CN1814622A - 与油脂代谢调控相关的转录因子GmDofA及其编码基因与应用 - Google Patents

与油脂代谢调控相关的转录因子GmDofA及其编码基因与应用 Download PDF

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CN1814622A CN 200610058763 CN200610058763A CN1814622A CN 1814622 A CN1814622 A CN 1814622A CN 200610058763 CN200610058763 CN 200610058763 CN 200610058763 A CN200610058763 A CN 200610058763A CN 1814622 A CN1814622 A CN 1814622A
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Abstract

本发明公开了一个与油脂代调控相关的转录因子及其编码基因与应用,特别是涉及一个来源于大豆的与油脂代谢调控相关的转录因子GmDofA及其编码基因与其在调控植物油脂代谢中的应用。该转录因子是具有下述氨基酸残基序列之一的蛋白质:1)序列表中的SEQ ID №:1;2)将序列表中SEQ ID №:1的氨基酸残基序列经过一至十个氨基酸残基的取代、缺失或添加且具有转录激活功能的调控植物油脂代谢的蛋白质。本发明基因的克隆及功能鉴定对提高和改良作物油脂成分、特别是对于提高大豆油脂成分,培育高油脂大豆品种具有重要的理论和现实意义。

Description

与油脂代谢调控相关的转录因子GmDofA及其编码基因与应用
技术领域
本发明涉及植物转录因子及其编码基因与应用,特别是涉及一个来源于大豆的与油脂代谢调控相关的转录因子GmDofA及其编码基因与其在调控植物油脂成份中的应用。
背景技术
人类饮食中71%的油脂来自于植物。在世界上的几种主要产油作物中,大豆总产油量约占30%,居世界植物油产量的第一位,棕榈油及油菜子油分别位居第二及第三(如表1所示)。
                     表1 世界上主要的产油作物
  种类   生产量(百万吨)   占总产量百分比   相对顺序
  大豆(Soybean)棕榈(Palm)油菜籽(Rapeseed)向日葵(Sunflower)棉花籽(Cottonseed)椰子(Coconut)花生(Peanut)橄榄(Olive)   15.508.527.037.003.312.712.691.63   29.116.013.213.16.25.15.03.1   12345678
脂肪酸的合成是植物体中最重要的代谢途径之一,它发生于植物体的任何一个细胞中,为生长发育所必须。对它的阻断将导致细胞死亡,因而至今为止还没有发现一个阻断脂肪酸合成的植物突变体。
植物中脂肪酸的合成主要在质体中进行,而动物及真菌的脂肪酸合成发生于胞质。因此植物需要存在一种不同于动物及真菌的机制一从质体将脂肪酸运输到细胞的其它部位。从而推断在细胞中必定存在脂肪酸生产和运输的控制机制,但是迄今尚不清楚在脂肪酸的合成中质体内外是如何联系的。
植物与其它真核生物在参与脂肪酸合成途径的酶有很大差异。从乙酰CoA和丙二酰CoA合成16或18个碳原子的脂肪酸至少需要30个不同的酶催化的反应来完成这一过程,而在动物、真菌及一些细菌中,以上反应是由一个存在于胞质中的多酶复合体来完成的。植物中,参与脂肪酸合成的酶分别以可溶的形式独立存在于质体的胞质中。尽管植物中参与脂肪代谢的酶很容易被分离,但问题是这些酶是否在体内也可形成一个多酶复合体。
脂肪酸合成途径中最重要的碳源是由ACCase合成的丙二酰CoA,在进入脂肪酸合成途径之前,丙二酰由CoA转移到酰基载体蛋白(ACP)上,从此脂肪酸合成都需要ACP的参与,直到形成16或18个碳原子的脂肪酸,并被用于合成甘油或被运出质体。ACP是一个分子量为9KD的酸性蛋白,它具有一个可以通过硫酯化结合乙酰基的基团。当丙二酰由CoA转移到ACP后,硫酯化的丙二酰由CoA进行一系列的聚合反应,接受乙酰ACP或乙酰CoA的乙酰基团。这一聚合反应是通过释放一个CO2分子来形成一个C-C键,CO2的释放使这一反应变得不可逆,从而使聚合反应不断进行。
大多数植物中,油脂都以三酰甘油(Triacylglycerols,TAG)的形式储藏,它的含量是一个非常重要的农艺性状,TAG的生物合成称之为Kennedy途径,如同真核生物中合成膜甘油酯的途径,脂肪酸去除CoA后被转移到3-磷酸甘油的1和2位,形成中间产物PA。PA去磷酸化产生DAG。在TAG合成的最后一步,第三个脂肪酸分子被转移到空的DAG 3’-OH位置,这一步反应是由二酰甘油乙酰转移酶(diacylglycerolacyltransferase,DGAT)催化的,此反应被认为是TAG生物合成中唯一的限速步骤。
人们已对脂类合成途径有了认知,并且已经克隆了很多参与脂类合成的酶基因。然而,对脂类合成的调控机理及其相关基因仍然知之甚少。
