CN1837210A - 特异青霉酮类化合物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及特异青霉酮(Notatone A)类化合物及其制备方法和用途。本发明用从青海湖泥样品中分离得到的特异青霉B－62(Penicillium notatum B－62)真菌生产出结构新颖的上述类型化合物。经实验证实，该类化合物可作为细胞增殖抑制剂或抗肿瘤剂。
Description
技术领域：
本发明涉及用特异青霉B-62(Penicillium notatum B-62)(保藏编号是：CCTCCM205047)制备特异青霉酮类化合物的方法；本发明还涉及该类化合物在制备细胞增殖抑制剂或抗肿瘤剂中的用途。
背景技术：
本发明人发现的式I化合物特异青霉酮(英文命名为Notatone A)是全新骨架，没有任何有关该类化合物的结构研究报道，也没有关于该类化合物的活性研究报道。
发明内容：
本发明旨在提供一种结构独特的具有细胞增殖抑制以及直接杀伤癌细胞等抗肿瘤活性的全新骨架化合物。
本发明的目的还在于提供一类新化合物的制备方法及其在制备肿瘤细胞增殖抑制剂或抗肿瘤剂中的用途。
本发明首次从特异青霉B-62(Penicillium notatum B-62)发酵物中发现了全新骨架的特异青霉酮(Notatone A)类化合物，如式I所示：
式I
其结构特征是：式I化合物的基本骨架为特异青霉酮(Notatone A)类，其中R1、R1′、R2、R2′、R3、R4、R5、R5′、R6、R6′、R7、R8可为氢、烃基、氨基、烷氧基、羟基、酰基、酰氧基或酰氨基。
优选的本发明化合物是所述的式I化合物特异青霉酮(Notatone A)的R1′、R2′、R5′、R6和R8均为氢，R1、R2、R3、R5、R6′、R7为甲基，R4为羟基。
上述发明中最优选的化合物是由青海湖泥样来源的特异青霉B-62(Penicillium notatumB-62)真菌的液体发酵物经硅胶柱层析，以石油醚、石油醚-丙酮、丙酮-甲醇为溶剂进行梯度洗脱。石油醚-丙酮1∶1的洗脱物，经Sephadex LH-20氯仿-甲醇1∶1纯化，再经制备HPLC，以甲醇-水70∶30洗脱得式I化合物。
本发明采用MTT法测试了式I化合物对P388、HL60、BEL-7402和A549细胞株的抗肿瘤活性。实验证实，特异青霉酮(Notatone A)对这四种肿瘤细胞均有增殖抑制作用。
因此本发明的式I化合物可用作细胞增殖抑制剂或肿瘤细胞杀伤剂。
式I化合物与各种药物可接受的载体、赋形剂或辅料配伍，可制成抗肿瘤药物，用于肿瘤的治疗。
式I化合物还可作为抑制细胞增殖的低分子生物探针用于生命科学研究，作为探针应用时，式I化合物可溶于氯仿、甲醇、水或含水甲醇中，也可溶于二甲基亚砜的含水溶液中加以应用。
本发明的式I化合物可通过微生物发酵培养，然后从发酵物中分离纯化而得到；也可由上述优选化合物经本领域技术人员熟知的化学修饰方法合成获得。
需要特别说明的是，经发酵微生物制取本发明式I化合物的方法可采用其它任何能生产该类化合物的微生物，只要能生产该类化合物的微生物均可作为生产菌用于制备式I化合物。
具体实施方式：
在如下的实施例中所指的化合物特异青霉酮(Notatone A)的化学结构是：(结构式中的阿拉伯数字是化学结构中碳原子的标位)：式I化合物的基本骨架为特异青霉酮(Notatone)类，其中R1、R1′、R2、R2′R3、R4、R5、R5′、R6、R6′、R7、R8为氢、烃基、氨基、烷氧基、羟基、酰基、酰氧基或酰氨基。
式I
实施例1 化合物特异青霉酮(Notatone A)的发酵生产及分离精制
1发酵生产
生产菌的发酵培养：按培养微生物的常规方法，取特异青霉B-62(Penicillium notatumB-62)，该菌株已于2005年5月26日保藏在中国典型培养物保藏中心(保藏编号是：CCTCCM205047)真菌适量，接种到PDA斜面培养基上，在28摄氏度培养箱中培养5天。
取斜面培养5天的特异青霉B-62(Penicillium notatum B-62)(保藏编号是：CCTCCM205047)适量，接种到装有150mL培养液[培养基组成(％)为：NaCl 12％、KCl 1％、MgSO4 1％、味精1％、玉米浆0.1％、甘露醇2％、麦芽糖2％、葡萄糖1％、酵母膏0.3％、pH＝7.0]的500mL锥型瓶中，在28℃、120转/分钟条件下摇床培养48小时，获得特异青霉B-62(Penicillium notatum B-62)真菌的种子培养液。将该种子培养液按5％接种量分别接种于装有200毫升生产培养液(培养基组成同上)的500mL锥型瓶中，装载于28℃、120转/分钟摇床上，进行为期15天的生产发酵，获得菌丝体和发酵液。
2浸膏的获得
