质以得到产物，为一种无色固体(化合物B)。产率：0.8g(61％).1HNMR(CDCl3)：d 1.5(s，9H，叔甲基)，5.4(s，2H，Ar-CH2)，7.4(m，7H，Ar-
H)和8.0(m，2H，Ar-
H).M.S.-m/z 326.1[M+H]。
B.4-氨基苄基苯甲酸酯化合物C(图23A)：
将4-Boc-氨基苄基苯甲酸酯(0.8g，2.5mmol)溶于含TFA(25％体积)的DCM(20mL)，并在RT搅拌2小时。将反应混合物倾入100.0g碎冰，并用饱和碳酸氢钠溶液中和，直至pH到达大约8.5。分离有机层，用DCM(3×20mL)萃取水层，并合并所有的有机层。然后用1×50mL饱和碳酸氢钠、水(2×50mL)洗涤DCM层，并干燥(硫酸钠)。除去溶剂得到一种无色固体(化合物C)，将此固体用于下一步而不进行进一步纯化。产率：0.51g(91％)。1H NMR(CDCl3)：d 5.3(s，2H，Ar-CH2)，6.6(d，2H，Ar-
H，j＝1.0Hz)，7.4(m，5H，Ar-
H，J＝1.0Hz)和7.9(d，2H，Ar-
H，J＝1.0Hz)。
C.4-(2-氯乙酰基)氨基苄基苯甲酸酯化合物D(图23A)：
将胺(0.51g，2.2mmol)溶于无水二甲基乙酰胺(5.0mL)，并在冰中冷却。通过注射器滴加氯乙酰氯(0.28g，2.5mmol)，使溶液变为RT，并搅拌2小时。再加入2.5mmol氯乙酰氯，并再继续搅拌2小时。然后将反应混合物倾入冰冷的水(100mL)。将沉淀的固体过滤，用水洗涤，然后用己烷/乙醚重结晶得到一种无色固体(化合物D)。产率：0.38g(56％)。1H NMR(CDCl3)：d 4.25(s，2H，CH2-Cl)，5.4(s，2H，Ar-
H)，7.4(m，5H，Ar-
H)，7.6(d，2H，Ar-
H)，8.2(d，2H，Ar-
H)和8.4(s，1H，-CONH)。
2-{1，4，7，10-四氮杂-7，10-双{[(叔丁基)氧基羰基]甲基}-4-[(N-{4-[苄氧基羰基]苯基}氨基甲酰基]环十二基}乙酸叔丁酯，化合物E图23A：
将DO3A-三叔丁酯.HCl(5.24g，9.5mmol)悬浮在30.0mL无水乙腈，加入无水碳酸钾(2.76g，20mmol)，并搅拌30分钟。然后将在无水乙腈(20.0mL)中的氯乙酰胺D(2.8g，9.2mmol)滴加到以上混合物10分钟。然后将反应混合物搅拌过夜。将溶液过滤，然后减压浓缩至糊。将该糊溶于大约200.0mL水，并用5×50mL乙酸乙酯萃取。用水(2×100mL)洗涤合并的有机层，并干燥(硫酸钠)。将溶液过滤并减压蒸发至糊，并用快速硅胶(600.0g)对糊进行色谱处理。用在DCM中的5％甲醇洗脱产物。收集在TLC上均一的所有级分，并蒸发得到一种无色胶。用异丙醚和DCM重结晶该胶以制备化合物E。产率：4.1g(55％)。1H NMR(CDCl3)：d 1.5(s，27H，甲基)，2.0-3.75(m，24H，NCH2s)，5.25(d，2H，Ar-CH2)，7.3(m，5H，Ar-
H)，7.8(d，2H，Ar-
H)和7.95(d，2H，Ar-
H).M.S.-m/z 804.3[M+H]。
D.还原以上的酸E以制备化合物F，(图23A)：将以上的苄基酯E(1.0g，1.24mmol)溶于甲醇-水混合物(10.0mL，95∶5)，并加入担载在碳上的钯(10％，0.2g)。然后用Parr仪器在50.0psi下将溶液氢化8小时。从溶液中滤出催化剂，然后减压浓缩得到一种无色绒毛状固体F。未对它进行进一步纯化，而将其立即置于下一步骤。MS：m/z 714.3[M+Na]。
E.制备L203(图23B)
使用上述的标准偶联方法使以上的酸F偶联至树脂[H-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-L-M-树脂]上的胺，树脂A和来自以上的F。0.5g(0.2mmol)树脂产生31.5mg最终纯化的肽(10.9％)N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L203)(图23B)。
实施例XVII-图24
合成L204
使用Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-L-M-树脂(0.5g，0.2mmol)(树脂A)。使用标准偶联条件，首先装载Fmoc-Gly-OH，然后装载来自以上方法(图23A)的F。产率：24.5mg(8.16％)的N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-4-氨基苯甲酰基-甘氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L204)(图24)。
实施例XVIII-图25
合成L205
如文献所述制备Fmoc-6-氨基烟酸1(″Synthesis ofdiacylhydrazine compiounds for therapeutic use″.Hoelzemann，G.；Goodman，S.(Merck Patent G.m.b.H..，Germany).Ger.Offen.2000，16 pp.CODEN：GWXXBX DE 19831710 A1 20000120)，并与预装载的Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-L-M-树脂(0.5g，0.2mmol)树脂A偶联，然后与如上述的其它氨基偶联以制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-4-氨基苯甲酰基-甘氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L205)产率：1.28mg(0.4％)。
实施例XIX-图26A和26B
合成L206
A.4′-Fmoc-氨基-3′-甲基联苯-4-甲酸B：
将氨基酸(0.41g，1.8mmol)溶于在10.0mL水中的碳酸铯(0.98g，3.0mmol)的溶液。参见″Rational Design of Diflunisal Analogueswith Reduced Affinity for Human Serum Albumin″Mao，H.等人，J.Am.Chem.Soc.，2001，123(43)，10429-10435。将此溶液在冰浴中冷却，滴加在THF(10.0mL)中的Fmoc-Cl(0.52g，2.0mmol)的溶液，并剧烈搅拌。加入后，将反应混合物于RT下搅拌20小时。然后用2NHCl酸化溶液。将沉淀的固体过滤，用水(3×20mL)洗涤并风干。然后用乙腈重结晶粗固体以得到一种无色绒毛状固体B图26A。产率：0.66g(75％).1H NMR(DMSO-d6)：d 2.2(s，Ar-Me)，4.25(t，1H，Ar-CH，j＝5Hz)，4.5(d，2H，O-CH2，j＝5.0Hz)，7.1(bs，1H，CONH)，7.4-8.0(m，8H，Ar-
H)和9.75(bs，1H，-COOH).M.S.：m/z472.0[M-H]。
使用标准偶联条件将以上的酸B与Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-L-M-树脂(0.2g，0.08mmol)树脂A偶联。如上述加入附加的基团以制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-[4′-氨基-2′-甲基联苯-4-羧基]-L-谷氨酰胺基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L206)。产率：30.5mg(24％)
实施例XX-图27A-B
合成L207
使用上述的方法由对应的胺制备3′-Fmoc-氨基-联苯-3-甲酸。参见″Synthesis of 3′-methyl-4-′nitrobiphenylcarboxylic acids bythe reaction of 3-methyl-4-nitrobenzenenediazonium acetatewith methyl benzoate″，Boyland，E.和Gorrod，J.，J.Chem.Soc.，Abstracts(1962)，2209-11。0.7G胺产生0.81g Fmoc-衍生物(58％)(化合物B，图27A)。1H NMR(DMSO-d6)：d 4.3(t，1H，Ar-CH)，4.5(d，2H，O-CH2)，7.25-8.25(m，16H，Ar-
H)和9.9(s，1H，-COOH).M.S.-m/z434[M-H]
将Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-L-M-树脂(0.2g，0.08mmol)树脂A与以上的酸B和上述其它基团偶联(图27B)。制备29.0mgN-[(3β，5β，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-[3′-氨基-联苯-3-羧基1]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L207)(23％)。
实施例XXI-图28
合成L208
将Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-L-M-树脂(0.2g，0.08mmol)A解封，并使用HATU作为偶联剂与对苯二酸偶联。用DIC和NHS活化所得的担载在树脂上的酸，然后与乙二胺偶联。最后将DOTA-一酸与担载在树脂上的胺偶联。制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-[1，2-二氨基乙基-对苯二酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺(L208)，产率为17.5mg(14％)
实施例XXII-图29A-B
合成L209
A.Boc-Glu(G-OBn)-G-OBn：
将Boc-谷氨酸(5.0g，20.2mol)溶于THF(50.0mL)，并在冰浴中冷却至0℃。加入HATU(15.61g，41.0mmol)，然后加入DIEA(6.5g，50.0mmol)。将反应混合物于0℃下搅拌30分钟。加入在THF(25.0mL)中的甘氨酸的苄基酯[8.45g，50mmol，通过用碳酸钠中和苄基甘氨酸盐酸盐，用DCM萃取并除去溶剂来产生]。将反应混合物变至RT，并在RT下搅拌20小时。在减压下除去所有的挥发物。用饱和碳酸钠溶液(100mL)处理残余物，并用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并有机层，用1N HCl(2×100mL)和水(2×100mL)洗涤，并干燥(硫酸钠)。将溶液过滤，并在减压下除去溶剂以得到一种糊，用快速硅胶(500.0g)对该糊进行色谱处理。用在DCM中的2％甲醇洗脱得到产物，为一种无色的糊(化合物B，图29A)。产率：8.5g(74.5％).1H NMR(CDCl3)：d1.4(s，9H，-CH3s)，2.0-2.5(m，4H，-CH-CH2和CO-CH)，4.2(m，5H，N-CH2-CO)，5.15(s，4H，Ar-CH2)，5.45(bs，1H，Boc-NH)，7.3(m，10H，Ar-
H)和7.6(2bs，2H，CONH).M.S.-m/z 564.1[M+H]。分析HPLC保留时间-8.29分(＞97％纯，20-65％B，经过15分钟)。
B.H-Glu(G-OBn)-G-OBn：
将以上的完全受保护的谷氨酸衍生物(1.7g，3.2mmol)B溶于DCM/TFA(4∶1，20mL)，并搅拌直至在TLC上原料消失(2小时)。将反应混合物倾入冰冷的饱和碳酸氢钠溶液(200mL)，分离有机层，用2×50mL DCM萃取水层，并与有机层合并。用饱和碳酸氢钠(2×100mL)、水(2×100mL)洗涤DCM层，并干燥(硫酸钠)。将溶液过滤，减压蒸发，并在真空下干燥残余物以得到一种玻璃(化合物C，图29A)，将其带入下一步骤而不进行进一步的纯化。产率：0.72g(95％)。M.S.-m/z442.2[M+H]。
C.(DOTA-三叔丁基)-Glu-(G-OBn)-G-OBn：
将在无水DCM(10.0mL)中的以上的胺C(1.33g，3mmol)加到活化的DOTA-三叔丁酯的溶液[2.27g，3.6mmol，用HBTU 1.36g，3.6mmol和DIEA 1.04g，8mmol处理，并在RT下在25mL无水DCM中搅拌30分钟]并在RT下搅拌20小时]。用200mL DCM稀释反应混合物，用饱和碳酸钠(2×150mL)洗涤，并干燥(硫酸钠)。将溶液过滤，并在减压下除去溶剂以得到一种褐色糊。用快速硅胶(500.0g)对粗产物作色谱处理。用在DCM中的2％甲醇洗脱得到产物，为一种无色胶(化合物D，图29A)。产率：1.7g(56.8％).1H NMR(CDCl3)：d 1.3和1.4(2s，9H，三个甲基，各自来自游离碱和DOTA的钠加合物)，2.0-3.5(m，20H，N-CH2s和-CH-CH2和CO-CH2)，3.75-4.5(m，13H，N-CH2-CO)，5.2(m，4H，Ar-CH2)和7.25(m，10H，Ar-
H).M.S.m/z-1018.3[M+Na]和996.5[M+H]和546.3[M+Na+H]/2。HPLC-保留时间：11.24分(＞90％，20-80％B，经过30分钟)。
D.(DOTA-三叔丁基)-Glu-(G-OH)-G-OH：
将以上的双苄基酯(0.2g，0.2mmol)D溶于甲醇-水(20mL，9∶1)，并在50psi下在10％Pd/C催化剂(0.4g，50％wt.水)存在下氢化。在HPLC和TLC上原料消失后(4小时)，滤出溶液中的催化剂，在减压下除去溶剂，并在高度真空下干燥残余物大约20小时(＜0.1mm)以得到产物，为一种无色泡沫(化合物E，图29A)。产率：0.12g(73.5％)。1HNMR(DMSO-d6)：d 1.3和1.4(2s，9H，对应于游离碱和DOTA的钠加合物的甲基)，1.8-4.7(m，33H，NCH2s，COCH2和CH-CH2和NH-CH-CO)，8.1，8.2和8.4(3bs，NHCO).M.S.：m/z-816.3[M+H]和838.3[M+Na].HPLC保留时间：3.52分(20-80％B，经过30分，＞95％纯)。
E.H-8-氨基-3，6-二氧杂辛酰基-8-氨基-3，6-二氧杂辛酰基-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2：
将Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-L-M-树脂(0.5g，0.2mmol)A解封，并依次与8-氨基-3，6-二氧杂辛酸偶联两次以在制备HPLC纯化之后得到以上脱保护的肽(化合物F，图29B)。产率：91.0mg(37％)。
HPLC保留时间：8.98分(＞95％纯度，10-40％B，经过10分钟).M.S.：m/z-1230.6[M+H]，615.9[M+2H]/2。
F.液相偶联以上的双酸E和胺F(图29B)
将双酸(13.5mg，0.0166mmol)E溶于100μL无水乙腈，用NHS(4.0mg，0.035mmol)和DIC(5.05mg，0.04mmol)处理，并在RT下搅拌24小时。往以上活化的酸加入游离胺F(51.0mg，0.41mmol)[通过以下方法产生：用饱和碳酸氢钠处理TFA盐并冻干溶液得到绒毛状固体的胺]，然后加入100μL NMP，并在RT下继续搅拌40小时。用无水乙醚(10mL)稀释溶液，离心收集沉淀，并再次用2×10mL无水乙醚洗涤。然后用制备HPLC纯化粗固体以得到产物，为一种无色绒毛状固体L209，如在图29B所示，产率为7.5mg(14.7％)。
实施例XXIII-图30A-B
合成L210