启动子是基因的编码区前面的一段DNA序列,它保持转录精确而有效地起始。真核生物的启动子除了含有TATA盒、CAAT盒、GC盒外,还有一些特定的作用元件通过与转录因子相互作用调控基因表达的时空特异性。分析这些反式作用元件有助于初步推测一个基因可能的调控基因。
发明内容
本发明的目的是提供大豆中一个与油脂代谢调控相关的转录因子。
本发明所提供的与油脂代谢调控相关的转录因子,名称为GmDofA,来源于大豆属大豆(Glycine max(L.)Merrill),是具有下述氨基酸残基序列之一的蛋白质:
1)序列表中的SEQ ID №:1;
2)将序列表中SEQ ID №:1的氨基酸残基序列经过一至十个氨基酸残基的取代、缺失或添加且具有转录激活功能的调控植物油脂代谢的蛋白质。
序列表中的SEQ ID №:1由300个氨基酸残基组成,自氨基端(N端)第35-84位氨基酸残基为Dof结构域。
编码大豆中与油脂代谢调控相关转录因子GmDofA的基因(GmDofA),是下述核苷酸序列之一:
1)序列表中SEQ ID №:2的DNA序列;
2)编码序列表中SEQ ID №:1的DNA序列;
3)在高严谨条件下可与序列表中SEQ ID №:2限定的DNA序列杂交的核苷酸序列。
所述高严谨条件为在6×SSC或(6×SSPE),0.1% SDS,2×Denhardt溶液中,65℃条件下杂交;在0.1×SSC,0.1% SDS溶液中,65℃条件下洗膜。
序列表中的SEQ ID №:2由1139个碱基组成,其编码序列为自5’端第134位到第1036位碱基,编码具有序列表中SEQ ID №:1的氨基酸残基序列的蛋白质,自5’端第236位到第385位碱基编码Dof结构域,自5’端第1037位到第1139位碱基为3’端非翻译区。
含有本发明基因的表达载体、转基因细胞系和宿主菌均属于本发明的保护范围。
扩增GmDofA中任一片段的引物对也在本发明的保护范围之内。
本发明的另一个目的是提供一种调控植物,特别是种子,中油脂成份的方法。
本发明所提供的调控植物中油脂成份的方法,是将所述与油脂代谢调控相关转录因子基因GmDofA导入植物组织或细胞,植物的油脂成份得到调控。
所述与油脂代谢调控相关转录因子基因GmDofA可通过含有所述与油脂代谢调控相关转录因子基因GmDofA的植物表达载体导入外植体;用于构建所述植物表达载体的出发载体可为任意一种双元农杆菌载体或可用于植物微弹轰击的载体等,如pBin438、pCAMBIA1302、pCAMBIA2301、pCAMBIA1301、pCAMBIA1300、pBI121、pCAMBIA1391-Xa或pCAMBIA1391-Xb(CAMBIA公司)等。
使用GmDofA构建植物表达载体时,在其转录起始核苷酸前可加上任何一种增强型、组成型、组织特异型或诱导型启动子,如花椰菜花叶病毒(CAMV)35S启动子、泛生素基因Ubiquitin启动子(pUbi)等,它们可单独使用或与其它的植物启动子结合使用;此外,使用本发明的基因构建植物表达载体时,还可使用增强子,包括翻译增强子或转录增强子,这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等,但必需与编码序列的阅读框相同,以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的,可以是天然的,也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。
为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选,可对所用植物表达载体进行加工,如加入可在植物中表达的编码可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因(GUS基因、萤光素酶基因等)、具有抗性的抗生素标记物(庆大霉素标记物、卡那霉素标记物等)或是抗化学试剂标记基因(如抗除莠剂基因)等。从转基因植物的安全性考虑,可不加任何选择性标记基因,直接以逆境筛选转化植株。
以pBin438为出发载体,构建的含有所述与油脂代谢调控相关转录因子基因GmDofA的植物表达载体为pBin438-GmDofA。
携带有本发明GmDofA的植物表达载体可通过使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化植物细胞或组织,并将转化的植物细胞或组织培育成植株。被转化的植物宿主既可以是单子叶植物,如水稻、小麦、玉米等,也可以是双子叶植物,如大豆、烟草、拟南芥或棉花等。
本发明提供了大豆中的一个与油脂代谢调控相关的转录因子GmDofA及其编码基因。转基因实验表明GmDofA是可以影响油脂含量这一性状的多基因之一,GmDofA的活性高低同大豆含油量、油脂积累速率成正相关。该基因的克隆及功能鉴定对提高和改良作物油脂成份、特别是对于提高大豆油脂成份,培育高油脂大豆品种具有重要的理论和现实意义。
下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。
