CN1823842A - 小牛血清去蛋白口腔膏及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种小牛血清去蛋白口腔膏及其制备方法。该口腔膏的配方包括下述重量份数比的组分：小牛血清去蛋白提取物干粉0.1－0.4份，苯佐卡因4－6份，羧甲基纤维素钠12.8－14.4份，果胶16－24份，羟苯乙酯0.04－0.06份，薄荷脑0.8－1.2份，液体石蜡20－30份，白凡士林30－40份。其制备方法包括以下步骤：1)制备小牛血清去蛋白提取物干粉；2)取下述重量份数比的组分：苯佐卡因4－6份，羧甲基纤维素钠12.8－14.4份，果胶16－24份，羟苯乙酯0.04－0.06份，薄荷脑0.8－1.2份，液体石蜡20－30份，白凡士林30－40份，将上述基质及添加剂混合均匀后，灭菌；3)取小牛血清去蛋白提取物干粉0.1－0.4份，与经灭菌的混合物混匀后，得到小牛血清去蛋白口腔膏。
Description
技术领域
本发明涉及生化药物口腔膏制剂及其制备方法。
背景技术
目前，小牛血清去蛋白提取物的药物剂型有水针、凝胶剂和胶囊，其中以水针的应用最为广泛。水针和胶囊是全身给药，不能局部应用；凝胶剂是局部应用剂型，但现有凝胶剂粘附性差，而且基质是水溶性物质，如果用于口腔内局部的涂抹，保留时间非常短，起不到应有的效果。
发明内容
本发明的目的是提供一种以小牛血清去蛋白提取物为活性成分的口腔膏。
本发明所提供的小牛血清去蛋白口腔膏，其配方包括下述重量份数比的组分：小牛血清去蛋白提取物干粉0.1-0.4份(相当于小牛血清去蛋白提取液2.5％-10％)，苯佐卡因4-6份，羧甲基纤维素钠12.8-14.4份，果胶16-24份，羟苯乙酯0.04-0.06份，薄荷脑0.8-1.2份，液体石蜡20-30份，白凡士林30-40份。
优选的小牛血清去蛋白口腔膏的配方为：小牛血清去蛋白提取物干粉0.2份，苯佐卡因5份，羧甲基纤维素钠13.6份，果胶20份，羟苯乙酯0.05份，薄荷脑1份，液体石蜡25份，白凡士林35.15份。
本发明的第二个目的是提供一种上述小牛血清去蛋白口腔膏的制备方法。
本发明所提供的小牛血清去蛋白口腔膏的制备方法，包括以下步骤：
1)制备小牛血清去蛋白提取物干粉；
2)取下述重量份数比的组分：苯佐卡因4-6份，羧甲基纤维素钠12.8-14.4份，果胶16-24份，羟苯乙酯0.04-0.06份，薄荷脑0.8-1.2份，液体石蜡20-30份，白凡士林30-40份；将上述基质及添加剂混合均匀后，灭菌；
3)取步骤1)制备的小牛血清去蛋白提取物干粉0.1-0.4份，与步骤2)经灭菌的混合物混匀后，得到小牛血清去蛋白口腔膏。
在上述制备方法中，所述步骤1)中小牛血清去蛋白提取物干粉的制备方法可参照本发明人先前申请的专利(一种提取小牛血去蛋白提取物的方法，专利号：ZL 96 120777.9)即采1-6个月龄幼牛静脉血，分离血清，用乙醇去蛋白，减压去除乙醇，在余下的液体中加入复合蛋白酶水解，离心，留上清，将上清进行超滤截留，收集得到的滤液为小牛血去蛋白提取液(固形物质量百分含量约为4％)，除菌后，冻干，得到小牛血去蛋白提取物干粉；所述幼牛品种优选为东北纯种黄牛；用乙醇去蛋白时，所用乙醇为质量百分含量96％的乙醇，乙醇用量为血清体积的两倍；减压去除乙醇的方法为：用真空旋转蒸发仪，37℃，1个大气压减压除乙醇；用复合蛋白酶水解的时间为20-28小时，优选为24小时；加入复合蛋白酶水解后进行离心的条件为：8000-12000rpm、4℃、20-40分钟，优选为10000rpm、4℃、30分钟；对上清进行超滤截所用的中空纤维柱的孔径为4000-6000道尔顿，优选为5000道尔顿。