A.H-8-氨基辛酰基-8-氨基辛酰基-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2：
此化合物也完全以与化合物F(图29B)的情况相同的方式制备，但使用1-氨基辛酸，并用制备HPLC纯化胺(化合物B，图30A)。产率：95.0mg(38.9％)。HPLC保留时间：7.49分(＞95％纯度；10-40％B，经过10.0分钟).M.S.：m/z-1222.7[M+H]，611.8[M+2H]/2。
如在L209的情况下那样在100μL乙腈中将(DOTA-三叔丁基)-Glu-(G-OH)-G-OH(0.0163g，0.02mmol)转化成它的双NHS酯，用在100μL NMP中的游离碱-化合物B(60.0mg，0.05mmol)处理，并继续反应40小时，然后进行处理，并如上述纯化以制备L210(图30B)，产率为11.0mg(18％)。
实施例XXIV-图31
合成L211
使用标准方案由0.2g Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-L-M-树脂(0.08mmol)制备。制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺L211，产率为4.7mg(3.7％)(图31)。
实施例XXV-图32
合成L212
使用标准方案由Rink酰胺Novagel树脂(0.47mmol/g，0.2g，0.094mmol)通过在树脂上构建序列来制备。制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺L212，产率为25.0mg(17.7％)(图32)。
实施例XXVI-图33
合成L213
由Fmoc-Met-2-氯三苯甲基氯化物树脂(NovaBioChem，0.78mmol/g，0.26g，0.2mmol)制备，而序列的其余部分使用标准方法构建。制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-甲硫氨酸L213，产率为49.05mg(16.4％)(图33)。
实施例XXVII-图34
合成L214
使用标准条件用Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-L-M-树脂(0.2g，0.08mmol)A制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-D-苯丙氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺L214。得到8.5mg产物(6.4％)(图34)。
实施例XXVIII-图35
合成L215
用Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-L-M-树脂(0.2g，0.08mmol)A制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-精氨酰基-L-亮氨酰基-甘氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺L215。得到9.2mg(5.5％)(图35)。
实施例XXIX-图36
合成L216
用Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-L-M-树脂(0.2g，0.08mmol)A制备N[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-精氨酰基-L-酪氨酰基-甘氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺L216。得到25.0mg(14.7％)(图36)。
实施例XXX-图37
合成L217
用Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-L-M-树脂A(0.2g，0.08mmol)制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-赖氨酰基-L-酪氨酰基-甘氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺L217。得到58.0mg(34.7％)(图37)。
实施例XXXI-图38
合成L218
使用Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-L-M-树脂A(0.2g，0.08mmol)。将Fmoc-Lys(ivDde)用于引入赖氨酸。在完成线性序列之后，用在DMF中的10％肼除去赖氨酸的保护基(2×10mL；每次10分钟，然后洗涤)。然后用“总述”部分所述的方法引入其余的氨基酸以完成所需的肽序列。图38中的L218获得的产率为40.0mg(23.2％)。
实施例XXXII-图39
合成L219
使用4-氨磺酰丁酰基AM Novagel树脂(1.1mmol/g；0.5g；0.55mmol)。-20℃下将第一氨基酸装载到此树脂上20小时。用普通偶联方法完成其余的序列。洗涤后，用20.0当量的碘乙腈和10.0当量的DIEA将树脂烷基化20小时。然后排干树脂的液体，洗涤，随后用2.0当量的在5.0mL THF中的戊胺裂解20小时。随后用2×5.0mL的THF洗涤树脂，并合并所有的滤液。然后在减压下蒸发THF，用10.0mL的试剂B 将残余物解封，并如前述纯化肽N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-D-苯丙氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-氨基戊基，L219。得到28.0mg(2.8％)(图39)
实施例XXXIII-图40
合成L220
用NovaSyn TGR(0.25mmol/g；0.15g，0.05mmol)树脂A制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-D-丙氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺，L220。得到31.5mg(41.4％)(图40)。
实施例XXXIV-图41
合成L221
用NovaSyn TGR(0.25mmol/g；0.15g，0.05mmol)树脂A制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-D-苯丙氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-亮氨酸酰胺，L221。得到28.0mg(34.3％)(图41)。
实施例XXXV-图42
合成L222
用NovaSyn TGR(0.25mmol/g；0.15g，0.05mmol)树脂A制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-D-酪氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-β丙氨酰基-L-组氨酰基-L-苯丙氨酰基-L-正亮氨酸酰胺，L222。得到34.0mg(40.0％)(图42)。
实施例XXXVI-图43
合成L223
用NovaSyn TGR(0.25mmol/g；0.15g，0.05mmol)树脂A制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-苯丙氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-β丙氨酰基-L-组氨酰基-L-苯丙氨酰基-L-正亮氨酸酰胺，L223。得到31.2mg(37.1％)(图43)。
实施例XXXVII-图44
合成L224
用NovaSyn TGR(0.25mmol/g；0.15g，0.05mmol)树脂A制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-苯丙氨酰基-L-亮氨酸酰胺，L224。得到30.0mg(42.2％)(图44)。
实施例XXXVIII-图45
合成L225
用NovaSyn TGR(0.25mmol/g；0.15g，0.05mmol)树脂A制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-亮氨酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-丝氨酰基-L-苯丙氨酰基-L-蛋氨酸酰胺，L225。得到15.0mg(20.4％)(图45)。
实施例XXXIX-图46
合成L226
用NovaSyn TGR(0.25mmol/g；0.15g，0.05mmol)树脂A制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-组氨酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺，L226。得到40.0mg(52.9％)(图46)。
实施例XL-图47
合成L227
用NovaSyn TGR(0.25mmol/g；0.15g，0.05mmol)树脂A制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-亮氨酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-苏氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-苯丙氨酰基-L-蛋氨酸酰胺L227。得到28.0mg(36.7％)(图47)。
实施例XLI-图48
合成L228
用NovaSyn TGR(0.25mmol/g；0.15g，0.05mmol)树脂A制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-苯丙氨酰基-L-蛋氨酸酰胺，L228。得到26.0mg(33.8％)(图48)。
实施例XLII-合成其它GRP化合物
A.用于制备4，4′-氨基甲基联苯羧酸(B2)和3，3′-氨基甲基联苯羧酸(B3)的一般方法：
1.甲基-羟基甲基联苯羧酸酯：
将商购得到的(Aldrich Chemical Co.)4-羟基甲基苯基硼酸或3-羟基甲基苯基硼酸(1.0g，6.58mmol)和异丙醇(10mL)及2M碳酸钠(16mL)一起搅拌直至溶液变均一。通过使氮通过溶液而使溶液脱气，然后用固体甲基-3-溴苯甲酸酯或甲基-4-溴苯甲酸酯(1.35g，6.3mmol)处理，随后用Pd(O)催化剂{[(C6H5)3P]4Pd；0.023g，0.003mmol}处理。将反应混合物在氮气氛下保持回流，直至通过TLC分析确定原料溴苯甲酸酯用完(2-3小时)。然后用250mL水稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。合并有机层，用饱和碳酸氢钠溶液(2×50mL)洗涤，并干燥(Na2SO4)。在减压下除去溶剂，并用快速硅胶(100g)色谱处理残余物。用在己烷中的40％乙酸乙酯洗脱得到产物，为一种固体或油。
产率：
B2-0.45g(31％)；m.p.-170-171℃。
B3-0.69g(62％)；油。
1H NMR(CDCl3)d B2-3.94(s，3H，-COOCH3)，4.73(s，2H，-CH2-Ph)，7.475(d，2H，J＝5Hz)，7.6(d，2H，J＝10Hz)，7.65(d，2H，J＝5Hz)和8.09(d，2H，J＝10Hz)。
M.S.-m/e-243.0[M+H]
B3-3.94(s，3H，-COOCH3)，4.76(s，2H，-CH2-Ph)，7.50(m，4H)，7.62(s，1H)，7.77(s，1H)，8.00(s，1H)和8.27(s，1H)。
M.S.-m/e-243.2[M+H]
2.叠氮基甲基联苯羧酸酯：
在冰中冷却在无水二氯甲烷(10mL)中的以上联苯醇(2.0mmol)，用二苯基磷酰基叠氮化物(2.2mol)和DBU(2.0mmol)处理，并在氮气氛下搅拌24小时。用水稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(2×25mL)萃取。合并有机层，相继用0.5M柠檬酸溶液(2×25mL)、水(2×25mL)洗涤，并干燥(Na2SO4)。将溶液过滤，并在减压下蒸发得到粗产物。用己烷/乙醚结晶4，4′-异构体，并将3，3′-异构体与异丙醚一起研磨以除去所有的杂质；进行TLC分析确定产物是均一的，不需要作进一步纯化。
产率：
甲基-4-叠氮基甲基-4-联苯羧酸酯-0.245g(46％)；m.p.-106-108℃。
甲基-4-叠氮基甲基-4-联苯羧酸酯-0.36g(59％，油)
1H NMR(CDCl3)d-4，4′-异构体-3.95(s，3H，-COOCH3)，4.41(s，2H，-CH2N3)，7.42(d，2H，J＝5Hz)，7.66(m，4H)和8.11(d，2H，J＝5Hz)
3，3′-异构体-3.94(s，3H，-COOCH3)，4.41(s，2H，-CH2N3)，7.26-7.6(m，5H)，7.76(d，1H，J＝10Hz)，8.02(d，1H，J＝5Hz)和8.27(s，1H)。
3.水解联苯羧酸的甲酯：
用20mL 2M氢氧化锂溶液处理大约4mmol甲酯，并搅拌至溶液均一(20-24小时)。用2×50mL乙醚萃取水层，并弃去有机层。然后用0.5M柠檬酸酸化水层，将沉淀的固体过滤并干燥。不需要进行其它纯化，并将酸带至下一步骤。
产率：
4，4′-异构体-0.87甲酯产生0.754g酸(86.6％)；m.p.-205-210℃
3，3′-异构体-0.48g甲酯提供0.34g酸(63.6％)；m.p.-102-105℃。
1H NMR(DMSO-d6)d：4，4′-异构体-4.52(s，2H，-CH2N3)，7.50(d，2H，J＝5Hz)，7.9(m，4H)和8.03(d，2H，J＝10Hz)
3，3′-异构体-4.54(s，2H，-CH2N3)，7.4(d，1H，J＝10Hz)，7.5-7.7(m，4H)，7.92(ABq，2H)和8.19(s，1H)。
4.将叠氮化物还原成胺：
此还原在固相完成，并且不分离胺。用标准肽偶联方案将叠氮基羧酸装载在树脂上。洗涤后，将含叠氮化物的树脂与20当量的三苯膦在THF/水(95∶5)中一起振荡24小时。在氮正压下排干溶液，然后用标准洗涤方法洗涤。将所得的胺用于下一步偶联。
5.(3β，5β，7α，12α)-3-[{(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基}氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸：
将三丁基胺(3.2mL；13.5mmol)滴加到在0℃下搅拌的在THF(80mL)中的Fmoc-甘氨酸(4.0g，13.5mmol)的溶液。然后加入氯甲酸异丁酯(1.7mL；13.5mmol)，并在10分钟后在1小时内将在DMF(80mL)中的三丁基胺(2.6mL；11.2mmol)和(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸(4.5g；11.2mmol)的悬浮液滴加到冷却的溶液。使混合物升温至室温，并在6小时后将溶液浓缩至120mL，然后加入水(180mL)和1N HCl(30mL)(最终pH 1.5)。将沉淀的固体过滤，用水(2×100mL)洗涤，真空干燥，并用快速色谱法纯化。用氯仿/甲醇(8∶2)洗脱得到产物，为一种无色固体。
产率：1.9g(25％)。TLC：Rf 0.30(CHCl3/MeOH/NH4OH-6∶3∶1)。