用棉布将菌丝体和发酵液分离，将菌丝体用丙酮浸提三次，减压浓缩至不含丙酮，所得水层用等体积乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯萃取液减压浓缩，得粗浸膏。发酵液减压浓缩为四分之一体积后，用乙酸乙酯萃取三次，合并菌丝体和发酵液的浸膏，共80克。
3化合物的分离精制
浸膏(80克)甲醇溶解后，加300克500目硅胶H(青岛海洋化工集团公司产品)拌样，减压除去溶剂后，用硅胶柱层析，以石油醚、石油醚-丙酮、丙酮-甲醇为溶剂进行梯度洗脱，分为10个流份。Fr-3(1.8克，石油醚-丙酮1∶1洗脱物)，经Sephadex LH-20(石油醚-丙酮1∶1)，再经HPLC，以甲醇-水70∶30洗脱得化合物特异青霉酮(Notatone A)22mg。
特异青霉酮(Notatone A)黄色无定型粉末，分子式为：C23H24O5，[α]D 17+106.9°(c 0.36，CHCl3)；HRESIMS：381.1673[M+H]+，UVλmax(CHCl3)nm(logε)：202(3.46)，226(3.57)，278(4.35)，426(4.24)；IRν(KBr，cm-1)：3450(OH)，1616(conjugated CO)，1508(benzenering)；其NMR数据如表1所示。
| 表1特异青霉酮(Notatone A)的1H和13C NMR数据(600 and 150MHz，in CDCl3)a | ||||
| Position | δH(J in Hz) | δC | HMBC(H→C) | 1H-1H COSYb |
| 1a | / | 137.8s | / | / |
| 1b | / | 135.8s | / | / |
| 2 | 4.62(m，1H) | 88.0d | / | / |
| 3 | 3.17(m，1H) | 44.6d | / | H-2 |
| 3a | / | 139.2s | / | / |
| 4 | / | 116.4s | / | / |
| 5 | / | 147.4s | / | / |
| 5a | / | 102.2s | / | / |
| 5b | / | 155.4s | / | / |
| 7 | 4.98(dd，J＝6.84，6.42，1H) | 82.3d | C-16，C-17，C-8a，C-5b | / |
| 8 | 3.13(dd，J＝7.74，6.9，1H) | 35.0d | C-17，C-8a，C-8b | H-17 |
| 8a | / | 130.8s | / | / |
| 8b | / | 100.1s | / | / |
| 9 | / | 131.8s | / | / |
| 10 | / | 184.8s | / | / |
| 11 | 6.37(s，1H) | 103.3d | C-9，C-8b，C-10，C-11a | / |
| 11a | / | 158.0s | / | / |
| 13 | 1.43(dd，J＝6.84，2.76，3H) | 19.1q | C-2，C-3 | H-2 |
| 14 | 1.33(dd，J＝6.9，1.38，3H) | 18.8q | C-2，C-3，C-3a | H-3 |
| 15 | 2.21(s，3H) | 11.5q | C-4，C-5，C-3a | / |
| 16 | 1.43(dd，J＝6.84，2.76，3H) | 19.1q | C-7，C-8 | H-7 |
| 17 | 1.33(dd，J＝6.9，1.38，3H) | 18.9q | C-7，C-8，C-8a | H-8 |
| 18 | 2.12(s，3H) | 10.7q | C-8a，C-9 | / |
| a)本表信号归属基于DEPT、1H-1H COSY、HMQC及HMBC图谱解析结果。碳信号的多重度利用DEPT方法确定并分别用s(单重峰)、d(二重峰)、t(三重峰)和q(四重峰)表示。b)此栏中的数字和代号分别代表在1H-1H COSY谱中与相应行中的1H给出偶合相关信号的1H核 | ||||
实施例2 抗肿瘤活性的测试
1实验样品及实验方法
被测样品溶液的配制：测试样品为上述实施例1中分离精制的纯品化合物特异青霉酮(Notatone A)，准确称取适量样品，用甲醇配制成所需浓度的溶液，供活性测试。
细胞系及细胞的继代培养：活性测试采用P388、HL60、BEL-7402和A549细胞系，各种细胞均用含10％FBS的RPMI-1640培养基，在37℃通入5％二氧化碳的培养箱中继代培养。
细胞增殖抑制活性测试方法(MTT法)
本发明采用MTT法，测试评价了被测试样品对癌细胞增殖的抑制活性。活细胞线粒体中脱氢酶能够代谢还原黄色的溴化3-(4，5-二甲基噻唑)-2，5-二苯基四氮唑为蓝紫色的不溶于水的formazan，formazan的多少可通过酶标仪测定其吸收度求得。由于formazan的量与活细胞数成正比，所以可根据吸收度求出活细胞的数目，从而了解药物抑制或杀伤肿瘤细胞的能力。
活性测试时，取对数生长期的P388、HL60、BEL-7402和A549细胞，用新鲜的RPMI-1640培养基配制成密度为每毫升5×104个细胞的细胞悬液，按每孔200微升接种于96孔板中，在37℃下培养24小时后，每孔加入2微升不同浓度的样品溶液，继续培养72小时。然后加入20μL含MTT的IPMI-1640溶液(5mg/L)，再培养4小时，移出150μL培养液后加入150μL DMSO溶解formazan，在540nm处测定其吸收度。按照IR％＝(OD空白对照-OD样品)/OD空白对照×100％式计算每个浓度下的细胞增殖抑制率(IR％)。
2实验结果
特异青霉酮(Notatone A)的细胞增殖抑制活性示于表2：
| 表2不同浓度的特异青霉酮(Notatone A)对癌细胞增殖的抑制率(％) | |||||
| 细胞株 | 化合物(Notatone A) | ||||
| 1×10-4M | 1×10-5M | 1×10-6M | 1×10-7M | 1×10-8M | |
| A549BEL-7402HL60P388 | 91.696.595.8100 | 021.000 | 0000 | 08.200.6 | 0000 |
3结论
化合物特异青霉酮(Notatone A)对包括人在内的哺乳动物来源的癌细胞具有抗肿瘤作用。因此，本发明的式I化合物可作为抗肿瘤剂(即抗肿瘤药物)用于肿瘤的治疗，也可作为细胞增殖抑制的低分子生物探针用于探索生命现象本质的生命科学实验研究中。
Claims (9)
1.式I化合物，其中R1、R1′、R2、R2′、R3、R4、R5、R5′、R6、R6′、R7、R8为氢、烃基、氨基、烷氧基、羟基、酰基、酰氧基或酰氨基。
式I
2.权利要求1所述的式I化合物为特异青霉酮(Notatone A)，其中R1′、R2′、R5′、R6和R8均为氢，R1、R2、R3、R5、R6′、R7为甲基，R4为羟基。
3.权利要求2所述式I化合物的制备方法，其特征是液体发酵培养特异青霉B-62(Penicillium notatum B-62)CCTCCM205047真菌，获取含有上述式I化合物的发酵物，然后从发酵物中分离纯化出式I化合物特异青霉酮(Notatone A)。
4.权利要求3所述的制备方法，将所述发酵物经硅胶柱层析，以石油醚、石油醚-丙酮，丙酮-甲醇为溶剂进行梯度洗脱，石油醚-丙酮1∶1的洗脱物，再经Sephadex LH-20柱层析，氯仿-甲醇1∶1洗脱产物再经制备HPLC分离纯化，以甲醇-水70∶30洗脱得式I化合物特异青霉酮(Notatone A)。
5.权利要求4所述式I化合物的制备方法，其中所述特异青霉酮(Notatone A)类化合物的生产菌是特异青霉B-62(Penicillium notatum B-62)CCTCCM205047。
6.权利要求1所述的式I化合物在制备细胞增殖抑制剂或肿瘤细胞杀伤剂中的用途。
7.权利要求1所述的式I化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
8.特异青霉真菌B-62(Penicillium notatum B-62)，其保藏号为：CCTCC M205047。
9.权利要求8所述的菌株用于生产权利要求1所述的式I化合物的用途。
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| CN101948472A (zh) * | 2010-05-20 | 2011-01-19 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一类新颖的十字孢碱类似物及其制备方法和用途 |
| CN101591314B (zh) * | 2008-10-24 | 2011-08-10 | 中国海洋大学 | 蛇孢假壳素(ophiobolin)类二倍半萜烯化合物及其制备方法和用途 |
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2005
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| CN101948472A (zh) * | 2010-05-20 | 2011-01-19 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一类新颖的十字孢碱类似物及其制备方法和用途 |
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