CN1897958B - 从天然肉桂提取物中获得的抗病毒制剂 - Google Patents

从天然肉桂提取物中获得的抗病毒制剂 Download PDF

Info

Publication number
CN1897958B
CN1897958B CN2004800387818A CN200480038781A CN1897958B CN 1897958 B CN1897958 B CN 1897958B CN 2004800387818 A CN2004800387818 A CN 2004800387818A CN 200480038781 A CN200480038781 A CN 200480038781A CN 1897958 B CN1897958 B CN 1897958B
Authority
CN
China
Prior art keywords
virus
extract
antivirus
influenza
immunity
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN2004800387818A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1897958A (zh
Inventor
迈克尔·奥瓦迪亚
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ramot at Tel Aviv University Ltd
Original Assignee
Ramot at Tel Aviv University Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ramot at Tel Aviv University Ltd filed Critical Ramot at Tel Aviv University Ltd
Publication of CN1897958A publication Critical patent/CN1897958A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN1897958B publication Critical patent/CN1897958B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/54—Lauraceae (Laurel family), e.g. cinnamon or sassafras
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
    • A61L2/16—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor using chemical substances
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明提供可从肉桂(Cinnamon sp.)获得的天然水性提取物，该提取物对包括流感病毒A、副流感(仙台)病毒和HSV-1病毒在内的包膜病毒具有抗病毒活性，而且所述提取物还具有抑制流感病毒A和副流感病毒的体内活性。本发明还涉及所述肉桂提取物的提取方法及其应用。