附图说明
图1为GmDGAT基因部分启动子序列的序列分析结果
图2为GmDofA基因在叶、花及开花20天豆荚中的表达特征RT-PCR分析结果
图3为pBin438-GmDofA的部分物理图谱
图4为GmDofA转基因拟南芥植株的RT-PCR鉴定结果
图5为GmDofA转基因拟南芥与野生型拟南芥种子中油脂含量的比较结果
具体实施方式
下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法,所用引物均由上海生工合成。
实施例1、大豆与油脂代谢调控相关的转录因子GmDofA编码基因的筛选及其cDNA的克隆
一、Dof家族与油脂代谢调控的相关性分析
根据已知的GmDGAT的cDNA序列(参见本发明人申请的专利号为200410049633.8的专利)的5’端设计一对嵌套引物,引物序列如下:
GmDGAT GP1(上游引物):5’-CAGTGGCTACAGTTTCAGGCTCATC-3’;
GmDGAT GP2(下游引物):5’-CGCAGGGAAGAGTGGTTGAGAG-3’
提取大豆品种8904的基因组DNA,然后用限制性内切酶EcoR I、Hind III、PstI和BamH I对其进行酶切,将酶切产物与TaKaRa公司的VITRO-PCR试剂盒中的相应接头连接,以此连接产物为模板,在特异引物GmDGAT GP1和通用引物primer C1(5’-GTACATATTGTCGTTAGAACGCGTAATACGACTCA-3’)的引导下进行第一次扩增,然后将产物稀释50倍并以此为模板,在特异引物GmDGAT GP2和通用引物primer C2(5’-CGTTAGAACGTAATACGACTCACTATAGGGAGA-3’)的引导下进行第二次扩增,PCR扩增结束后,对扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳检测,回收长度约为696bp的DNA片段,将其克隆入载体pMD-18(TaKaRa公司)中,筛选阳性克隆,提质粒进行测序,结果获得了长度为696bp的GmDGAT部分启动子序列,利用Genomatix软件分析此启动子序列中可能的转录因子结合位点,分析结果如图1所示(图中右边数字表示可能的DNA结合位点距离ATG的碱基数;可能的Dof结合位点、TATA盒及CCAAT盒标注在序列上方),该序列包含数量较多的Dof基因结合序列:AAAG(反式为CTTT),其中正向结合序列出现8次,反式结合序列出现6次,此出现概率远大于四碱基序列出现的平均概率(1次/256bp);另外可能的TATA盒位于ATG的-173bp位置,可能的CCAAT盒出现在离ATG-270bp处;除较多的Dof结合位点外,还存在如Myb、Prolamin box、TCP class I、等22类调控位点存在,但它们的数量都较少,出现次数最多的Myb结合位点为4次。此外,在Genbank中检索得到AtDGAT(GenBank号:AC005917)、OsDGAT(GenBank号:AC135427)、LcDGAT(GenBank号:AP006408)的启动子序列,同样用Genomatix软件分析这些启动子序列中可能的Dof结合位点,发现在长度为1.5Kb的AtDGAT、OsDGAT、LcDGAT启动子序列中AAAG和CTTT分别出现27次、14次、25次。Duan等人通过对水稻种子发育过程中特异表达的转录因子启动子序列分析发现很多种子特异表达基因的启动子部分也都含有较多的Dof基因结合作用元件(Duan K,Luo YH,Luo D,Xu ZH,Xue HW.(2005)New insights into the complex andcoordinated transcriptional regulation networks underlying rice seeddevelopment through cDNA chip-based analysis.Plant Mol Biol.2005Apr;57(6):785-804)。
因此,推断Dof家族与植物的油脂代谢调控相关。
二、大豆与油脂代谢调控相关的转录因子GmDofA编码基因的筛选及其cDNA的克隆
对约32万条大豆EST序列(Tian,A.G.,Wang,J.,Cui,P.,Han,Y.J.,Xu,H.,Cong,L.J.,Huang,X.G.,Wang,X.L.,Jiao,Y.Z.,Wang,B.J.,Wang,Y.J.,Zhang,J.S.,Chen,S.Y.(2004)Characterizat ion of soybean genomic featuresby analysis of its expressed sequence tags.Theor Appl Genet,108:903-913)进行分析,用Phrap软件(P.Green,http://www.phrap.com)将其聚类成contig基因序列,通过BLAST检索Genbank数据库对已获得的可能为Dof家族的转录因子编码基因的contig序列进行验证及拼接延长,并用DNASTAR中的Editseq软件翻译上述序列,结果27个contig序列中具有Dof结构域,将这些基因统称为GmDof。