化合物的体外和体内测试
实施例XLIII：在PC3细胞系中对GRP受体的体外结合试验
图14A-B
为鉴定潜在的先导化合物，使用一种鉴定对GRP-R具有高亲和力的化合物的体外试验。由于已知来自人前列腺癌的PC3细胞系表现出在细胞表面高表达GRP-R，因此开发出96孔平板格式的放射配体结合试验，并使其有效用于测定125I-BBN与GRP-R阳性PC3细胞的结合和本发明化合物抑制这种结合的能力。用此试验测定RP527配体、DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH2(对照)和抑制125I-BBN与GRP-R结合的本发明化合物的IC50。(RP527＝N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-5-氨基戊酸-BBN(7-14)[SEQ.ID.NO：1]，它具有MS＝1442.6和IC50-0.84)。Van de Wiele C，Dumont F等人，Technetium-99m RP527，a GRPanalogue for visualization of GRP receptor-expressingmalignancies：a feasibility study.Eur.J.Nucl.Med.，(2000)27；1694-1699；DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH2也称作DO3A-一酰胺-8-氨基-辛酸-BBN(7-14)[SEQ.ID.NO：1]，它具有MS＝1467.0。DO3A一酰胺-氨基辛基-BBN[7-14]。
使放射配体结合平板试验有效用于BBN和BBN类似物(包括可商购得到的BBN和L1)，且还使用99mTc RP527作为放射配体。
A.材料和方法：
1.细胞培养：
从美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)获得PC3(人前列腺癌细胞系)，并在组织培养瓶(Corning)中在RPMI1640(ATCC)内培养。此生长培养基补充有10％热灭活FBS(Hyclone，SH30070.03)、10mM HEPES(GibcoBRL，15630-080)和抗生素/抗真菌剂(GibcoBRL，15240-062)得到最终浓度的青霉素-链霉素(100单位/mL)和两性霉素B(0.25μg/mL)。将所有的培养物保持在含5％CO2/95％空气的增湿气氛和37℃下，按指示用0.05％胰蛋白酶/EDTA(GibcoBRL25300-054)进行常规传代。在96孔白色/透明底微滴平板(FalconOptilux-1)或96孔黑色/透明胶原I cellware平板(BecktonDickinson Biocoat)中以2.0×104/孔的浓度接种培养用于实验的细胞。在接种后第1或2天将平板用于结合研究。
2.结合缓冲液：
补充20mM HEPES、0.1％BSA(w/v)、0.5mM PMSF(AEBSF)、杆菌肽(50mg/500ml)，pH 7.4的RPMI 1640(ATCC)。从Perkin-Elmer获得125I-BBN(不带载体，2200Ci/mmole)。
B.与125I-BBN对PC3细胞中的GRP-R的竞争试验：
用96孔平板试验测定本发明各种化合物抑制125I-BBN与人GRP-R结合的IC50。采用以下的一般方法：
将所有受试化合物溶于结合缓冲液，并在结合缓冲液中完成适宜的稀释。在96-孔白色/透明底微滴平板(Falcon Optilux-I)或96孔黑色/透明胶原I cellware平板(Beckton Dickinson Biocoat)中以2.0×104/孔的浓度接种用于试验的PC3细胞(人前列腺癌细胞系)。在接种后第1或2天将平板用于结合研究。在试验前检查平板的汇合(＞90％汇合)。对于此试验，将浓度范围为1.25×10-9M-5×10-9M的RP527或DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH2配体(对照)或本发明化合物与125I-BBN(25,000cpm/well)一起温育。以75μL/孔的体积进行这些研究。将一式三份的孔用于各数据点。在加入适宜的溶液之后，将平板在4℃下培养1小时以防止配体-受体复合物内化。通过加入200μL冰冷的培养缓冲液来终止培养。将平板洗涤5次，并吸干。用LKBCompuGamma计数器或微板闪烁计数检测放射性。
RP527(对照)和L70-本发明化合物的竞争结合曲线可以见于图14A-B。这些数据表明RP527对照的IC50为2.5nM，而L70-本发明的化合物的IC50为5nM。DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH2对照的IC50为5nM。受试的本发明化合物的IC50值可以见于以上表1-3，表明它们与对照的值相当，从而可以预期其对受体具有充足的亲和力，以允许在体内被带受体的细胞摄取。
C.内化&流出试验：
在96孔平板上进行这些试验。在洗涤除去血清蛋白之后，将PC3细胞与125I-BBN、177Lu-DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH2或放射性标记的本发明的化合物一起在37℃下培养40分钟。通过加入200μL冰冷的结合缓冲液来终止培养。用结合缓冲液将平板洗涤两次。为除去表面结合的放射配体，将细胞与0.2M乙酸(在盐水中)，pH 2.8一起培养2分钟。将平板离心，并收集酸洗涤培养基以测定未被内化的放射性的量。收集细胞以测定内化的125I-BBN的数量，并在γ-计数器中分析所有的样品。通过将不同时间点获得的计数与在最后时间点(T40分钟)获得的计数进行比较而将内化试验数据标准化。
对于流出研究，在37℃下对PC3细胞负载125I-BBN或放射性标记的本发明化合物40分钟后，洗去未结合的物质，并如上述测定内化％。然后在37℃下将细胞重悬在结合缓冲液中达3小时。在0.5、1、2或3小时，如上所述测定相对于最初负荷水平保持内化的量，并将其用于计算流出百分比，记录于表5。
表5
125I-BBN以及DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH2(对照)和本发明化合物
的Lu-177络合物的内化和流出
| I-BBN | DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH2(对照) | L63 | L64 | L70 | |
| 内化(40分钟) | 59 | 89 | 64 | 69 | 70 |
| 流出(2小时) | 35 | 28 | 0 | 20 | 12 |
这些数据表明，本发明的化合物被PC3细胞内化和保留的程度与对照物类似。
实施例XLIV-制备Tc-标记的GRP化合物
制备在0.1％TFA水溶液中浓度为1mg/mL的表6鉴定的本发明化合物的肽溶液。通过将SnCl2.2H2O(20mg/mL)溶于1N HCl而制备氯化亚锡溶液。通过将等分试样的SnCl2溶液(10μL)加到葡萄糖酸钠溶液来制备包含20μg SnCl2.2H2O/100μL的葡萄糖酸亚锡溶液，所述葡萄糖酸钠溶液通过将13mg的葡萄糖酸钠溶于水来制备。通过将50mg HP-γ-CD溶于1mL水来制备羟丙基γ-环糊精[HP-γ-CD]溶液。
通过混合20μl未标记化合物(20μg)的溶液，50μL HP-γ-CD溶液，100μL Sn-葡萄糖酸盐溶液和20-50μL 99mTc高锝酸盐(5-8mCi，Syncor)来制备以下鉴定的99mTc标记的化合物。最终的体积大约为200μL，而最终pH为4.5-5。将反应混合物在100℃下加热15-20分钟，然后通过反相HPLC分析以测定放射化学纯度(RCP)。通过HPLC分离目标产物峰，收集至含有5mg/mL抗坏血酸、16mg/mL HP-γ-CD和50mM磷酸盐缓冲液，pH 4.5的稳定缓冲液中，并用加速真空浓缩以除去乙腈。用于分析和纯化的HPLC系统如下：C18 Vydac柱，4.6×250mm，水相：在水中的0.1％TFA，有机相：在乙腈中的0.085％TFA。流速：1mL/分。取决于各肽的性质，使用20％-25％乙腈/0.085％TFA的恒溶剂洗脱。
标记结果总结在表6中。
表6
| 化合物1 | 序列2 | HPLC保留时间(分) | 最初RCP3(％) | RCP4(％)纯化后即刻 |
| L2 | -RJQWAVGHLM-NH2 | 5.47 | 89.9 | 95.6 |
| L4 | -SJQWAVGHLM-NH2 | 5.92 | 65 | 97 |
| L8 | -JKQWAVGHLM-NH2 | 6.72 | 86 | 94 |
| L1 | -KJQWAVGHLM-NH2 | 5.43 | 88.2 | 92.6 |
| L9 | -JRQWAVGHLM-NH2 | 7.28 | 91.7 | 96.2 |
| L7 | -aJQWAVGHLM-NH2 | 8.47 | 88.6 | 95.9 |
n.d.＝未检测
1：所有化合物与N，N′-二甲基甘氨酰-Ser-Cys-Gly金属螯合剂缀合。使用Acm保护形式的配体。因此，用于制备L2的99mTc络合物的配体为N，N′-二甲基甘氨酰-Ser-Cys(Acm)-Gly-RJQWAVGHLM-NH2。在与Tc螯合期间除去Acm基团。
2：在序列中，″J″指8-氨基-3，6-二氧杂辛酸，而″a ″指D-丙氨酸。
3：加热后和HPLC纯化前即刻进行最初RCP测定。
4：在HPLC分离和通过加速真空除去乙腈之后测定RCP。
实施例XLV-制备用于细胞结合和生物分布研究的177Lu-L64：
通过在90℃下将10μg L64配体(10μL 1mg/mL水溶液)、100μL乙酸铵缓冲液(0.2M，pH 5.2)和～1-2mCi在0.05N HCl中的177LuCl3(MURR)温育15分钟来合成此化合物。通过加入20μL1％Na2EDTA·2H2O(Aldrich)水溶液来清除游离177Lu。所得的放射化学纯度(RCP)为～95％。通过HPLC，使用YMC Basic C8柱[4.6×150mm]，30℃的柱温和1mL/分的流速，以及30分钟内68％A/32％B-66％A/34％B的梯度，将放射性标记的产物与未标记的配体和其它杂质分离，其中A为柠檬酸盐缓冲液(0.02M，pH 3.0)，而B为80％CH3CN/20％CH3OH。分离的化合物的RCP为～100％，而HPLC保留时间为23.4分钟。
通过将目标HPLC峰收集至1000μL柠檬酸盐缓冲液(0.05M，pH5.3，含1％抗坏血酸和0.1％HSA)来制备用于生物分布和细胞结合研究的样品。通过离心浓缩30分钟来除去收集的洗脱物中的有机洗脱剂。对于细胞结合研究，在体外研究30分钟内用细胞结合培养基稀释纯化的样品至浓度为1.5μCi/mL。关于生物分布研究，在体内研究30分钟内将样品用柠檬酸盐缓冲液(0.05M，pH 5.3，含1％抗坏血酸钠和0.1％HSA)稀释至最终浓度为50μCi/mL。
实施例XLVI-制备用于放射治疗研究的177Lu-L64
通过于85℃下将70μg L64配体(70μL 1mg/mL水溶液)、200μL乙酸铵缓冲液(0.2M，pH 5.2)和～30-40mCi在0.05N HCl中的177LuCl3(MURR)温育10分钟来合成此化合物。在冷却至室温后，通过加入20μL 2％Na2EDTA·2H2O(Aldrich)水溶液清除游离177Lu。所得的放射化学纯度(RCP)为～95％。通过HPLC，用300VHP阴离子交换柱(7.5×50mm)(Vydac)从未标记的配体和其它杂质中分离放射性标记的产物，所述的柱用水、50％乙腈/水，然后用1g/L乙酸铵水溶液以1mL/分的流速依次洗脱。用50％CH3CN从柱中洗脱目标化合物，并将其与～1mL含5％抗坏血酸、0.2％HSA和0.9％(v∶v)苄醇的柠檬酸盐缓冲液(0.05M，pH 5.3)混合。通过旋转真空40分钟除去分离级分中的有机部分，并在体内研究30分钟内用含5％抗坏血酸、0.2％HSA和0.9％(v∶v)苄基醇的柠檬酸盐缓冲液(0.05M，pH 5.3)将该浓缩的溶液(～20-25mCi)调节至浓度为7.5mCi/mL。所得的化合物的RCP＞95％。
实施例XLVII-制备111In-L64：
通过在85℃下在0.05N HCl(80μL)和155μL乙酸钠缓冲液(0.5M，pH 4.5)中将10μg L64配体(5μL在0.01N HCl中的2mg/mL溶液)、60μL乙醇、1.12mCi 111InCl3温育30分钟来合成此化合物。通过加入20μL 1％Na2EDTA.2H2O(Aldrich)水溶液来清除游离111In。所得的放射化学纯度(RCP)为87％。通过HPLC，使用Vydac C18柱[4.6×250mm]，50℃的柱温和1.5mL/分的流速，以及20分钟内75％A/25％B-65％A/35％B的梯度，从未标记的配体和其它杂质中分离放射性标记的产物，其中A为0.1％TFA水溶液，而B为在乙腈中的0.085％TFA。以此系统，111In-L64的保留时间为15.7分钟。分离的化合物RCP为96.7％。
实施例XLVIII-制备177Lu-DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH2(对照)
通过将DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH2配体(如美国专利申请公开2002/0054855和WO 02/87637所述制备，二者被引用作为参考)溶于0.01N HCl至浓度为1mg/mL来制备肽的储备液。以所示的顺序混合以下试剂来制备177Lu-DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH2：
0.2M NH4OAc，pH 6.8 100μl
肽储备液，1mg/mL，在0.01N HCl中 5μL
177LuCl3(MURR)，在0.05M HCl中 1.2μl(1.4mCi)
将反应混合物在85℃下保温10分钟。在水浴中冷却至室温后，加入20μL 1％EDTA溶液和20μL EtOH。通过HPLC，使用C18柱(VYDAC Cat#；218TP54)分析化合物，用20分钟内21-25％B的梯度以1mL/min的流速洗脱，其中A为0.1％TFA/H2O，而B为0.1％TFA/CH3CN)。形成97.1％产率(RCP)的177Lu-DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH2，其在此系统中的保留时间为～16.1分钟。
实施例XLIX-制备177Lu-L63
如关于177Lu-DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH2所述制备此化合物。通过HPLC，使用C18柱(VYDAC Cat#，218TP54)分析化合物，以1mL/分的流速和20分钟内30-34％B的梯度洗脱(其中溶剂为A.0.1％TFA/H2O，而B为0.1％TFA/CH3CN)。形成的177Lu-L63的RCP为97.8％，在此系统中的保留时间为～14.2分钟。
实施例L-制备用于细胞结合和生物分布研究的177Lu-L70：
根据上述的方法制备此化合物，但换成L70(实施例II的配体)。用YMC Basic C8柱(4.6×150mm)进行纯化，柱温为30℃，流速为1mL/分，而梯度为40分钟内80％A/20％B至75％A/25％B，其中A为柠檬酸盐缓冲液(0.02M，pH 4.5)，而B为80％CH3CN/20％CH3OH。分离的化合物的RCP为～100％，而HPLC保留时间为25.4min。
实施例LI-制备用于放射治疗研究的177Lu-L70：
如以上关于L64所述制备此化合物。
实施例LII-制备用于细胞结合和生物分布研究的111In-L70：