Description

从天然肉桂提取物中获得的抗病毒制剂
技术领域
本发明涉及从植物提取物中获得的抗病毒制剂。
背景技术
病毒是人和动物体的重要病原体。病毒感染的爆发经常起因于新病毒(例如HIV(艾滋病毒)、西尼罗河病毒、SARS(严重急性呼吸道综合症)病毒)的介入，或起因于已知病毒(例如流行性感冒病毒)的新毒株对免疫学上的原初群体的介入。
尽管最近西尼罗河病毒和SARS的爆发非常严重，但是流行性感冒仍然是最为普遍和重要的病毒感染之一。虽然福尔马林灭活三价疫苗的有效使用已经减小了流行性感冒的影响，但是该病毒仍然与世界范围内的重大发病和死亡有关。在世界范围内，流感病毒在季节性流行中每年感染总人口的10％～20％，导致3～5百万重病例和至少250,000～500,000人死亡(世界卫生组织W.H.O.，Global Influenza Program，2003年9月和W.H.O.Fact Sheet，2003年3月)。仅在美国，每年的报道就超过1亿例，造成20,000人死亡，并因此造成巨大的经济影响(据估计，1995年约为229亿美元)(American Lung Association，2002)。W.H.O.已经预计，每年由此花费的总费用约为710～1670亿美元(W.H.O.Fact Sheet，2003年3月)。
直到最近，金刚烷胺和金刚乙胺才被用于流感病毒感染的治疗，但是现在认为所述药物与严重的不良影响(包括在较高剂量时主要在老年人中发生的谵妄和癫痫发作(seizures))有关。当将其以较少剂量来预防大流行的流感时，所述不良事件不明显。此外，病毒还会对这些药物产生抗性(Steinhaur等，1991)。
最近研制出一类新的抗病毒剂，即神经氨酸苷酶抑制剂。这种药物(如扎那米韦和奥塞米韦)具有较小的不良副作用(尽管扎那米韦可能会使哮喘或其它慢性肺病加重)，但是这些药物昂贵，并且目前在很多国家无法得到使用(W.H.O.Fact Sheet，2003年3月)。流感也可能对神经氨酸苷酶抑制剂产生抗性(McKimm-Berschkin，2000；Gubavera等，2002)。
很多草本植物和香料，其中也包括肉桂(cinnamon)，已经显示具有抗微生物和化学保护的活性(Lay和Roy，2004)。使用有机溶剂从肉桂中获得的提取物(例如Velluti等，2004)典型地包含以下成分：丁香酚(82％)、丁香烯(4.6％)、乙酸丁香酚酯(2.1％)、芳樟醇(1.8％)、桂皮醛(1％)、乙酸桂皮醇酯(1％)、2-丙基苯并间二氧杂环戊烯(2-propyl benzodioxol)(1％)和荜澄茄烯(＜1％)。已经表明，这些提取物(实际上是精油)表现出抗真菌活性(Velluti等，2003和Velluti等，2004)。
其它肉桂(cinnamon bark)精油具有抗蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)的抗菌活性(Valero和Salmeron，2003)；以及抗细菌活性和抗真菌活性(Kalemba和Kunicka，2003以及Mau等，2001)。
在有机溶剂中提取的肉桂的疏水组分具有抗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)的抗菌活性(Tabak，M.等，1999)；抗导致呼吸道霉菌病的真菌的抗真菌活性(Singh，H.B.等，1995)；以及通过抑制逆转录造成的抗HIV-1活性(Yamasaki等，1998)。
从肉桂中得到的组合物也可用于其它适应症，例如使用肉桂粉末来降低血清葡萄糖甘油三酸酯、低密度脂蛋白胆固醇和总胆固醇(Khan等，2003)；肉桂的水提取物可用作抗氧化剂(Murcia等，2004)；以及表现出防止胰岛素抗性的作用(Qin等，2004)；还表现出抑制Na+/K+ATP酶和Cu2+ATP酶的作用(Usta等，2003)。从肉桂获得的精油提取物还表现出促进消化的作用(Hernandez等，2004)。
发明内容
本发明基于一个意外的发现，即肉桂((cinnamon bark，樟属中的种(Cinnamon sp.))的天然的水性提取物具有抗包括流感病毒A、副流感(仙台(Sendai))病毒和HSV-1病毒的包膜病毒(enveloped virus)的抗病毒活性和抑制小鼠中流感病毒A和副流感病毒的体内活性。
根据本发明的一个优选实施方式，具有抗病毒活性的肉桂(Cinnamonsp.)的分离的活性组分(自此称为CE)还另外具有一种或多种以下化学性质：
1.可被多种氯化物盐(chloride salt)，如KCl、NaCl、MgCl2、SrCl2、CuCl2或ZnCl2沉淀。
2.在280nm处所表现出的吸光度为15 O.D/mg.cm。
3.在0.1M NaOH或0.1M HCl或0.1M H2SO4中保存后仍然维持大部分的活性。
4.以相对廉价和简单的方式，无需有机溶剂就可以提取为水溶液。
5.作为稳定粉末或作为放在冰箱内或室温的溶液可以保存很长的时间(至少2年)。
6.热稳定并因此可在高达134℃的温度灭菌。
本文使用的术语“CE ppt”是指用0.15M KCl通过盐析得到的提取物分离组分。
至于生物活性，本发明的CE可于室温在施用的数分钟内在较低水平抑制病毒。因此除了药物用途之外，于室温在较低水平的快速抑制作用还可以对污染疑似区域进行表面消毒或对循环空气进行净化。
本发明的CE均可有效地抗流感病毒和副流感病毒以及HSV-1病毒，并且可保护受感人的红细胞和其它红细胞免受预吸收在红细胞上的病毒的作用。因此，本发明的CE被认为可以有效治疗已经预吸收有病毒的细胞。而且，本发明的CE在细胞上的预吸收在保护细胞免受随后的病毒感染中具有预防效果。
本发明的一个方面涉及肉桂(Cinnamon sp.)的一种新的水性提取物，如图12(d)所示，所述提取物在280nm处的吸光度约为15 O.D./mg.cm，此外还具有上述的化学性质。
本发明进一步涉及一种由下述方法得到的CE：
(i)将肉桂(cinnamon bark)研磨成粉末并将其拌入水性缓冲液中以获得溶液；
(ii)将所述溶液离心并分离上清液；
(iii)导入盐以获得沉淀。
该方法可以进一步包括以下步骤：
(iv)将以上步骤(iii)中得到的沉淀溶解在基本为中性pH的水中或缓冲液中；
(v)在琼脂糖凝胶或Sephadex柱上对所述溶液进行分离；和
(vi)用合适的缓冲液和不同浓度的糖，优选为半乳糖来洗脱所述溶液，以获得肉桂的抗病毒组分。
根据一个优选实施方式，本发明涉及由上述方法获得的CE，其中所述用以获得沉淀的盐为氯化物盐。
根据另一个优选实施方式，本发明涉及一种通过如下方法从肉桂(cinnamon sp.)中获得的提取物：
(i)将肉桂皮(bark)研磨成粉末；
(ii)将所述肉桂皮拌入0.01M或0.02M的pH为7.0的水性磷酸盐缓冲液中；
(iii)通过离心分离上清液，以用作中和粗提物(crude neutralizingextract)；
(iv)用0.15M KCl或0.08M MgCl2沉淀所述粗提物中的活性成分；
(v)将所述沉淀溶解在水中或0.01M pH为7.0的磷酸盐缓冲液中；
(vi)将该溶液装载到琼脂糖凝胶4B柱中，接着用磷酸盐缓冲液和不同浓度的半乳糖进行分阶洗脱；和
(vii)用0.15M半乳糖从柱中洗脱活性抗病毒物质(图12a、b、c；组分b或II)。
本发明还涉及组合物，该组合物可以是营养补充制品(nutraceutical)组合物或药物组合物，所述组合物包含本发明的CE以及一种药物或营养补充制品可接受的载体。该组合物可为液体、固体或半固体状态。
此外，本发明涉及一种用于治疗感染的药物组合物或营养补充制品组合物，该组合物包括有效量的CE活性成分以及适用于药物组合物或营养补充制品组合物的载体。
在本发明的上下文中，术语“治疗”一般是指下述情况之一：治疗已确立的感染以将其治愈或减少病毒量、减少病毒性疾病的至少一种不期望的副作用、缩短感染的急性期、以及在感染发生前预防感染。
