CN1883491A - 人参皂苷Rh1的医药用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及人参皂苷Rh1的医药用途。人参皂苷Rh1具有促智、神经保护、抗脑缺血、抗肿瘤、刺激骨髓造血、抗软骨退变、防治白内障作用，可期望成为痴呆综合征、帕金森氏病、缺血性心脑血管病、贫血、肿瘤、骨关节炎、白内障的治疗药物。其给药方式可以为口服或注射途径给药。

Description

人参皂苷Rh1的医药用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域，确切地说是人参皂苷Rh1(ginsenoside Rh1)的医药用途。

背景技术

人参药用在我国已有数千年的历史，其具有多种生理和药理作用，如抗肿瘤、增强免疫、改善微循环、平稳血压、调节血糖、降血脂、安神、抗衰老、抗紧张、调节消化机能、预防消化道溃疡、提高生命质量、增强记忆及学习能力等。

目前公认人参皂苷是人参的有效部位，其中的Rg₁作为有效成分之一，含量较高，活性强，作用广。但是，天然人参皂苷被肠道吸收的能力极差，难以入血发挥药效作用，从而影响了人参皂苷的新药开发及产业化。

近年研究表明，人和大鼠口服人参皂苷后，在人肠道内代谢途径为Rg₁→Rh₁→原人参三醇(Ppt)，在大鼠肠道内的代谢途径为：Rg₁→Rh₁/F₁(ginsenoside F₁)→原人参三醇(Ppt)。其中F₁为Rh₁的同分异构体。说明Rg₁经肠内菌代谢后，两个中间产物(Rh₁及F₁)被吸收入血产生药理作用。

王毅等研究结果显示Rh1能提高巨噬细胞的吞噬能力和促进NO的释放，且Rh1能促进脾细胞增殖、下调刀豆素(ConA)诱导的T细胞增殖。研究者认为Rh1调节机体免疫功能的作用可能与其在体内直接激活T细胞增殖、抑制活化状态的T细胞、并提高巨噬细胞吞噬及释放NO的能力等有关，其中Rh1对T细胞的作用更强【王毅，姜艳，王本祥.人参皂苷Rg1及其肠内菌代谢产物Rh1对小鼠免疫细胞功能的影响.药学学报，2002，37(12)：927】。

王毅等观察人参皂苷Rh1对DC刺激T细胞增殖的影响结果表明人参皂苷Rh1可不同程度地增强DC刺激T细胞增殖及LPAK细胞对肿瘤细胞的杀伤能力，Rh1作用与其剂量范围及细胞比例密切相关【王毅，郝钰，邱全瑛.人参皂苷Rg1及Rh1对树突状细胞刺激T细胞增殖及LPAK抗肿瘤活性的影响.中国免疫学杂志，2003，19(4)：248】。

张有为等研究人参皂苷对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用结果表明：在5μmol/L浓度下，人参皂苷Rh1较明显地抑制了肿瘤细胞的增殖【张有为，窦德强，陈英杰，等.人参皂苷对人体骨肉瘤细胞U₂OS增殖的影响.中草药，2001，32(3)：232-236】。而关于人参皂苷Rh1的其余药理作用皆未见报道。

发明内容

本发明的目的在于明确提出了人参皂苷Rh1的医药用途。

本发明提供了人参皂苷Rh1在制备治疗痴呆综合征药物中的应用。

本发明提供了人参皂苷Rh1在制备治疗阿尔茨海默病药物中的应用。

本发明提供了人参皂苷Rh1在制备治疗或预防血管性痴呆药物中的应用。

本发明提供了人参皂苷Rh1在制备治疗帕金森氏病药物中的应用。

本发明提供了人参皂苷Rh1在制备治疗贫血药物中的应用。

本发明提供了人参皂苷Rh1在制备治疗再生障碍性贫血药物中的应用。

本发明提供了人参皂苷Rh1在制备治疗白血病药物中的应用

本发明提供了人参皂苷Rh1在制备治疗或预防缺血性脑中风的药物中的应用。

本发明提供了人参皂苷Rh1在制备治疗或预防脑缺血/再灌注损伤的药物中的应用。

本发明提供了人参皂苷Rh1在制备治疗或预防心肌缺血的药物中的应用。

本发明提供了人参皂苷Rh1在制备治疗骨关节炎的药物中的应用。

本发明提供了人参皂苷Rh1在制备治疗自内障的药物中的应用。

本发明提供的药物可以以口服或注射途径给药，注射给药可以为静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、皮下注射或瘤体内注射。口服制剂可以为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、滴丸、软胶囊、悬浮液、溶液、糖浆；注射用制剂可以为冻干粉针、注射用静脉乳剂、注射液、输液。口服制剂优选为片剂、胶囊剂、颗粒剂；注射用制剂优选冻干粉针、注射用静脉乳剂。