通过在85℃下将10μg L70配体(10μL在0.01N HCl中的1mg/mL溶液)、180μL乙酸铵缓冲液(0.2M，pH 5.3)、在0.05N HCl中的1.1mCi111InCl3(61μL，Mallinckrodt)和50μL盐水保温30分钟来合成此化合物。通过加入20μL 1％Na2EDTA·2H2O(Aldrich)水溶液来清除游离的111In。所得的放射化学纯度(RCP)为86％。通过HPLC，使用与Vydac强阴离子交换柱[7.5×50mm]相连的Waters XTerra C18柱，从未标记的配体和其它杂质中分离放射性标记的产物，柱温为30℃，流速为1mL/分，且梯度如下表列出，其中A为0.1mM NaOH水溶液，pH 10.0，B为1g/L乙酸铵水溶液，pH 6.7，而C为乙腈。利用此系统，111In-L70的保留时间为15分钟，而L70配体的保留时间为27-28分钟。分离的化合物的RCP为96％。
通过收集目标HPLC峰至500μL柠檬酸盐缓冲液(0.05M，pH 5.3，含有5％抗坏血酸、1mg/mL L-蛋氨酸和0.2％HSA)来制备用于生物分布和细胞结合研究的样品。通过旋转真空30分钟来除去收集物中的有机部分。关于细胞结合研究，在体外研究30分钟内使用纯化、浓缩的样品。关于生物分布研究，在体内研究30分钟内用柠檬酸盐缓冲液(0.05M，pH 5.3，包含5％抗坏血酸钠和0.2％HSA)将样品稀释至终浓度为10uCi/mL。
| 时间，分钟 | A | B | C |
| 0-10 | 100％ | ||
| 10-11 | 100-50％ | 0-50％ | |
| 11-21 | 50％ | 50％ | |
| 21-22 | 50-0％ | 0-50％ | 50％ |
| 22-32 | 50％ | 50％ |
实施例LIII-体内药代动力学研究
A.示踪剂量生物分布：
用以下鉴定的本发明化合物在荷有异种移植的PC3肿瘤的裸鼠([Ncrl-Foxnl<nu>)中进行低剂量药代动力学研究(例如生物分布研究)。在所有的研究中，以200μCi/kg给小鼠静脉内施用100μL 177Lu-标记的受试化合物，且每组(n＝3-4)的停留时间为1和24小时。在LKB1282 CompuGamma计数器中以适宜的标准分析组织。
表7
在1和24小时在负荷PC3肿瘤的裸鼠中进行药代动力学比较
(200μCi/kg；值为％ID/g)177Lu-177标记的本发明化合物与对照比较
| 组织 | DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH2对照 | L63 | L64 | L70 | ||||
| 1小时 | 24小时 | 1小时 | 24小时 | 1小时 | 24小时 | 1小时 | 24小时 | |
| 血液 | 0.44 | 0.03 | 7.54 | 0.05 | 1.87 | 0.02 | 0.33 | 0.03 |
| 肝 | 0.38 | 0.04 | 12.15 | 0.20 | 2.89 | 0.21 | 0.77 | 0.10 |
| 肾 | 7.65 | 1.03 | 7.22 | 0.84 | 10.95 | 1.45 | 6.01 | 2.31 |
| 肿瘤 | 3.66 | 1.52 | 9.49 | 2.27 | 9.83 | 3.60 | 6.42 | 3.50 |
| 胰腺 | 28.60 | 1.01 | 54.04 | 1.62 | 77.78 | 6.56 | 42.34 | 40.24 |
在L64和L70注射之后血液、肝脏和肾中的放射性的分布与对照化合物DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH2的类似，而L64和L70在肿瘤中的摄取在1和24小时则高得多。L63也表现高肿瘤摄取，虽然早期血液和肝脏值有所增加。小鼠胰腺-已知具有GRP受体的正常器官对L64、L70和L63的摄取大大高于对照化合物DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH2。
实施例LIV-受体亚型特异性
目前，已知GRP受体家族的四种哺乳动物成员：GRP-偏好受体(GRP-R)、神经调节肽-B偏好受体(NMB-R)、蛙皮素受体亚型3(BB3-R)和蛙皮素受体亚型4(BB4-R)。研究177Lu-L70的受体亚型特异性。结果表明，177Lu-L70与GRP-R和NMB-R特异性结合，并且对BB3-R的亲和力小。
通过体外受体放射自显影术，使用Reubi等人，″BombesinReceptor Subtypes in Human Cancers Detection with the UniversalRadioligand125I-[D-Tyr6，beta-Ala，Phe13，Nle14]″，Clin.CancerRes.8：1139-1146(2002)所述的方法和先前发现仅表达一种GRP受体亚型的组织样品，以及包括正常胰腺和结肠及慢性胰腺炎的非-肿瘤组织确定L70的镥络合物[这里称为177Lu-L70](如上述制备)的亚型特异性(在下面表8a中表示)。将人回肠类癌组织用作NMB-R的来源，将人前列腺癌用作GRP-R的来源，而将人支气管类癌用作BB3-R亚型受体的来源。为了进行比较，还使用其它蛙皮素放射性配体，如125I-Tyr4-蛙皮素，或已知为通用配体的化合物，125I-[DTyr6，βAla11，Phe13，Nle14]-BBN(6-14)(其与GRP-R的所有三个亚型结合)，对相邻组织切片进行受体放射自显影。进一步讨论见Fleischmann等人“BombesinReceptors in Distinct Tissue Compartments of Human PancreaticDisease，”Lab.Invest.80：1807-1817(2000)；Markwalder等人，“Gastin-Releasing Peptide Receptors in the HumanProstate：Relation to Neoplastic Transformation，”Cancer Res.59：1152-1159(1999)；Gugger等人，“GRP Receptors inNon-Neoplastic and Neoplastic Human Breast，”Am.J.Pathol.155：2067-2076(1999)。
表8A
使用不同放射性配体检测各种人类组织中的蛙皮素受体亚型
| 肿瘤 | n | 使用177Lu-L70进行受体放射自显影术 | 使用标准BN放射性配体进行受体放射自显影术* | ||||
| GRP-R | NMB-R | BB3 | GRP-R | NMB-R | BB3 | ||
| 乳腺Ca | 8 | 8/8 | 0/8 | 0/8 | 8/8 | 0/8 | 0/8 |
| 前列腺Ca | 4 | 4/4 | 0/4 | 0/4 | 4/4 | 0/4 | 0/4 |
| 肾Ca | 6 | 5/6 | 0/6 | 0/6 | 4/6 | 0/6 | 0/6 |
| 回肠类癌 | 8 | 0/8 | 8/8 | 0/8 | 0/8 | 8/8 | 0/8 |
| 支气管类癌 | 6 | 2/6(弱) | 0/6 | 0/6 | 2/6(弱) | 0/6 | 6/6 |
| 结肠Ca-肿瘤-平滑肌 | 77 | 3/7(弱)7/7 | 0/70/7 | 0/70/7 | 3/7(弱)7/7 | 0/70/7 | 0/70/7 |
| 胰腺Ca | 4 | 0/4 | 0/4 | 0/4 | 0/4 | 0/4 | 0/4 |
| 慢性胰腺炎(腺泡) | 5 | 5/5 | 0/5 | 0/5 | 5/5 | 0/5 | 0/5 |
| 人胰腺(腺泡) | 7 | 1/7(弱) | 0/7 | 0/7 | 0/7 | 0/7 | 0/7 |
| 小鼠胰腺(腺泡) | 4 | 4/4 | 0/4 | 0/4 | 4/4 | 0/4 | 0/4 |
*125I-[DTyr6，βAla11，Phe13，Nle14]-BBN(6-14)和125I-Tyr4-BBN
从表8a可以看出，也可使用177Lu-L70体外显现使用已建立的放射性配体鉴定的所有表达GRP-R的肿瘤，如前列腺、乳腺和肾细胞癌。如表8a所示，由于敏感性更好，可使用177Lu-L70(但不能使用125I-Tyr4-BBN)鉴定所选择的具有较低GRP-R水平的肿瘤。所有用已建立的放射性配体鉴定的表达NMB-R的肿瘤也可用177Lu-L70显现。相反，不能用177Lu-L70检测BB3肿瘤。人们不应对在表8a所列各种类型肿瘤中受体表达的天然发生率作出任何结论，因为所试验例子被选择为在绝大多数情况下受体-阳性，仅有少数选择阴性对照。正常的人类胰腺不被177Lu-L70标记，而在相同条件下小鼠胰腺被强标记。虽然正常胰腺是一种可非常迅速降解的组织，不能完全排除蛋白包括受体的降解，表明人类胰腺数据确实为阴性的因素包括相似条件下小鼠胰腺的阳性对照和在相应人类胰岛中发现的强标记的BB3，其代表所研究的人类胰腺质量的阳性对照。此外，在病理学改变(慢性胰腺炎)的胰腺组织中检测到GRP-R表明GRP-R当存在时可在所选择的实验条件下在该组织中被鉴定。事实上，177Lu-L70以较之125I-Tyr4-BBN更高的敏感性鉴定慢性胰腺炎中的这些GRP-R。胰腺癌均不含可测出量的GRP-R，少数结肠癌显示用177Lu-L70测量的低密度的非均匀分布的GRP受体(表8a)。还应进一步注意到结肠平滑肌表达GRP-R且用177Lu-L70及已建立的蛙皮素配体在体外检测到。
表8B
175Lu-L70与在人类癌症中表达的3种蛙皮素受体亚型的结合亲和性。数据以nM IC50(平均值±SEM.n＝圆括号中的实验数)表示。
| 化合物 | B.NMB-R | C.GRP-R | BB3 |
| 通用配体 | 0.8±0.1(3) | 0.7±0.1(3) | 1.1±0.1(3) |
| 175Lu-L70 | 0.9±0.1(4) | 0.8±0.1(5) | ＞1,000(3) |
如表8b所示，冷标记的175Lu-L70对在人类组织中表达的人GRP和NMB受体具有非常高的亲和性，而对BB3受体仅有低亲和性。这些实验使用125I-[DTyr6，βAla11，Phe13，Nle14]-BBN(6-14)作为放射性示踪剂。使用177Lu-标记的L70作为放射性示踪剂，上述数据由此被证实和扩展。所有表达GRP-R的人类癌症都被177Lu-L70强标记。对所有NMB-R-阳性肿瘤也同样。相反，没有显现BB3肿瘤。177Lu-L70的敏感性似乎好于125I-Tyr4-BBN或125I-标记的通用蛙皮素类似物。因此，可使用177Lu-L70很容易地鉴定少数表达低密度GRP-R的肿瘤，而使用125I-Tyr4-BBN时，它们不是阳性的。177Lu-L70的结合特性还可在非-肿瘤组织中加以证实。尽管作为对照的小鼠胰腺显示出表达非常高密度的GRP-R，正常人类胰腺腺泡全无GRP-R。然而，在慢性胰腺炎的状况下，可在腺泡(如Fleischmann等人先前报道，“Bombesin Receptorsin Distinct Tissue Compartments of Human Pancreatic Diseases，”Lab.Invest.80：1807-1817(2000))和组织中鉴定出GRP-R，且使用177Lu-L70较之使用125I-Tyr4-BBN再次具有更好的敏感性。相反，表达BB3的胰岛不被177Lu-L70检测出，而它们被通用配体强标记，如先前Fleischmann等人，“Bombesin Recptors in Distinct tissueCompartments of Human Pancreatic Disease，”Lab.Invest.80：1807-1817(2000)所报道的。少数结肠癌具有GRP-R，通常密度非常低且不均匀分布，正常结肠平滑肌表达高密度GRP-R。
表8a和8b的结果表明预期Lu标记的L70衍生物可很好地结合主要表达GRP-R的人类前列腺癌。它们还表明预期Lu标记的L70衍生物不会很好地结合正常的人类胰腺(其主要表达BB3-R受体)，或主要表达BB3-R受体亚型的癌。
实施例LV-放射治疗研究
A.效力研究
使用负荷PC3肿瘤的裸鼠模型进行放射治疗研究。在短期效力研究中，将177Lu标记的本发明的化合物L64、L70、L63和治疗对照化合物DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH2与未治疗的对照组作比较。(每个治疗组的n＝12，长达30天，而合并的未治疗的对照组的n＝36，长达31天)。对于所有效力研究而言，在无菌条件下给小鼠静脉内或皮下施用100μL 30mCi/kg177Lu-标记的本发明的化合物。在研究持续期间将受试者笼养在栅栏环境中。在整个研究期间每周对每只受试动物进行3次体重和肿瘤大小(用卡尺测量)收集。提前终止的指标包括：死亡；总体重(TBW)下降等于或大于20％；肿瘤大小等于或大于2cm3。短期效力研究的结果在图15A中显示。这些结果表明用L70、L64或L63治疗的动物与不给予治疗的动物和给予相同剂量DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH2对照的动物相比存活提高。
用L64和L70，使用与前述相同的剂量，但每种化合物使用更多动物(n＝46)并追踪长达120天，来进行长期效力研究。长期效力研究的结果表示在图15B中。相对于与前面相同的对照(n＝36)，L64和L70治疗均明显增加存活(p＜0.0001)，且L70好于L64，虽然彼此没有统计学差异(p＜0.067)。
实施例LVI
使用分段偶联对L64和L70的可替代选择的制备
可以使用由A-D(图19)概括表示的中间产物的集合体来制备化合物L64和L70，所述中间产物本身可以由固相和液相肽合成领域中已知的标准方法制备(Synthetic Peptides-A User′s Guide 1992，Grant，G.，Ed.WH.Freeman Co.，NY，Chap 3和Chap 4pp 77-258；Chan，W.C.和White，P.D.Basic Procedures in Fmoc Solid Phase PeptideSynthesis-A Practical Approach 2002，Chan，W.C.和White，P.D.Eds Oxford University Press，New York，Chap.3pp 41-76；Barlos，K和Gatos，G.Convergent Peptide Synthesisin Fmoc SolidPhase Peptide Synthesis-A Practical Approach 2002，Chan，W.C.和White，P.D.Eds Oxford University Press，New York，Chap.9pp216-228.)，所述文献在此被引用以供参考。
这些方法包括基于Aloc、Boc、Fmoc或苄氧基羰基的肽合成策略，或者审慎选择的那些固相或溶液方法的组合。用于特定步骤的中间体根据分子中每个位置的适宜保护基的选择来选择，所述保护基可以选自图1所示的基团清单。本领域技术人员还理解，还可以使用可与肽合成方法相容、包含可替代选择的保护基的中间体，而以上所示的保护基的罗列选项用作例示而不是包括性的，且这些可替代的选择在本领域中是已知的。
这在概述这种方法的图20中作了详细例示。当应用相同的合成策略时，用中间产物C2替换在合成L64中所示的C1而得到L70。
实施例LVII-图49A和49B
合成L69