根据本发明的优选实施方式，术语“流感病毒”或“副流感病毒”或“HSV-1病毒”是指这些病毒的所有已知的和最新进化的毒株。
本发明进一步涉及一种治疗病毒感染受验者的方法，该方法包括对需要这种治疗的受验者施用有效量的上述提取物。
病毒感染优选为包膜病毒感染；更优选为正粘病毒、副粘病毒、疱疹病毒、逆转录酶病毒、冠状病毒、嗜肝DNA病毒、痘病毒、披膜病毒、黄病毒、线状病毒、弹状病毒(Rhabdovirus)或布尼亚病毒(Bunyavirus)等病毒家族的病毒感染。
最优选病毒感染由选自以下病毒的病毒引起：流感病毒、副流感病毒(本文也称为“仙台病毒”)或HSV-1病毒。
需要的受验者可以是已经受到确定的病毒感染的受验者，因而提供治疗以治愈所述感染、减小所述感染的至少一种不期望的副作用或缩短感染的持续时间，或者是以预防方式处理以避免病毒的随后感染的受验者。
根据本发明，所述“受验者”是指人受验者或者动物受验者，并且可以为哺乳动物或者家禽，特别是农畜或宠物。所述受验者也可以是各种水产业中的鱼、农业中的蜜蜂和其它昆虫。
施用可以通过本领域已知的任意方式进行，如口服施用、注射施用(parenterally)、直肠施用、局部施用、经鼻施用而施用于眼睛、耳朵、鼻子或黏膜组织等。所述施用优选为口服施用或鼻内施用。
本发明还涉及一种对病毒污染疑似区域进行消毒的方法，该方法包括通过例如喷洒、刷涂或海绵擦敷等对该疑似区域施用有效量的本发明的提取物。该表面可以是应当被消毒的房屋或医疗设施中的任何区域。
消毒剂组合物可以用以将如瓷砖、PVC(聚氯乙烯)、瓷器、不锈钢、大理石、银器和镀铬物(chrome)的表面进行清洁和消毒，以除去油脂、蜡、油、干漆和霉等。消毒剂组合物还可以用作洗衣用添加剂并采用气溶胶喷雾形式，在这种情况中，所述组合物与适当的推进剂例如雾化剂混合并且在压力下密封在气溶胶容器中。
在一个特定的实施方式中，组合物被吸收在毛巾或布上，由此提供消毒毛巾，该消毒毛巾可用来作为将该组合物施用于各种表面的手段或用于对个体的手和皮肤进行消毒。
根据另一种选择方案，消毒组合物可施用于植物，以预防或治疗植物病毒感染。所述植物可以为例如果林、藤本植物、棉田、森林、草原(prairies)、私家花园或公共花园、草地和菜地等。所述提取物还可以在采收前或采收后对已被病毒感染的果树或蔬菜进行治疗的方法中。
本发明的消毒组合物一般还包括表面活性剂，该表面活性剂优选选自非离子表面活性剂和阳离子表面活性剂。非离子表面活性剂可以例如为选自聚乙二醇醚、聚亚烷基二醇二烷基醚以及乙醇与环氧乙烷和环氧丙烷的加成产物中的一种或多种。
阳离子表面活性剂可以选自各种季铵盐，季铵盐例如为但不限于辛基二甲基苄基氯化铵、辛基癸基二甲基氯化铵、二辛基二甲基氯化铵、二癸基二甲基氯化铵和二甲基乙基苄基氯化铵，或者它们的混合物，例如但不限于烷基二甲基苄基氯化铵和二烷基二甲基氯化铵的混合物。在一个实施方式中，所述组合物还包括染料、香水、增效助剂、螯合剂和腐蚀抑制剂。
包含本发明提取物的组合物还可用来处理蓄水库，所述蓄水库例如为但不限于水系统、冷却系统、游泳池、自然或人工蓄水库、渔场、水箱、水族馆以及任何其它水体。
在一个实施方式中，所述组合物采用干燥形式以足以控制病毒的生长的量加到蓄水库中。在另一个实施方式中，所述干燥组合物被溶解在合适的载体中之后再加到蓄水库中。
本发明的另一个方面提供通过将空气通过含有或吸收有本发明提取物的适当的过滤器而对机场、医院、幼儿园、办公室、住宅等中的循环空气进行净化的方法。在本发明的范围内，还提供一种含有或吸收有本发明CE的过滤器。所述过滤器可以用本领域技术人员已知的任何适合于特定应用的材料制成。所述过滤器可以为单一单元过滤器或多过滤器系统，并且可以制成与任何现有的净化单元、过滤性系统或空调性系统中的过滤器相匹配，所述净化单元、过滤性系统或空调性系统例如用于清洁室、工业、医院、住宅、办公室或其它设施中。
本发明的提取物可在过滤器生产期间或在其即将被使用之前通过本领域已知方法吸收在过滤器上，所述方法例如：以预定流量和浓度将所述提取物喷在过滤器上，然后使载体干燥；将过滤器投入提取物溶液中一段时间，使提取物吸收在过滤器表面上，然后使溶剂干燥等。
本发明的所有组合物根据其特殊应用可以是液体形式或固体形式。
根据另一方面，本发明涉及一种制造中和病毒的方法，该方法包括将原初病毒与有效量的本发明提取物接触。所述经中和的原初病毒可以代替目前使用的灭活病毒颗粒，用于抗病毒感染的继发免疫(subsequentimmunization)。具体地，该用途是用于制备灭活的流感病毒、副流感病毒或HSV-1病毒，可将其中和而制备疫苗，以代替目前使用的福尔马林灭活病毒。因而本发明提供一种抗病毒感染的免疫方法，该方法包括对受验者施用本发明的中和病毒。
所述疫苗可以通过诸如口服施用、鼻内施用、皮下施用、肌肉内施用和本领域技术人员已知的其它途径等各种途径进行施用。
附图说明
为了理解本发明，并明了本发明实际上是如何得以实施，现在通过参照附图并仅以非限定性方式对一些优选实施方式进行描述，其中：
图1(a)示出不同浓度的本发明粗提物对流感病毒A的溶血活性的体外影响；
图1(b)示出不同浓度的本发明粗提物对副流感病毒(仙台)的溶血活性的体外影响；
图2示出提取物经高压灭菌或放置4年后的抗病毒活性；
图3示出不同浓度和不同组分的本发明粗提物对流感病毒A PR8的抑制作用；
图4(a)示出经HCl和H2SO4处理的粗提物的组分的抗病毒作用；
图4(b)示出经NaOH处理的粗提物的组分的抗病毒作用；
图5示出经水透析的粗提物的组分的抗病毒作用；
图6(a)示出提取物在不同保存期后对流感病毒A-PR8的抗病毒作用；
图6(b)示出提取物在不同保存期后对副流感病毒(仙台)的抗病毒作用；
图7示出不同浓度的本发明提取物对预吸收在红细胞中的流感病毒A PR8的抑制作用；
图8示出CE组分被红细胞预吸收后对流感病毒A PR8的防御作用。
图9示出显示本发明的提取物对感染流感A病毒的小鼠的体重的影响的体内结果；
图10示出显示本发明的提取物对感染副流感仙台病毒的小鼠的体重的影响的体内结果；
图11(a)和图11(b)示出显示感染有与CE抑制剂一起培养的流感APR8病毒的小鼠的死亡和相应体重的柱状图；
图12(a)示出琼脂糖凝胶4B的半乳糖洗脱组分-具有抗病毒活性的组分(II)；
图12(b)示出琼脂糖凝胶4B的半乳糖洗脱组分-具有抗病毒活性的组分(II)；
图12(c)示出琼脂糖凝胶4B的半乳糖洗脱组分-具有抗病毒活性的组分(b)；
图12(d)示出肉桂提取物的光密度曲线。
图13(a)示出本发明的粗提物对感染HSV-1的Vero细胞的影响；
图13(b)示出不同浓度的HSV-1病毒(在Vero细胞上)对固定量的本发明粗提物的响应效果；
图13(c)示出增大本发明化合物的量对感染有固定量的HSV-1的Vero细胞的影响；
图14(a)绘出经病毒感染的小鼠在鼻内施用抑制剂后的体重变化；
图14(b)绘出在注射病毒后立即用抑制剂处理或注射1小时后用抑制剂处理后的体重变化；
图14(c)绘出在用原初仙台病毒对小鼠进行感染前利用仙台病毒和抑制剂进行鼻内免疫的小鼠的体重变化；
图14(d)绘出在用原初仙台病毒对小鼠进行感染前利用仙台病毒对小鼠进行口服免疫或皮下免疫的小鼠的体重变化。
具体实施方式
A.活性提取物的制备
活性物质采用以下三个步骤进行分离：a)在市场购买肉桂皮(bark)，并将其研磨成粉末，然后将其置于0.01M～0.02M的水性磷酸盐缓冲液(pH 7.0)中搅拌过夜。离心分离上清液，并将该上清液用作中和粗提物；b)用0.15M KCl或0.08M MgCl2沉淀所述粗提物中的活性物质，并将该沉淀溶解于水中或0.01M的磷酸盐缓冲液(pH 7.0)中(CE ppt.)；c)将该溶液加入到琼脂糖凝胶4B柱中，接着用磷酸盐缓冲液和不同浓度的半乳糖进行分阶洗脱。活性抗病毒物质以0.15M的半乳糖从柱中洗脱(图12a、b、c；组分b或II)。
B.血细胞凝集单位(Hemagglutinating unit，HAU)和溶血活性的测定