本发明所提供的各种药物剂型均可以以药学常规方法制备而成。

本发明通过下列实施方式证明了人参皂苷RH1的用途，但不限于此。

具体实施方式：

试验例1：人参皂苷Rh1对AD模型大鼠学习记忆力的影响

1.A_β1-40诱导大鼠AD样病变模型的制备及分组：

应用凝聚态β淀粉样肽1～40片段(A_β1-40)注入大鼠海马内建立AD样病变的动物模型。具体如下：

SD雄性大鼠共50只，清洁2级，体重250～300g。SD大鼠经麻醉后于立体定位仪下以A_β1-40行双侧海马内注射，每侧各1μl(预先将A_β1-40溶于无菌生理盐水10μg/μl，用前37℃下孵育1周)。注射部位为：前囟后3.5mm，脑正中线旁开2.0mm，其深度为2.7mm。

大鼠随机分为5组：(1)A_β1-40处理模型组；(2)人参皂苷Rh1低剂量治疗组(2.5mg/kg)；(3)人参皂苷Rh1中剂量治疗组(5mg/kg)；(4)人参皂苷Rh1高剂量治疗组(10mg/kg)；(5)假手术对照组：即海马内注射等量生理盐水。

给药方法：各组动物于造模前一周开始腹腔注射给药，每天1次，连续3周。迷宫训练期间，于训练前0.5h给药。

2.观察指标与方法

空间学习记忆力测试：采用Morris水迷宫法。平台设于迷宫东北象限正中，水平面高出平台1.5cm，水温保持在19℃～20℃，大鼠连续训练5d，每天2次，设定最长游动时间为70s，以秒表记时，记录大鼠找到平台所需时间(潜伏期，EL)。

3.结果：

对AD大鼠空间学习记忆力的影响：随训练天数增加，各组大鼠平均EL逐渐缩短。与假手术组比较，模型组大鼠EL明显延长，第4天开始差异显著(P＜0.05)，说明造模成功。与模型组比，人参皂苷Rh12.5mg/kg组大鼠于第4天开始EL明显缩短，5mg/kg组则于第3天开始EL明显缩短，10mg/kg组则于第2天即开始EL明显缩短，皆差异显著；10mg/kg组第5天则有极显著性差异。表明人参皂苷Rh1各剂量组均能显著改善A_β1-40诱导的大鼠空间学习记忆障碍，且呈剂量依赖性。详见表1。

                        表1  人参皂苷Rh1对实验性AD模型大鼠空间辨别学习记忆能力的影响

组别	n	潜伏期/s
							1d	2d	3d	4d	5d
		假手术对照组模型组人参皂苷Rh12.5mg/kg组人参皂苷Rh15mg/kg组人参皂苷Rh110mg/kg组	1010101010	58.68±6.8660.18±6.6959.90±7.3059.44±8.3059.09±8.38	47.13±8.7957.43±4.8355.76±5.4553.68±6.6443.54±6.04*	43.18±11.3054.87±9.2950.98±6.1239.87±6.06*35.96±6.03*						32.56±8.42*52.18±7.1538.23±7.13*33.93±7.09*30.14±7.67*	23.50±4.96*51.37±10.6730.30±3.67*24.31±3.89*21.34±3.98**

注：与AD模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

试验例2：人参皂苷Rh1对血管性痴呆模型大鼠学习记忆力的影响

1.造模方法

本研究采用永久性结扎双侧颈总动脉(2-VO)法制作慢性脑灌注不足VaD动物模型，大鼠术前12h禁食、4h禁水。用10％水合氯醛(0.35ml/100g)腹腔注射麻醉，必要时补充注射，保证手术期间有自主呼吸。待翻正反射消失后，仰卧固定木制手术台上。颈前部去毛，酒精、碘酒消毒后，沿腹侧颈正中切开，依次钝性分离皮下脂肪、胸骨舌骨肌和胸锁乳头肌，再分别分离暴露左、右侧颈总动脉及气管(注意勿伤及迷走神经)，套以“0”号丝线双重结扎，然后逐层缝合肌肉、皮肤。其中控制麻醉深度、保持体温恒定是造模成功的关键。术后动物送至有通风设备动物房饲养。假手术组动物同法行颈前皮肤切开，分离皮下脂肪、肌肉等组织，分离、暴露但不结扎颈总动脉，逐层缝合切口。术毕给予注射用青霉素钠水溶液适量局部涂敷，放入笼中饲养，每日肌注青霉素钠20万U/只，连用3d(如出现感染者可延长至1周)，防治感染。