概述：(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸A与Fmoc-Cl反应得到中间产物B。使用八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2(BBN[7-14])官能化的Rink酰胺树脂(A)依次与B、Fmoc-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸和DOTA三叔丁酯反应。在用试剂B裂解和脱保护之后，用制备HPLC纯化粗品，得到L230。总产率：4.2％。
A.(3β，5β，7α，12α)-3-(9H-芴-9-基甲氧基)氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸，B(图49)
将在1，4-二烷(18mL)中的9-芴基甲氧基羰基氯(1.4g；5.4mmol)的溶液滴加到在0℃下搅拌的在10％Na2CO3水溶液(30mL)和1，4-二烷(18mL)中的(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸A(2.0g；4.9mmol)(3)的悬浮液。室温下搅拌6小时后加入H2O(100mL)，用Et2O(2×90mL)洗涤水相，然后加入2M HCl(15mL)(最终pH：1.5)。将沉淀的固体过滤，用H2O(3×100mL)洗涤，真空干燥，然后用快速色谱法纯化得到B，为一种白色固体(2.2g；3.5mmol)。产率71％。
B.N-[3β，5β，7α，12α)-3-[[[2-[2-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-7，12-二羟基-24-氧代胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺，L69(图50)
将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟。过滤溶液，并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液再搅拌20分钟，然后过滤溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将(3β，5β，7α，12α)-3-(9H-芴-9-基甲氧基)氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸B(0.75g；1.2mmol)、N-羟基苯并三唑(HOBt)(0.18g；1.2mmol)、N，N′-二异丙基碳二亚胺(DIC)(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂，将混合物于室温下振荡24小时，倒空，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物再振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将Fmoc-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸(0.79g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加到树脂。将混合物于室温下振荡3小时，倒空并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，过滤溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物再振荡20分钟。过滤溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(0.79g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL：1.2mmol)、N-乙基二异丙基胺(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加到树脂。将混合物在室温下振荡24小时，过滤并用DMA(5×7mL)、CH2Cl2(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)(2)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，用Et2O(20mL)对其进行处理后得到一种沉淀。离心收集沉淀，并用Et2O(3×20mL)洗涤得到一种固体(248mg)，对其用HPLC分析。用制备HPLC纯化一定量的粗品(50mg)。将包含产物的级分冻干得到L69(6.5mg；3.5×10-3mmol)(图49B)，为一种白色固体。产率5.8％。
实施例LVIII-图50
合成L144
概述：使用八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2(BBN[7-14])官能化的Rink酰胺树脂(A)与4-[2-羟基-3-[4，7，10-三[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]丙氧基]苯甲酸反应。在用试剂B(2)裂解并脱保护之后，用制备HPLC纯化粗品得到L144。总产率：12％。
A.N-[4-[2-羟基-3-[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]丙氧基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸酰胺，L144(图50)
将树脂A(0.4g；0.24mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，过滤溶液，并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液再搅拌20分钟，然后过滤溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将4-[2-羟基-3-[4，7，10-三[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]丙氧基]苯甲酸B(0.5g；0.7mmol)、HOBT(0.11g；0.7mmol)、DIC(0.11mL；0.7mmol))、N-乙基二异丙基胺(0.24mL；1.4mmol)和DMA(7mL)加到树脂。将混合物在室温下振荡24小时，倒空，用DMA(5×7mL)、CH2Cl2(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)(2)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，用Et2O(20mL)对其处理后得到一种沉淀。离心收集沉淀，并用Et2O(3×20mL)洗涤得到一种固体(240mg)，用HPLC对其进行分析。用制备HPLC纯化一定量的粗品(60mg)。将包含产物的级分冻干得到L144(10.5mg；7.2×10-3mmol)，为一种白色固体。产率12％。
实施例LIX
制备L300和177Lu-L300
从0.2g Rink酰胺Novagel树脂(0.63mmol/g，0.126mmol)，在制备型柱色谱之后，得到L300(0.033g，17％)。保留时间为6.66分钟。分子式为C72H99N19O18。计算的分子量为1518.71；观察到1519.6。序列为DO3A-Gly-Abz4-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Phe-Leu-NH2。L300的结构在图51中显示。
将L300(13.9μg溶于13.9μL 0.2M pH 4.8的醋酸钠缓冲液中)与150μL 0.2M pH 4.8醋酸钠缓冲液和4μL 177LuCl3(1.136mCi，MissouriResearch Reactor)混合。100℃下10分钟后，放射化学纯度(RCP)为95％。将产物在Vydac C18肽柱(4.6×250mm，5μm孔径)上纯化，使用0.1％TFA水溶液(A)和0.085％TFA乙腈溶液(B)的含水/有机梯度，以1mL/分钟的流速洗脱。使用下列梯度：等度洗脱22％B 30分钟，5分钟内至60％B，保持在60％B 5分钟。将以18.8分钟保留时间洗脱的该化合物收集到1mL 0.8％人血清白蛋白溶液中，其是通过将HSA加入到生理盐水与注射用抗坏血酸的9∶1混合物中而制备的。使用SpeedVacuum(Savant)除去乙腈。纯化后，该化合物具有100％的RCP。
实施例LX-对于GRP受体亚型的连接基特异性的表征
在本测定中，使用两种细胞系：C6，一种表达NMB-R的啮齿动物成胶质细胞瘤细胞系，和PC3，一种表达GRP-R的人前列腺癌细胞系。通过测量其竞争125I-NMB或125I-BBN与在C6和PC3细胞中其相应受体结合的能力，间接测定了多种未标记的化合物对各受体亚型(NMB-R和GRP-R)的亲和性。
A.材料和方法：
1.细胞培养：
C6细胞从ATCC(CCL-107)获得并在补充了2mM L-谷氨酰胺、1.5g/L碳酸氢钠、15％马血清和2.5％FBS的F12K培养基(ATCC)中培养。将用于测定的细胞以9.6×104/孔的浓度平板接种在48孔聚-赖氨酸涂覆的平板(Beckton Dickinson Biocoat)中。PC3从ATCC(CRL-1435)获得并在补充了2mM L-谷氨酰胺、1.5g/L碳酸氢钠、10mM HEPES和10％FBS的RPMI 1640(ATCC)中培养。两种培养物均维持在37℃下，含5％CO2/95％空气的湿润大气中。将用于测定的PC3细胞以2.0×104个细胞/孔的浓度平板接种在96-孔白色/透明底平板(Falcon Optilux-I)中。在接种后第2天，平板用于进行测定。
2.结合缓冲液，和放射性-配体：
RPMI 1640(ATCC)含25mM HEPES、0.2％BSA级分V、1.0mMAEBSF(CAS#3087-99-7)和0.1％杆菌肽(CAS#1405-87-4)，pH 7.4。
使用定制的125I-[Tyr0]NMB，＞2.0Ci/μmole(Amersham LifeScience)[125I-NMB]和商业得到的125I-[Tyr4]BBN，＞2.0Ci/μmole(Perkin Elmer Life Science)[125I-BBN]作为放射性配体。
B.体外测定法：
使用48-孔平板测定系统(用于C6研究)，用125I-NMB进行竞争实验。所有PC3研究均是按照实施例XLIII所述，使用125I-BBN进行的。基于连接基亚型选择进行测定的化合物。结果在表9中表示。
表9
用于测定所选的化合物数和它们的连接基
| 连接基类型 | 化合物数 |
| 中性、碱性或中性、碱性&酸性的组合 | 8 |
| 直链脂族(？-氨基链烷酸&？-氨基烷氧酸(alkoxynoic acid) | 4 |
| 胆汁酸(胆酸) | 3 |
| 取代丙氨酸(环烷基、芳香的和杂芳香的) | 5 |
| 芳香的(氨基苯甲酸和氨烷基苯甲酸，联苯基) | 12 |
| 环状非-芳香的 | 5 |
| 杂环的(芳香的和非-芳香的) | 5 |
| 混杂的(DOTA-NMB、DOTA-G-Abz4-NMB、DOTA-Abz4-G-NMB、BBN7-14、BBN8-14、DOTA-BBN7-14) | 6 |
使用GraphPad Prism单-位点竞争非-线形回归分析分析由该研究获得的结合参数。将各种化合物对C6细胞中NMB-R的相对亲和性与使用商业得到的[Tyr4]-BBN和[Tyr0]-NMB获得的进行比较。为了区分GRP-R偏好化合物与NMB-R加GRP-R偏好化合物，将从各化合物获得的IC50值与在C6细胞上从[Tyr0]-BBN和125I-NMB获得的进行比较。将两类化合物之间的截断点取为10X[Tyr4]-BBN的IC50。在所试验化合物中，8种化合物偏好结合GRP-R(如表10所示)而32种化合物以相似的亲和性结合GRP-R和NMB-R，有两种显示偏好NMB-R。
表10
使用125I-NMB和125I-BBN进行竞争实验获得的IC50值
| L# | 化合物 | IC50(nM) | GRP-R | GRP-R&NMB-R | |
| 125I-BBN/PC3 | 125I-NMB/C6 | ||||
| na | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-SS-QWAVGHLM-NH2 | 10 | 10.4 | - | 是 |
| na | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-G-QWAVG | 25 | 7.9 | - | 是 |
| HLM-NH2 | |||||
| na | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-GG-QWAVGHLM-NH2 | 48 | 20.2 | - | 是 |
| na | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-KK-QWAVGHLM-NH2 | 13 | 6.4 | - | 是 |
| na | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-SK-QWAVGHLM-NH2 | 2 | 2.2 | - | 是 |
| na | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-SR-QWAVGHLM-NH2 | 1.9 | 2.0 | - | 是 |
| na | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-KS-QWAVGHLM-NH2 | 7.5 | 24.1 | 是 | - |
| na | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-KE-QWAVGHLM-NH2 | 32 | 60.0 | 是 | - |
| na | DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH2 | 3.4 | 3.1 | - | 是 |
| na | DO3A-一酰胺-Apa3-QWAVGHLM-NH2 | 36 | 18.9 | - | 是 |
| na | DO3A-一酰胺-Abu4-QWAVGHLM-NH2 | 19.8 | 5.2 | - | 是 |
| L3 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-DJ-QWAVGHLM-NH2 | 70 | 33 | - | 是 |
| L64 | DO3A-一酰胺-G-Adca3-QWAVGHLM-NH2 | 8.5 | 3.3 | - | 是 |
| L63 | DO3A-一酰胺-G-Ah12ca-QWAVGHLM-NH2 | 23 | 3.8 | - | 是 |
| L67 | DO3A-一酰胺-G-Akca-QWAVGHLM-NH2 | 5.5 | 2.3 | - | 是 |
| na | DO3A-一酰胺-Cha-Cha-QWAVGHLM-NH2 | 22 | 77 | 是 | - |
| na | DO3A-一酰胺-Nal1-Bip-QWAVGHLM-NH2 | 30 | 210.9 | 是 | - |
| na | DO3A-一酰胺-Cha-Nal1-QWAVGHLM-NH2 | 8 | 66.5 | 是 | - |
| na | DO3A-一酰胺-Nal1-Bpa4-QWAVGHLM-NH2 | 17 | 89.9 | 是 | - |
| L301 | DO3A-一酰胺-Amb4-Nal1-QWAVGHLM-NH2 | 10 | 6.8 | - | 是 |
| L147 | DO3A-一酰胺 | 4 | 32 | 是 | - |