为了筛选在花、豆荚中特异或高表达的GmDof,根据上述27个GmDof的核苷酸序列分别设计引物。分别以栽培大豆8904叶、花、开花后20天豆荚的cDNA为模板,在引物P1和P2的引导下进行RT-PCR分析,以βTublin基因(5’-AAC CTC CTC CTC ATCGTA CT-3’和5’-GAC AGC ATC AGC CAT GTT TCA-3’)为对照,结果如图2所示,有7个GmDof基因(GmDofA、GmDofB、GmDofC、GmDofD、GmDofE、GmDofF、GmDofG)在花、豆荚中特异或高表达,其中GmDofA在叶中未见表达,在花中和开花后20天的豆荚中表达量较高,表明GmDofA的表达可能与大豆种子发育、成熟密切相关。最后经过电子拼接获得了GmDofA的cDNA全长序列,该序列具有序列表中SEQ ID №:2的核苷酸序列,序列表中的SEQ ID №:2由1139个碱基组成,其编码序列为自5’端第134位到第1036位碱基,编码具有序列表中SEQ ID №:1的氨基酸残基序列的蛋白质,自5’端第236位到第385位碱基编码Dof结构域,自5’端第1037位到第1139位碱基为3’端非翻译区。
实施例2、GmDofA转基因拟南芥的获得
一、GmDofA植物表达载体的构建
以克隆有全长GmDofA基因的pMD-18载体为模板,用含有Bgl II和Kpn I接头序列的特异引物(DofA 438-P1:5’-TCATCAGATCTATGCAGCAAATACACTCCA TG-3’;DofA 438-P2:5’-AAACAGCTAGCGGGAAGATGAAAGAGAGAAGAAG-3’)扩增GmDofA的cDNA序列,扩增结束后进行1%琼脂糖凝胶电泳检测,扩增出925bp的目的片段,与预期结果相符,回收并纯化该片段,用限制性内切酶Bgl II和Kpn I对其双酶切后克隆到植物双元表达载体pBin438(李太元,田颖川,秦晓峰等,高效抗虫转基因烟草的研究,中国科学(B辑),1994,24(3):276-282)中的CaMV 35S启动子下游,得到GmDofA的植物表达载体,命名为pBin438-GmDofA,该载体的部分物理图谱如图3所示。
二、转化拟南芥及转基因植株的鉴定
将步骤一构建的质粒pBin438-GmDofA用电击法导入农杆菌GV3101中,用菌落PCR的方法获得阳性重组子,然后用抽真空法将重组农杆菌转化野生型拟南芥(col-0)中,经培育后收获种子,将种子播于含卡那霉素(50mg/L)的MS筛选培养基上,待筛选得到的T1代植株长至4-6叶时移到蛭石上生长,收获T1代单株,各单株种子分别播种,用相同的MS筛选培养基继续筛选以观察T2代的分离情况,如此重复数代直至获得遗传稳定的转基因纯合株系。对其中6个转基因株系(Line1、Line2、Line5、Line6、Line7、Line8)的2星期苗用DofA 438-P1和DofA 438-P2为引物进行RT-PCR鉴定,以野生型拟南芥(col-0)为对照,结果如图4所示,表明除Line5外,均有GmDofA基因的表达,获得了GmDofA转基因拟南芥阳性植株。
实施例3、GmDofA转基因拟南芥种子脂肪组分及含量分析
选取实施例2获得的GmDofA转基因拟南芥Linel和Line6植株的种子,用下述方法对其脂肪组分及含量进行分析,其中脂肪酸的测定方法参照Pritam等(Pritam S.Sukhija and D.L.Palmquist(1988)Rapid Method for Determination of TotalFatty Acid Content and Composition of Feedstuffs and Feces J.Agric.Food Chem.,36:1202-1206)的方法进行:种子经充分研磨后,称重,加入盐酸甲醇溶液,再加入正己烷及内标液,80℃水浴2h,取出加入K2CO3溶液中和产生的酸,最后取上清液用气相色谱(AGILENT 6890 GC)法进行测定,以Sigma公司的脂肪酸甲酯作为标准对照,测定结果如图5所示(空心柱为野生型拟南芥,实心柱为转基因植株Linel(L1)和Line6(L6)),结果GmDofA转基因拟南芥种子的脂肪酸含量较野生型植株显著提高, 证明GmDofA是与植物的油脂代谢调控相关的基因。
                            序列表
<160>2
<210>1
<211>300
<212>PRT
<213>大豆属大豆(Glycine max(L.)Merrill)
<400>1
Met Gln Gln Ile His Ser Met Pro Gly Gly Arg Phe Phe Ser Gly Ser
1               5                   10                  15
Gly Ser Ala Asp Arg Arg Leu Arg Pro His His Gln Asn Gln Gln Ala