2.动物分组及给药方法：同试验例1。

3.观察指标与方法：同试验例1。

4.结果：

对AD大鼠空问学习记忆力的影响：随训练天数增加，各组大鼠平均EL逐渐缩短。与假手术组比较，模型组大鼠EL明显延长，第4天开始差异显著(P＜0.05)，说明造模成功。与模型组比，人参皂苷Rh12.5mg/kg组大鼠于第4天开始EL明显缩短，5mg/kg组则于第3天开始EL明显缩短，10mg/kg组则于第2天即开始EL明显缩短，皆差异显著(P＜0.05)；10mg/kg组第4天开始即有极显著性差异(P＜0.001)。表明人参皂苷Rh1各剂量组均能显著改善实验性VD大鼠空间学习记忆障碍，且呈剂量依赖性。详见表2。

                    表2  人参皂苷Rh1对实验性VD模型大鼠空间辨别学习记忆能力的影响

组别	n	潜伏期/s
							1d	2d	3d	4d	5d
		假手术对照组模型组人参皂苷Rh12.5mg/kg组人参皂苷Rh15mg/kg组人参皂苷Rh110mg/kg组	1010101010	58.59±6.6760.21±6.6958.90±7.5659.43±8.1257.07±8.38	47.24±8.4558.46±4.9355.67±5.5452.98±6.5442.58±6.23*	43.344±11.3053.89±9.2850.89±6.1039.87±6.09*34.45±6.23*						32.78±8.02*52.08±7.1038.45±7.03*33.93±7.09*20.34±3.98**	23.34±4.89*51.38±10.8930.80±3.45*23.39±3.98*19.99±3.79**

注：与AD模型组比较，*P＜0.05；P＜0.001。

试验例3：人参皂苷Rh1对帕金森氏病(PD)大鼠的影响

1.造模方法

120只体重200～300gSD大鼠，随机分出10只作正常对照组，10只作假手术组(注射等量含2g/L维生素C的生理盐水)，其余100只进行造模。造模方法如下：

戊巴比妥钠按体重50mg/kg腹腔注射麻醉并固定于立体定位仪，颅骨钻孔，6-羟基多巴(6-OHDA)8μg溶于2μL生理盐水(其中含2g/L维生素C)，微量注射于一侧黑质或/和内侧前脑束，注射完毕留针5min再缓慢拔出，封闭伤口。腹腔注射青霉素10万u/kg，换药，每日1次，7日后拆线。术后2周用0.01％阿朴吗啡腹腔注射(1ml/只)，观察记录每5min向健侧旋转次数及40min旋转的总次数，旋转次数≥7圈/min(280圈/40min)者为阳性。每周1次，连续4周阳性者为合格的PD模型大鼠。假手术组大鼠未出现旋转行为。

2.动物分组及给药方法：

将造模成功的60只PD大鼠随机分为4组，每组15只，具体如下：(1)模型组；(2)人参皂苷Rh1低剂量组(2.5mg/kg)；(3)人参皂苷Rh1中剂量组(5mg/kg)；(4)人参皂苷Rh1高剂量组(10mg/kg)。

给药方法：腹腔注射给药，每天1次，连续3周。

3.观察指标与方法：分别于给药第1、2、3周末用盐酸阿扑吗啡诱导检测PD大鼠的旋转行为。

4.结果：人参皂苷RH1对治疗前后大鼠旋转行为的影响：

表3显示：模型组大鼠旋转圈数不断增加，与治疗前比较2周后即有显著性差异(P＜0.01)；中、高剂量人参皂苷Rh1治疗后第2周即可改善PD大鼠的旋转行为，使旋转圈数减少(与模型组比较，P＜0.05或P＜0.01)；低剂量Rh1治疗3周后比模型组的旋转圈数减少(P＜0.01)。

                            表3  各组大鼠治疗前后旋转行为比较

组别	N	n/r·min-1
						治疗前	治疗1周后	治疗2周后	治疗3周后
		模型组人参皂苷Rh1 2.5mg/kg组人参皂苷Rh1 5mg/kg组人参皂苷Rh1 10mg/kg组	15151515	9.83±2.7210.37±2.7410.23±2.7510.09±2.11	9.87±3.718.12±2.3311.09±3.789.78±2.67					13.62±4.54##9.98±1.548.86±3.258.13±3.23*	13.09±3.78##7.89±3.05**5.09±2.35*##6.67±1.77*##