| -G-Mo3abz4-QWAVGHLM-NH2 | |||||
| L241 | DO3A-一酰胺-G-Cl3abz4-QWAVGHLM-NH2 | 4 | 0.8 | - | 是 |
| L242 | DO3A-一酰胺-G-M3abz4-QWAVGHLM-NH2 | 5 | 2.2 | - | 是 |
| L243 | DO3A-一酰胺-G-Ho3abz4-QWAVGHLM-NH2 | 14 | 9.9 | - | 是 |
| L202 | DO3A-一酰胺-G-Hybz4-QWAVGHLM-NH2 | 13 | 2.7 | - | 是 |
| L204 | DO3A-一酰胺-Abz4-G-QWAVGHLM-NH2 | 50 | 1.2 | - | 是 |
| L233 | DO3A-一酰胺-G-Abz3-QWAVGHLM-NH2 | 4.8 | 1.6 | - | 是 |
| L235 | DO3A-一酰胺-G-Nmabz4-QWAVGHLM-NH2 | 7 | 1.5 | - | 是 |
| L147 | DO3A-一酰胺-Mo3amb4-QWAVGHLM-NH2 | 3.5 | 1.2 | - | 是 |
| L71 | DO3A-一酰胺-Amb4-QWAVGHLM-NH2 | 7.2 | 0.2 | - | 是 |
| L73 | DO3A-一酰胺-Aeb4-QWAVGHLM-NH2 | 5 | 1.8 | - | 是 |
| L208 | DO3A-一酰胺-Dae-Tpa-QWAVGHLM-NH2 | 8 | 0.9 | - | 是 |
| L206 | DO3A-一酰胺-G-A4m2biphc4-QWAVGHLM-NH2 | 5 | 1.3 | - | 是 |
| L207 | DO3A-一酰胺-G-A3biphc3-QWAVGHLM-NH2 | 3 | 15.1 | - | 是 |
| L72 | DO3A-一酰胺-Amc4-QWAVGHLM-NH2 | 8.2 | 2.6 | - | 是 |
| L107 | DO3A-一酰胺-Amc4-Amc4-QWAVGHLM-NH2 | 5 | 0.3 | - | 是 |
| L89 | DO3A-一酰胺-Aepa4-QWAVGHLM-NH2 | 23 | 114 | 是 | - |
| L28 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-Aepa4-S-QWAVGHLM-NH2 | 25 | 13 | - | 是 |
| L74 | DO3A-一酰胺-G-Inp-QWAVGHLM-NH2 | 6.5 | 3.4 | - | 是 |
| L36 | N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-Pial-J-QWAVGHLM-NH2 | 7 | 12.1 | - | 是 |
| L82 | DO3A-一酰胺-Ckbp-QWAVGHLM-NH2 | 8 | 1.7 | - | 是 |
| na | DO3A-一酰胺 | 11 | 14 | - | 是 |
| -Aoc-QWAVGHL-Nle-NH2 | |||||
| L70 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-QWAVGHLM-NH2 | 4.5 | 1.5 | - | 是 |
| na | DO3A-一酰胺-QWAVGHLM-NH2 | 366 | ＞250 | 没有选择性偏好 | |
| na | QWAVGHLM-NH2 | 369 | 754 | 没有选择性偏好 | |
| na | WAVGHLM-NH2 | ＞800 | ＞800 | 没有选择性偏好 | |
| L204 | DO3A-一酰胺-Abz4-G-QWAVGHLM-NH2 | ＞50 | 1.2 | 偏好NMB-R | |
| na | GNLWATGHFM-NH2 | ＞500 | 0.7 | 偏好NMB-R | |
| L227 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-LWATGHFM-NH2 | 28 | 0.8 | - | 是 |
在上表中，“na”表示“不适用的”(例如，该化合物不含本发明的连接基且因此没有指定L#)。
基于上面所述，观察到若干结果。单独的受体结合区(BBN7-14或BBN8-14)没有显示出对GRP-R或NMB-R的任何偏好。向受体结合区加入单独的螯合剂不有助于肽对GRP-R或NMB-R的亲和(DO3A-一酰胺-QWAVGHLM-NH2)。螯合剂通过连接基与肽偶合确实导致肽对受体的亲和。然而，根据连接基类型的不同，该亲和性从双重(偏好NMB-R和GRP-R)到GRP-R(偏好GRP-R)变化。
所试验的ω-氨基链烷酸(175Lu-DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-HN2和DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHL-Nle-NH2中的8-氨基辛酸，DO3A-一酰胺-Apa3-QWAVGHLM-NH2中的3-氨基丙酸和DO3A-一酰胺-Abu4-QWAVGHLM-NH2中的4-氨基丁酸)作为连接基，赋予肽对GRP-R和NMB-R的双重亲和性。用‘Nle’替换175Lu-DOTA-Aoc-QWAVGHLM-NH2中的‘Met’不改变肽的这种双重亲和性。
含胆酸的连接基(L64中的3-氨基胆酸、L63中的3-氨基-12-羟基胆烷酸和L67中的3-氨基-12-酮胆烷酸)赋予肽对GRP-R和NMB-R的双重亲和性。含环烷基和芳香取代的丙氨酸的连接基(DO3A-一酰胺-Cha-Cha-QWAVGHLM-NH2中的3-环己基丙氨酸、DO3A-一酰胺-Cha-Nal1-QWAVGHLM-NH2中的1-萘基丙氨酸、DO3A-一酰胺-Nal1-Bpa4-QWAVGHLM-NH2中的4-苯甲酰基苯丙氨酸和DO3A-一酰胺-Nal1-Bip-QWAVGHLM-NH2中的联苯基丙氨酸)使肽对GRP-R具有选择亲和性。仅含4-(2-氨乙基哌嗪)-1的连接基也使肽具有GRP-R选择性(L89)。
向NMB序列中引入G-4-氨基苯甲酸连接基可使化合物除了其固有的NMB-R亲和性外，还对GRP-R具有亲和性(L227 vs GNLWATGHFM-NH2)。围绕连接基移动Gly的位置将L70的亲和性从其双重亲和性改变为对NMB-R的选择亲和性(L204)。L70中4-氨基苯甲酸中的3-甲氧基取代(如L240)将双重亲和性改变为对GRP-R的选择亲和性。
根据前面的数据可明显看出连接基对受体亚型的特异性具有显著影响。可鉴定三组化合物：
◆对GRP-R有活性的那些
这些化合物提供体外和体内对该受体特异性的信息，其可用于诊断目的。当用治疗性放射性核素放射性标记这些化合物时，可对仅含该受体的组织进行治疗，而不影响含NMB-R的那些组织。
◆对NMB-R有活性的那些
这些化合物提供体外和体内对该受体特异性的信息，其可用于诊断目的。当用治疗性放射性核素放射性标记时，可对仅含该受体的组织进行治疗，而不影响含GRP-R的那些组织。
◆对GRP-R和NMB-R均有活性的那些
这些化合物提供有关体外和体内这两种受体亚型联合存在的信息，其可用于诊断目的。以特异性为代价，靶向两种受体可增加检测的敏感性。当用治疗性放射性核素放射性标记这些化合物时，可对含两种受体的组织进行治疗，其可增加递送到所需组织的剂量。
实施例LXI-125I-BBN与经修饰的蛙皮素(BBN)类似物对人前列腺癌(PC3)
细胞中GRP-R的竞争研究
为了测定替换BBN7-14类似物中特定氨基酸的效应，制备靶向部分中被修饰的肽，并测定与人前列腺癌(PC3)细胞中GRP-R的竞争性结合。所有这些肽具有与金属螯合部分缀合的通用连接基(DOTA-Gly-Abz4-)。结合数据(IC50nM)在下面表13中表示。
A.材料和方法：
1.细胞培养：
PC3细胞系从ATCC(CRL-1435)获得并在补充了2mM L-谷氨酰胺、1.5g/L碳酸氢钠、10mM HEPES和10％FBS的RPMI 1640(ATCC)中培养。培养物维持在37℃，含5％CO2/95％空气的湿润大气中。将用于测定的PC3细胞以2.0×104个细胞/孔的浓度平板接种在96-孔白色/透明底平板(Falcon Optilux-I)中。在接种后第2天，平板用于进行测定。
2.结合缓冲液：
RPMI 1640(ATCC)含25mM HEPES、0.2％BSA级分V、1.0mMAEBSF(CAS#3087-99-7)和0.1％杆菌肽(CAS#1405-87-4)，pH 7.4。
3.125I-Tyr4-蛙皮素[125I-BBN]
125I-BBN(Cat#NEX258)从PerkinElmer Life Sciences获得。
C.体外测定法：
与125I-BBN对PC3细胞中GRP-R的竞争测定：
将所有试验的化合物均溶于结合缓冲液中，并在结合缓冲液中进行适当稀释。以2.0×104/孔的浓度将用于测定的PC3细胞接种在96-孔黑色/透明I型胶原cellware平板(Beckton Dickinson Biocoat)中。在平板接种后第2天，平板用于结合研究。在测定前检查该平板的汇合(＞90％汇合)。进行竞争测定时，将1.25×10-9M-500×10-9M浓度的N，N-二甲基甘氨酰基-Ser-Cys(Acm)-Gly-Ava5-QWAVGHLM-NH2(对照)或其它竞争剂与125I-BBN(25,000cpm/孔)共同培养。以75μl/孔测定体积进行研究。各数据点使用一式三个孔。加入适宜溶液后，4℃温育平板1小时。通过加入200μl冰冷的温育缓冲液而终止温育。将平板洗5次并吸干。使用LKB CompuGamma计数器或微量平板闪烁计数器检测放射性。将125I-BBN的结合放射性相对于竞争剂的抑制浓度绘制曲线，并根据结合曲线获得125I-BBN结合被抑制50％(IC50)的浓度。
表13：与125I-BBN对PC3细胞中GRP-R的竞争研究
| L# | 肽 | IC50[nM] | |
| Ref | na | N，N-二甲基甘氨酰基-Ser-Cys(Acm)-Gly-Ava5-QWAVGHLM-NH2 | 2.5 |
| 1 | L70 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-QWAVGHLM-NH2 | 4.5 |
| 2 | L214 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-fQWAVGHLM-NH2 | 18 |
| 3 | L215 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-QRLGNQWAVGHLM-NH2 | 6 |
| 4 | L216 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-QRYGNQWAVGHLM-NH2 | 4.5 |
| 5 | L217 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-QKYGNQWAVGHLM-NH2 | 10 |
| 6 | L218 | >EQ-[K(DO3A-一酰胺-G-Abz4)-LGNQWAVGHLM-NH2 | 53 |
| 7 | L219 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-fQWAVGHLM-NH-C5H12 | 75 |
| 8 | L220 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-QWAVaHLM-NH2 | 13 |
| 9 | L221 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-fQWAVGHLL-NH2 | 340 |
| 10 | L222 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-yQWAV-Ala2-HF-Nle-NH2 | 46 |
| 11 | L223 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-FQWAV-Ala2-HF-Nle-NH2 | 52 |
| 12 | L224 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-QWAGHFL-NH2 | ＞500 |
| 13 | L225 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-LWAVGSFM-NH2 | 240 |
| 14 | L226 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-HWAVGHLM-NH2 | 5.5 |
| 15 | L227 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-LWATGHFM-NH2 | 39 |
| 16 | L228 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-QWAVGHFM-NH2 | 5.5 |
| 17 | na | GNLWATGHFM-NH2 | ＞500 |
| 18 | na | yGNLWATGHFM-NH2 | 450 |
| 19 | L300 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-QWAVGHFL-NH2 | 2.5 |
结果/结论：靶向部分被修饰的各种肽的结合结果分析表明：
神经调节肽类似物(GNLWATGHFM-NH2、yGNLWATGHFM-NH2)不能竞争GRP-R，除非与DO3A-一酰胺-G-Abz4缀合(L227)。然而，它们是有效的NMB竞争剂。这与QWAVGHLM-NH2、DO3A-一酰胺-QWAVGHLM-NH2&L70中反映的对蛙皮素序列氨基末端的衍生要求相类似。组氨酸的替换(L225)降低了在GRP-R的竞争。
L70中两个连接基组分的反转产生L204，这改变了亚型特异性至偏好NMB亚型。蛙皮素序列中L13F置换维持了GRP-R活性(L228)。
表14
| L号 | 序列 | IC50 | |
| C6/NMB-R | PC3/GRP-R | ||
| na | GNLWATGHFM-NH2 | 0.69 | ＞500 |
| na | YGNLWATGHFM-NH2 | 0.16 | 884.6 |
| L227 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-LWATGHFM-NH2 | 0.07 | 28.0 |
| L225 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-LWAVGSFM-NH2 | - | 240 |
| na | WAVGHLM-NH2 | ＞800 | ＞800 |
| na | QWAVGHLM-NH2 | 369 | 754 |
| na | DO3A-一酰胺-QWAVGHLM-NH2 | 161 | 366 |
| L70 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-QWAVGHLM-NH2 | 4.5 | 1.5 |
| L204 | DO3A-一酰胺-Abz4-GQWAVGHLM-NH2 | 1.19 | ＞50 |
| L228 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-QWAVGHFM-NH2 | - | 5.5 |