通过使用0.4％洗过的人红细胞来测定血细胞凝集单位(HAU)。在体外通过两个连续步骤测定病毒的溶血活性：1)在室温使游离病毒与1ml的4％人红细胞进行附着，附着时间为15min(分钟)；2)将感染细胞在37℃培养3h(小时)，然后离心。通过测量上清液在540nm处的吸光度来测定病毒的溶血活性。
C.活性组分的洗脱
用0.08M MgCl2或0.15M KCl来对60ml的粗提物进行沉淀。将该沉淀溶解于水中或0.01M磷酸盐缓冲液中，并将该溶液加入到预先用0.01M的磷酸盐缓冲液(pH 7.0)洗过的琼脂糖凝胶4B的10ml柱上。如图12a，b，c所示，用磷酸盐缓冲液洗涤柱子，然后用0.15M、0.3M的半乳糖和不同浓度的乙腈进行分阶洗脱。发现抗病毒物质存在于用0.15M半乳糖从柱中洗脱的组分b(图12(c))中或图12a、b所示的组分II中。
实施例1本发明的粗提物对流感病毒A的溶血活性的体外抑制作用
如实验步骤中所述，将不同量的粗提物与流感病毒A PR8的256HAU样品一起培养以检测所述粗提物对病毒的溶血活性的抑制作用。用单独的病毒或单独的粗提物作为对照。结果如图1(a)所示。病毒的溶血活性完全被250μg的粗提物抑制。
实施例2本发明的提取物对仙台病毒的溶血活性的体外抑制作用
如实验步骤中所述，将不同量的粗提物和仙台病毒的256HAU样品一起培养以检测所述粗提物对病毒的溶血活性的抑制作用。用单独的病毒或单独的粗提物作为对照。结果如图1(b)所示。病毒的溶血活性完全被250μg粗提物抑制。
实施例3经一段时间的冷藏和高压灭菌后的抗病毒活性的维持
肉桂提取物(CE)或高压灭菌的CE在室温或冰箱中保存4年后，测定它们抑制仙台病毒(S.V.)溶血活性的能力。将200μg CE和256HAU病毒一起培养，并按实验步骤中所述，检测溶血作用。结果如图2所示。如可以看到的，CE除了在134℃高压灭菌后损失了一些活性外，在所有处理的抗病毒活性均得以保持。
实施例4经不同试剂处理的本发明提取物的不同组分对流感病毒APR8的抑制作用
在室温下将高压灭菌的CE组分与256HAU流感A PR8病毒一起培养15分钟。将该培养物施用于人红细胞，然后将所得混合物转到37℃培养3小时。结果如图3所示。50μg～100μg的各CE组分都足以抑制病毒的溶血活性。CE ppt(用0.15M KCl通过盐析获得的分离组分)所表现出的抗病毒活性最强。
将CE ppt与0.01M或0.1M的HCl和H2SO4于室温培养3小时，接着中和至pH 7，然后如图3所示，检测其中和病毒的能力。这种处理后的结果如图4(a)所示。
将CE ppt与于0.01M或0.1M NaOH于室温培养3h，接着中和至pH 7，然后如图3所示，检测其抑制病毒的溶血活性的能力。结果如图4(b)所示。处理后的物质保持部分活性。CE ppt为用0.15M KCl通过盐析得到的沉淀组分。
在水中透析CE组分，然后如图3所示，检测抗病毒活性。结果如图5所示。CE组分中的活性物质的分子量大于10Kda(透析袋分离点)。
实施例5将本发明的提取物培养不同时间后对流感病毒A PR8的抑制作用
将50μg～200μg的CE ppt组分样品和病毒于室温培养1～30分钟，然后加入红细胞。如图3所示，测定病毒的溶血活性。结果如图6(a)所示。短暂的培养(1分钟)就足以中和病毒。
将50μg～200μg的CE ppt组分样品和病毒于室温培养1分钟或20分钟，然后加入红细胞。如图3所示，检测病毒的溶血活性。结果如图6(b)所示。短暂的培养(1分钟)就足以中和病毒。
实施例6对预吸收在红细胞上的流感病毒A PR8的抑制作用
如在方法中所述，在室温将256HAU流感A PR8病毒吸收在人红细胞上，然后施用不同的CE组分，并在37℃培养。结果如图7所示。各CE组分都抑制了病毒的溶血活性，尽管这和游离病毒与CE组分的直接相互作用相比，各组分至少需要两倍的量。
如在方法中所述，在室温将两种CE组分吸收在人红细胞上，多余量用PBS冲洗两次，然后施用256HAU流感A PR8病毒，并在37℃培养。结果如图8所示。经冷藏的粗提物和分离的组分CE ppt都可以保护红细胞免受病毒的溶血活性的作用，但是CE ppt更为有效。保护所需的量比通过直接相互作用抑制病毒的量高4～10倍。
实施例7本发明提取物的处理对感染有流感病毒A的小鼠的体内影响
对3.5周龄的小鼠静脉(尾部静脉)注射(i.v.)250μl仅含有128HAU流感A病毒的PBS、或混有250μg粗提物的流感A病毒的PBS、或仅含有粗提物的PBS。每隔2～3天给小鼠称重。结果如图9所示。仅以病毒感染的小鼠体重下降且大多数在7～10天内死亡，而对于注射病毒与粗提物的混合物的小鼠，其体重几乎与仅注射粗提物的小鼠以相同的水平持续增加。每组包括10只小鼠。
实施例8本发明的提取物对仙台病毒的体内影响
给3.5周龄的小鼠吸入50μl仅含有64HAU仙台病毒的水、或混有125μg粗提物的病毒的水、或仅含有粗提物的水。每隔2～3天给小鼠称重。结果如图10所示。仅以病毒感染的小鼠体重下降且大多数在7～10天内死亡，用病毒和粗提物的混合物鼻内处理的小鼠得以恢复且体重增加。每组包括10只小鼠。
实施例9本发明的提取物对流感病毒A PR8感染的体内影响
给3.5周龄的小鼠尾部静脉注射预先在室温与250μgCE抑制剂培养30分钟的128HAU流感病毒A PR8。在3周内每隔2～3天给小鼠称重。结果如图11(a)和11(b)所示。体重损失超过2g就标记为体重损失事件。以预先与抑制剂进行培养的病毒进行感染的小鼠没有发生死亡。每组包括10只小鼠。
实施例10本发明的提取物对感染有HSV-1的Vero细胞的影响
将100PFU(菌斑形成单位)等分量的HSV-1与50μg(B)高压灭菌的CE ppt在100μl的M-199培养基中混合，并且立即提供至24孔板中的Vero细胞上。在37℃、5％CO2培养2小时后，给每孔另外覆盖1ml的培养基，并继续培养3天。细胞用PBS洗涤两遍，然后用甲醇固定并以Giemsa染色。
结果如图13(a)所示。如道(A)中所见的，仅以HSV感染的细胞与孔板分离并被洗下。与此相反，用混有50μg CE ppt的HSV感染的细胞并没有受到影响，表明本发明的提取物可保护Vero细胞免受HSV-1病毒的感染。
将50μg固定等分量的CE ppt与含有102PFU～106PFU的HSV1的样品在100μl M-199培养基中培养1小时。将各样品施用于24孔板中生长的汇合Vero细胞单层上，并将孔板在37℃、5％CO2培养2小时。给每孔添加1ml培养基并继续培养3天。细胞用PBS冲洗两遍，然后用甲醇固定并以Giemsa染色。
结果如图13(b)所示。各道如下：A-102PFU、B-103PFU、C-104PFU(A～C-病毒完全被抑制)；D-105PFU-病毒部分被抑制；E-106PFU-病毒几乎不被抑制；F-102PFU没有抑制剂的病毒，细胞与孔分离并被洗下。
将含有106PFU等分量的HSV1与50μg～400μg的CE ppt在100μlM-199培养基中混合。各混合物被立即提供至24孔板中的汇合Vero细胞单层上。在37℃、5％CO2培养1小时后，给每孔的细胞覆盖1ml M-199培养基，并继续培养3天。细胞用PBS冲洗两遍，然后用甲醇固定并以Giemsa染色。
结果如图13(c)所示。各道如下：A-106PFU没有抑制剂的病毒，细胞与孔分离并从被洗下；B～F：106PFU含有如下不同量的CE ppt的病毒：B-50μg、C-100μg、D-200μg、E-300μg、F-400μg。CE ppt的抑制作用和增长量之间呈直接相关。
从所有这些结果可以看出，本发明的提取物可保护Vero细胞免受HSV-1感染造成的破坏性影响。
实施例11本发明的提取物对感染有病毒的小鼠的体重损失的影响
用与125μg CE ppt抑制剂预培养20分钟的32HAU仙台病毒对3.5周龄的小鼠进行感染或在感染病毒后立即用CE ppt处理。然后在3周的时间内每隔2～3天给小鼠称重。如图14a所示，用抑制剂处理的两组小鼠在感染后8天体重开始增加(P＝0.017)。没有用抑制剂处理的对照组体重继续下降。