注：#与治疗前比较，P＜0.05；##P＜0.01；*与模型组比较，P＜0.05；**P＜0.01。

试验例4：人参皂苷RH1对免疫诱导再生障碍性贫血(AA)小鼠的影响

1.免疫诱导AA小鼠模型的建立

取DBA/2小鼠，断颈处死，常规消毒，无菌取出胸腺及颈部、颌下、腋窝、腹股沟、肠系膜等处淋巴结，加少量生理盐水，轻轻磨碎后过滤，使成单细胞悬液，台盼蓝鉴定细胞活性，活性细胞达98％。计数后配成所需浓度备用。雌性Balb/c小鼠，经⁶⁰Co6.0Gyγ射线亚致死量全身照射。4h内由尾静脉输入取自DBA/2小鼠胸腺淋巴结混合细胞，输细胞量为每只1×106/0.2ml。

2.分组与给药

将Balb/c小鼠随机分为6组，每组10只，具体如下：(1)正常对照组：即未经照射组，给予腹腔注射无菌生理盐水，10ml·kg^-1·d^-1，每天1次，连续12d。(2)模型对照组：于制模当天即给予腹腔注射无菌生理盐水，10ml·kg^-1·d^-1，每天1次，连续12d。(3)人参皂苷Rh1低剂量组(5mg/kg)；(4)人参皂苷Rh1中剂量组(10mg/kg)；(5)人参皂苷Rh1高剂量组(20mg/kg)；于制模当天即给予人参皂苷Rh1腹腔注射，每天1次，连续12d。(6)丙酸睾丸酮组：于制模当天即给予腹腔注射丙酸睾丸酮，10ml·kg^-1·d^-1。所有小鼠均给予每升含红霉素250mg及庆大霉素320万U无菌水喂养。

3.观察指标与方法：

3.1小鼠外周血细胞计数，骨髓有核细胞计数：于制模第12d，每只小鼠经尾静脉采血，按常规方法计数外周血细胞(白细胞、血小板、血红蛋白、网织红细胞)后，断颈处死，取右侧股骨，用PBS冲出骨髓细胞，计数，即为1根股骨中的骨髓有核细胞(BMNC)。

3.2骨髓CD34⁺细胞检测：将冲出的BMNC用4％甲醛固定，加入10μlCD34⁺RPE单抗，4℃孵育30min，用PBS2ml洗2次后加入1mlPBS，经流式细胞仪检测CD34⁺细胞。

4.结果

实验各组小鼠血细胞计数、骨髓有核细胞计数均显著低于正常对照组(P＜0.01)，但人参皂苷RH1中、高剂量组及丙酸睾丸酮组较模型对照组明显增加(P＜0.01)。模型对照组BMNC上CD34⁺细胞抗原的表达水平明显低于正常对照组(P＜0.01)，而人参皂苷Rh1中、高剂量组及丙酸睾丸酮组较模型对照组明显增加(P＜0.05和P＜0.01)，且与正常对照组之间无显著性差异(P＞0.05)。但人参皂苷Rh1小剂量组与模型对照组比较无显著差异(P＞0.05)。详见表4-5。

                                           表4  各组小鼠血细胞计数(x±s)

组别	n	白细胞(×109·L-1)	血红蛋白(g·L-1)	血小板(×109·L-1)	网织红细胞(个/1000个RBC)
						正常对照组模型对照组人参皂苷Rh1 5mg/kg组人参皂苷Rh1 10mg/kg组人参皂苷Rh1 20mg/kg组丙酸睾丸酮组	101010101010	6.8±0.6**0.8±0.41.2±0.72.5±0.8#*3.9±0.9##**4.8±0.9**	147.6±17.6**69.9±23.374.5±20.3102.6±21.7#*131.7±18.4##**140.5±17.0**	230.1±31.3**153.7±18.1170.5±42.9186.6±46.3#*202.5±51.6##**214.9±50.2**	10.1±1.4**4.2±1.15.1±0.97.6±1.0#*8.9±1.2##**9.2±1.2**

注：与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与丙酸睾丸酮组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

            表5  小鼠骨髓有核细胞数及CD34⁺抗原表达的变化(x±s)

组别	n	骨髓单个核细胞计数(×106/根股骨)	CD34+(％)
				正常对照组模型对照组人参皂苷Rh1 5mg/kg组人参皂苷Rh1 10mg/kg组人参皂苷Rh1 20mg/kg组丙酸睾丸酮组	101010101010	7.8±1.1**1.8±1.02.0±0.93.6±0.9#*4.5±1.1##**5.5±0.9**	71.2±2.7**52.8±4.649.4±3.859.9±5.4#*64.0±5.3##*68.7±5.9**

注：与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与丙酸睾丸酮组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