在此可见，L228中F13M14向F13L14的置换产生对GRP-R具有高活性的化合物(L300)。除去甲硫氨酸有益，因为它有氧化的倾向。如果不同时进行L13F置换，不会产生该益处(L221)。如在L224中所见，除去V10导致结合完全丧失。
表15
| 号 | 序列 | IC50 | |
| C6/NMB-R | PC3/GRP-R | ||
| L 300 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-QWAVGHFL-NH2 | - | 2.5 |
| L221 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-fQWAVGHLL-NH2 | - | 340 |
| L224 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-QWA GHFL-NH2 | - | ＞500 |
表16
如表16所见，在BBN2-6区允许多种置换(L214-L217，L226)。
| 号 | 序列 | IC50 | |
| C6/NMB-R | PC3/GRP-R | ||
| na | pEQRYGNQWAVGHLM-NH2 | 3.36 | 2.2 |
| L214 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-fQWAVGHLM-NH2 | - | 18 |
| L215 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-QRLGNQWAVGHLM-NH2 | - | 6 |
| L216 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-QRYGNQWAVGHLM-NH2 | - | 4.5 |
| L217 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-QKYGNQWAVGHLM-NH2 | - | 10 |
| L226 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-HWAVGHLM-NH2 | - | 5.5 |
表17
正如所预期的，表17的结果表明通用激动剂(L222&L223)以～50nM水平相当好地竞争。
| 名称 | 号 | 序列 | IC50 | |
| C6/NMB-R | PC3/GRP-R | |||
| 通用激动剂 | L222 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-yQWAV-Ala2-HF-Nle-NH2 | - | 46 |
| 通用激动剂 | L223 | DO3A-一酰胺-G-Abz4-FQWAV-Ala2-HF-Nle-NH2 | - | 52 |
实施例LXI-175Lu-L70和175Lu-DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH2的NMR
结构比较
该NMR研究的目的是提供Lu-L70的完整结构表征并将它与175Lu-DOTA-Aoc-QWAVGHLM的结构进行比较。L70和175Lu-DOTA-Aoc-QWAVGHLM都是蛙皮素类似物(见图60和61)，区别仅在于螯合基团与靶向肽之间的连接基。L70中存在甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基，而175Lu-DOTA-Aoc-QWAVGHLM中存在8-氨基辛酰基。然而，这两个化合物的生物学数据明显不同。进行详细的NMR研究以解释这种差异。
A.实验
1.材料
将5mg 175Lu-DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH2溶于225μLDMSO-d6(Aldrich 100％原子％D)中。将5mg 175Lu-L70溶于225μLDMSO-d6(Aldrich 100％原子％D)中。
2.NMR数据的获取
所有NMR实验都是在装有3mm宽谱带反向(z-轴梯度)探针的Varian Inova-500傅里叶变换NMR波谱仪上进行的。化学位移参照DMSO-d6的残余CH峰，对于质子在2.50ppm，对于13C在40.19ppm。通过Varian数字温度控制器控制样品温度。使用NMRPipe、VNMR、PROSA和VNMRJ软件在Sun Blade 2000 Unix计算机上处理数据并使用NMRView和SPARKY软件在Linux计算机上分析。使用CYANA软件在Linux计算机上进行肽的建模，并使用MOLMOL软件在Compaq DeskproWorkstation上进一步分析。
B.结果和讨论
175Lu-L70的质子化学位移确定如下。1D波谱中甲基区(0.5-2.5ppm)的迅速测量鉴定出2.02ppm的尖锐单峰为甲硫氨酸的甲基峰。在TOCSY波谱的同一区中，与4.32ppm唯一一个峰相关的1.16ppm化学位移表明它们属于丙氨酸。与1.98和4.12ppm的两个峰相关的0.84和0.85ppm的甲基峰必定属于缬氨酸。与1.60、1.48和4.23ppm的峰相关的0.84和0.88ppm的剩余甲基峰属于亮氨酸。这些化学位移和其它氨基酸的化学位移也存在于“指纹”区(见Wuthrich，K.“NMR ofProteins and Nucleic acid，”John Wiley & Sons，1986)-TOCSY波谱的主链NH-aH区(见图52)。属于氨基酸自旋系统的所有化学位移本身将垂直排列。仔细检测波谱后，确定所有化学位移。通过检查其它波谱如COSY(见图53)和NOESY(见图54)进一步证实化学位移。确定质子化学位移后，通过gHSQC波谱鉴定它们的碳化学位移(见图55)并通过检查gHMBC(图56)和gHSQCTOCSY(见图57)波谱进一步证实。Lu-L70的化学位移在表19中列出(原子编号参照图60)。
有趣的是，在175Lu-L70的TOCSY波谱中，14.15ppm的NH质子的化学位移显示出与组氨酸环的两个其它峰的强相关性，且也与水分子强相关。该水分子不是自由交换的且在NMR时帧中清晰可见。为了了解组氨酸的哪个质子与该水分子更强烈地相互作用，15℃下对175Lu-L70进行选择性均-去偶合实验。当以低能量选择性饱和水峰时，在14.16和14.23ppm的组氨酸NH峰的强度显著降低，而组氨酸在7.32和8.90ppm的两个剩余峰的强度部分降低(见图58)。对NMR时间标度上的水质子的观察提示刚性构象。
含水分子的175Lu-L70的草拟化学结构可在图62中见到。水分子通过覆盖由配位氧描述的方形平面而占据第9个配位位点。这具有其它先例。在X-射线结构中观察到水在Na[Lu(DOTA)H2O]·4H2O中Lu的第9个位点配位，如Aime等人，Inorg.Chim.Acta 1996，246，423-429所示，其引入此处作为参考。
相比之下，在175Lu-DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH2的TOCSY波谱中，NH质子的化学位移仅显示与组氨酸环的两个其它峰紧密相关，但与水分子无关(见图59)。这表明没有水分子同时与175Lu和175Lu-DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH2中的His-NH配位。因此，两个分子之间的差异是显著的。在175Lu-L70中，通过结合的水分子稳定肽的二级结构，且这可引起体内稳定性增加。
表19-25℃下，DMSO-d6中，175Lu-L70的化学位移(ppm)
| 位置指定 | 化学位移质子(碳) |
| 2/12 | - |
| 3/11 | - |
| 5/9 | - |
| 6/8 | - |
| 13 | - |
| 15 | - |
| 20 | - |
| 17 | 3.69/3.62 |
| 22 | 9.95/9.73 |
| 23 | 4.04/4.16(43.57) |
| 26 | 10.47 |
| 28/32 | 7.62(118.9) |
| 29/31 | 7.79(128.7) |
| 35a | 8.54 |
| 36 | 4.29(54.26) |
| 39 | 1.83/1.91(27.26) |
| 40 | 2.16(32.08) |
| 47 | 6.84/7.30 |
| 43 | 7.97 |
| 44 | 4.54(53.37) |
| 48 | 2.98/3.12(27.74) |
| 50 | 7.12(123.9) |
| 51 | 10.79 |
| 53 | 7.53(118.7) |
| 54 | 6.93(118.6) |
| 55 | 7.03(121.3) |
| 56 | 7.28(111.7) |
| 58 | 8.09 |
| 59 | 4.32(48.71) |
| 62 | 1.16(17.86) |
| 63 | 7.65 |
| 64 | 4.12(58.28) |
| 67 | 1.98(30.96) |
| 68/73 | 0.84(18.42)0.85(19.52) |
| 69 | 8.19 |
| 70 | 3.70/3.74(42.45) |
| 74 | 8.10 |
| 75 | 4.60(51.85) |
| 78 | 2.95/3.08(27.50) |
| 80 | 14.15 |
| 81 | 8.91 |
| 83 | 7.32 |
| 84 | 8.14 |
| 85 | 4.23(51.93) |
| 86 | 1.48(40.6) |
| 87 | 1.60(24.61) |
| 88/91 | 0.84(21.8)0.88(23.41) |
| 92 | 8.04 |
| 93 | 4.25(52.25) |
| 96 | 1.76/1.92(32.16) |
| 97 | 2.41(29.91) |
| 99 | 2.02(15.13) |
Claims (27)
1.选自下列的化合物：
DO3A-一酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-QWAVaHLM-NH2
DO3A-一酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-f-QWAVGHLM-NH2
DO3A-一酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-f-WAVGHLL-NH2
DO3A-一酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-f-QWAVGHL-NH-戊基
DO3A-一酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-y-QWAV-Bala-H-F-Nle-NH2
DO3A-一酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-f-QWAV-Bala-H-F-Nle-NH2
DO3A-一酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-QWAVGHFL-NH2
DO3A-一酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-QWAVGNMeH-L-M-NH2
DO3A-一酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-LWAVGSF-M-NH2
DO3A-一酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-HWAVGHLM-NH2
DO3A-一酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-LWAGHFM-NH2
DO3A-一酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-QWAVGHFM-NH2
DO3A-一酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-QRLGNQWAVGHLM-NH2
DO3A-一酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-QRYGNQWAVGHLM-NH2
DO3A-一酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-QKYGNQWAVGHLM-NH2
Pglu-Q-Lys(DO3A-一酰胺)-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-LGNQWAVGHLM-NH2
DO3A-一酰胺-Gly-3-氨基-3-脱氧胆酸-QRLGNQWAVGHLM-NH2
DO3A-一酰胺-Gly-3-氨基-3-脱氧胆酸-QRYGNQWAVGHLM-NH2
DO3A-一酰胺-Gly-3-氨基-3-脱氧胆酸-QKYGNQWAVGHLM-NH2；和
Pglu-Q-Lys(DO3A-一酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆酸)-LGNQWAVGHLM-NH2。
2.选自下列的化合物：
DO3A-一酰胺-G-4-氨基苯甲酸-QWAVGHFL-NH2
DO3A-一酰胺-4-氨甲基苯甲酸-L-1-萘基丙氨酸-QWAVGHLM-NH2和
DO3A-一酰胺-G-4-氨基苯甲酸-QWAVGNMeHisLM-NH2。
3.以下通式的化合物：
M-N-O-P-G
其中
M为DO3A，任选与放射性核素络合；
N为0、α或非α-氨基酸或其它连接基；
O为α或非α-氨基酸；
P为0、α或非α-氨基酸或其它连接基；且
G为GRP受体靶向肽，
其中N、O或P中至少一个为8-氨基-3，6-二氧杂辛酸；且
其中GRP受体靶向肽选自QWAVGHLM-NH2、QWAVGNMeHLM-NH2、QWAVGHFL-NH2、LWATGSFM-NH2和QWAVaHLM-NH2。
4.以下通式的化合物：
M-N-O-P-G
其中
M为DO3A，任选与放射性核素络合；
N为0、α或非α-氨基酸或其它连接基；
O为α或非α-氨基酸；
P为0、α或非α-氨基酸或其它连接基；且
G为GRP受体靶向肽，
其中N、O或P中至少一个为(3β，5β，12α)-3-氨基-12-羟基胆烷-24-酸；且
其中GRP受体靶向肽选自QWAVGHLM-NH2、QWAVGNMeHLM-NH2、QWAVGHFL-NH2、LWATGSFM-NH2和QWAVaHLM-NH2。
5.以下通式的化合物：
M-N-O-P-G
其中
M为DO3A，任选与放射性核素络合；
N为0、α或非α-氨基酸或其它连接基；
O为α或非α-氨基酸；
P为0、α或非α-氨基酸或其它连接基；且
G为GRP受体靶向肽，
其中N、O或P中至少一个为4-氨基苯甲酸；且
其中GRP受体靶向肽选自QWAVGHLM-NH2、QWAVGNMeHLM-NH2、QWAVGHFL-NH2、LWATGSFM-NH2、QWAVaHLM-NH2、Nme-QWAVGHLM-NH2、Q-Ψ[CSNH]WAVGHLM-NH2、Q-Ψ[CH2NH]WAVGHLM-NH2、Q-Ψ[CH＝CH]WAVGHLM-NH2、α-MeQWAVGHLM-NH2、QNme-WAVGHLM-NH2、QW-Ψ[CSNH]-AVGHLM-NH2、QW-Ψ[CH2NH]-AVGHLM-NH2、QW-Ψ[CH＝CH]-AVGHLM-NH2、Q-α-Me-WAVGHLM-NH2、QW-Nme-AVGHLM-NH2、QWA＝Ψ[CSNH]-VGHLM-NH2、QWA-Ψ[CH2NH]-VGHLM-NH2、QW-Aib-VGHLM-NH2、QWAV-Sar-HLM-NH2、QWAVG-Ψ[CSNH]-HLM-NH2、QWAVG-Ψ[CH＝CH]-HLM-NH2、QWAV-Dala-HLM-NH2、QWAVG-Nme-His-LM-NH2、QWAVG-H-Ψ[CSNH]-L-M-NH2、QWAVG-H-Ψ[CH2NH]-LM-NH2、QWAVGH-Ψ[CH＝CH]-LM-NH2、QWAVG-α-Me-HLM-NH2、QWAVGH-Nme-LM-NH2、QWAVGH-α-MeLM-NH2、QWAVGHF-L-NH2和QWAVGHLM-NH2。