在一个不同的实验中，用32HAU仙台病毒对3.5周龄的小鼠以鼻内施用进行感染，然后立即用125μg CE ppt抑制剂处理。第二组小鼠在感染后1小时用CE ppt抑制剂处理。在2.5周的时间内每隔2～3天给小鼠称重。如图14b所示，用CE ppt抑制剂处理过的小鼠体重持续增加，而对照组的体重却显著下降(P≤0.001)。
实施例12本发明的提取物对免疫小鼠的体重损失的影响
在另一组实验中，对利用CE ppt抑制剂的免疫进行测试。用混有125μgCE ppt的32HAU仙台病毒对3.5周龄的小鼠进行鼻内免疫。对照组只接受水。免疫后3周，用单独的64HAU原初病毒感染所述两组小鼠。在40天的时间内每2～3天给小鼠称重。如图14c所示，免疫小鼠不受到随后病毒感染的影响，并且体重继续增加(P＝0.013)。
类似地，如图14d所示，通过两种施用方式：口服施用和皮下施用，利用混有CE ppt抑制剂的仙台病毒对两组小鼠进行3次免疫。第3次施用病毒加CE ppt后2周，如对照组小鼠那样，用80HAU原初病毒感染所述的两组小鼠。经免疫的小鼠不受到随后病毒感染的影响，并且体重持续增加。在口服施用或皮下施用病毒加CE ppt的小鼠之间基本上没有显著差异(P＝＜0.001)。
参考文献列表
American Lung Association，2002年1月8日.Flu and Cold：Statistics.Hernandez等，(2004).Influence of two plant extracts on broilersperformance，digestibility，and digestive organ size，Poult.Sci.，83(2)：169-174.
Kalemba and Kunicka，(2003).Antibacterial and antifungal properties ofessential oils，Curr.Med.Chem.，10(10)：813-829.
Khan等，(2003).Cinnamon improves glucose and lipids of people withtype 2 diabetes，Diabetes Care，26：3215-3218.
Lay和Roy，(2004).Antimicrobial and chemo-preventive properties ofherbs and spices，Curr.Med.Chem.，11(11)：1451-1460.
Mau，J.L.等，(2001).Antimicrobial effect of extracts from ChineesChive，Cinnamon，and Corni fructus.J.Agric.Food Chem.49：183-188.
Murcia等，(2004).Antioxidant evaluation in dessert spices comparedwith common food additives，influence of irradiation procedure，J.Agric.Food Chem.，52：1872-1881.
Qin等，(2004).Cinnamon extract prevents the insulin resistance inducedby a high fructose diet，Horm.Metab.Res.，35：119-125.
Singh，H.B.等，(1995)，cinnamon bark oil，a potent fungitoxicantagainst fungi causing respiratory tract mycoses.Allergy，50(12)：995-999.
Steinhaur，D.A.，Wharton，S.A.，Skehel，J.J.，Wiley，D.C.和Hay，A.J.(1991).Amantadine selection of a mutant influenza viruscontaining an acid stable hemagglutinin glycoprotein：evidence for virusspecific regulation of the pH of glycoprotein transport vesicles.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，88：11525-11529.
Tabak，M.等，(1999).Cinnamon extracts′inhibitory effect onHelicobacter pylori，J.Ethnopharmacol.67：269-277.
Usta等，(2003).Comparative study on the effect of cinnamon and cloveextracts and their main components on different types of ATPases，Hum.Exp.Toxicol.，22(7)：355-362.
Valero和Salmeron，(2003).Antibacterial activity of 11 essential oilsagainst Bacillus cereus，in tyndallized carrot broth.Intl.J of FoodMicrobiology，85：73-81.
Velluti等，(2004).Impact of essential oils on growth rate，zearalenoneand deoxynivalenol production by Fusarium graminearum under differenttemperature and water activity conditions in maize grain，J.of AppliedMicrobiology，96：716-724.
Velluti等，(2003).Inhibitory effect of cinnamon，clove，lemongrass，oregano and palmarose essential oils on growth and fumonisin B1 productionby Fusarium proliferatum in maize grain.Intl.J.of Food Microbiology，89：145-154.
W.H.O.Influenza，Fact Sheet No.211，2003年3月.
W.H.O.Global Influenza Programme，Note for the Press No.22，2003年9月.
W.H.O.Avian influenza，2004年1月.
W.H.O.H5N1 avian influenza：a chronology of key events，2004年2月.
W.H.O.Avian influenza A(H7)human infections in Canada，2004年4月.
W.H.O.Working Group Three：Antivirals-their use and availability，2004年4月.
W.H.O.Assessment of risk to human health associated with outbreaksof highly pathogenic H5N1 avian influenza in poultry，2004年5月.
Yamasaki等，(1998)，anti-HIV-1 activity of herbs in Labiatae.Biol.Pharm.Bull.，21：829-8339.