试验例5：人参皂苷Rh1对大鼠局部脑缺血损伤的影响

1.分组与实验方法

Wistar大鼠随机分为(1)假手术组(等容量溶剂)，(2)模型对照组(等容量溶剂)，(3)尼莫地平组(Nim，1.5mg/kg)，(4)人参皂苷RH1低剂量组(2.5mg/kg)；(5)人参皂苷RH1中剂量组(5mg/kg)；(6)人参皂苷RH1高剂量组(10mg/kg)。每组10只。禁食12小时后，水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉，分离右侧颈总动脉，夹闭颈内、颈总动脉，颈外动脉近心端及远心端结扎，中间剪断。将颈外动脉游离端拉至与颈内动脉成一条直线，将栓线(选用直径0.24mm尼龙线，长度5.0cm)由颈外动脉插入至颅内，遇轻微阻力时停止，插入深度约为2cm。结扎颈外动脉开口，并打开颈总动脉动脉夹，消毒缝合伤口，造成左侧大脑中动脉缺血模型；假手术组仅进行右侧颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉的分离(以上实验均在23℃～25℃进行)。术后各组动物静脉注射相应药物(给药体积1ml/200g)。24小时后按文献【刘小光，徐理纳，一种能评价溶栓和抗溶栓的大鼠脑中动脉模型，药学学报，1995，30：662】所述方法及标准观察并记录大鼠的行为障碍：(A)提鼠尾观察前肢屈曲情况，如双前肢对称伸向地面，计为0分，如手术对侧前肢出现腕屈曲计为1分，肘屈曲计为2分，肩内旋计为3分，既有腕屈曲和/或肘屈曲，又有肩内旋者，计为4分。(B)将动物置于平地面上，分别推双肩向对侧移动，检查阻力。如双侧阻力对等且有力，计为0分，如向手术对侧推动时阻力下降者，根据下降程度不同分为轻、中、重三度，分别计为1，2和3分。(C)将动物双前肢置一金属网上，观察双前肢的肌张力。双前肢肌张力对等且有力者计为0分。同样根据手术对侧肌张力下降程度不同计为1，2和3分。(D)动物有不停地向一侧转圈者，计为1分。根据标准评分，满分为11分，分数越高，表示动物行为障碍越严重。

行为评分后处死大鼠，取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，冠状切成5片，脑片用红四氮唑(TTC)染色，正常组织经染色后呈红色，梗塞组织呈白色，染色后照相，用中国航空航天大学病理图像分析软件求梗塞面积比。数据用 X±s表示，以组间t检验进行统计学处理。

2.结果

如表8所示，缺血24小时后，大鼠表现出明显的行为障碍，大鼠脑组织也出现明显的灶状缺血区，达到全脑的25％左右；给予不同剂量的人参皂苷Rh1，动物行为障碍有不同程度的减轻，大鼠脑缺血区也有明显好转，且呈剂量依赖性。

        表8  人参皂苷RH1对大鼠局部脑缺血损伤的影响(n＝10， X±s)

组别		行为障碍	缺血面积(％)
				假手术组模型对照组尼莫地平组		09.10±1.376.89±2.43**	024.19±4.1313.08±7.11**
人参皂苷Rh1组	2.5mg/kg5mg/kg10mg/kg	7.90±1.24*7.48±3.03*5.43±1.29**	18.34±2.73*16.52±2.64*10.09±3.59**

注：与模型对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。

试验例6人参皂苷Rh1对大鼠脑缺血/再灌注损伤的影响

1.分组及实验方法

分组同前。禁食12小时后，按实验例7所述方法造成左侧大脑中动脉缺血；术后10min各组动物静脉注射相应药物(给药体积1ml/200g)。缺血2小时后，抽出尼龙线，造成大鼠脑缺血/再灌注损伤；再灌22小时后，按按实验例1所述方法进行行为评分、脑片染色。数据用 X±s表示，以组间t检验进行统计学处理。

2.结果

如表9所示，缺血2小时再灌22小时后，大鼠表现出明显的行为障碍，大鼠脑组织也出现明显的灶状缺血区，达到全脑的25％左右；给予不同剂量的人参皂苷Rh1，动物行为障碍有不同程度的减轻，大鼠脑缺血区也有明显好转，且呈剂量依赖性。

表9  人参皂苷Rh1对大鼠脑缺血/再灌注损伤的影响(n＝10， X±s)

组别	行为障碍	缺血面积(％)
			假手术组	0	0

模型对照组尼莫地平组		10.18±1.246.88±2.24**	25.38±4.7613.55±7.07**
				人参皂苷Rh1组	2.5mg/kg5mg/kg10mg/kg	7.89±1.14*7.46±1.36**5.25±1.01**	18.48±2.77*13.33±3.35**10.45±3.12**