6.选自下列的化合物：
DO3A-一酰胺-G-4-氨基苯甲酸-QWAVaHLM-NH2，
DO3A-一酰胺-G-4-氨基苯甲酸-fQWAVGHLM-NH2，
DO3A-一酰胺-G-4-氨基苯甲酸-fQWAVGHLL-NH2，
DO3A-一酰胺-G-4-氨基苯甲酸-fQWAVGHL-NH-戊基，
DO3A-一酰胺-G-4-氨基苯甲酸-yQWAV-Bala-HFNle-NH2，
DO3A-一酰胺-G-4-氨基苯甲酸-fQWAV-Bala-HFNle-NH2，
DO3A-一酰胺-G-4-氨基苯甲酸-QWAVGHFL-NH2，
DO3A-一酰胺-G-4-氨基苯甲酸-QWAVGNMeHisLM-NH2，
DO3A-一酰胺-G-4-氨基苯甲酸-LWAVGSFM-NH2，
DO3A-一酰胺-G-4-氨基苯甲酸-HWAVGHLM-NH2，
DO3A-一酰胺-G-4-氨基苯甲酸-LWATGHFM-NH2，
DO3A-一酰胺-G-4-氨基苯甲酸-QWAVGHFM-NH2，
DO3A-一酰胺-G-4-氨基苯甲酸-QRLGNQWAVGHLM-NH2，
DO3A-一酰胺-G-4-氨基苯甲酸-QRYGNQWAVGHLM-NH2，
DO3A-一酰胺-G-4-氨基苯甲酸-QKYGNQWAVGHLM-NH2，
Pglu-Q-Lys(DO3A-一酰胺-G-4-氨基苯甲酸)-LGNQWAVGHLM-NH2，
DO3A-一酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆酸-QWAVaHLM-NH2，
DO3A-一酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆酸-fQWAVGHLM-NH2，
DO3A-一酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆酸-fQWAVGHLL-NH2，
DO3A-一酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆酸-fQWAVGHL-NH-戊基，
DO3A-一酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆酸-yQWAV-Bala-HFNle-NH2，
DO3A-一酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆酸-fQWAV-Bala-HFNle-NH2，
DO3A-一酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆酸-QWAVGHFL-NH2，
DO3A-一酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆酸-QWAVGNMeHLM-NH2，
DO3A-一酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆酸-LWAVGSFM-NH2，
DO3A-一酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆酸-HWAVGHLM-NH2，
DO3A-一酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆酸-LWATGHFM-NH2，
DO3A-一酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆酸-QWAVGHFM-NH2，
DO3A-一酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆酸-QRLGNQWAVGlyHLM-NH2，
DO3A-一酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆酸-QRYGNQWAVGHLM-NH2，
DO3A-一酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆酸-QKYGNQWAVGHLM-NH2，和
Pglu-Q-Lys(DO3A-一酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆酸)-LGNQWAVGHLM-NH2。
7.以下通式的化合物：
M-N-O-P-G
其中
M为DO3A，任选与放射性核素络合；
N为0、α或非α-氨基酸或其它连接基；
O为α或非α-氨基酸；
P为0、α或非α-氨基酸或其它连接基；且
G为GRP受体靶向肽，
其中N、O或P中至少一个为8-氨基-3，6-二氧杂辛酸或(3β，5β，12α)-3-氨基-12-羟基胆烷-24-酸；且
其中G选自Nme-QWAVGHLM-NH2、Q-Ψ[CSNH]WAVGHLM-NH2、Q-Ψ[CH2NH]-WAVGHLM-NH2、Q-Ψ[CH＝CH]WAVGHLM-NH2、α-MeQWAVGHLM-NH2、QNme-WAVGHLM-NH2、QW-Ψ[CSNH]-AVGHLM-NH2、QW-Ψ[CH2NH]-AVGHLM-NH2、QW-Ψ[CH＝CH]-AVGHLM-NH2、Q-α-Me-WAVGHLM-NH2、QW-Nme-AVGHLM-NH2、QWA＝Ψ[CSNH]-VGHLM-NH2、QWA-Ψ[CH2NH]-VGHLM-NH2、QW-Aib-VGHLM-NH2、QWAV-Sar-HLM-NH2、QWAVG-Ψ[CSNH]-HLM-NH2、QWAVG-Ψ[CH＝CH]-HLM-NH2、QWAV-Dala-HLM-NH2、QWAVG-Nme-His-LM-NH2、QWAVG-H-Ψ[CSNH]-L-M-NH2、QWAVG-H-Ψ[CH2NH]-LM-NH2、QWAVGH-Ψ[CH＝CH]-LM-NH2、QWAVG-α-Me-HLM-NH2、QWAVGH-Nme-LM-NH2、QWAVGH-α-MeLM-NH2、QWAVGHF-L-NH2和QWAVGHLM-NH2。
8.一种靶向胃泌素释放肽受体(GRP-R)和神经调节肽-B受体(NMB-R)的方法，所述方法包括给予以下通式的化合物
M-N-O-P-G
其中
M为光标记或金属螯合剂，任选与放射性核素络合；
N为0、α或非α-氨基酸或其它连接基；
O为α或非α-氨基酸；
P为0、α或非α-氨基酸或其它连接基；
G为GRP受体靶向肽；且
其中N、O或P中至少一个为非α-氨基酸。
9.权利要求8的方法，其中N、O或P中至少一个为含环状基团的非α-氨基酸。
10.权利要求9的方法，其中N为Gly，O为4-氨基苯甲酸且P为0。
11.一种靶向GRP-R和NMB-R的方法，所述方法包括给予以下通式的化合物：
M-N-O-P-G
其中
M为光标记或金属螯合剂，任选与放射性核素络合；
N为0、α氨基酸、取代胆汁酸或其它连接基；
O为α氨基酸或取代胆汁酸；
P为0、α氨基酸、取代胆汁酸或其它连接基；
G为GRP受体靶向肽；且
其中N、O或P中至少一个为取代胆汁酸。
12.权利要求11的方法，其中N为Gly，O为(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸，且P为0。
13.权利要求8、9或12任何一项的方法，其中GRP受体靶向肽选自：
Nme-QWAVGHLM-NH2，
Q-Ψ[CSNH]WAVGHLM-NH2，
Q-Ψ[CH2NH]WAVGHLM-NH2，
Q-Ψ[CH＝CH]WAVGHLM-NH2，
α-MeQWAVGHLM-NH2，
QNme-WAVGHLM-NH2，
QW-Ψ[CSNH]-AVGHLM-NH2，
QW-Ψ[CH2NH]-AVGHLM-NH2，
QW-Ψ[CH＝CH]-AVGHLM-NH2，
Q-α-Me-WAVGHLM-NH2，
QW-Nme-AVGHLM-NH2，
QWA＝Ψ[CSNH]-VGHLM-NH2，
QWA-Ψ[CH2NH]-VGHLM-NH2，
QW-Aib-VGHLM-NH2，
QWAV-Sar-HLM-NH2，
QWAVG-Ψ[CSNH]-HLM-NH2，
QWAVG-Ψ[CH＝CH]-HLM-NH2，
QWAV-Dala-HLM-NH2，
QWAVG-Nme-His-LM-NH2，
QWAVG-H-Ψ[CSNH]-L-M-NH2，
QWAVG-H-Ψ[CH2NH]-LM-NH2，
QWAVGH-Ψ[CH＝CH]-LM-NH2，
QWAVG-α-Me-HLM-NH2，
QWAVGH-Nme-LM-NH2，和
QWAVGH-α-MeLM-NH2。
14.一种提高权利要求1-7任何一项的化合物的体内活性的方法，包括修饰GRP受体靶向肽从而减少所述肽蛋白酶切割的步骤。
15.权利要求14的方法，其中该修饰的GRP-R靶向肽是激动剂。
16.一种减少权利要求1-7任何一项的胃泌素释放肽(GRP)类似物的蛋白酶切割的方法，所述方法包括修饰GRP-R靶向部分中肽键的步骤。
17.权利要求16的方法，其中该修饰的GRP-R靶向肽是激动剂。
18.一种减少为激动剂的具有胃泌素释放肽受体(GRP-R)靶向部分的胃泌素释放肽(GRP)类似物的蛋白酶切割的方法，所述方法包括修饰GRP-R靶向部分中肽键的步骤。
19.权利要求14、16或18任何一项的方法，其中该GRP-R靶向部分选自：
Nme-QWAVGHLM-NH2，
Q-Ψ[CSNH]WAVGHLM-NH2，
Q-Ψ[CH2NH]WAVGHLM-NH2，
Q-Ψ[CH＝CH]WAVGHLM-NH2，
α-MeQWAVGHLM-NH2，
QNme-WAVGHLM-NH2，
QW-Ψ[CSNH]-AVGHLM-NH2，
QW-Ψ[CH2NH]-AVGHLM-NH2，
QW-Ψ[CH＝CH]-AVGHLM-NH2，
Q-α-Me-WAVGHLM-NH2，
QW-Nme-AVGHLM-NH2，
QWA＝Ψ[CSNH]-VGHLM-NH2，
QWA-Ψ[CH2NH]-VGHLM-NH2，
QW-Aib-VGHLM-NH2，
QWAV-Sar-HLM-NH2，
QWAVG-Ψ[CSNH]-HLM-NH2，
QWAVG-Ψ[CH＝CH]-HLM-NH2，
QWAV-Dala-HLM-NH2，
QWAVG-Nme-His-LM-NH2，
QWAVG-H-Ψ[CSNH]-L-M-NH2，
QWAVG-H-Ψ[CH2NH]-LM-NH2，
QWAVGH-Ψ[CH＝CH]-LM-NH2，
QWAVG-α-Me-HLM-NH2，
QWAVGH-Nme-LM-NH2，和
QWAVGH-α-MeLM-NH2。
20.权利要求1-7任何一项的化合物，其中G为已被修饰从而减少蛋白酶切割的GRP受体靶向肽。
21.一种赋予包含光标记或任选与放射性核素络合的金属螯合剂和GRP-R靶向肽的化合物对GRP-R和/或NMB-R的特异性的方法，包括在这类化合物中包括以下通式的连接基：
N-O-P
其中
N为0、α或非α-氨基酸或其它连接基；
O为α或非α-氨基酸；
P为0、α或非α-氨基酸或其它连接基；且
其中N、O或P中至少一个为非α-氨基酸。
22.一种赋予包含光标记或任选与放射性核素络合的金属螯合剂和GRP-R靶向肽的化合物对GRP-R和/或NMB-R的特异性的方法，包括在这类化合物中包括以下通式的连接基：
N-O-P
其中
N为0、α氨基酸、取代胆汁酸或其它连接基；
O为α-氨基酸或取代胆汁酸；
P为0、α-氨基酸、取代胆汁酸或其它连接基；且
其中N、O或P中至少一个为取代胆汁酸。
23.一种赋予包含光标记或任选与放射性核素络合的金属螯合剂和GRP-R靶向肽的化合物对GRP-R和/或NMB-R的特异性的方法，包括在这类化合物中包括以下通式的连接基：
N-O-P
其中
N为0、α氨基酸、具有环状基团的非α-氨基酸或其它连接基；
O为α氨基酸或具有环状基团的非α-氨基酸；
P为0、α氨基酸、具有环状基团的非α-氨基酸或其它连接基；且
其中N、O或P中至少一个为具有环状基团的非α-氨基酸。
24.一种提高包含光标记或任选与放射性核素络合的金属螯合剂和GRP-R靶向肽的化合物的体内活性的方法，包括在这类化合物中包括以下通式的连接基：
N-O-P
其中
N为0、α或非α-氨基酸或其它连接基；
O为α或非α-氨基酸；
P为0、α或非α-氨基酸或其它连接基；且
其中N、O或P中至少一个为非α-氨基酸。
25.一种提高包含光标记或任选与放射性核素络合的金属螯合剂和GRP-R靶向肽的化合物的体内活性的方法，包括在这类化合物中包括以下通式的连接基：
N-O-P
其中
N为0、α氨基酸、取代胆汁酸或其它连接基；
O为α-氨基酸或取代胆汁酸；
P为0、α-氨基酸、取代胆汁酸或其它连接基；且
其中N、O或P中至少一个为取代胆汁酸。
26.一种提高包含光标记或任选与放射性核素络合的金属螯合剂和GRP-R靶向肽的化合物的体内稳定性的方法，包括在这类化合物中包括以下通式的连接基：
N-O-P
其中
N为0、α氨基酸、具有环状基团的非α-氨基酸或其它连接基；
O为α氨基酸或具有环状基团的非α-氨基酸；
P为0、α氨基酸、具有环状基团的非α-氨基酸或其它连接基；且
其中N、O或P中至少一个为具有环状基团的非α-氨基酸。
27.具有以下结构的化合物
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/US2003/041328 WO2004065407A2 (en) | 2003-01-13 | 2003-12-24 | Improved gastrin releasing peptide compounds |
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| US10/828,925 | 2004-04-20 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
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| CN (1) | CN1897980A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102076214A (zh) * | 2008-05-19 | 2011-05-25 | 伯拉考成像股份公司 | 释放胃泌素的肽化合物 |
| CN109422810A (zh) * | 2017-08-24 | 2019-03-05 | 孙立春 | 全人源或人源化bombesin受体GRPR单克隆抗体药物或诊断试剂的开发及应用 |
-
2004
- 2004-07-12 CN CN200480038653.3A patent/CN1897980A/zh active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102076214A (zh) * | 2008-05-19 | 2011-05-25 | 伯拉考成像股份公司 | 释放胃泌素的肽化合物 |
| CN109422810A (zh) * | 2017-08-24 | 2019-03-05 | 孙立春 | 全人源或人源化bombesin受体GRPR单克隆抗体药物或诊断试剂的开发及应用 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20070117 |