            20                  25                  30
Leu Lys Cys Pro Arg Cys Asp Ser Leu Asn Thr Lys Phe Cys Tyr Tyr
        35                  40                  45
Asn Asn Tyr Asn Leu Ser Gln Pro Arg His Phe Cys Lys Asn Cys Arg
    50                  55                  60
Arg Tyr Trp Thr Lys Gly Gly Val Leu Arg Asn Val Pro Val Gly Gly
65                  70                  75                  80
Gly Cys Arg Lys Ser Lys Arg Ser Ser Lys Pro Asn Lys Ile Thr Pro
                85                  90                  95
Ser Glu Thr Ala Ser Pro Pro Pro Pro Pro His Pro Asp His Asn Asn
            100                 105                 110
Asn Ser Asn Ser His Ser Ser Ser Glu Ser Ser Ser Leu Thr Ala Ala
        115                 120                 125
Val Ala Thr Thr Thr Glu Ala Val Ser Ala Pro Glu Thr Leu Asn Ser
    130                 135                 140
Asp Ser Asn Asn Asn Asn Asn Met Gln Glu Ser Lys Leu Leu Ile Pro
145                 150                 155                 160
Ala Leu Glu Thr Asn Asn Pro Leu Glu Gln Gly Thr Gly Asp Cys Gly
                165                 170                 175
Gly Ile Phe Ser Glu Ile Gly Pro Phe Thr Ser Leu Ile Thr Thr Thr
            180                 185                 190
Thr Ser Thr Asn Glu Pro Leu Gly Ser Gly Phe Gly Phe Gly Asn Ser
        195                 200                 205
Thr Leu Pro Asp Ala Ser Ser Phe Gln Trp His Tyr Gln Lys Val Ser
    210                 215                 220
Ser Asn Asn Glu Glu Leu Lys Leu Pro Glu Asn Ser Phe Leu Asp His
225                 230                 235                 240
Thr Val Asp Leu Ser Gly Met His Ser Lys Thr Ser His Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Phe Gly Ser Leu Asp Trp Gln Gly Gly Ala Asp Gln Gly Leu Phe Asp
            260                 265                 270
Leu Pro Asn Thr Val Asp His Ala Tyr Trp Ser His Thr His Trp Ser
        275                 280                 285
Asp His Asp Asn Ser Ser Ser Leu Phe His Leu Pro
    290                 295                 300
<210>2
<211>1139
<212>DNA
<213>大豆属大豆(Glycine max(L.)Merrill)
<400>2
tagacgatag agagaagaag tacgttgttg cagggcaggg atatttgttt ctcactctct     60
