背景技术
电流式电子传感器是通过施加电位差以驱动电子转移反应并产生电流,测得的电流大小与目标被分析物的浓度相关。电流式电子传感器可使得对被分析物的实际、快速、例行的测量成为可能。
在生物医学技术领域,已经开发出生物传感器用来分析人类的体液,从而诊断潜在的疾病或者监测健康状况。生物传感器是一种分析装置,其至少包含两个部份,一个是用来选择性地识别样本中的某一被分析物的生物组件(Biological component),另一个用于传递生物信号以供进一步分析的变换器材(Transducer device)。例如,通常利用生物传感器来监测某些个体中的乳酸盐、胆固醇、血红素、胆红素和葡萄糖。例如对于糖尿病患者,测定血液等体液中葡萄糖的浓度非常重要。糖尿病患者必须经常检查其血液中葡萄糖的水平,以便据此调节其饮食中葡萄糖的摄入量并监测治疗效果。通过每日注射胰岛素并严格控制饮食摄入量,使血液中的葡萄糖保持在适当水平,可使1型糖尿病患者的预后良好。由于必须密切跟踪糖尿病患者血液中的葡萄糖水平,所以理想的葡萄糖检测用生物传感器必须简单、易用、精确度高。另一方面,对于高血脂患者,监测血液中胆固醇的浓度也非常重要,长期血液中胆固醇浓度过高易引发脑中风或心血管疾病。
在电流式生物传感器之装置开发方面的成功已经使得可以对数种生物分子,包括葡萄糖、胆固醇和各种药物进行电流测量化验。一般而言,电流式生物传感器的生物组件至少包括一块绝缘底板、二或三个电极、一个介电层、一个含有酶作为催化剂的区域以及至少一个氧化还原介体(又称电子转移剂),该介体用来在被分析物的酶性氧化期间引入电子转移。当将含有被分析物的样本添加到该反应区域时,反应便开始进行。一般利用两种物理效应:网状散布和毛细管作用来引导所加样本在该反应区域上均匀地分布。然后在电极之间施加某一电位差,触发电子转移反应进行。待测被分析物被氧化,伴随的酶与介体的链锁反应产生电子。所施加的电位差必须足以能驱动扩散有限的氧化还原反应,但不足以启动无关的化学反应。经过短暂延迟后,观察并测量生物传感器中氧化还原反应所产生的电流,该电流与样本中被分析物的有无和/或含量相关。
测量电流式检测所用的传统技术范例可以在以下文献中发现:授予给Genshaw等人的美国专利第5,620,579号,其名称为“减小电流式传感器中偏压的装置”(以下称为“专利579”);以及授予给Szuminsky等人的美国专利第RE.36,268号,其名称为“测量电流式诊断分析方法及装置”(以下称为“专利268”)。每个文献中均提出了供应电位差以触发氧化还原反应的不同方法。专利579揭示的待测被分析物浓度的方法是:首先对电流式传感器施加第一电位,即熔断电压电位;然后对电流式传感器施加第二电位,即读取电压电位。测量该熔断电压电位的第一电流及该读取电压电位的第二电流,计算偏压校正值,以便提高被分析物测定的精确度。
专利268揭示的方法可以定量测定体液中具有重要生物学意义的化合物。专利268中,在氧化还原反应的早期阶段并不提供任何电压,从而消除早期阶段中不必要的功率消耗。经过一段时间后,对样本施加一固定电压,并且测量相应的科特雷尔电流(Cottrell current)。
新一代电子传感器的趋势主要在缩短检测时间和提高分辨率,其能使信号分辨率能够得以改善,并使检测所消耗的功率能更有效率。此外,通过不同的供电模式来推动检测反应的进行亦是为人所期待的。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明进一步说明。附图中显示了该实施例的一个例子。附图中只要可能,相同的参考符号便指代相同或类似的部分。
图1是本发明的一项实施例,用来测定样本中含有之被分析物浓度的系统的框图。
图2是根据本发明的一项实施例,用来测定被分析物浓度的装置的示意图。