步骤2)中各种基质及添加剂的添加量(重量份数比)优选为：苯佐卡因5份，羧甲基纤维素钠13.6份，果胶20份，羟苯乙酯0.05份，薄荷脑1份，液体石蜡25份，白凡士林35.15份；对基质及添加剂混合物进行灭菌的条件为：在121℃下，高压灭菌20-30min。
本发明提供了一种以小牛血清去蛋白提取物为活性成分的口腔膏及其制备方法。该口腔膏可用于各种口腔疾病的治疗，如口腔粘膜、牙龈、唇的疼痛及损伤等，具体来讲包括复发性口炎、疱疹性口炎、放射性口炎、慢性口角炎、牙龈炎、牙周炎、脱压疼痛、出牙疼痛、牙石刮除术及牙龈切除术后、粘膜移植术后伤口覆盖、拔牙术、口腔内颌面外科手术创面覆盖及托牙的镶配等。本发明止痛效果显著，口腔局部应用，即可即刻止痛，并且黏度适中，口腔保留时间适当，弥补了现有注射液和胶囊不能口腔局部应用的缺陷，也克服了凝胶剂黏附性差的不足。此外，该口腔膏制备方法简单，具有工业化生产的可行性。本发明在口腔医学及医药领域中具有较高的实际应用价值。
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
具体实施方式
下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法。所述百分含量均为质量百分含量。
实施例1、小牛血清去蛋白口腔膏的制备
生产1000支小牛血清去蛋白口腔膏(小牛血清去蛋白提取物干粉含量：0.1％，相当于含小牛血清去蛋白提取液2.5％)，具体过程包括以下步骤：
1、小牛血清去蛋白提取物干粉的制备
在无菌条件下制备小牛血清去蛋白提取物干粉，具体方法为：采1-6个月龄的东北纯种黄牛的静脉血，4000rpm、4℃离心15分钟分离血清；取5L血清，加入10L 96％乙醇，不断搅拌，静置60分钟，使蛋白质变性沉淀，然后经20000rpm、4℃离心30min，弃沉淀，得到12.5L上清，利用真空旋转蒸发仪，37℃，1个大气压减压除乙醇；在余下液体中加入1.5g复合蛋白酶，37℃水解24小时，在10000rpm、4℃，离心30分钟，留上清；上清用5000道尔顿中空纤维柱超滤截留，收集得到的滤液即为小牛血清去蛋白提取液，得到1000mL(g)小牛血清去蛋白提取液；将提取液用微孔滤膜除菌后，冻干24小时，即得40g小牛血清去蛋白提取物干粉。
2、基质及添加剂的混合及灭菌
取苯佐卡因250g，羧甲基纤维素钠720g，果胶900g，羟苯乙酯3g，薄荷脑60g，液体石蜡1150g，白凡士林1912g，将上述基质及添加剂混合均匀后，在121℃下，高压灭菌25min。
3、小牛血清去蛋白口腔膏的获得及分装、检测
取步骤1制备的小牛血清去蛋白提取物干粉5g，与步骤2经灭菌的混合物混匀后，得到小牛血清去蛋白口腔膏。用软膏填充器分装，分装成每5、10g/支两种规格。经检测本实施例1制备的小牛血清去蛋白口腔膏合格。
实施例2、小牛血清去蛋白口腔膏的制备
生产1000支小牛血清去蛋白口腔膏(小牛血清去蛋白提取物干粉含量：0.2％，相当于含小牛血清去蛋白提取液5％)，具体过程包括以下步骤：
1、小牛血清去蛋白提取物干粉的制备
在无菌条件下制备小牛血清去蛋白提取物干粉，具体方法为：采1-6个月龄的东北纯种黄牛的静脉血，4000rpm、4℃离心15分钟分离血清；取5L血清，加入10L 96％乙醇，不断搅拌，静置60分钟，使蛋白质变性沉淀，然后经20000rpm、4℃离心30min，弃沉淀，得到12.5L上清，利用真空旋转蒸发仪，37℃，1个大气压减压除乙醇；在余下液体中加入1.5g复合蛋白酶，37℃水解24小时，再10000rpm、4℃，离心30分钟，留上清；上清用5000道尔顿中空纤维柱超滤截留，收集得到的滤液即为小牛血去蛋白提取液，得到1000mL(g)小牛血清去蛋白提取液；将提取液用微孔滤膜除菌后，冻干24小时，即得40g小牛血清去蛋白提取物干粉。