ctcatgttca ctcaacaaca acgacgcact cactgacatc aacactagtt tcaggtgcta    120
tctcatccac caaatgcagc aaatacactc catgcccgga gggaggtttt tctccggctc    180
cggatccgcc gaccggaggc tccgacccca ccatcagaac cagcaggcct taaagtgccc    240
ccgctgcgac tctctcaaca ccaagttctg ctactacaac aactacaacc tctcccagcc    300
ccgccacttc tgcaagaact gccgccgcta ttggactaaa ggcggcgtcc tccgcaacgt    360
ccccgtcggc ggcggttgcc gcaaatccaa acgctcctcc aagcccaaca aaataacacc    420
ctctgaaacc gcttcaccgc caccaccccc gcaccccgac cacaacaaca actccaactc    480
tcattccagc agcgagagct ccagcctcac cgccgccgtt gccaccacca ccgaggccgt    540
gtcggcgccg gagactttaa actctgattc caacaacaac aacaacatgc aagagtcaaa    600
gttgttgatc cctgctctgg aaactaataa tcctctggag cagggaacag gggactgcgg    660
tggtatcttc tctgaaattg gtcctttcac cagtttgatc actactacta cttccactaa    720
tgaaCCttta gggtCagggt tcgggttcgg taactccact ctccccgatg cgtcgtcgtt    780
tcagtggcac taccagaagg ttagcagtaa caacgaagaa ttgaagttgc cggagaactc    840
ctttctcgat cacaccgttg atttgtcggg gatgcatagt aaaaccagcc acgggggagg    900
attcggatcg ttggattggc agggcggtgc agatcaaggt ttgtttgatc ttcctaacac    960
cgttgatcac gcttactgga gtcacactca ctggtctgac cacgacaatt cttcttctct   1020
ctttcatctt ccctgaaaat gttttcacgc ctcttctaaa tcttatctca cctttttttt   1080
tatttcttat ataaatttaa ctttaaaaga agaagagtaa aggagattgg aaatcaaaa    1139

Claims (10)

1、一个与油脂代谢调控相关的转录因子,是具有下述氨基酸残基序列之一的蛋白质:
1)序列表中的SEQ ID №:1;
2)将序列表中SEQ ID №:1的氨基酸残基序列经过一至十个氨基酸残基的取代、缺失或添加且具有转录激活功能的调控植物油脂代谢的蛋白质。
2、根据权利要求1所述的转录因子,其特征在于:所述蛋白具有序列表中SEQ ID№:1的氨基酸残基序列。
3、编码权利要求1所述的与油脂代谢调控相关的转录因子的基因,是下述核苷酸序列之一:
1)序列表中SEQ ID №:2的DNA序列;
2)编码序列表中SEQ ID №:1的DNA序列;
3)在高严谨条件下可与序列表中SEQ ID №:2限定的DNA序列杂交的核苷酸序列。
4、根据权利要求3所述的基因,其特征在于:所述基因具有序列表中SEQ ID №:2的DNA序列。
5、含有权利要求3所述基因的表达载体、转基因细胞系和宿主菌。
6、一种调控植物油脂成份的方法,是将权利要求3所述的与油脂代谢调控相关转录因子基因导入植物组织或细胞,植物的油脂成份得到调控。
7、根据权利要求6所述的方法,其特征在于:所述与油脂代谢调控相关转录因子基因通过含有所述与油脂代谢调控相关转录因子基因的植物表达载体导入植物组织或细胞。
8、根据权利要求7所述的方法,其特征在于:用于构建所述植物表达载体的出发载体为pBin438、pCAMBIA1302、pCAMBIA2301、pCAMBIA1301、pCAMBIA1300、pBI121、pCAMBIA1391-Xa或pCAMBIA1391-Xb。
9、根据权利要求8所述的方法,其特征在于:所述植物表达载体为pBin438-GmDofA。
10、根据权利要求6所述的方法,其特征在于:所述植物宿主为大豆、水稻、小麦、玉米、烟草、拟南芥或棉花。
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