Claims (14)

1.一种肉桂(Cinnamon sp.)的抗病毒提取物，所述提取物由以下方法获得：
(i)将肉桂研磨成粉末并将其拌入0.01M～0.02M的pH为7.0的水性磷酸盐缓冲液中以获得溶液；
(ii)将所述溶液离心并分离上清液以获得中和粗提物CE；
(iii)用0.15M KCl或0.08M MgCl2沉淀所述粗提物中的活性成分。
2.如权利要求1所述的抗病毒提取物，其中所述方法还包括以下步骤：
(iv)将(iii)中得到的沉淀溶解在水中或0.01M的pH为7.0的磷酸盐缓冲液中；
(v)将所述溶液装载到琼脂糖凝胶4B柱中，接着用磷酸盐缓冲液和不同浓度的半乳糖进行分阶洗脱；和
(vi)用0.15M半乳糖从柱中洗脱活性抗病毒物质。
3.如权利要求1或2所述的抗病毒提取物，其中所述提取物中的活性物质具有大于10Kda的分子量。
4.一种用于治疗病毒感染的组合物，该组合物由权利要求1～3任一项所述的抗病毒提取物作为活性成分和药学可接受的载体组成。
5.权利要求1～3任一项所述的抗病毒提取物在制备用于治疗病毒感染的药物组合物或营养补充制品组合物中的用途。
6.如权利要求5所述的用途，其中所述病毒选自流感病毒、副流感病毒或HSV-1病毒。
7.一种对病毒污染疑似的区域进行消毒的方法，该方法包括对该疑似区域施用有效量的权利要求1～3任一项所述的抗病毒提取物，其中所述区域为房屋或医疗设施内的任何区域。
8.如权利要求7所述的方法，其中使空气通过含有或吸收有权利要求1～3任一项所述的抗病毒提取物的过滤器来实现消毒。
9.一种含有或吸收有权利要求1～3任一项所述的抗病毒提取物的空气消毒用过滤器。
10.如权利要求9所述的空气消毒用过滤器，其中所述过滤器安装于机场、医院、幼儿园、办公室或住宅内。
11.一种制造用于免疫的中和病毒的方法，该方法包括将原初病毒与有效量的权利要求1～3任一项所述的抗病毒提取物接触，其中所述原初病毒选自流感病毒、副流感病毒或HSV-1。
12.一种用于免疫的中和病毒，该中和病毒采用权利要求11所述的方法制备。
13.一种疫苗制剂，该疫苗制剂由权利要求12所述的用于免疫的中和病毒制成。
14.权利要求12所述的用于免疫的中和病毒在制备用于针对病毒感染进行免疫的疫苗制剂中的用途。
CN2004800387818A 2003-12-24 2004-12-23 从天然肉桂提取物中获得的抗病毒制剂 Expired - Fee Related CN1897958B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US53198503P 2003-12-24 2003-12-24
US60/531,985 2003-12-24
PCT/IL2004/001161 WO2005060352A2 (en) 2003-12-24 2004-12-23 Antiviral preparations obtained from a natural cinnamon extract