注：与模型对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。

试验例7：人参皂苷Rh1对大鼠心肌缺血的影响

1.分组及实验方法

分组同前。禁食12小时后，ip乌拉坦(1.2g/kg)麻醉，测肢体导联心电图。剪去左胸前皮毛，碘酒及酒精消毒，沿胸骨左缘1cm处，剪开胸壁肌肉及二条肋骨，迅速打开胸腔，暴露心脏，在动脉圆锥与左心耳之间结扎左冠状动脉，立即将心脏放回，排挤出胸腔空气，用止血钳闭合胸腔，造成大鼠急性心肌缺血模型。术后各组动物静脉滴注(用输液泵注射)相应药物(给药体积3ml，30min滴完)。记录术后0，2，6h心电图，随后取出心脏，以冷生理盐水洗净后，-20℃冰箱冷冻过夜。次日，将冷冻的心脏由结扎处至心尖部等厚切成5片，浸入新鲜配制的0.5％N-BT磷酸缓冲液(pH 7.4)中。37℃水浴振摇10～15min。用滤纸吸干切片表面的染色液，分离染色部分和未染色部分，称重，记算梗死面积。心肌梗死百分比(％)＝梗死部分重量/(非梗死部分重量+梗死部分重量)×100％。

3.结果：如表10所示，不同剂量的人参皂苷Rh1均明显减少结扎冠状动脉所致大鼠急性心肌缺血引起的心肌梗死面积，并可降低由心肌缺血造成的肢体导联心电图J点的升高。人参皂苷RH1对心肌具有保护作用，能降低缺血引起的心肌损伤。

                       表10  人参皂苷Rh1对大鼠心肌缺血损伤的影响(n＝10， X±s)

分组		心肌梗死百分比(％)	J点升高(10×mV)
							正常	0h	2h	6h
			模型对照组丹参注射液组		24±318±6*	0.8±0.60.8±0.6					6.7±2.36.0±1.5*	6.3±2.05.6±1.7*	5.9±1.5*5.6±1.6*
人参皂苷Rh1	2.5mg/kg5mg/kg10mg/kg	17±6*Δ14±6**13±6**#					0.7±0.50.7±0.60.7±0.5	5.3±1.1*Δ4.6±1.6*4.4±1.3*#	4.8±1.3*Δ4.2±1.4*4.1±1.6*#	4.1±1.5*Δ3.5±1.0*3.4±1.1*#

注：与模型对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01

试验例8：人参皂苷Rh1对实验性兔膝骨关节炎的影响

1.动物模型的建立

以切断兔前后交叉韧带方法造模。以3％戊巴比妥30mg/kg静脉麻醉，随机取左、右膝内侧髌腱旁直切口1-2cm，沿髌腱旁切开关节囊向内侧推离髌骨造成脱位。屈曲膝关节，直视下可见膝交叉韧带，用眼科剪小心剪断交叉韧带，避免损伤关节面软骨。行前后抽屉实验证实交叉韧带完全切断，冲洗关节腔积血、积屑，逐层缝合伤口，无菌包扎固定。术后4d肌注青霉素4×106U/d，以预防感染。

2.分组与给药

健康新西兰兔60只，雌雄不限，兔龄6-8个月，平均体重(2.7±0.5)kg。全部动物由暨南大学动物实验中心提供。动物随机分为6组，每组10只。具体如下：(1)假手术组。(2)模型组：于制模当天即给予无菌生理盐水10ml灌胃，每天1次，连续10周。(3)人参皂苷Rh1低剂量组(1.25mg/kg)；(4)人参皂苷Rh1中剂量组(2.5mg/kg)；(5)人参皂苷Rh1高剂量组(5mg/kg)；于制模当天即给予人参皂苷Rh1灌胃，每天1次，连续10周。(6)硫酸氨基葡萄糖胶囊(40mg/kg)；加蒸馏水稀释成溶液，于制模当天即给予灌胃，每天1次，连续10周。

3.观察指标与方法：

3.1X线：给药10周后摄兔膝关节前后位CR片观察膝关节X线表现。

3.2骨内压：采用脑压计测量骨内压。在静脉全麻下，把兔仰卧固定于手术台上，在兔左或右胫骨结节上约5mm处内侧平坦骨面将骨穿针头垂直穿入髓腔，拔出针芯，快速将带有细长针头、充有0.1％肝素钠生理盐水的注射管向骨穿针内芯管注射充满，再将装有肝素钠生理盐水的细塑料管经三通管连接到骨穿针和脑压计，观察10min，指针稳定后，记录数据。所得数据(单位：mmH₂O)经公式换算成kPa。

3.3血清SOD、NO含量测定：给药10周后自兔耳缘静脉取血5ml测血清SOD、NO含量。

4.结果

4.1X线观察：假手术组膝关节内外侧间隙均匀一致，股骨髁、胫骨平台关节面轮廓清晰、光整；模型组膝关节内侧间隙明显变窄，外侧间隙增大，膝关节失稳，股骨内髁、胫骨平台关节面不光整；人参皂苷RH1各剂量组及硫酸氨基葡萄糖组膝关节内侧间隙变窄，外侧间隙稍宽，但与模型组比较，股骨内髁、胫骨平台关节面尚光整。

4.2骨内压：结果表明：模型组、人参皂苷Rh1组、硫酸氨基葡萄糖组皆与假手术组对比有显著性差异，说明造模成功。人参皂苷Rh1组中、高剂量组、硫酸氨基葡萄糖组与模型组比较有显著性差异，说明人参皂苷Rh1中、高剂量及硫酸氨基葡萄糖组皆可降低兔膝关节炎模型骨内压，两者比较无显著性差异。详见表11。

表11  人参皂苷RH1对兔膝关节炎模型骨内压的影响(n＝10， X±s)

组别		骨内压(kPa)
			假手术组模型对照组硫酸氨基葡萄糖组		2.18±0.14*3.72±0.162.45±0.15*
人参皂苷Rh1组	1.25mg/kg2.5mg/kg5mg/kg	3.56±0.193.02±0.11*2.65±0.18*#

注：与模型对照组比较*P＜0.05；与硫酸氨基葡萄糖组比较#P＜0.05。

4.3血清SOD、NO含量测定：用黄嘌呤氧化酶法测定SOD含量，用硝酸还原酶法测定NO含量，结果显示：模型组血清中SOD含量明显下降，人参皂苷Rh1组及硫酸氨基葡萄糖组SOD活性升高，说明人参皂苷RH1与硫酸氨基葡萄糖均可提高SOD活性。血清NO测定，模型组血清中NO含量明显升高，人参皂苷Rh1组及硫酸氨基葡萄糖组NO含量降低(表12)。

表12  人参皂苷Rh1对膝关节炎模型兔血清SOD、NO的影响(n＝10， X±s)

组别		SOD(NU/ml)	NO(μmol/L)
				假手术组模型对照组硫酸氨基葡萄糖组		442.2±29.4*255.8±32.0416.2±30.8*	101.7±16.9*122.5±19.9119.6±15.8*
人参皂苷Rh1组	1.25mg/kg2.5mg/kg5mg/kg	424.0±28.6*440.3±29.7*468.2±22.5*#	117.5±15.5*116.3±14.9*118.6±20.1*#

注：与模型对照组比较*P＜0.05；与硫酸氨基葡萄糖组比较#P＜0.05。

5.结论

上述结果表明人参皂苷Rh1能降低骨内压、提高SOD含量，抑制氧自由基对软骨细胞及基质的损害，从而起到防止并延缓关节软骨的退行性改变，抑制滑膜炎症以起到防治骨关节炎的作用。

试验例9：人参皂苷Rh1对大鼠D-半乳糖性白内障的影响

1.动物模型的建立

每日给予除正常组大鼠外各组大鼠腹腔缓慢注入80％半乳糖溶液(20mg/kg)，共14天。

2.分组与给药

选用1％阿托品散瞳检查晶状体透明的健康Wistar大鼠48只，雌雄各半，鼠龄22天(提前三天断乳)，体重40～50g。动物随机分为6组，每组8只。具体如下：(1)正常组。给予腹腔注射生理盐水。(2)模型组：于制模当天即给予无菌生理盐水腹腔注射，每天1次，连续14天。(3)人参皂苷Rh1低剂量组(2.5mg/kg)；(4)人参皂苷Rh1中剂量组(5mg/kg)；(5)人参皂苷RH1高剂量组(10mg/kg)；于制模当天即给予人参皂苷Rh1腹腔注射，每天1次，连续14天。(6)维生素E(1.3ml/100g)；于制模当天即给予腹腔注射，每天1次，连续14天。

3.观察指标与方法：

3.1裂隙灯显微镜检查：1％阿托品滴眼液散瞳，每日用裂隙灯检查双眼晶状体混浊情况，记录下其出现I级混浊的时间，末次给药12小时后记录各组大鼠晶状体混浊情况。

裂隙灯下晶状体检查分级：晶状体混浊程度按下列标准分级。0期(无混浊)：晶状体透明清亮；I期(轻度混浊)：仅赤道部有空泡；II期(明显混浊)：空泡扩展到中央；III期(皮质混浊)：皮质呈现不规则条纹或剑竹状向前极放射的混浊灶，逐渐形成弥漫性灰色→灰白色混浊，晶状体核心尚透明；IV期(核混浊)：晶状体除皮质混浊外晶状体核密度增高，色灰或灰白或白色；V期(完全混浊)：整个晶状体呈完全性白内障。

3.2晶状体及血清SOD、MDA测定：实验第14天给药后12小时，裂隙灯显微镜检查后，各组大鼠乙醚麻醉，摘眼球，眼眶取血。摘除之眼球，以冰生理盐水漂洗后，仔细从后路剖开眼球，除去眼球壁及玻璃体，剥离悬韧带，冰盘上小心分离晶状体。以每只大鼠的晶状体为一个标本，用4℃蒸馏水冲洗后，滤纸吸干，分析天平称重，按W/V＝1∶9加入生理盐水中，于冰浴下研磨10min，高速冷冻离心(3000r/min)10～15min后，取其上清液即为10％晶状体匀浆，同时低温离心血液取血清，立即送检测定。

4.结果

4.1人参皂苷Rh1对大鼠晶状体混浊发生时间的影响：人参皂苷Rh1与维生素E皆可延长晶状体发生混浊的时间，与模型组比较有显著性差异，且人参皂苷Rh1大剂量优于维生素E疗效，两者比较有显著性差异(表13)。

         表13  各组大鼠晶状体混浊发生时间情况( X±s)

组别		眼数(只)	混浊发生时间(天)
				模型对照组维生素E组		1416	7.72±0.568.72±0.46
人参皂苷Rh1组	2.5mg/kg5mg/kg10mg/kg	161616	7.96±0.598.02±0.6*9.65±0.68*#

注：与模型对照组比较*P＜0.05；与维生素E组比较#P＜0.05。

                   表14  各组大鼠晶状体混浊情况

组别		眼数(只)	晶状体混浊程度
									0	I	II	III	IV	V
			正常组模型对照组维生素E组		161416	1600	002	003							035	046	070
人参皂苷Rh1组	2.5mg/kg5mg/kg10mg/kg	161616							000	3811	643	432	310	000

4.2各组大鼠晶状体及血清SOD活性及MDA的含量变化情况(见表15)：

表15  各组大鼠晶状体及血清SOD活性及MDA的含量变化情况( X±s)

组别	n	血清SOD(Nu/ml)	晶状体SOD(Nu/g protein)	血清MDA(Nm/ml)	晶状体MDA(Nm/g protein)
						正常组	8	152.23±9.41**	272.23±9.41**	12.23±2.41**	7.07±1.19**

模型对照组维生素E组		78	105.13±12.09118.27±11.87*	192.58±19.29217.73±15.23*	22.95±3.921.13±2.99*	18.75±1.9716.19±2.40*
							人参皂苷Rh1组	2.5mg/kg5mg/kg10mg/kg	888	146.34±12.27**140.09±7.98**#156.72±13.08**##	235.86±14.57**247.67±15.04**#257.33±14.41**##	17.37±3.93**14.92±3.85**#11.32±2.91**##	13.08±2.00**11.22±2.88**#9.17±2.49**##

注：与模型对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01；与维生素E组比较#P＜0.05，##P＜0.01。

5.结论

人参皂苷Rh1能明显延缓白内障的形成，减轻晶状体混浊程度，降低MDA含量，提高SOD活性，且都不同程度优于维生素E。

Claims (6)

1.人参皂苷Rh1的医药用途。其特征在于：人参皂苷Rh1的促智、神经保护、抗脑缺血、刺激骨髓造血、抗软骨退变、防治白内障作用，可期望成为痴呆综合征、帕金森氏病、缺血性心脑血管病、贫血、骨关节炎、白内障的治疗药物。

2.根据权利要求1所述的促智作用，其特征在于：促智作用可以包括促进正常人的学习记忆、改善脑功能障碍所致的学习记忆损伤及痴呆综合征患者改善记忆等。

3.根据权利要求1所述的神经保护作用，其特征在于：人参皂苷Rh1能保护大脑皮质神经元、有肯定的抗神经细胞凋亡作用。

4.根据权利要求1所述的痴呆综合征，其特征在于：痴呆综合征包括阿尔茨海默病、血管性痴呆等。

5.根据权利要求1所述的贫血，其特征在于：贫血包括再生障碍性贫血、白血病等。

6.根据权利要求1任一所述的应用，其给药方式可以以口服或注射途径给药，注射给药可以为静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、皮下注射或瘤体内注射。口服制剂可以为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、滴丸、软胶囊、悬浮液、溶液、糖浆；注射用制剂可以为冻干粉针、注射用静脉乳剂、注射液、输液。口服制剂优选为片剂、胶囊剂、颗粒剂；注射用制剂优选冻干粉针、注射用静脉乳剂。