2、基质及添加剂的混合及灭菌
取苯佐卡因250g，羧甲基纤维素钠680g，果胶1000g，羟苯乙酯2.5g，薄荷脑50g，液体石蜡1250g，白凡士林1757.5g，将上述基质及添加剂混合均匀后，在121℃下，高压灭菌25min。
3、小牛血清去蛋白口腔膏的获得及分装、检测
取步骤1制备的小牛血清去蛋白提取物干粉10g，与步骤2经灭菌的混合物混匀后，得到小牛血清去蛋白口腔膏。用软膏填充器分装，分装成每5、10g/支两种规格。经检测本实施例制备的小牛血清去蛋白口腔膏合格。
实施例3、小牛血清去蛋白口腔膏的制备
生产1000支小牛血清去蛋白口腔膏(小牛血清去蛋白提取物干粉含量：0.4％，相当于含小牛血清去蛋白提取液10％)具体过程包括以下步骤：
1、小牛血清去蛋白提取物干粉的制备
在无菌条件下制备小牛血清去蛋白提取物干粉，具体方法为：采1-6个月龄的东北纯种黄牛的静脉血，4000rpm、4℃离心15分钟分离血清；取5L血清，加入10L 96％乙醇，不断搅拌，静置60分钟，使蛋白质变性沉淀，然后经20000rpm、4℃离心30min，弃沉淀，得到12.5L上清，利用真空旋转蒸发仪，37℃，1个大气压减压除乙醇；在余下液体中加入1.5g复合蛋白酶，37℃水解24小时，再10000rpm、4℃，离心30分钟，留上清；上清用5000道尔顿中空纤维柱超滤截留，收集得到的滤液即为小牛血去蛋白提取液，得到1000mL(g)小牛血清去蛋白提取液；将提取液用微孔滤膜除菌后，冻干24小时，即得20g小牛血清去蛋白提取物干粉。
2、基质及添加剂的混合及灭菌
取苯佐卡因250g，羧甲基纤维素钠640g，果胶1100g，羟苯乙酯2g，薄荷脑40g，液体石蜡1350g，白凡士林1598g，将上述基质及添加剂混合均匀后，在121℃下，高压灭菌30min。
3、小牛血清去蛋白口腔膏的获得及分装、检测
取步骤1制备的小牛血清去蛋白提取物干粉20g，与步骤2经灭菌的混合物混匀后，得到小牛血清去蛋白口腔膏。用软膏填充器分装，分装成每5、10g/支两种规格。经检测本实施例制备的小牛血清去蛋白口腔膏合格。
实施例4、检测小牛血清去蛋白口腔膏对兔口腔溃疡愈合的影响
药品：
受试药品：实施例1、2、3制备的小牛血去蛋白口腔膏，规格为5克/支，小牛血清去蛋白提取物干粉的含量分别为0.1％、0.2％、0.4％(相当于含小牛血清去蛋白提取物2.5％、5％、10％)。
阳性对照药品：市售宁康口内胶，规格为3.5克/支。
实验动物：健康大耳白兔20只，体重2.0kg-2.5kg，雄、雌均可(雌兔为未孕者)。
兔口腔溃疡模型的复制：参考文献(熊风琴，李善华，王遒等.口腔溃疡药膜对豚鼠实验性口腔溃疡的治疗作用.现代口腔医学杂志，1997，11(4)：259-260；陈柯，任煜光，罗渝宁等.Nd：YAG激光治疗口腔溃疡的动物实验研究.应用激光，1998，18(3)：135-136)中的方法将塑料离心管底部磨出直径为3mm的孔，用小棉球沾90％石炭酸(湿润、不溢出为度)置管内小孔处；将兔用3％戊巴比妥钠静脉麻醉，牵开上下唇，暴露口腔颊部粘膜，离心管垂直于口腔粘膜，烧灼30秒，使局部口腔粘膜呈苍白色，于次日创面形成圆形溃疡，表面充血，无伪膜，边界较清晰。同一兔烧灼左右两个溃疡面。
以实施例1、2、3制备的小牛血清去蛋白口腔膏为例，检测本发明的小牛血清去蛋白口腔膏对兔口腔溃疡愈合的影响。具体实验方法如下：将实验动物随机分为五组，即小牛血清去蛋白口腔膏的三个试验组(低、中、高三个剂量)、阳性药物对照组和空白对照组，每组4只兔，8个溃疡面。溃疡形成后进行如下治疗：
I组为空白对照组，创面涂生理盐水；
II组为低剂量试验组，涂布0.1％小牛血清去蛋白口腔膏，每日4次；