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1897958A CN1897958A (zh) 2007-01-17
CN1897958B true CN1897958B (zh) 2011-02-02

Family

ID=34710251

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2004800387818A Expired - Fee Related CN1897958B (zh) 2003-12-24 2004-12-23 从天然肉桂提取物中获得的抗病毒制剂

Country Status (6)

Country Link
US (1) US9364511B2 (zh)
EP (2) EP1711192B1 (zh)
CN (1) CN1897958B (zh)
BR (1) BRPI0418103A (zh)
CA (1) CA2551454A1 (zh)
WO (1) WO2005060352A2 (zh)

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2269621B1 (en) * 2008-03-31 2017-12-27 Shiseido Company, Ltd. Cinnamonum extract for treating photoaging
US20110200692A1 (en) * 2008-10-07 2011-08-18 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Use of a cinnamon bark extract for treating amyloid-associated diseases
FR2948570A1 (fr) * 2009-07-31 2011-02-04 Addevista Nouvelles compositions a base de plantes et leurs utilisations
US9861610B2 (en) 2011-08-01 2018-01-09 Akay Flavours & Aromatics Pvt Ltd. Process for selective extraction of bioactive and bioavailable cinnamon polyphenols and procyanidin oligomers and a stable composition thereof
EP2991664B1 (de) 2013-04-30 2019-09-04 Forschungszentrum Jülich GmbH Agenzien zur prävention und therapie von folgeerkrankungen von hiv und anderer viraler infektionen
CN106606539B (zh) * 2016-12-16 2019-07-23 昆药集团股份有限公司 一种肉桂多酚组合物的应用
CN106957826B (zh) * 2017-03-14 2020-02-07 昆药集团股份有限公司 一种病毒灭活剂及其应用
CN107823258A (zh) * 2017-11-15 2018-03-23 郑州航空港百桥生物科技有限公司 肉桂提取物的制备方法、肉桂提取物及其应用
CN113454102A (zh) 2019-06-28 2021-09-28 辉宝动物保健公司 非洲猪瘟疫苗
IT201900020512A1 (it) 2019-11-06 2021-05-06 Micronature S R L Derivato da scarti di lavorazione delle castagne e suoi usi
CN111789880A (zh) * 2020-05-07 2020-10-20 郑州航空港百桥生物科技有限公司 肉桂提取物在抑制covid-19新型冠状病毒进入细胞及复制中的应用
WO2022123513A1 (en) * 2020-12-10 2022-06-16 Indus Biotech Private Limited Composition and method for managing coronavirus infection
KR102526308B1 (ko) * 2022-06-23 2023-04-27 한국 한의학 연구원 한약재 추출물을 유효성분으로 포함하는 코로나바이러스 감염증의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
CN115025176A (zh) * 2022-06-24 2022-09-09 深圳市武大金球中药现代化工程技术研究中心 一种抗病毒复方组合物
US11969453B2 (en) 2023-06-14 2024-04-30 Nae Woi Korea., Ltd. Horseradish and cinnamon mixed extract composition for suppression of avian viral epidemic diseases