图3A是显示对含有各种浓度水平的葡萄糖样本施加固定电压的实验结果的曲线图;
图3B是显示根据本发明的一项实施例,对含有各种浓度水平的葡萄糖样本施加电位曲线的实验结果的曲线图;
图3C是显示对葡萄糖样本施加固定电压与施加电位曲线的实验结果对比的曲线图;
图3D是显示根据本发明的一项实施例,对含有各种浓度水平的胆固醇样本施加电位曲线的实验结果的曲线图;
图3E是显示对胆固醇样本施加固定电压与施加电位曲线的实验结果对比的曲线图;
图4是显示根据本发明的一项实施例,用来处理电流信号的方法的曲线图;以及
图5是显示根据本发明的一项实施例用来将电流信号与被分析物浓度产生关联的方法的流程图。
图中10.系统,11.微处理器,12.电压产生器,13.含有催化剂和电极之器材,14.检测器,15.存储器,20.装置,21.固定器,22.电压产生器,23.检测器,24.微处理器,25.存储器,26.指示器,27.含有催化剂和电极之器材,501.将含有某一浓度被分析物的样本添加到含有催化剂和电极之器材27之步骤,502.将包含一个偏压和一个交流部分的电位曲线施加给含有催化剂和电极之器材27之步骤,503.测量含有催化剂和电极之器材27所产生的电流信号之步骤,504.微处理器24处理电流信号以导出该被分析物的浓度-电流关系之步骤。
具体实施方式
图1是根据本发明的一项实施例,用来测定样本中被分析物浓度的系统10的框图。样本来源包括但不限于:血液,淋巴,唾液,阴道和肛门分泌物,尿液,粪便,汗液,泪水,以及其它体液。参考图1,系统10包括微处理器11、电压产生器12、含有催化剂和电极之器材13、检测器14和存储器15。
供应一个电位曲线以触发含有催化剂和电极之器材13中的电子转移反应。该电位曲线包含一个偏压和一个交流部分。具有某一振幅并以某一频率传输的交流部分为正弦波、三角形波、方波中之一或组合。将某一体积的含有某一浓度被分析物的待测样本添加到含有催化剂和电极之器材13中,微处理器11令电压产生器12产生某一电位曲线。市场上可购得的各种数据采集装置,例如National Instruments公司(位于美国德克萨斯州奥斯汀市)制造的DAQ卡等,均可用作电压产生器12。在根据本发明的一项实施例中,针对选择葡萄糖做为被分析物的情形,电位曲线包含0.4V的固定偏压和一个交流部分,该交流部分为正弦波,振幅为0.1V,频率为1Hz。然而,该偏压可以是一个固定的值,在测量周期内保持不变,另一方面,在其它实施例中,该偏压亦可以随时间而变化。在根据本发明的其它实施例中,该偏压值可以为恒定值或者随时间变化,范围约为0.1V至2.5V,并且该正弦波的振幅可以在约0.01V至1.0V的范围内,频率可以在0.1Hz至100Hz的范围内。偏压、振幅和频率可以随着含有催化剂和电极之器材13或被分析物的改变而改变。
虽然所论述的实施例是针对葡萄糖的测定,但本领域的熟练技术人员应该明白,只要选择适当的催化剂,如酶等,便可将本发明的装置用于其它被分析物的测定。被分析物的例子包括:代谢物质,如葡萄糖、胆固醇、甘油三酸酯或乳酸等;激素,如甲状腺素或甲状腺刺激素等;生理组成物,如白蛋白或血色素等;生物标志物,包括蛋白质、脂质、碳水化合物、脱氧核糖核酸或核糖核酸;药物,如抗痫药或抗生素等;或非治疗性化合物,如重金属或毒素等。
将含有被分析物的样本添加至含有催化剂和电极之器材13,此催化剂可以是预先即添加的酶,然后将电压产生器12产生的电位曲线施加给该含有催化剂和电极之器材13以便进行电子转移反应,本反应至少需借助一种电子转移剂来发生。给定一种生物分子A则氧化还原过程可以用下列反应式来说明:
在有适当的酶存在的情况下,电子转移剂C将生物分子A氧化成B。然后,电子转移剂C在器材13的某一电极处被氧化。
式中n为整数。电子被电极收集,并且测量所产生的电流。
本领域的熟练技术人员应该知道,其它许多不同的反应机制也可以实现相同的结果。式1和2只是此种反应机制的非限制性例子。
举例而言,一个葡萄糖分子与两个铁氰化物阴离子在葡萄糖氧化酶存在的情况下反应,产生葡萄糖酸内酯、两个亚铁氰化物阴离子和两个质子,如下式所示:
(式3)
既有的葡萄糖量可藉由将亚铁氰化物阴离子电氧化成铁氰化物阴离子并测量产生的电流来检测。上述过程可以用下式说明:
在本发明的较佳实施例中,适合用于葡萄糖的催化剂是葡萄糖氧化酶,含有催化剂和电极之器材13中的试剂包含下列配方:600u/mL的葡萄糖氧化酶,0.4M的铁氰化钾,0.1M的磷酸盐缓冲剂,0.5M的氯化钾,以及2.0g/dL的明胶。
在另一个例子中,需要测量样本中含有的胆固醇(可能包括胆固醇和胆固醇酯)总量。含有催化剂和电极之器材13中提供的适当酶包括胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶。胆固醇酯在胆固醇酯酶存在的情况下水解成胆固醇,如下式所示:
然后,胆固醇氧化成胆甾烯酮,如下式所示:
胆固醇总量可藉由将亚铁氰化物阴离子电氧化成铁氰化物阴离子并测量产生的电流来检测。
检测器14可检测来自含有催化剂和电极之器材13中的电流信号。微处理器11会处理并分析该电流信号,然后使经处理的电流信号与被分析物(例如葡萄糖或胆固醇)浓度产生关联。存储器15会储存该经处理的数据和相同电位曲线下的电流-浓度关系。系统10可进一步包括一显示组件(未示出),用来显示检测结果。
图2是根据本发明的一项实施例,用来测定被分析物浓度的装置20的示意图。参考图2,装置20包括固定器21、电压产生器22、检测器23、微处理器24、存储器25、指示器26和含有催化剂和电极之器材27。固定器21可接收、联接并固定含有催化剂和电极之器材27。存储器25中存储有(例如)一个查找表,列出被分析物各种浓度与相应电流水平之间的浓度-电流关系。电压产生器22产生的电位曲线实质上与用来建立浓度-电流关系的曲线相同。将该电位曲线施加给含有催化剂和电极之器材27。检测器23检测自含有催化剂和电极之器材27所产生的电流信号。微处理器24处理电流信号,并将所处理的结果与浓度产生关联。通过映射、线性插值法或者其它方法将检测到的电流水平与存储器25中存储的查找表相比较。装置20的指示器26显示样本中被分析物的水平。
图3A是显示将含有各种不同浓度的葡萄糖样本分别添加到一个含有催化剂和电极之器材,接着分别对该器材施加固定电压的实验结果的曲线图。参考图3A,将含有浓度各为230mg/dl、111mg/dl、80mg/dl和0mg/dl的葡萄糖样本分别添加到一个含有葡萄糖氧化酶和电极之器材,接着分别对该器材施加固定电压0.4V。这些样本的葡萄糖浓度是根据以下反应通过比色法来测定:
产生的电流由曲线L230DC、L111DC、L80DC和L0DC表示。在早期阶段,例如从0到0.5秒时,由于电子移转反应不稳定,可能出现不稳定的电流。此外,随着反应的进行,所产生的电流的振幅随时间增加而减小。
图3B是显示根据本发明的一项实施例,将含有各种浓度的葡萄糖样本分别添加到一个含有催化剂和电极之器材,接着分别对该器材施加电位曲线的实验结果的曲线图。参考图3B,将浓度各为230mg/dl、111mg/dl、80mg/dl和0mg/dl的葡萄糖样本分别添加到一个含有葡萄糖氧化酶和电极的器材,接着分别对该器材施加一个包含0.4V的偏压和一个正弦波的电位曲线,该正弦波的振幅为0.1V,频率为1Hz。产生的电流由曲线L230AC、L111AC、L80AC和L0AC表示。
根据美国糖尿病协会(“ADA”)资料,血液中的葡萄糖在就餐前一般在50到100mg/dl之间,而就餐后则上升到一般低于170mg/dl的水平。本实施例所选范围0到230mg/dl(此范围可以针对糖尿病患者使用)较ADA所提出的正常范围为宽。
图3C是显示根据本发明的一项实施例,对葡萄糖样本分别施加固定电压与施加电位曲线的实验结果对比的曲线图。参考图3C,曲线L111DC1和L111DC2表示将两个含有111mg/dl葡萄糖的样本分别添加到含有葡萄糖氧化酶和电极的器材,并对该器材分别施加固定电压0.4V和0.5V所测得的电流信号,而曲线L111AC表示将含有111mg/dl葡萄糖的的样本添加到一个含有葡萄糖氧化酶和电极的器材,并对该器材施加一个包含0.4V偏压和一个正弦波的电位曲线所测得的电流信号,该正弦波的振幅为0.1V,频率为1Hz。可以看出,与曲线L111DC1和L111DC2相比,曲线L111AC具有更高的电流信号,因而具有更高的分辨率。特别是当将曲线L111AC和L111DC2相互比较时,曲线L111AC较曲线L111DC2具有更高的分辨率,这表明使用电位曲线的方法更有利。
图3D是显示根据本发明的一项实施例,将含有各种浓度的胆固醇样本分别添加到一个含有催化剂和电极之器材,接着分别对该器材施加电位曲线的实验结果的曲线图。参考图3D,将浓度各为200mg/dl、100mg/dl、50mg/dl和0mg/dl的胆固醇样本分别添加到一个含有胆固醇氧化酶和电极的器材,该器材内已含有250u/mL的胆固醇氧化酶、250u/mL的胆固醇酯酶、0.2M的铁氰化钾和1%(v/v)Triton X-100,接着分别对该器材施加一个包含0.5V的偏压和一个正弦波的电位曲线,该正弦波的振幅为0.1V,频率为1Hz。产生的电流由曲线LCH200AC、LCH100AC、LCH50AC和LCH0AC表示。
图3E是显示根据本发明的一项实施例,对胆固醇样本分别施加固定电压与施加电位曲线的实验结果对比的曲线图。参考图3E,将四个浓度为200mg/dl的胆固醇样本分别添加到含有胆固醇氧化酶和电极的器材,该器材内已含有250u/mL的胆固醇氧化酶、250u/mL的胆固醇酯酶、0.2M的铁氰化钾和1%(v/v)Triton X-100,接着分别对该器材施加固定电压与施加电位曲线。LCH200DC1、LCH200DC2和LCH200DC3表示对该器材分别施加固定电压0.4V、0.5V和0.6V所测得的电流信号,而曲线LCH200AC表示对该器材施加一个包含0.5V偏压和一个正弦波的电位曲线所测得的电流信号,该正弦波的振幅为0.1V,频率为1Hz。可以看出,与曲线LCH200DC1、LCH200DC2和LCH200DC3相比,曲线LCH200AC具有更高的电流信号,因而具有更高的分辨率。特别是当将曲线LCH200AC和LCH200DC3相互比较时,曲线LCH200AC较曲线LCH200DC3具有更高的分辨率,这表明使用电位曲线的方法更有利。
图4是显示根据本发明的一项实施例用来处理电流信号的方法的曲线图。参考图4,以图3B所示回应曲线L80AC为例,藉由(例如)曲线拟合来连接曲线L80AC的峰值以形成峰值曲线LP80;另一方面,连接曲线L80AC的谷值以形成谷值曲线LV80。此处列举五个方法将电流信号与被分析物(即葡萄糖)的浓度产生关联。在第一个方法中,在大约60秒的测量周期中的某一时间点测量回应曲线的峰值曲线的电流值。该时间点应当从回应曲线的稳定电流区域选取,则不用担心任何不稳定的反应。在第二个方法中,则可以在某一时间点测量回应曲线的谷值曲线的电流值。表1中概括了作为回应曲线L0AC、L80AC、L111AC和L230AC的第一和第二个方法。
表1显示用来将电流信号与样本中的被分析物量产生关联的方法的实验结果。具体而言,表1的第二和第三栏分别表示根据本发明的上述第一和第二个方法,其中电流值是在施加电位曲线(与图3B所示相同)后的第四秒测得的。为作比较,表1的最后一栏表示在施加固定电压后的第四秒测量电流值的方法。
表1
葡萄糖浓度(mg/dl) |
第四秒时回应曲线的峰值曲线的电流值(A) |
第四秒时回应曲线的谷值曲线的电流值(A) |
固定电压0.4V下第四秒时回应曲线的电流值(A) |
0 |
3.89 |
-1.19 |
1.60 |
80 |
6.88 |
0.46 |
3.72 |
111 |
9.75 |
2.87 |
7.38 |
230 |
17.62 |
9.24 |
14.91 |
此外,在第三个方法中,在某一段时间周期上对回应曲线积分来计算电荷数量。在第四个方法中,在某一段时间周期上对回应曲线的峰值曲线积分来计算电荷数量。在第五个方法中,在某一段时间周期上对回应曲线的谷值曲线积分来计算电荷数量。曲线拟合和积分等操作可以在微处理器24中执行。表2中概括了作为回应曲线L0AC、L80AC、L111AC和L230AC的例子的第三、第四和第五个方法。
表2显示用来将电流信号与被分析物的量产生关联的其它方法的实验结果。具体而言,表2的第二、第三和第四栏分别表示了根据本发明的上述第三、第四和第五个方法,其在施加电位曲线(与图3B所示相同)后会在从第一到第六秒的时间周期上对曲线积分。为作比较,表2的最后一栏表示在施加固定电压后的相同时间周期上对反应曲线进行积分的方法。
表2
葡萄糖浓度(mg/dl) |
从第一到第六秒的时间周期上对回应曲线进行积分所计算出的电荷数量(Q) |
从第一到第六秒的时间周期上对回应曲线的峰值曲线进行积分所计算出的电荷数量 |
从第一到第六秒的时间周期上对回应曲线的谷值曲线进行积分所计算出的电荷数量 |
在固定电压0.4V下从第一到第六秒的时间周期上对回应曲线进行积分所计算出的 |
| |
(Q) |
(Q) |
电荷数量(Q) |
0 |
10.79 |
22.93 |
-1.10 |
14.57 |
80 |
24.23 |
40.24 |
8.60 |
28.16 |
111 |
41.41 |
58.89 |
25.98 |
44.07 |
230 |
81.13 |
103.34 |
60.96 |
88.79 |
图5是显示根据本发明的一项实施例用来将电流信号与被分析物浓度相关的方法的流程图。参考图5,在步骤501中将含有某一浓度被分析物的样本添加到一个含有催化剂和电极之器材27上。接着在步骤502中,将包含一个偏压和一个交流部分的电位曲线施加给该器材27。然后在步骤503中测量该器材27所产生之电流信号。在步骤504中,微处理器24处理电流信号以导出该被分析物的浓度-电流关系,该浓度-电流关系可以采用查找表的形式存储在存储器25中。
为了图解和说明的目的,上文已经揭示了本发明的优选实施例。说明无意穷尽一切或者将本发明限制为所揭示的精确形式。本领域的熟练技术人员依据以上的揭示,很容易想到所述实施例的许多变化及更改。本发明的范围仅由权利要求书及其等效技术方案来确定。
另外,在说明本发明的代表性实施例时,本说明书可能是以特定的步骤序列来提出本发明的方法和/或程序。但是,在方法或程序并不依赖说明书所提出的特定步骤序列的范围内,方法或程序并不局限于所述的特定步骤序列。本领域的熟练技术人员应该明白,其它的步骤序列也是可能的。因此,说明书中提出的特定步骤序列不应该被理解为是对权利要求书的限制。另外,针对本发明的方法和/或程序的权利要求书并不受按写明的顺序执行其步骤的限制,并且本领域的熟练技术人员很容易明白,可以改变执行顺序而仍然处在本发明的精神和范围内。