III组为中剂量试验组，涂布0.2％小牛血清去蛋白口腔膏，每日4次；
IV组为高剂量试验组，涂布0.4％小牛血清去蛋白口腔膏，每日4次；
V组为阳性对照组，涂布宁康口内胶，每日1次；
各组持续给药直至溃疡愈合。
治疗过程中，观察并记录溃疡面积和不同时间溃疡愈合的情况指标，同时对治疗过程中各组创面的溃疡充血、水肿情况进行积分比较，积分标准如下：无充血、水肿记0分；轻度充血、水肿记1分；中度充血、水肿记2分；重度充血、水肿记3分；各组数据均用均值±标准差表示，用t检验进行统计分析。实验结果如下：
(1)小牛血清去蛋白口腔膏对溃疡充血、水肿程度积分的影响
烧灼当日局部成灰白色，于次日形成溃疡，溃疡局部充血、水肿严重，治疗后逐渐减轻，治疗中各组溃疡充血、水肿程度积分值统计结果如表1所示：
表1治疗中各组溃疡充血、水肿程度积分值统计结果
| 组别 | n | 治疗前 | 治疗3天后 | ||
| 总积分 | x±SD | 总积分 | x±SD | ||
| 空白对照组 | 8 | 24 | 3±0 | 19 | 2.38±0.74 |
| 低剂量组 | 8 | 24 | 3±0 | 13 | 1.63±0.52* |
| 中剂量组 | 8 | 24 | 3±0 | 10 | 1.25±0.71** |
| 高剂量组 | 8 | 24 | 3±0 | 9 | 1.13±0.64** |
| 阳性对照组 | 8 | 24 | 3±0 | 12 | 1.50±0.53* |
注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
治疗3天后，低、中、高剂量小牛血清去蛋白口腔膏组的总积分分别由治疗前的24分减至13、10、9分，阳性对照组由治疗前的24分减至12分，而空白对照组由24分减至19分。上述结果表明本发明的小牛血清去蛋白口腔膏能明显减轻溃疡的充血水肿程度。
(2)小牛血清去蛋白口腔膏对家兔口腔溃疡面积的影响
治疗中各组的溃疡面积变化情况如表2所示：
表2治疗中不同时间各组的溃疡面积变化情况(x±SD mm2，n＝8)
| 组别 | 治疗前 | 治疗2天后 | 治疗3天后 | 治疗4天后 |
| 空白对照组 | 46.63±1.60 | 64.99±0.94 | 65.46±0.81 | 38.37±0.74 |
| 低剂量组 | 47.10±1.51 | 46.64±1.16* | 32.75±0.47* | 15.52±0.58* |
| 中剂量组 | 46.81±1.61 | 40.58±0.37* | 23.44±0.51* | 8.93±0.81* |
| 高剂量组 | 47.13±1.48 | 39.98±0.83* | 20.63±0.61* | 7.16±0.48* |
| 阳性对照组 | 46.78±1.77 | 46.35±0.69* | 31.44±0.72* | 14.47±0.70* |
注：*与对照组比较P＜0.01。
中、高剂量组小牛血清去蛋白口腔膏治疗2天后可见溃疡面积明显缩小，并随时间的延长，作用更为显著；低剂量组和阳性对照组于治疗3天后溃疡面积也明显缩小，各组与空白对照组相比差异具有显著性意义(P＜0.01)，表明本发明的小牛血清去蛋白口腔膏对口腔溃疡具有较好的愈合效果。
(3)口腔膏对家兔口腔溃疡愈合时间的影响
各实验组家兔的口腔溃疡愈合时间统计结果如表3所示：
表3各组溃疡的愈合时间统计结果
| 组别 | 溃疡面总个数 | 愈合溃疡面个数 | 平均愈合时间(x±SDd) | |||
| 治疗4天 | 治疗5天 | 治疗6天 | 治疗7天 | |||
| 空白对照组 | 8 | 0 | 1 | 2 | 5 | 6.50±0.76 |
| 低剂量组 | 8 | 1 | 4 | 3 | 0 | 5.25±0.71a |
| 中剂量组 | 8 | 5 | 3 | 1 | 0 | 4.38±0.52ab |
| 高剂量组 | 8 | 7 | 1 | 0 | 0 | 4.13±0.35ace |
| 阳性对照组 | 8 | 1 | 5 | 2 | 0 | 5.13±0.64ad |
注：a与空白对照组比较P＜0.01，b与低剂量组比较P＜0.05，c与低剂量比较P＜0.01，d与低剂量组比较P＞0.05，e与中剂量组比较P＞0.05。
小牛血清去蛋白口腔膏中、高剂量组治疗4天后溃疡大部分愈合，低剂量组和阳性对照组于治疗5天后溃疡也基本愈合，各组的平均愈合时间与空白对照组相比明显缩短(P＜0.01)，表明本发明的小牛血清去蛋白口腔膏可明显缩短家兔口腔溃疡的愈合时间，具有明显的促进口腔溃疡愈合的作用。
Claims (7)
1、一种小牛血清去蛋白口腔膏，其配方包括下述重量份数比的组分：小牛血清去蛋白提取物干粉0.1-0.4份，苯佐卡因4-6份，羧甲基纤维素钠12.8-14.4份，果胶16-24份，羟苯乙酯0.04-0.06份，薄荷脑0.8-1.2份，液体石蜡20-30份，白凡士林30-40份。
2、根据权利要求1所述的小牛血清去蛋白口腔膏，其特征在于：所述配方包括以下组分：小牛血清去蛋白提取物干粉0.2份，苯佐卡因5份，羧甲基纤维素钠13.6份，果胶20份，羟苯乙酯0.05份，薄荷脑1份，液体石蜡25份，白凡士林35.15份。
3、一种权利要求1所述的小牛血清去蛋白口腔膏的制备方法，包括以下步骤：
1)制备小牛血清去蛋白提取物干粉；
2)取下述重量份数比的组分：苯佐卡因4-6份，羧甲基纤维素钠12.8-14.4份，果胶16-24份，羟苯乙酯0.04-0.06份，薄荷脑0.8-1.2份，液体石蜡20-30份，白凡士林30-40份；将上述基质及添加剂混合均匀后，灭菌；
3)取步骤1)制备的小牛血清去蛋白提取物干粉0.1-0.4份，与步骤2)经灭菌的混合物混匀后，得到小牛血清去蛋白口腔膏。
4、根据权利要求3所述的小牛血清去蛋白口腔膏的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中小牛血清去蛋白提取物干粉的制备方法为：采1-6个月龄幼牛静脉血，分离血清，用乙醇去蛋白，减压去除乙醇，在余下的液体中加入复合蛋白酶水解，离心，留上清，将上清进行超滤截留，收集得到的滤液为小牛血去蛋白提取液，除菌后，冻干，得到小牛血去蛋白提取物干粉。
5、根据权利要求4所述的小牛血清去蛋白口腔膏的制备方法，其特征在于：所述幼牛品种为东北纯种黄牛；用乙醇去蛋白时，所用乙醇为质量百分含量96％的乙醇，乙醇用量为血清体积的两倍；减压去除乙醇的方法为：用真空旋转蒸发仪，37℃，1个大气压减压除乙醇；用复合蛋白酶水解的时间为20-28小时；加入复合蛋白酶水解后进行离心的条件为：8000-12000rpm、4℃、20-40分钟；对上清进行超滤截所用的中空纤维柱的孔径为4000-6000道尔顿。
6、根据权利要求5所述的小牛血清去蛋白口腔膏的制备方法，其特征在于：所述用复合蛋白酶的水解的时间为24小时；加入复合蛋白酶水解后进行离心的条件为：10000rpm、4℃、30分钟；对上清进行超滤截所用的中空纤维柱的孔径为5000道尔顿。
7、根据权利要求3所述的小牛血清去蛋白口腔膏的制备方法，其特征在于：所述步骤2)中各种基质及添加剂的添加量为：苯佐卡因5份，羧甲基纤维素钠13.6份，果胶20份，羟苯乙酯0.05份，薄荷脑1份，液体石蜡25份，白凡士林35.15份；对基质及添加剂混合物进行灭菌的条件为：在121℃下，高压灭菌20-30min。
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