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
LU78955A1 (de) * 1978-01-27 1979-09-06 Chimicasa Gmbh Verfahren zur inaktivierung von viren
LU86573A1 (de) * 1986-09-08 1988-04-05 Chimicasa Gmbh Verfahren und praeparat zum inaktivieren von viren innerhalb lebender menschlicher oder tierischer organismen
DE4017091A1 (de) * 1990-05-27 1991-11-28 Walter Dr Mach Molekuelverbundsystem zur kontra-eskalativen therapie viraler infektionskrankheiten
JPH06199674A (ja) * 1992-12-28 1994-07-19 Tsumura & Co 日和見感染症の治療・予防に関する医薬
US6027716A (en) * 1997-04-02 2000-02-22 Farmo-Nat Ltd. Synergistic herbal extracts
FR2761625B1 (fr) 1997-04-07 1999-08-20 Soc D Mecanique D Irigny Procede et dispositif pour le soudage d'appendices sur un tube de verin
EP1146111A1 (en) * 2000-04-14 2001-10-17 The Procter & Gamble Company Process of disinfecting a hard-surface with a composition comprising cinnamon oil and/or an active thereof

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Chun-Ching Lin et al.anti-herpes virus type 2 activity of herbal medicines from Taiwan.《Pharmaceutical Biology》.2003,第41卷(第4期),259-262. *

Also Published As

Publication number Publication date
CA2551454A1 (en) 2005-07-07
BRPI0418103A (pt) 2007-05-08
US9364511B2 (en) 2016-06-14
EP1711192A2 (en) 2006-10-18
EP1711192A4 (en) 2009-07-15
US20060275515A1 (en) 2006-12-07
WO2005060352A3 (en) 2006-03-23
CN1897958A (zh) 2007-01-17
EP2422805A1 (en) 2012-02-29
WO2005060352A2 (en) 2005-07-07
EP1711192B1 (en) 2013-12-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9364511B2 (en) Antiviral preparations obtained from a natural cinnamon extract
CN100444734C (zh) 一种复方抗病毒喷雾剂及其制备方法
Bartak et al. Antiviral and healing potential of Sambucus nigra extracts
CN109745514A (zh) 一种具有抗菌抗病毒的组合物及其制备方法和用途
KR102213514B1 (ko) 코로나 바이러스 활성 억제용 천연 조성물
KR20130050834A (ko) 커큐민을 포함하는 살바이러스 또는 살균용 조성물
Abubakar et al. An overview of treatment options to combat Peste des petits ruminants in endemic situations
Shah et al. RESEARCH ARTICLE Elucidating antiviral activity of Curcuma longa against H9N2 influenza virus using embryonated chicken egg model
JP4307459B2 (ja) インフルエンザ予防・治療剤
CA2622508C (en) Medicament for the prevention and treatment of influenza
US7815945B2 (en) Medicament for the prevention and treatment of influenza
Sainhi et al. A Review Article on Phytochemicals New Line of Treatment of Sars Covid-19
CN1935256A (zh) 一种能防治多型流感的复方人干扰素喷雾剂的制作技术
Fathy et al. Assessment of antiviral activity for ethanolic chlorella vulgaris extract against Newcastle Disease Virus (NDV) infection in Sasso chicken
KR102049673B1 (ko) 토복령 추출물을 함유하는 저병원성 조류독감 바이러스 소독제 조성물의 제조방법
JP5236339B2 (ja) 鳥インフルエンザウイルス不活化剤
Wasito Effects of Red Onion Extract (Allium ascalonicum L.) in Pulmonary Histopathological Lesions of Layer Chickens: A Possible Herbal Medicine Solution to Overcome Avian Influenza and Newcastle Disease Viruses
Ahmadi et al. Concise Review on Herbal Medicine Effects on Combating Newcastle Disease Virus as a Threat to the Poultry Industry
CN103329950B (zh) 一种预防院内呼吸道感染的加药纸片及其制备方法
Ganapathy In Vitro Analysis of the Anti-influenza Virus Activity of Pomegranate Products and Fulvic Acid.
CN116715733A (zh) 一种有效抑制柑橘黄龙病病原菌增殖的抗菌肽stj-2及其应用
KR20200009625A (ko) 대왕버섯 추출물을 함유하는 저병원성 조류독감 바이러스 소독 조성물의 제조방법
CN102397343A (zh) 一种中药型气雾剂及其制备方法
Abubakar et al. Special Issues
Iheukwumere et al. BOOSTING THE ANTIVIRAL ACTIVITY OF BAPHIA NITIDA LEAVES EXTRACT IN BROILER CHICKS USING VITAMIN C

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20110202

Termination date: 20181223

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee